96 G asas y Acei es
Vol.
48. Fase. 2 (1997), 96-102
REVISION
U ilización del ensayo del ácido 2- ioba bi ú ico (ATB)
pa a e alua el p oceso au ooxida i o en alimen os
Po I. M. Vica io Rome o, R. Guillen Sans y iVI. Guzman Chozas*
Á ea de Nu ición y B oma ología. Depa amen o de Bioquímica, B oma ología y Toxicología.
Facul ad de Fa macia. Uni e sidad de Se illa, el.
P o .
Ga cía González, s/n. 41012 Se illa.
RESUMEN
U ilización del ensayo del ácido 2- ioba bi ú ico (ATB)
pa a e alua el p oceso au ooxida i o en alimen os
En es a e isión cien í ica se ecogen di e en es aspec os de
la aplicación del ensayo del ácido 2- ioba bi ú ico (ATB) a la
medida del g ado de au ooxidación de alimen os lipidióos. Se
conside an las di e en es o mas de p ocesado del alimen o, de
inducción olun a ia a la au ooxidación, de p epa ación de las
mues as, écnicas empleadas y posibles in e e encias.
Se con empla el es udio y aplicación del mé odo a mues as
de ca ne, pescados, hue os, leche y de i ados lác eos, ce eales,
p oduc os die é icos in an iles, g asas animales y acei es ege a-
les comes ibles. Se hace e e encia a la posible co elación con
o os índices de oxidación ya es ablecidos, como el índice de
pe óxidos y o os, así como ambién la posible co elación a o-
able en e los alo es del índice o núme o de ATB y la e alua-
ción senso ial del p oceso au ooxida i o (g ado o es ado de
an-
cidez).
PALABRAS-CLAVE: Acido 2- ioba bi ú ico - Alimen o -
Au oxidación - Rancidez - Re isión (a ículo).
SUMMARY
Use o he 2- hioba bi u ic acid (TBA) es o e alua ion
o he au oxida i e p ocess in oods.
In his o e iew se e al aspec s conce ning he applica ion o
2- hioba bi u ic acid (TBA) es o measu ing oxida i e ancidi y
in oods a e desc ibed and discussed. Di e en ac o s like ood
p ocessing, san iple induced oxida ion and p epa a ion, applied
me hodologies and in e e ences, a e conside ed. The applica ion
o he TBA es o some oods like mea s,
ish,
eggs, milk and dai y
p oduc s, ce eals, in an - oods, animal a s and ege able oils a e
desc ibed.
Co ela ion be ween TBA index o TBA numbe and
o he oxida ion indices (i.e. pe oxide alue) as well as senso y
e alua ion a e also conside ed.
KEY-WORDS: Au oxida ion - Food - Rancidi y - Re iew
(pape ) - 2-Thioba bi u ic
acid.
1.
INTRODUCCIÓN
El ensayo del ácido 2- ioba bi ú ico (ATB) iene su
o igen en un abajo publicado po Kohn y Li e sedge
(1944) sob e los p oduc os de oxidación de ejidos
animales. Es os au o es sugi ie on que la sus ancia
eaccionan e debe ía a a se de un compues o ca -
boníiico. Be nheim
e al.
(1948) es udia on la eacción
en e el ATB y los p oduc os de oxidación de de e mi-
nadas sus ancias lipídicas. De acue do con es as
expe iencias pione as los p oduc os de eacción colo-
eados, o iginados a pa i de la oxidación de ácidos
g asos insa u ados, y su pos e io eacción con ATB,
se debían a la o mación de los ácidos alquiliden io-
ba bi ú icos.
Los p ime os cien í icos que u iliza on es a eac-
ción pa a de ec a la au ooxidación en alimen os, más
conc e amen e en g asa de leche, ue on Pa on y
Ku z (1951). Es os au o es comp oba on que el
espec o de abso ción ob enido al hace eacciona la
g asa de leche oxidada con ATB e a simila al del
pig-
men o ojo (Xmáx=530-532 nm) que se ob enía cuando
eaccionaban di ec amen e malondialdehído (MDA) y
eac i o ATB. A pa i de es as obse aciones ex aje-
on la conclusión de que el MDA enía una especial
signi icación o p o agonismo en la incidencia de la
an-
cidez ( é mino senso ial que se de i a del p oceso de
au ooxidación de las g asas) de la g asa alimen a ia, y
en la oxidación de las memb anas isula es de los
eji-
dos i os, en gene al.
Si ealizamos una e isión de la bibiliog a ía
acu-
mulada e e en e al ensayo del ATB, es han sido las
écnicas gene almen e empleadas:
- La écnica de des ilación, de Ta ladgis e al.,
(1960), aplicada habi ualmen e a alimen os de o igen
animal.
- La de calen amien o a e lujo (Caldwell y G ogg,
1955;
Cain e al., 1956; Poko ny y Die enbache ,
1989), sin e apa de sepa ación p e ia.
- La de ex acción simple, aplicada po p ime a ez
a los acei es ege ales po SidweII
e al.
(1954), y con
modi icaciones ecien es en las que se in oduce la
ex acción en ase sólida pa a su aplicación en ca nes
(Raha jo
e al.,
1993).
Mien as que en la écnica de ex acción simple se
ex aen de la mues a las sus ancias eaccionan es
con ATB, empleando una ase acuosa en la que es á
disuel o el eac i o y pos e io men e se calien a, en la
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Faso. 2(1997) 97
écnica de calen amien o a e lujo la eacción se
eali-
za di ec amen e en e la mues a y el eac i o. En la
écnica de des ilación se hace una sepa ación p e ia
de las sus ancias eac i as po ola ilización a al as
empe a u as. Exis en adecuadas e isiones donde se
compa an las di e en es écnicas en su aplicación a
los acei es ege ales comes ibles (Guillén-Sans y
Guzmán-Chozas, 1993; Sans
e al.,
1993) o a ca nes
(So ensen y Jo gensen, 1996).
Aunque, dada la complejidad del p oceso, oda ía
no se ha llegado a escla ece po comple o el meca-
nismo de es a eacción, sí que se ha demos ado su
u ilidad,
jun o con o as écnicas de medida de la au o-
oxidación,
en la de ección de los cambios oxida i e
que se p oducen en los alimen os y en los sis emas
biológicos po ac o es ales como el ai e (oxígeno), el
calo , la luz, las adiaciones ionizan es y la p esencia
de iniciado es de la eacción en cadena, ales como
las azas de elemen os me álicos (cob e, hie o...).
Una de las c í icas ecuen es a es a eacción es su
poca especi icidad, ya que o os aldehidos p esen es
en el alimen o ambién eaccionan con ATB dando un
compues o colo eado, que puede in e e i en la e a-
luación o al de la oxidación (Guillén-Sans y Guzmán-
Chozas, 1995).
2.
CARNES
El ensayo del ATB se ha aplicado a mues as de
ganado bo ino y de ce do, y ambién en meno ex en-
sión,
a mues as de pollo y de pa o. El p ocesado o
p epa ación de la mues a ha sido muy di e so. Así, el
ensayo del ATB ha sido p ac icado en ca nes some i-
das a di e sos p ocesos de conse ación: e ige adas
y/o congeladas (Tomás y Funes, 1987), ca nes
coci-
nadas (Ta ladgis
e al.,
1960; Shaidi
e al.,
1987), ca -
nes cu adas (Zispe y Wa s, 1962; Yun
e al.,
1987) o
almacenadas du an e dis in os pe íodos de iempo. Se
han compa ado los esul ados ob enidos en ca ne
c uda y some ida a di e sos p ocesos de cocinado
(asado, es o ado, enla ado, cocinado len o y appe i-
zación o enla ado) (Huang y G eene, 1978). Po el
e-
cuen e uso de la misma, ambién se han hecho
es u-
dios del ensayo del ATB en ca ne picada
(hambu gesas) (G eene y Cumuze, 1981; Willemon
e al., 1987; Raha jo e
al.,
1991). En mues as
e i-
ge adas (4° C) y congeladas
(-20°G)
se daban alo es
más bajos del núme o de ATB que los que se daban
en ca ne cocida.
La écnica habl ualmen e empleada ha sido la des-
ilación (Ta iadgis e al., 1960), que en ocasiones se
ha compa ado con la écnica de calen amien o a
e lu-
jo,
con encional después de desp o einiza con ácido
iclo oacé ico (ATA) (Tomás y Funes, 1987). Al obje o
de educi el iempo de du ación de la écnica de des-
ilación,
a eces a dua, en ca ne de bo ino picada se
empleó el calen amien o en au ocla e (Ramí ez y
Spillman,
1987). Asimismo se ha usado la écnica de
ex acción simple modi icada, empleando como
ex ac an e el ácido pe cló ico. Se pudo conclui que la
écnica de ex acción e a más ápida, ácil de lle a a
cabo y an exac a como lo pudie a se la de des ila-
ción,
en el con ol de ca ne de a es (Salih
e al.,
1987).
Una mejo a de la écnica de ex acción simple, usan-
do ATA, pe mi e medi a baja empe a u a (4°C) y
eli-
mina las sus ancias que in e ie en median e colum-
nas en ase sólida (O 18) (Raha jo
e al.,
1991).
Como longi ud de onda expe imen al (de medida),
se escogió la que co espondía al máximo de abso -
ción del pigmen o ojo (530-532 nm). Se han o ecido
ó mulas co ec i as pa a e i a las in e e encias (si
las hubie a) de los pigmen os ama illo (Xmáx=450 nm)
y/o ana anjado (Xmáx=497 nm) (Yu y Sinnhube , 1962).
Pa a calcula el núme o de ATB se ha hecho uso de
sus ancias modelo y del alo de abso i idad mola
del compues o colo eado (Wi as, 1972). A eces,
median e una ap oximación ma emá ica, se elimina la
necesidad de usa un pa ón ex e no (Izumimo o
e al.,
1990).
Di e sos ac o es pueden a ec a los esul ados del
ensayo. La adición de an ioxidan es, como gala o de
p opilo y AEDT ocasionaban alo es más bajos del
índice de ATB (Rhee., 1978). Iniciado es del p oceso
au ooxida i o, como hema ina (Keskinel e
al.,
1964),
sales de Fe (III) o e -bu ilhid ope óxidos (Kosugi e
al., 1991), inc emen aban es e índice de ATB. El ipo
de especie animal y alimen ación (ha ina de pescado),
clase de músculo o p o undidad desde la piel de la
oma de mues a (A e jo d, 1960), in e e encias
e-
cuen es (ca bohid a os) y el amaño y g ado de
di i-
sión de la mues a (Tu ne e
al.,
1954), ocasionaban
e ec os di e sos sob e los esul ados. Die as icas en
hie o inc emen aban el alo de las sus ancias que
eaccionan con ATB (TBARS) en músculo esquelé ico
de ce do (Mille
e al.,
1994). La p esencia de adi i os,
como algina es, aumen aba los índices del ensayo
(Raha jo
e al.,
1989), en cambio la p esencia de
ni i-
os p e enía la o u a oxida i a de los lípidos du an e
el almacenamien o (Willemon , 1987). En ca ne de e -
ne a a la que se había suminis ado i amina E o ecía
índices de ATB más bajos (Sho land, 1976).
Se ha co elacionado el núme o de ATB con o os
pa áme os indica i os de la oxidación lipídica como el
índice de pe óxido (Vi uci e
al.,
1986) o el índice de
yodo (A e jo d, 1960). En ca ne de bo ino c uda los
con enidos en hexanal y 2-3, oc anodiona mos aban
un g ado de co elación signi ica i amen e al os con
los esul ados ob enidos en el ensayo del ATB; la
ca ne es aba c uda, ecién cocida, almacenada y
ecocinada (S . Angelo e
al.,
1987). Después de
apli-
ca la écnica de des ilación, se encon a on coe icien-
es de co elación bajos, aunque signi ica i os, en e el
núme o de ATB y la pun uación senso ial, en ca ne de
bo ino picada (G eene y Cumuze, 1981). La ex ac-
ción en ase sólida supone una mejo a de la écnica de
ex acción simple, aumen a la especi icidad y o ece
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una buena co elación con la e aluación senso ial en
ca ne de e ne a c uda y cocinada (Raha jo e al.,
1993).
3. PESCADOS
Los es udios se han cen ado undamen almen e
en especies de o igen ma ino: me luza y bacalao
(C aw o d
e al.,
1979), sa dina (Asaha a, 1987; Rod í-
guez e
al.,
1991), a enque (Snauwa e e
al.,
1977),
a ún (Sinnhube y Yu, 1958), caballa (Vyncke, 1975),
ju el (López Capon y Ba cia, 1978) salmone e (Lee y
Toledo, 1977), ibu ón (Kakiuchi e
al.,
1989) y os as
(Schwa z y Wa s, 1957). Aunque ambién exis en un
núme o es imable de e e encias que se e ie en a la
ca pa (Mai y Kinsella, 1979; I edale y Yo k, 1977) y al
salmón (Vi ucci e
al.,
1986). También se ha aplicado
el mé odo en ha ina, acei e y salsa de pescado.
La p epa ación de la mues a a ía según los
casos. Se ha con olado pescado esco, congelado,
e ige ado, almacenado a ios meses, seco y salado,
en ile es, odajas, desmenuzado, picado, sin la
piel,
almacenado a una humedad ela i a del 30-50%,
en asado a acío o i adiado, cocinado o some ido a
i u a.
La ancidez del pescado y los mé odos a a és
de los cuales puede de ec a se, en e ellos el mé odo
del ATB, ha sido e isada (Ca oche y Jiménez-Colme-
ne o,
1988). Como écnicas, se han empleado la des-
ilación o iginal (Rhee, 1978), la ex acción di ec a
u i-
lizando ácido iclo oacé ico (Vyncke, 1978) y un
p ocedimien o indi ec o que suponía la ex acción p e-
ia de los lípidos desde la mues a (B a koswska y
Zwie zykowski, 1988); asimismo se ha u ilizado el
ex ac o Bligh y Dye , que sepa a el MDA lib e de
MDA
lábil,
aconsejado pa a las mues as con muy
bajo con enido g aso.
Los esul ados que se ob u ie on con la écnica de
des ilación o iginal ue on dis in os en mues as de
pescado, que en mues as de animales e es es
(bo ino, ce do y pollo), lo que pa ece lógico debido a
la di e en e composición en ácidos g asos insa u a-
dos.
Si se a a de mues as de peces, aún se hace
más necesa io el empleo de un sis ema an ioxidan e-
siné gico al aplica la écnica de des ilación (Rhee,
1978). La adición de la mezcla de ipoli os a o AEDT
a pescado en salsa, aunque suponía un descenso en
las ci as del núme o de ATB, no conseguía inhibi el
olo a ancio. El uso de BHT e a más e ec i o pa a
ep imi el ascenso del núme o de ATB; pe o ampoco
esul aba e icaz pa a sup imi el desag adable e ec o
senso ial.
Solamen e median e el empleo de una mez-
cla asco ba o-ni i o se conseguía de ene la ap ecia-
ción del desa ollo oxida i e, an o po las ci as que se
ob enían del núme o de
ATB,
como en el aspec o
sen-
so ial (Sa omi
e al.,
1988).
Hemoglobina, o mioglobina, y Fe (II), aumen aban
las ci as del núme o de ATB en acei e de pescado.
empleando la écnica de des ilación. La adición de
AEDT enmasca aba el Fe (II), mien as que la adición
de BHA p e enía el e ec o ad e so de los pigmen os
de la sang e (Shiba a y Kinumaki, 1979 a, b). O os
ac o es que ambién pueden in luencia los esul a-
dos son el ipo de especie animal (C aw o d eí al.,
1979), o el ipo de músculo ( ojo o blanco) que se
con-
side a (Lee y Toledo, 1977). Una in e e encia impo -
an e es la p esencia de o maldehído (HCHO), sus-
ancia que se o igina en el pescado. El o maldehído
ocasiona una u bidez o p ecipi ado blanco, cuando
eacciona con el eac i o
ATB,
habiéndose comp oba-
do que una concen ación supe io a 25|jg/mL in e ie-
e cla amen e (Almandós e
al.,
1986). Pa a e i a un
p oceso de sepa ación p e ia ( il ación, cen i uga-
ción) se pod ía soslaya la in e e encia empleando un
exceso de eac i o; más conc e amen e, que la a io
concen ación de ATB/concen ación de MDA> 1000
(Ca oche y Tejada, 1988). El núme o de ATB se ha
co elacionado sa is ac o iamen e con el con enido en
la mues a de pescado de sus ancias educ o as olá-
iles y con el índice de pe óxido. Pa ece da se una
buena co elación en e el ensayo del ATB y el mé o-
do de HPLC con de ec o o omé ico (532 nm) (Kakiu-
chi
e al.,
1989).
4. HUEVOS
Los es udios se han cen ado en yema de hue o
almacenada a ios días a 23°C, empleando la écnica
de des ilación. Los esul ados se en a ec ados po
ac o es ales como la p esencia, con e ec o p o-oxi-
dan e,
an o del hie o, na u almen e p esen e en la
yema,
como del clo u o de guanidina, p esencia de
an ioxidan es, AEDT (secues an e) (Pike y Peng,
1988a), y la in luencia del pH, pues o que a alo es
bajos del pH se inc emen a la p ooxidación (Pike y
Peng,
1988b).
5. LECHE Y DERIVADOS LÁCTEOS
Leche (en e a y en pol o) y de i ados lác eos,
como la caseína (Wi as, 1972), ue on los p ime os
p oduc os alimen a ios a los que se le aplicó el mé o-
do del ATB (Dunkiey y
Jennings,
1951), así como
man-
equilla y queso, comp obándose que es e ensayo
mide el g ado de oxidación po debajo del ni el de
sen-
sibilidad alcanzable sensohalmen e (Biggs y B yan ,
1953). Las mues as se almacenaban a empe a u a
ambien e, e ige adas y en salmue a, así como pas-
eu izadas. La écnica usualmen e empleada es
indi-
ec a,
median e ex acción p e ia de la acción g asa.
La eacción se e a ec ada po la in e e encia de
ca bohid a os (lac osa) (Biggs y B yan , 1953), y el ipo
de disol en e usado en la ex acción (Pea son, 1974).
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Vol.47.
Faso. 2(1997) 99
En mues as de man equilla almacenada in e e ía la
p esencia de especias (comino, omillo) en el p oduc-
o o iginal (Fa ag
e al.,
1988). En queso man enido en
salmue a se comp obó que an o la e ige ación como
la pas eu ización educían sensiblemen e la au oxida-
ción (Hamed
e al.,
1987). El índice de ATB en leches
y de i ados lác eos se han compa ado con o os
índi-
ces como el de K eis, el índice de yodo, índice de
aci-
dez y pe óxidos. Se comp obó (Pa on y Ku z, 1951)
que en lác eos el ensayo del ATB e a más sensible
que los adicionales ensayos del índice de yodo y del
índice de K eis, y p esen a una co elación adecuada
con las p uebas senso iales (Dunkiey, 1951).
6. CEREALES, PRODUCTOS DE REPOSTERÍA
Y PRODUCTOS DIETÉTICOS INFANTILES
El ensayo del ATB se aplicó po p ime a ez en
p oduc os de panade ía a mediados de la década de
los cincuen a (Caldwell y G ogg, 1955). En p oduc os
p ocesados, ales como pas eles y salsas, se de e mi-
nó el núme o de ATB, haciendo uso de la abso i idad
mola del pigmen o ojo (Wi as, 1972). En p oduc os
de pas ele ía elabo ados con ma ga ina y edulco an-
es (saca osa y mal i ol), se comp obó median e el
ensayo del ATB que se mani es aba un mayo e ec o
p ooxidan e cuando en la composición el edulco an e
usado e a la saca osa (Wada
e al.,
1978). Una modi-
icación en el ensayo del ATB, en la que se calcula la
abso bancia de los aduc os ATB-MDA y ATB-saca o-
sa,
pe mi e co egi la in e e encia debida a los
azú-
ca es (Du y B amiage, 1992). Va ios p oduc os die é i-
cos in an iles se almacena on en condiciones
o dina ias du an e dos años; pe iódicamen e se in es-
igaban dis in os índices pa a e alua el p og eso de la
oxidación,
en e ellos la p ueba del ATB, que ue la
que mejo coe icien e de co elación p esen aba con
las p uebas senso iales (Ka adzho , 1973).
7. GRASAS ANIMALES
El mé odo se ha aplicado a sebo y man eca de
ce do some idos a a amien o é mico, que iba desde
120°C a 240°C (Kalac
e al.,
1988). T adicionalmen e
se ha empleado la écnica de ex acción simple (Sid-
well e
al.,
1954; Va gas y Gu ié ez, 1956). Poko ny
e al.,
(1985) desa olla on una écnica adap able a los
p ime os es adios de oxidación de la man eca de
ce do. Se han hecho o as p uebas con an ioxidan es
y siné gicos, y ambién con ca alizado es clásicos del
p oceso au ooxida i o (hie o, cob e e hid ope óxidos
p eexis en es en la mues a) (Kosugi
e al.,
1991). En
man eca de ce do exis ía una buena co elación en e
las p uebas senso iales y el núme o de ATB (Jacob-
son e
al.,
1964). Maleki (1974) lle ó a cabo una
ali-
dación del mé odo de g asas y acei es.
8. ACEITES VEGETALES COMESTIBLES
El ensayo del ATB se ha aplicado a di e sos
acei-
es:
acei e de oli a i gen y e inado, acei es de soja,
acei es de gi asol, sésamo, algodón, maíz, colza, cá -
amo y cacahue e. La in oducción olun a ia y en un
iempo b e e de la au ooxidación en la mues a
inclu-
yó di e sos p ocedimien os: hid ogenación pa cial,
conse ación a la luz di usa, mé odo del oxígeno
ac i-
o (A.O.M.) (SidweII e
al.,
1954; Gu ié ez y Va gas,
1957), almacenamien o en en ases ce ados y abie -
os du an e a ios meses (Bolinas y Rosse i, 1977),
en ejecimien o de los acei es a 37°C y 60°C (Jacob-
son
e al.,
1964), la adición de an ioxidan es y siné gi-
cos con pos e io calen amien o en e 38°C-75°C (Fio-
i i
e al,
1974), la e mooxidación en es u a a dis in as
empe a u as (A ya y Ni mala, 1971; Kalac e al.,
1988;
Guillén-Sans e al., 1988; Guillén-Sans e al.,
1991).
Las di e en es écnicas u ilizadas pa a medi la
au ooxidación lipídica en acei es ege ales han sido
e isadas ecien emen e (Guillén-Sans y Guzman
Chozas, 1993). Se ha empleado la écnica de ex ac-
ción simple o iginal, midiendo las abso bancias a 452
nm y 530 nm. Reduciendo la empe a u a de calen a-
mien o, se consigue es abiliza el pigmen o ama illo
(450 nm) y se ob iene una mejo co elación con las
p uebas senso iales ( la o ) que en la écnica o iginal
(Ma cuse y Poko ny, 1994). En iempos se u ilizó un
sis ema ce ado y empe a u as de ebullición (100°G)
pa a lle a a e ec o la eacción (Taü el y Zimme man,
1960). U ilizando sus ancias modelo, y haciendo uso
de la abso i idad mola , se de e minó el núme o de
ATB a pa i de los alo es de abso bancia a 532 nm
(Wi as, 1972). Pe o la écnica más adecuada ha
demos ado se la ex acción simple, modi icada y
op imizada en acei es de oli a, aplicable con igual
e i-
cacia a los acei es de semilla (Vica io e al., 1988,
1990). O as écnicas dispe sas se han empleado.
Papel eac i o de
ATB,
que con enía ácido cí ico y io-
sul a o sódico, pod ía se álida como p ueba semi-
cuan i a i a (Asakawa y Ma sushi a, 1975).
En acei e de soja e mooxidado se comp obó la
exis encia de co elación en e el inc emen o de MDA
y el descenso de oco e oles. Tan o MDA (malondial-
dehído) como las TBARS (sus ancias que eaccionan
con ATB) ascendían du an e el p oceso oxida i e
(oxi-
dación a 170°G) en p esencia de oco e ol (Kishida e
al., 1991). En e los alo es TBARS y el consumo de
oxígeno ambién se da una buena co elación, c e-
ciendo ambos linealmen e has a cie os alo es de
consumo de oxígeno en los que los alo es TBARS se
es abilizan e incluso descienden (Kishida
e al.,
1993).
En de e minadas condiciones ni el índice de pe óxidos
ni el índice de K eis e an p uebas adecuadas pa a
de e mina el pe íodo de inducción, pe o sí se pudo
log a a a és del ensayo del ATB (Gu ié ez y Va gas,
1960;
A ya y Ni mala, 1971). El acei e de algodón,
u i-
lizado como mues a-sus a o, si i ió pa a un es udio
(c) Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas
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100 G asas y Acei es
connpa a i o del mé odo del ATB en e a o os mé o-
dos y écnicas, ales como la quimioluminiscencia,
HPLC, o la esonancia de spin elec ónico (Yang
e al.,
1991). En e los ac o es que a ec an o pueden a ec-
a , los esul ados del ensayo se pod ía ci a el ipo de
acei e ege al, su o ma de en asado y el almacena-
mien o de las mues as (debido p incipalmen e a la
ines abilidad del MDA), jun o con el ipo de écnica
aplicado (Guillén-Sans e al., 1993), la elección ade-
cuada de la longi ud de onda de medida (532 nm, 452
nm) y la posible p esencia de sus ancias que ebajan
la oxidación (gliadina, albúmina) (Taguchi
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Recibido: Oc ub e 1996
Acep ado: Ma zo 1997
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