DOSAGE DE L'INGENOL DANS LES TEINTURES MERES
HOMEOPATHIQUES DE DIVERSES ESPECES D' EUPHORBIA PAR LA
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE
S. PAPHASSARANG"M.A. GIRIN', Ch. OAVID-ETEVE', A. CHABOU02,
J. RAYNAU02
1. Labo a oi es BOIRON, 20 ue de la Libé a ion 69110 SAINTE-FOY
LES-LYON (FRANCE)
2. 0épa emen de bo anique e biologie cellulai e, Pha macognosie
(Ma ie e médicale). Facul é de Pha macie, 8 a enue Rocke elle
69373 LYON CEOEX 08 (FRANCE)
MOTS CLES:
Eupho bia amygdaloi"des L. Eupho bia esula L. ; Eupho bia
helioscopia L. ; Eupho bia la hy is L. ; Eupho bia palus is L. ;
Eupho bia pilosa L. ; Eupho bia piluli e a L. Eupho bia
esini e a Be g. ; Ingenol ; Ingenol es e s ; HPLC.
ABSTRACT
High pe o mance liquid ch oma og aphy has been de eloped o he
iden i ica ion and quan i a ion o ingenol in homoeopa hic mo he
inc u es o 8 Eupho bia species. The ingenol es e s we e
hyd olyzed wi h KOH in me hanol and he ee ingenol was analyzed
by C18 RP column using me hanol-wa e (60 : 40 V/V) as he mobile
phase. The ingenol con en anged om 0. 5 �g/ml o 16. 7 �g/ml.
Eupho bia esini e a Be g. mo he inc u e was ound o be he
iches in ingenol. On �he o he hand, ingenol con en was no
signi ican in E. amygdaloi"des L. o E. piluli e a L. mo he
inc u es.
333
l. INTRODUCTION
No e a ail po e su 8 ein u es me es homéopa hiques
ab iquées a pa i des di é en es especes du gen e Eupho bia:
Eupho bia amygdaloi"des L. , Eupho bia esula L. , 'Eupho bia
helioscopia L. , Eupho bia la hy is L., Eupho bia palus is L.,
Eupho bia pilosa L. , Eupho bia piluli e a L. e Eupho bia
esini e a Be g. Malg é l'hé é ogénéi é mo phologique, on
cons a e chez le gen e Eupho bia la p ésence su le plan
his ologique de la ici e es (1). Le la ex con e e a ces plan es
une ce aine oxici é, due su ou aux dé i és e péniques en
pa iculie aux es e s des di e penes dé i és du pho bol e de
l'ingénol (2)(3). Les es e s d'ingénol son les plus éque nmen
encon ées dans ou es les especes é udiées (4) . Le dosage
di ec d'ingénol sous o me d'es e�s dans les ein u es me es
n'es pas possible. Cela es du d'une pa a la di e si é
s uc u ale de ces cons i uan s e d'au e pa a la non
disponibili é des émoins es e s d'ingénol dans le co nme ce. Pa
con e, il es possible de se p ocu e de l'ingénol e de le
dose dans nos ein u es me es ap es sa libé a ion. Pa mi les
echniques ch oma og aphiques u ilisées pou le con ole, la
ch oma og aphie liquide hau e pe o mance es sans dou e la
echnique la plus adap ée. Elle pe me l'é ude quan i a i e de
ce ype de cons i uan di ec emen sans dé i a isa ion.
11. PARTIE EXPERlMENTALE
-MATERIEL ET CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES
* Appa eillage
Les analyses on é é e ec uées su un ch oma og aphe liquide
Hewle -Packa d, sé ie 1050, équipé d'un injec eu au oma ique
e d' un dé ec eu mul ilongueu d' onde. Ce sys eme es pilo é pa
HP ChemS a ion de Hewle Packa d (Hewle -Packa d, Palo-Al o,
Cali o nie, E a s-Unis)
* Condi ions ch oma og aphiques
Colonne Sphé iso b OOS 2, 5�, 250 x 4mm Hewle -Packa d, Palo
Al o, Cali o nie, E a s-Unis)
Sol an : mé hanol-eau (60:40; V/V)
oébi : 1 ml/min
Oé ec ion: 204 nm
Tempé a u e de la colonne: 30°C
Volume d'injec ion: 20 �l
334
-SOLUT10NS A ANALYSER
* Solu ion émoin:
L' ingénol sous o me lib e es eomme eialisé pa les Labo a oi es
Sigma (s Louis, MO. , E a s- Unis). 11 es eondi ionné dans des
ampoules en e e seellées sous azo e e se p ésen e sous o me
d'un ilm solide in isible adhé an aux pa ois. L'ingénol es
solubilisé dans le mé hanol e conse é ¡ moins de oOe e ¡
l'ab i de la lumie e.
* p épa a ion de l'éehan illon
L'ingénol es en géné al dans la plan e sous o me de mono ou de
dies e s. Pou sa oi la quan i é d'es e s d'ingénol dans les
ein u es me es, on peu dose l' ingénol lib e ap es
saponi iea ion.
La eehnique de saponi iea ion des ein u es me es u ilisées lo s
de ce a ail dé i e de eelle dée i e pa UPADHAY e eoll. (1980)
(5): 5 ml de ein u e me e son la és pa 3 ois 5 ml d'hexane
pou se déba asse des ae ions lipidiques e i e péniques.
La phase es an e es é apo ée ¡ see sous p ession édui e. Le
ésidu es saponi ié pa 5 ml de po as se mé hanolique O, 5M
pendan 45mn ¡ la empé a u e ambian e. L'exees de KOH es
neu alisé pa Hel lN. Ap es adjone ion de 5 ml d'eau dis illée,
la solu ion ob enue es ex ai e pa 3 ois 5 ml de
diehlo omé hane. La solu ion ex ae i e ob enue es é apo ée ¡
see sous p ession édui e e le ésidu es ep is pa 100 �l de
mé hanol. La solu ion mé hanolique ob enue on é é eonse ée ¡
une empé a u e in é ieu e ¡ oOe e ¡ l'ab i de la lumie e.
111- RESULTATS ET D1SeUSS10N
Dans les eondi ions dée i es, l'ingénol donne un pie au emps de
é en ion oisin de 7.23 mino
Le pie de l'ingénol dans la ein u e me e a é é iden i ié pa son
emps de é en ion. La eon i ma ion a é é e ee uée pa la
mé hode d'ajou . La quan i iea ion d'ingénol dan s les ein u es
me es es ai e pa la mé hode d'é alonnage ex e ne. Di é en s
essais on é é e ee ués pou la alida ion du dosage.
-E ude de la épé abili é
Nous a ons injee é 10 ois de sui e un olume de 20 �l d'une
solu ion é alon d'ingénol ¡ 50 �g/ml. L'ai e du pie d'ingénol a
é é en egis é. La moyenne de l'ai e des pies e le eoe ieien
de la a ia ion (eV) de la épé abili é son ensui e ealeulés.
Le e es de 0. 51 %. La mé hode de dosage es eonsidé ée eomme
épé able ea le e de la épé abili é es in é ieu ¡ 1 %.
335
-E ude de la ep oduc ibili é
Nous a ons éalisé une sé ie de 9 dosages su 3 jou s d' une
solu ion é alon d' ingénol el. 50 lJ.g/ml. L' ai e co espondan au pic
d'ingénol a é é en egis é. Nous calculons ensui e la moyenne e
le CV de la ep oduc ibili é des éponse. Le CV ou é es de
0.88 %. La mé hode de dosage peu e e considé ée comme
ep oduc ible ca le coe icien de a ia ion de la
ep oduc ibili é es in é ieu el. 2 %.
-é ude de la linéa i é
Elle a é é ai e a ec une gamme d' é alonnage de 6 solu ions
émoins allan de 50 el. 670 lJ.g/ml. Chaque solu ion es injec ée
3 ois e l'ai e des pics men ionnée es la moyenne des 3 ai es
en egis ées. La d oi e d'é alonnage es linéai e dans la gamme
de concen a ion essayée. L' équa ion de la d oi e es de la
o me: Y = aX+b a = 31.356; b = 121.399. Le coe icien de
co éla ion ou é es de 0.99.
La concen a ion en ingénol dan 5 les ein u es me es es la
sui an e ·(pa o d e déc oissan l: E. esini e a Be g. ) E.
pilosa L.) E. la hy is L. ) E. helioscopa L. ) E. palus is L.
) E. esula L. ) E. amygdaloi"des L. e E. piluli e a L.
Le dosage d'ingénol dans les ein u es me es mon e que la eneu
en ingénol es es a iable sui an les ein u es me es. Ainsi,
l'ingénol n'es p ésen qu'el. l'é a de aces dan 5 les ein u es
me es d' E. amygdaloi·des L. e d' E. piluli e a L. alo s qu' il es
p ésen en g ande quan i é dans les échan illons p épa és el.
pa i de la ein u e me e d'E. esini e a Be g. Ce e ichesse
peu s'explique pa le ai que la TM d'E. esini e a Be g es
p épa ée el. pa i du la ex.
IV. CONCLUSION
L'ingénol es un aceu in é essan pou le con ole des
ein u es me es d'Eupho be en aison de son appo a ec leu
oxici é. La ch oma og aphie liquide,hau e pe o mance s'a e e
e e une echnique bien adap ée a l'é ude quali a i e e
quan i a i e de ce compasé. Elle es apide, iable e pe me le
dosage de l'ingénol di ec emen sans ai e des dé i a isa ions.
336
V. BIBLIOGRAPHIE
1. G. DEYSSON: Elémen s d'ana omie des plan es asculai es
Edi . Sedes, Pa is, 1965,266 pages
2. A. D. KINGHORN, F. J. EVANS, Plan a Med. , 28 (1975), 324-335
3. E. H. SEIP, E. HECKER, Plan a Med. , 46 (1982), 215-218
4. F. J. EVANS, C. J. SOPER, Lloydia. , 41 (1978) 193-233
5. R.R. UPADHYAY, F. BAKHTARAR, H. MOHSENI, A. M. SATER, N. SALEH,
A. TAFAZULI, F. N. DIZAJI, G. MOHADDES, Plan a Med. , 38 (1980),
151-154
337

U Sig�204,4 Re �450,80
2400�
j
2200�
2000�
1800�
!
1600�
1
1400�
!
1200�
¡
1000�
.
<
800�
60J
1
40�
200J
ime -> 2.000 4.000 6.000 8.000 10.'000
CP.ROMATOGRAMME DE IA SOLUTION TEMOIN D' INGENOL
338
nAU
j
J
700 ..
J
600-1
1
J
500-1
j
400-1
j
300 ..
1
200-1
"j
1m. ->
S
,;;;
on
<::
,....
':'�
l'-
'cd 5.000 10.'000 15.000 i
20.000 25.000 30.000
I CHROMATOGRAMME D' UN EXTRAIT DE IA TEINTORE MERE D' EQPHORBIA PILOSA L
339
w
�
TENEUR EN INGENOL DANS LES TEINTURES MERES HOMEOPATHIQUES
lmu!q! nl)
TENEUR
NOMS DE LA TEINTURE MERE PARTIE DE PLANTES UTILISEE , EN DILUTION TENEUR EN INGENOL
ETHANOL en l1g/ml
Eupho bia amygdaloides L. Plan e en ie e aiche 65 % 1/10 T aces
Eupho bia esula L. Plan e en ie e aiche 65 % 1/10 0,51
Eupho bia helioscopia L. Plan e en ie e aiche 65 % 1/10 1,54
Eupho bia la hy is L. Plan e en ie e aiche 65 % .1/10 3,02
Eupho bia palus is L. Plan e en ie e aiche 65 % 1/10 1,27
Eupho bia pilosa L. Plan e en ie e aiche 65 % 1/10 9,47 I
Eupho bia piluli e a L. Plan e en ie e desséchée 65 % 1/10 T aces
Eupho bia esini e a Be g. Résine desséchée 90 % 1/10 16,71
-