VALIDACIÓN DEL MÉTODO CUANTITATIVO DE DETERMINACIÓN DE
PROTEÍNA EN UN ENTORNO ACREDITABLE POR ENAC.
VALIDATION OF THE QUANTITATIVE METHOD OF A PROTEIN
DETERMINATION IN A CONTEXT ACREDITABLE BY ENAC.
Au o /es
And ea Pé ez Li e
Di ec o /es
Agus ín A iño Mone a, Jesús Be án Aso y An onio López Aliaga.
Facul ad de Ve e ina ia
2021
T abajo Fin de G ado en
Ciencia y Tecnología de los Alimen os
Ag adecimien os
Empecé la ca e a en el año 2010, con mucha ilusión sin sabe lo que el u u o me depa a ía,
dos meses después, ecibí una ansiada llamada, mi p ime abajo en un labo a o io.
Desde ese mismo día, luché po pode compagina los es udios con la jo nada comple a del
abajo, ue ealmen e complicado en cie os momen os. Pe o desde luego sin la ayuda de
muchos de los p o eso es que han pasado po mis años de g ado (8 ni más ni menos) hubie a
sido imposible y sob e odo ag adece a los p o eso es de los úl imos años po las acilidades, la
amabilidad y la comp ensión que han mos ado siemp e conmigo. Agus ín A iño da e las g acias
po o ece e de mane a desin e esada en ayuda me con es e abajo. Y no puedo ol ida me de
odos compañe os de clase, p ác icas… que he conocido en es a a en u a y ambién han
apo ado su g ani o. ¡¡GRACIAS!!
¡¡GRACIAS!!, a mis compañe os del Labo a o io Ag oambien al, quienes siemp e me han is o
como su “HIJICA”, me han animado siemp e a con inua cuando i aba la oalla, además de
o ma me en odo lo elacionado con aspec os labo ales, son muchos y no pod ía nomb a los a
odos, pe o en especial a An onio López y Jesús Be án po a en u a se (conociéndome) a
ayuda me con el T abajo Fin de G ado, sin ellos no hubie a sido lo mismo.
Finalmen e a mis pad es, mi ma ido y aho a mi u u o a bebe en camino, ¡¡MIL GRACIAS!!, po
habe compa ido el su imien o conmigo, po seca las lag imas y po b inda los ap obados,
pe o sob e odo po con ia has a el úl imo día que yo si que pod ía.
ÍNDICE
I- ÍNDICE DE TABLAS
II- ÍNDICE DE FIGURAS
1- RESUMEN ……………………………………………………………..………………………………………………1
2- ABSTRACT ………………………………………………………….………………………………………………….2
3- INTRODUCCIÓN ………………………………………………………………………….……………………..….3
3.1 ¿Qué es una alidación? ……………………………………………………………………………………3
3.2 P oceso de alidación …………………………………………………………………..…………………..4
3.3 En o no ac edi able …………………………………………………………………………………..……..5
3.4 Impo ancia del análisis de p o eína …………………………………………………………………5
3.5 Compa a i a del análisis de p o eína median e mé odo Dumas espec o a
mé odo Kjeldahl………………………………………………………………………………………….......6
3.6 Requisi os del Sis ema de calidad..……………………………………………………………………6
3.7 Pa áme os de ca ac e ización de la alidación……………….………………………..………7
3.7.1 Exac i ud ………………………………..…………………………..………………………………….7
3.7.2 P ecisión…………………………………………………………….….……………………………….8
3.7.3 Lími e de de ección y cuan i icación…………………….…………………………………9
3.7.4 Ince idumb e…………………………………………………..…………………………………….9
3.8. C i e ios p e ios a la alidación ………………………………..…………………………………..10
4- JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS …………………………………………..……………………………………12
5- METODOLOGIA …………………………………………………………..……………………………….……..13
5.1 Desa ollo del mé odo analí ico Dumas de de e minación cuan i a i a de
p o eína en p oduc os cá nicos. ……………………………………………………………………13
5.2 Ob ención de da os de alidación median e e isiones bibliog á icas de da os
(Validación e ospec i a). ………………………………………………………………….…..…… 14
5.3 Ob ención de da os de esul ados de análisis expe imen ales ( alidación
p ospec i a). ………………………………………………………………………………..……..……….16
5.4 Cálculos de los pa áme os de ca ac e ización del mé odo ……….………..…………23
5.4.1 Exac i ud, p ecisión e ince idumb e ……………………………………23
5.4.2 Lími es de de ección y cuan i icación……………….….……………….23
6- RESULTADOS Y DISCUSIÓN …………………………………………………………….……………..…….25
6.1 Ap obación y dis ibución del mé odo………………………………………………...…..25
6.2 Validación e ospec i a, cálculo de ince idumb e pa iendo de los da os
ob enidos. ………………………………………………………………………………………………….…26
6.3 Validación p ospec i a, cálculo de ince idumb e pa iendo de los da os
ob enidos y esul ados de los pa áme os de ca ac e ización ……………………….26
6.3.1 Exac i ud…………………………………………………..………………………………26
6.3.2 P ecisión……………………………………………………………………………………27
6.3.3 Lími es de de ección y cuan i icación…………………………………………28
6.3.4 Cálculo de la ince idumb e……………….………………………………………30
6.4 Valo ación de las ince idumb e de los dos mé odos de alidación.…………33
7- CONCLUSIONES ……………………………………………………………………….………………………….34
8- CONCLUSIONS ……………………………………………………………………….……………………………35
9- VALORACIÓN PERSONAL …………………………………………………………..…………………………36
10- BIBLIOGRAFIA …………………………………………………………..…………………………………………37
11- ANEXOS ………………………………………………………………………………………………………………39
Anexo I Compa a i a mé odos Dumas – Kjeldahl………………….………………………………39
Anexo II abla de la dis ibución -s uden ………………..…………………………………………44
Anexo III Mé odo de análisis cuan i a i o de p o eína po Dumas en p oduc os
cá nicos …………………….…………………………………………………………………………………..……45
I- ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Valo es de p o eína pa a la alidación e ospec i a de ma e iales in e labo a o io
desde 2009 a 2019 buscados en los cuade nos de in e labo a o ios del labo a o io.
Tabla 2. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 11/11/2020
Tabla 3. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 12/11/2020
Tabla 4. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 13/11/2020
Tabla 5. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4484/17 en el día 11/11/2020
Tabla 6. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4484/17 en el día 12/11/2020
Tabla 7. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4484/17 en el día 13/11/2020
Tabla 8. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4635/19 en el día 11/11/2020
Tabla 9. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4635/19 en el día 12/11/2020
Tabla 10. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4635/19 en el día
13/11/2020.
Tabla 11. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
Ma e ial de Re e encia 1- Rango Bajo. Fo ma o ac edi ado, p opio del Labo a o io
Ag oambien al.
Tabla 12. Valo es ob enidos en el p og ama del apa a o LECO de blancos con cápsula de es año
pa a el cálculo de lími es de de ección y cuan i icación.
Tabla 13. Resul ados ob enidos de la alidación e ospec i a de ma e iales de e e encia
an iguos con el p og ama p opio del labo a o io ( PRG-UGC-03 e 1) ac edi ado po ENAC
Tabla 14. Valo es ob enidos del o ma o (FT-UGC-427 e 1) pa a comp obación de la e acidad
del mé odo de alidación.
Tabla 15. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango bajo.
Tabla 16. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango medio.
Tabla 17. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango al o.
Tabla 18. Tabla con los esul ados de las de iaciones es ánda ob enidas según o ma o p opio
del labo a o io (FT-UGC-425. Re 1) . Rango bajo – medio - al o
Tabla 19. Valo es % de p o eína, des iación es ánda y media ob enidos del análisis de p o eína
con mé odo Dumas del Ma e ial de Re e encia Medio pa a comp obación del lími e de
de ección

Tabla 20. Valo es % de p o eína, des iación es ánda y media ob enidos del análisis de p o eína
con mé odo Dumas del Ma e ial de Re e encia Medio pa a comp obación del lími e de
cuan i icación
Tabla 21. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
Tabla 22. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
Tabla 23. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
II- ÍNDICE DE FIGURAS
Figu a 1. Esquema del p oceso de alidación (Du au e al, 2010).
1
1- RESUMEN
El obje i o p incipal de es e abajo es la pues a a pun o y alidación de la de e minación
de p o eína po el mé odo Dumas en el Labo a o io Ag oambien al del Gobie no de A agón.
In e esa al Labo a o io la pues a en ma cha del mé odo en ma ices de p oduc os cá nicos pa a
su pos e io ac edi ación po ENAC.
El Labo a o io dispone de dos p ocedimien os analí icos pa a p o eína, el mé odo
Kjeldahl y el mé odo Dumas, y ya se ha comp obado en o as ma ices que no p esen an
di e encias signi ica i as en sus esul ados.
Como p ime paso se ha edac ado la desc ipción del mé odo de análisis cuan i a i o de
p o eína po Dumas en p oduc os cá nicos. Después, se desa olla un plan de alidación. Al
a a se de un mé odo que se usa desde hace iempo en el Labo a o io, esul a posible compa a
dos o mas de alidación: p ospec i a y e ospec i a.
La alidación e ospec i a, ob eniendo esul ados que p o ienen de la pa icipación en
eje cicios de in e compa ación. Se ealizó una búsqueda en los egis os de eje cicios de
in e compa ación ealizados en los úl imos 10 años, encon ando más de 40 eje cicios. De es os,
solo 22 eunían oda la in o mación necesa ia pa a es e ipo de alidación.
La segunda o ma de alida , la p ospec i a, se lle a a cabo a a és de la epe ición
analí ica, en al menos 3 días di e en es, de ma e iales de e e encia de alo conocido,
ob eniendo esul ados que con un a amien o es adís ico pe mi en alida el mé odo.
En ambas alidaciones ob enemos la e acidad, la p ecisión y inalmen e la
ince idumb e, lo que pe mi e compa a las y conclui que los esul ados ob enidos son
simila es.
Todo el p oceso ha sido desa ollado en un Labo a o io ac edi ado po la En idad
Nacional de Ac edi ación (ENAC), lo que hace posible que es e mé odo llegue a se ac edi ado.
Se concluye que el mé odo Dumas es aplicable a la de e minación de p o eína en
p oduc os cá nicos con unos pa áme os adecuados al uso p e is o.
Palab as cla e: alidación, in e labo a o ios, mé odo Dumas, cá nicos, p o eína
2
2- ABSTRACT
The main objec i e o his wo k is he de elopmen and alida ion o he p o ein
de e mina ion by he Dumas me hod in he “Labo a o io Ag oambien al del Gobie no de
A agón”. The Labo a o y is in e es ed in he implemen a ion o he me hod in ma ices o mea
p oduc s o i s subsequen acc edi a ion by ENAC.
The Labo a o y has wo analy ical p ocedu es o p o ein, he Kjeldahl me hod and he
Dumas me hod, and i has al eady been p o en in o he ma ices ha he e a e no signi ican
di e ences in hei esul s.
As a i s s ep, a desc ip ion o he me hod o quan i a i e p o ein analysis by Dumas in
mea p oduc s has been w i en. Then, a alida ion plan is de eloped. As his me hod has been
used o a long ime in he labo a o y, i is possible o compa e wo o ms o alida ion:
p ospec i e and e ospec i e.
Re ospec i e alida ion, ob aining esul s om pa icipa ion in in e compa ison exe cises.
A sea ch o he eco ds o in e compa ison exe cises conduc ed in he las 10 yea s ound mo e
han 40 exe cises. O hese, only 22 had all he in o ma ion necessa y o his ype o alida ion.
The second o m o alida ion, p ospec i e alida ion, is ca ied ou h ough he analy ical
epe i ion, on a leas 3 di e en days, o e e ence ma e ials o known alue, ob aining esul s
ha , wi h s a is ical ea men , allow he me hod o be alida ed.
In bo h alida ions we ob ain he ueness, p ecision and inally he unce ain y, which
allows us o compa e hem and conclude ha he esul s ob ained a e simila .
The whole p ocess has been de eloped in a labo a o y acc edi ed by he Na ional
Acc edi a ion En i y (ENAC), which makes i possible o his me hod o be acc edi ed.
I is concluded ha he Dumas me hod is applicable o he de e mina ion o p o ein in mea
p oduc s wi h pa ame e s sui able o he in ended use.
Key wo ds: alida ion, in e labo a o y, Dumas me hod, mea , p o ein.
3
3- INTRODUCCIÓN
3.1 ¿Qué es una alidación?
La alidación de un mé odo analí ico es un paso undamen al pa a asegu a que los
esul ados en egados po dicho mé odo son con iables. Cuando se ealiza la alidación de un
mé odo po pa e del labo a o io, lo que se busca es pode de e mina con undamen o
es adís ico que el mé odo es adecuado pa a los ines p e is os.
La alidación es el obje i o p incipal de es e abajo ya que es eque ida en no mas
sob e sis emas de ges ión de la calidad, pa icula men e en la no ma ISO 17025 sob e equisi os
gene ales pa a labo a o ios de calib ación y ensayo.
Es impo an e que el labo a o io enga cla o an es de inicia la alidación cuales son los
eque imien os del mé odo pa a es ablece el alcance de la alidación. Es esencial conoce el
mé odo a alida y su aplicabilidad, es deci , el anali o, su concen ación (ni el, lími e de
de ección, lími e de cuan i icación, e c.) y la ma iz (o ma ices) en las cuales se desea u iliza
(Lazos y He nández, 2004).
El esul ado de una alidación es una decla ación sob e el cumplimien o, o
incumplimien o, de los equisi os pa a el uso o aplicación dada, sus en ada en e idencias,
necesa iamen e obje i as. En la Figu a 1 se mues a un esquema de ipos de alidaciones según
ipos de mé odos a alida .
La alidación puede se compleja, pe o cuando se u iliza co ec amen e, puede aho a
iempo y dine o a la go plazo pe mi iendo un abajo más iable y gene ando unos p ocesos más
con olados y es ables. Conoce el p oceso ayuda á a educi los esul ados no con o mes y
acili a á la demos ación en una audi o ía de que se iene el con ol de los p ocesos (López,
2012).
Figu a 1. Esquema del p oceso de alidación (Du au e al, 2010).
10
𝐿í𝑚𝑖𝑡𝑒)𝑑𝑒)𝑐𝑢𝑎𝑛𝑡𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛=10)𝑥)𝑑𝑒𝑠𝑣𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛)𝑒𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟)𝑑𝑒)10)𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜𝑠
Pa a ambas de e minaciones, se u ilizan blancos, que son cápsulas de es año que no
con ienen el anali o de in e és, pe o que u iliza odos los pasos del p ocedimien o solo con los
eac i os.
3.7.4 Ince idumb e: Rango de alo es en e los que se encuen a el esul ado co ec o
con una de e minada p obabilidad (gene almen e el 95%). La No ma UNE/ISO/IEC
17025:2017 de “Requisi os gene ales ela i os a la compe encia de los
labo a o ios de ensayo y calib ación” pone especial én asis en la necesidad de
es ima la ince idumb e del ensayo (ISO 17025:2017, 2017) y po ello es un
obje i o en la alidación.
La ince idumb e se puede es ima en base al modelo “caja neg a”. Hay cie os é minos
que con igu an la es imación de la ince idumb e po el modelo global o caja neg a, que son
denominados “con ibuciones a la ince idumb e” (Reyes y Ce ezo, 2009):
- Ince idumb e del ma e ial de e e encia
- Di e encia en e del alo medio ob enido y el de e e encia del Ma e ial de
Re e encia Ce i icado (MRC) ( ambién conocido como sesgo o ecupe ación)
- Rep oducibilidad de la medición
Po an o, los é minos a ene en cuen a son:
i. Ince idumb e del MRC
ii. Ve acidad o Exac i ud
iii. P ecisión
𝑈𝑟𝑒𝑙)
(
%
)
=2𝑥
WX
𝐶𝑉
√
𝑛)𝑑𝑖𝑎
Y
!+𝑢)(%)+
[
𝑅)(%)
√
3
!
Siendo:
U el (%): ince idumb e expandida ela i a
u (%): Ince idumb e ma e ial de e e encia
CV: p ecisión aplicada como con ol de calidad
R: sesgo máximo de la ecupe ación (%)
n: nº de epe iciones día

11
La ince idumb e se exp esa asociada al alo cen al en los in o mes de esul ados.
3.8 C i e ios p e ios pa a la alidación
An es de p ocede a la alidación, y en unción de las necesidades de uso de los
esul ados, debe con a se con algún c i e io que debe á cumpli el mé odo pa a conside a lo
adecuado.
En ocasiones se dispone de c i e ios es ablecidos po la legislación, pe o en es e caso no
disponemos de equisi os que sean de obligado cumplimien o. Al no dispone de esos c i e ios
esul a más complicado es ablece obje i os de alidación, en es os casos la uen e de
in o mación debe se , además de las di e en es e e encias bibliog á icas, la p opia expe iencia
adqui ida en la pues a a pun o del mé odo, nues a expe iencia con mé odos simila es o la
expe iencia del “me cado”.
Se op a po es ablece un c i e io pa a la des iación es ánda de modo que sea meno
de 0,91, que es el co espondien e al p omedio de las des iaciones es ánda de odos los
ma e iales de e e encia ecopilados du an e los úl imos 10 años.
12
4- JUSTIFICACIÓN Y OBJETIVOS
La ealización de es e abajo busca, p incipalmen e, la ca ac e ización del mé odo
Dumas de análisis de p o eína en p oduc os cá nicos, gene ando una alidación comple a, con
la es imación de la ince idumb e, que nos indica á los lími es den o de los cuales se encuen a
nues o da o con una p obabilidad del 95% (K=2 coe icien e de cobe u a).
En el labo a o io donde se ealizan los análisis expe imen ales exis e un in e és especial
en la implan ación del mé odo Dumas como al e na i a álida al mé odo Kjeldahl.
Fundamen almen e po las mejo as que es a me odología apo a al día a día, como la apidez
analí ica, las mejo as medioambien ales o la segu idad.
El obje i o p incipal es la alidación del mé odo Dumas, compa ando dos mé odos de
alidación ( e ospec i o y p ospec i o). Aunque pa a pode llega a una conclusión inal, es
necesa io alcanza unos obje i os pa ciales:
1- Desa olla el mé odo de de e minación cuan i a i a de p o eína median e el mé odo
Dumas en p oduc os cá nicos.
2- Ob ene da os de alidación median e e isiones bibliog á icas de da os (Validación
e ospec i a), pa a p ocede a la alidación una ez ecopilados.
3- Ob ene esul ados de análisis expe imen ales (Validación p ospec i a), pa a p ocede
a la alidación una ez ealizados los análisis y ob enidos los esul ados.
4- Calcula los pa áme os de ca ac e ización de ambas alidaciones median e la aplicación
de he amien as es adís icas.
13
5- METODOLOGIA
5.1 Desa ollo del mé odo analí ico Dumas de de e minación cuan i a i a de p o eína
en p oduc os cá nicos.
El ensayo a alida es el análisis de p o eína po el mé odo Dumas, en ma iz de
p oduc os cá nicos ( escos, en pa é, o cu ados). Es e mé odo de cuan i icación de p o eína no
es el mé odo o icial (Boe.es, 1979), que es Kjeldahl, es un mé odo pe mi ido po la legislación
en el caso de piensos po ejemplo, que iene la misma alidez que el mé odo o icial siemp e que
puedas demos a que no exis en di e encias signi ica i as en e los esul ados ob enidos con
ambos mé odos. El p ime paso ue demos a que no exis en di e encias signi ica i as en e
ambos mé odos median e el análisis es adís ico de a ios esul ados de mues as analizadas
an o po el mé odo o icial (Kjeldahl) como po el mé odo al e na i o (Dumas), e en (Anexo I).
T as la búsqueda de los documen os y o ma os necesa ios según el ac ual sis ema de
calidad implan ado en el Labo a o io Ag oambien al, gene a emos un mé odo que end á un
código (MT-ALI-XX). La edacción de los mé odos en es e labo a o io iene que segui un igu oso
o den ma cado po el índice, en el que se incluye: 1- OBJETO, 2- ALCANCE (campo de aplicación,
obje o de ensayo y pa áme os), 3- SEGURIDAD E HIGIENE, 4- DESCRIPCIÓN, 5-REALIZACIÓN
(equipos, ma e iales, condiciones, p ocedimien os, documen os, egis os…), 7- CONTROL DE
CALIDAD ( azabilidad, epe ibilidad, endencias…), 8- RESPONSABILIDADES, 9- REFERENCIAS Y
10- ANEXOS.
Inicialmen e se pa e de un mé odo simila ya desc i o (MT-ALI-010) con el i ulo de :
“ni ógeno po combus ión y de ec o de conduc i idad é mica (mé odo Dumas) y p o eína
b u a”. Es e mé odo solo aba ca a piensos y sus ma e ias p imas, ce eales y sus de i ados, pe o
hay muchos apa ados comunes que podemos aplica a nues o nue o mé odo pa a p oduc os
cá nicos.
Una ez comple ados odos los apa ados an e io es, se comp ueba si exis en c i e ios
ma cados en cuan o a epe ibilidad, ep oducibilidad… po alguna legislación igen e, pe o el
p ocedimien o o icial de análisis del ni ógeno en ca ne (Boe.es, 1979), solo ma ca en el
apa ado 5.5 que el po cen aje de p o eína o al se á: 6,25 x po cen aje de N o al. También
hace e e encia a una no ma ISO R-937 (ISO 937:1978, 1978) que no indica más in o mación en
cuan o a lími es de cuan i icación y de ección, epe ibilidad, e c. Po lo an o, se á el labo a o io
p e ia expe iencia, el que ma que es os lími es necesa ios pa a el seguimien o de la alidación
y de los pos e io es análisis dia ios.
14
Ac ualmen e se abaja en p oduc os cá nicos, pa a la acep ación de los esul ados, se
ealiza cada mues a po iplicado y es os es alo es ienen que cumpli una epe ibilidad de
0,3% en ni ógeno, lo que co esponde a 1,88 % en p o eína. Además es obliga o io in oduci
en cada anda de abajo un con ol (ma e ial de e e encia p oceden e de un eje cicio
in e labo a o io) donde se aplica como ince idumb e 2 eces la des iación es ánda del
ma e ial, debido a que en es e momen o, po no es a alidado el mé odo, se u iliza como
ap oximación a la ince idumb e a aplica .
Finalmen e, el p ocedimien o de análisis Dumas se basa en la combus ión (a 850°C) de
una pequeña can idad de mues a (ap oximadamen e 0,3-0,5 g amos) pesada en una capsula
de es año. En la combus ión se gene an di e sos gases que pasan po el ci cui o in e no del
apa a o, has a llega a un de ec o de conduc i idad é mica que cuan i ica el ni ógeno , donde
se ob end á la can idad de ni ógeno en milig amos, que con el peso in oducido p e iamen e y
el ac o pa a con e sión de ni ógeno a p o eína (6,25), se ob iene el po cen aje de ni ógeno
y p o eína. Se ealiza en p ime luga una limpieza del apa a o, dejando al apa a o unos 20
minu os pasando gases en acío, as es o dos análisis de blanco con cápsula y po úl imo una
ec a de calib ado con ácido e ilendiamino e aacé ico (EDTA), se a a de un pa ón ce i icado,
con un con enido de ni ógeno de 9,56 % ± 0,06, se u ilizan 5 pesos di e en es pa a es a ec a
(0,05, 0,10, 0,15, 0,20 y 0,25 g amos), as el ecalib ación del apa a o odas las medidas de
EDTA deben de cumpli que su po cen aje de ni ógeno a ié en e 9,50 y 9,62. Después de la
acep ación de la ec a se p ocede á a pesa las mues as e inicia el análisis. El mé odo comple o
al de alle se adjun a en Anexo III.
Pa a que és e sea álido, y enga su codi icación, iene que se e isado y ap obado po el
esponsable de la Unidad de Ga an ía de Calidad y po el di ec o del labo a o io, que jun o a la
pe sona que lo ha elabo ado se hacen esponsables del mé odo. Una ez inalizado es e ámi e
se á dis ibuido po el je e de la Unidad de Ga an ía de Calidad.
5.2 Ob ene da os de alidación median e ecopilación de da os his ó icos ( alidación
e ospec i a).
Validación e ospec i a, basada en la ecopilación de esul ados de eje cicios
in e compa ación ealizados po el labo a o io en di e en es años. Es os da os incluyen el alo
de consenso de p o eína, la des iación es ánda ob enida en e los esul ados de los di e en es
labo a o ios pa icipan es en el eje cicio de in e compa ación. Y inalmen e el alo de p o eína
in o mado po el labo a o io median e la écnica Dumas.
15
Es os da os se almacenan en el labo a o io, du an e a ios años (10-15 años) eniendo en
cuen a que la echa de caducidad es de 5 años pa a cada ma e ial. Se a a de una búsqueda de
los esul ados de di e en es eje cicios de in e compa ación en los que el Labo a o io ha
pa icipado pa a es a de e minación y ma iz. Desde el año 2009 has a 2019 se encon a on un
o al de 40 eje cicios; se o dena on en una hoja Excel los alo es de: esul ado epo ado po el
labo a o io, esul ado de consenso de eje cicio, y la des iación es ánda . T as el es udio
ealizado, solo 22 de los eje cicios an e io es ienen los 3 alo es eque idos, con los que se a
a abaja (Tabla 1).
Median e un p og ama Excel (PRG-UGC-03 Re 1), den o del sis ema de ges ión de calidad
del Labo a o io Ag oambien al, se calculan los sesgos (es deci , la di e encia en e el alo
emi ido po el Labo a o io y alo asignado po el p o eedo del eje cicio), y el z-sco e (que es
la di isión del sesgo en e la des iación es ánda ) de cada eje cicio.
Como úl imo paso, se calcula la ince idumb e del mé odo de p o eína Dumas, pa a ello se
calcula cada con ibución a la ince idumb e: media y des iación es ánda de los sesgos.
Con odos es os da os pod emos calcula : la ince idumb e, la p ecisión (como des iación
es ánda o coe icien e de a iación), y la e acidad del p oceso (como ecupe ación).
Tabla 1. Valo es de p o eína pa a la alidación e ospec i a de ma e iales in e labo a o io
desde 2009 a 2019 buscados en los cuade nos de in e labo a o ios del labo a o io.
Nº
Nº DE INTERCOLABORATIVO
VALOR ASIGNADO
VALOR MEDIO
SESGO
1
811/11
11,91
11,45
-0,46
2
3522/11
21,94
21,35
-0,59
3
4381/11
19,55
20,03
0,48
4
537/12
13,15
12,99
-0,16
5
341/13
12,71
11,79
-0,92
6
3803/14
24,89
25,7
0,81
7
813/15
9,58
7,78
-1,80
8
957/16
12,25
12,31
0,06
9
4247/15
28,86
21,65
-7,21
10
3804/14
9,81
9,54
-0,27
11
1374/17
13,12
12,63
-0,49
12
3521/13
22,83
23,34
0,51
13
3623/16
28,75
29,31
0,56
14
249/18
13,56
13,31
-0,25

16
15
2045/17
13,12
13,12
0,00
16
4484/17
13,01
12,94
-0,07
17
4486/17
9,89
10,02
0,13
18
1691/18
13,69
13,13
-0,56
19
2310/19
28,69
28,88
0,19
20
4635/19
28,85
29,33
0,48
21
3720/16
7,49
7,43
-0,06
22
4814/19
7,19
7,13
-0,06
5.3 Ob ene da os de esul ados de análisis expe imen ales ( alidación p ospec i a).
Validación p ospec i a, basada en la epe ición de análisis de p o eína po el mé odo
Dumas. Pa a la ob ención de alo es que sean signi ica i os se ealiza un plan de alidación. En
es e plan se alo an los ma e iales disponibles en ese momen o, se comp ueba cual es el ango
habi ual de abajo; que se es ablece desde 7 a 30 % p/p en p o eína, inalmen e se eligen 3
ma e iales de e e encia que es én en el ango bajo (7%), ango medio (13-15%) y un ango al o
(28-30%), y se ecoge la in o mación necesa ia de cada ma e ial pa a el cálculo pos e io de la
alidación:
- Ma e ial de ango Bajo (nº de egis o labo a o io: 3720/16): Se a a de un p oduc o
cá nico (Tocino en e e ado), son es os de un eje cicio in e labo a o ios del año 2016,
de la en idad JUNAN ( JUNAN 13/16 M2), se ob iene el ce i icado en oc ub e de 2016,
con una caducidad del p oduc o de 5 años, gua dando los es os de mues a en el
congelado a -18°C. El alo eal o ce i icado de % de p o eína sob e ma e ia na u al es
de 7,49 ± 1,50 % p/p p o eína sob e ma e ia na u al (smn). El alo que el labo a o io
epo ó en ese eje cicio ue de 7,43 % p/p p o eína smn. Ob eniendo un z-sco e -0,07 y
una des iación es ánda del eje cicio de 0,7491.
- Ma e ial de ango Medio (Nº de egis o de labo a o io: 4484/17) : Se a a de un
p oduc o cá nico (Jamón cocido), son es os de un eje cicio in e labo a o ios del año
2017, de la en idad JUNAN ( Ensayo 10/17 M1), se ob iene el ce i icado en no iemb e
de 2017, con una caducidad del p oduc o de 5 años, gua dando los es os de mues a
en el congelado a -18°C. El alo eal es de 13,01 ± 1,301 % p/p p o eína smn. El alo
17
que el labo a o io epo ó en ese eje cicio ue de 12,94 % p/p p o eína smn. Ob eniendo
un z-sco e -0,11 y una des iación es ánda del eje cicio de 0,6505.
- Ma e ial de ango Al o (nº de egis o labo a o io: 4635/19): Se a a de un p oduc o
cá nico (Jamón cu ado), son es os de un eje cicio in e labo a o ios del año 2019, de la
en idad Gabine e de se icios pa a la Calidad (GSC-MEAT/2019M1B), se ob iene el
ce i icado en ene o de 2020, con una caducidad del p oduc o de 5 años, gua dando los
es os de mues a en el congelado a – 18°C. El alo eal es de 28,85 ± 2,88 % p/p
p o eína smn. El alo que el labo a o io epo ó en ese eje cicio ue de 29,33 % p/p
p o eína smn. Ob eniendo un z-sco e 0,33 y una des iación es ánda del eje cicio de
1,44.
Pa a que es a alidación sea ep esen a i a, se ealiza án 10 análisis dia ios de p o eína
de cada ma e ial ( ango bajo, medio y al o) du an e 3 días di e en es, siguiendo el mé odo
Dumas desc i o en el Anexo III, en o al es o se án 90 esul ados independien es. Se ecoge án
los da os ob enidos y se o dena án en una hoja Excel pa a el pos e io a amien o de da os.
Es os ma e iales se conse an congelados, po lo que un día an es se p ocede a man ene en
e ige ación pa a su descongelación.
Se aplicó el p ocedimien o al cual se desc ibe en el mé odo, omando pesos de pa ida de
en e 0,300 y 0,500 g amos. P e iamen e a las pesadas se homogeneizo el ma e ial de
e e encia con un molinillo adecuado pa a asegu a la homogeneidad de la mues a y, po an o,
la epe ibilidad en los alo es del análisis.
Con ca ác e p e io al uso del equipo, al como indica el mé odo, se p ocede a pone a
pun o el ins umen o de medida de la ma ca (LECO) de análisis de ni ógeno po mé odo Dumas,
median e la limpieza y calib ación, ob eniendo la ec a de calib ado. De es e modo se p ocedió
cada día de análisis:
Día 1: 11/No iemb e/2020;
Día 2: 12/No iemb e/2020;
Día 3: 13/No iemb e/2020.
A. RANGO BAJO
Se pesan 10 cápsulas del ma e ial y se in oducen en el au o-mues eado del LECO ob eniendo
los da os de % de p o eína e lejados en las Tablas 2, 3 y 4 co esponden al ango bajo, las Tablas
5,6 y 7 al ango medio y po úl imo las Tablas 8, 9 y 10 al ango al o:
DIA 1
18
Tabla 2. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 11/11/2020.
Nº de mues a
Peso (g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de p o eína
3720-1
0,4352
1,0570
6,25
6,607
3720-2
0,4402
1,0115
6,25
6,322
3720-3
0,3876
1,1549
6,25
7,218
3720-4
0,4522
1,1003
6,25
6,877
3720-5
0,3224
1,0780
6,25
6,738
3720-6
0,4375
0,9969
6,25
6,231
3720-7
0,4000
0,9855
6,25
6,160
3720-8
0,3795
1,0417
6,25
6,511
3720-9
0,4188
1,1577
6,25
7,236
3720-10
0,3507
1,1934
6,25
7,460
DIA 2
Tabla 3. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 12/11/2020.
Nº de mues a
Peso (g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de p o eína
3720-1
0,2642
0,9950
6,25
6,219
3720-2
0,4239
1,1773
6,25
7,358
3720-3
0,3215
1,0900
6,25
6,813
3720-4
0,3328
0,9806
6,25
6,129
3720-5
0,3318
1,1161
6,25
6,976
3720-6
0,2527
1,0208
6,25
6,380
3720-7
0,3857
1,0675
6,25
6,672
3720-8
0,3000
1,0282
6,25
6,426
3720-9
0,3156
0,9991
6,25
6,245
3720-10
0,3782
1,0390
6,25
6,494
DIA 3
Tabla 4. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 3720/16 en el día 13/11/2020.
Nº de mues a
Peso (g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de p o eína
3720-1
0,3360
1,1703
6,25
7,315
3720-2
0,3345
1,0432
6,25
6,520
3720-3
0,4225
0,9403
6,25
5,877
19
3720-4
0,5204
1,0392
6,25
6,495
3720-5
0,4180
1,0891
6,25
6,807
3720-6
0,4790
1,0385
6,25
6,491
3720-7
0,3638
1,0234
6,25
6,396
3720-8
0,3692
1,0095
6,25
6,309
3720-9
0,3959
0,9863
6,25
6,165
3720-20
0,2785
1,0152
6,25
6,345
B. RANGO MEDIO
DIA 1
Tabla 5. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4484/17 en el día 11/11/2020.
Nº de mues a
Peso (g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de p o eína
4484-1
0,3488
2,1061
6,25
13,16
4484-2
0,3289
2,1148
6,25
13,22
4484-3
0,3996
2,1388
6,25
13,37
4484-4
0,2752
2,1417
6,25
13,39
4484-5
0,4543
2,0943
6,25
13,09
4484-6
0,6105
2,0460
6,25
12,79
4484-7
0,3735
2,1166
6,25
13,23
4484-8
0,4562
2,1345
6,25
13,34
4484-9
0,4743
2,0780
6,25
12,99
4484-10
0,4042
2,1021
6,25
13,14
DIA 2
Tabla 6. Resul ados ob enidos del p og ama Leco pa a el ma e ial 4484/17 en el día 12/11/2020.
Nº de mues a
Peso (g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de p o eína
4484-1
0,5841
2,1002
6,25
13,13
4484-2
0,4533
2,1787
6,25
13,62
4484-3
0,6636
2,1636
6,25
13,52
4484-4
0,4291
2,2039
6,25
13,77
4484-5
0,2809
2,2099
6,25
13,81
4484-6
0,4846
2,1835
6,25
13,65
4484-7
0,4578
2,1794
6,25
13,62
26
Además de ob ene la ince idumb e, se comp ueba la e acidad con el es udio de -
S uden , donde se ob iene una calculada de 1,278 y la abulada de 1,721 pa a una
p obabilidad del 95 % y 21 g ados de libe ad ( ). Como la -calculada es in e io que la
abulada, se con i ma la alidez a es e mé odo de alidación (Tabla 14).
Tabla 14. Valo es ob enidos del o ma o (FT-UGC-427 e 1) pa a comp obación de la e acidad
del mé odo de alidación.
6.3 Validación p ospec i a, cálculo de ince idumb e pa iendo de los da os
ob enidos y esul ados de los pa áme os de ca ac e ización
6.3.1 Exac i ud
Se compa an los alo es ob enidos con los alo es de e e encia, median e un es udio
es adís ico del es -S uden alo a emos su ap i ud y alidez (Tabla, 15,16 y 17). Median e la
abla del Anexo II, buscamos el alo de abulada pa a 9 g ados de libe ad ( =10-1) y un 95%
de p obabilidad, el alo ob enido es de 1,833.
o Rango bajo
Tabla 15. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango bajo.
3720/16 (7,49%)
Día 1
Día 2
Día 3
To al de días
Media ( % P/P p o eína)
6,74
6,57
6,47
6,635
Sesgo
-0,63
-0,92
-1,02
-0,85
T calculada
0,522
0,753
0,842
1,26
o Rango medio
Tabla 16. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango medio.
4484/17 (13,01%)
Día 1
Día 2
Día 3
To al de días
VERACIDAD
cal
1,278
ab
1,721

27
Media ( % p o eína)
13,17
13,60
13,33
13,39
Sesgo
0,16
0,59
0,32
0,38
T cal
0,273
0,971
0,592
1,01
o Rango Al o
Tabla 17. Cálculo de -S uden desde los sesgos del alo e e encia y el alo medio de análisis
en ango al o
4635/19 (28,85%)
Día 1
Día 2
Día 3
To al de días
Media ( % p o eína)
29,93
29,87
30,24
30,00
Sesgo
1,08
1,02
1,39
1,15
T cal
1,308
0,526
1,218
0,796
Todos los alo es de calculadas es án po debajo de la abulada, po lo que no exis en
di e encias signi ica i as al 95% de p obabilidad en e los di e en es días de análisis y el ma e ial
de e e encia u ilizado. Po lo an o la exac i ud de es e mé odo es acep able.
6.3.2 P ecisión
Se calcula la des iación es ánda de las medias de los 3 días, es os da os se ob ienen
desde el p og ama in e no del Labo a o io (FT-UGC-425. Re 1):
Rango bajo = 0,133
Rango medio = 0,217
Rango Al o = 0,211
o Repe ibilidad:
Des iación es ánda ob enida al analiza una misma mues a a ias eces, en un pe iodo
co o de iempo, sin cambia de equipo de medida, eac i os o analis a. Válido pa a las
epe iciones dia ias (Tabla 18).
Tabla 18. Tabla con los esul ados de las de iaciones es ánda ob enidas según o ma o p opio
del labo a o io (FT-UGC-425. Re 1) . Rango bajo – medio – al o.
3720/16 (7,49% p/p)
Tanda día 1
Tanda día 2
Tanda día 3
Des iación es ánda
0,454
0,386
0,383
4484/17 (13,01% p/p)
Tanda día 1
Tanda día 2
Tanda día 3
28
Des iación es ánda
0,185
0,192
0,171
4635/19 (28,85% p/p)
Tanda día 1
Tanda día 2
Tanda día 3
Des iación es ánda
0,261
0,613
0,361
o Rep oducibilidad
Es a des iación co esponde a la se ie comple a de los 30 análisis en conjun o, donde
cambian an o los días de análisis, como las ec as de calib ado.
Rango bajo = 0,410
Rango medio = 0,252
Rango Al o = 0,457
En odos los casos es as des iaciones son bas an e in e io es de 0,91 que es el alo
obje i o p opues o inicialmen e, como no exis e una legislación que ma que ningún pa áme o,
se decidió coge la des iación es ánda media de odos los ma e iales de e e encia abajados
en la alidación e ospec i a.
El esul ado es muy posi i o en es e aspec o. Se puede conclui diciendo que es un
mé odo que demues a ene una al a p ecisión.
6.3.3 Lími es de de ección y cuan i icación.
Des iación es ánda absolu a del % de p o eína ob enida de los alo es Tabla 12: 0,0689
Lími e de De ección= 3 x des iación es ánda absolu a = 1,29 % en p o eína
Lími e de Cuan i icación= 10 x des iación es ánda absolu a = 4,31 % en p o eína
Los alo es calculados de lími es de de ección se án 1,29% y pa a el lími e de
cuan i icación 4,31%. Se p ocede a la comp obación de los lími es ma emá icos con mues as
eales, según la me odología desc i a, ob eniendo los siguien es alo es (Tabla 19 y 20).
Tabla 19. Valo es % de p o eína, des iación es ánda y media ob enidos del análisis de p o eína
con mé odo Dumas del ma e ial de e e encia pa a comp obación del lími e de de ección.
Nº de mues a
Peso
(g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de
p o eína
Ma e ial de
e e encia
0,9100
0,21325
6,25
1,333
29
Ma e ial de
e e encia
0,9750
0,20747
6,25
1,297
Ma e ial de
e e encia
0,9360
0,20488
6,25
1,281
Des iación
es ánda
0.0266
Media de los alo es
1,30%
Tabla 20. Valo es % de p o eína, des iación es ánda y media ob enidos del análisis de p o eína
con mé odo Dumas del ma e ial de e e encia pa a comp obación del lími e de cuan i icación.
Nº de mues a
Peso
(g amos)
% de ni ógeno
ac o
% de
p o eína
Ma e ial de
e e encia
0,4731
0,7251
6,25
4,532
Ma e ial de
e e encia
0,4434
0,7163
6,25
4,477
Ma e ial de
e e encia
0,4362
0,7000
6,25
4,375
Des iación
es ánda
0,0797
Media de los alo es
4,46%
Se concluye que los lími es de de ección y cuan i icación calculados ma emá icamen e
ob enidos de los esul ados del análisis de blancos con cápsula po el mé odo Dumas son da os
iables, po que as la ealización de la comp obación con mues a eal se de ec a una media de
1,30 % de p o eína (cuando el lími e de de ección calculado es 1,29 %) y en el lími e de
cuan i icación una media de 4,46 % (siendo el alo calculado de 4,31%).
Finalmen e p oponemos que el ango de abajo sea po encima de 5% p/p p o eína, y
po debajo de ese alo no podemos asegu a que el esul ado sea álido y cuan i icable con
ce eza po el mé odo Dumas.
6.3.4 Cálculo de la ince idumb e
30
Con el mismo p og ama que hemos es ado abajando an e io men e (FT-UGC-425 e 1)
se ob ienen los esul ados de las ince idumb es de los di e en es angos de abajo, ecogidas
en las Tablas 21, 22 y 23 que se mues an a con inuación.
- Rango bajo: Se ob iene un alo de ince idumb e ela i a de 20,67% y una
ecupe ación de 88,02% .
Tabla 21. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
MATERIAL DE REFERENCIA (1) Rango bajo
PRECISIÓN
REPETIBILIDAD
TANDA 1
TANDA 2
TANDA 3
MEDIA
6,736
6,571
6,472
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
0,454
0,386
0,383
COEFICIENTE DE
VARIACIÓN (%)
6,73 %
5,87 %
5,92 %
REPRODUCIBILIDAD
CONSIDERANDO
MEDIAS
CONJUNTO VALORES
MEDIA
6,593
6,593
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
0,133
0,410
COEFICIENTE DE VARIACIÓN (%)
2,02 %
6,22 %
RECUPERACIONES
RECUPERACION MEDIA
88,02 %
RANGO
99,60 %
78,46 %
INCERTIDUMBRE
INCERTIDUMBRE DE ENSAYO (CON
COEFICIENTE DE PROBABILIAD DEL 95%)
1,363
INCERTIDUMBRE RELATIVA (%)
20,67 %
- Rango medio: Se ob iene un alo de ince idumb e ela i a de 6,36 % y una
ecupe ación de 102,76%
31
Tabla 22. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
MATERIAL DE REFERENCIA (2) Rango medio
PRECISIÓN
REPETIBILIDAD
TANDA 1
TANDA 2
TANDA 3
MEDIA
13,172
13,601
13,334
DESVIACION ESTANDAR
0,185
0,192
0,171
COEFICIENTE DE
VARIACION (%)
1,40 %
1,41 %
1,28 %
REPRODUCIBILIDAD
CONSIDERANDO
MEDIAS
CONJUNTO VALORES
MEDIA
13,369
13,369
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
0,217
0,252
COEFICIENTE DE VARIACIÓN (%)
1,62 %
1,89 %
RECUPERACIONES
RECUPERACION MEDIA
102,76 %
RANGO
106,15 %
98,31 %
INCERTIDUMBRE
INCERTIDUMBRE DE ENSAYO (CON
COEFICIENTE DE PROBABILIDAD DEL 95%)
0,8501
INCERTIDUMBRE RELATIVA (%)
6,36 %
- Rango al o: Se ob iene un alo de ince idumb e ela i a de 6,77% y una
ecupe ación de 104,00%
Tabla 23. Fo ma o de cálculo de ince idumb e de acue do con (FT-UGC-425 e 1), pes aña
esumen. Fo ma o ac edi ado, p opio del labo a o io Ag oambien al.
MATERIAL DE REFERENCIA (3) Rango Al o
PRECISIÓN
REPETIBILIDAD
TANDA 1
TANDA 2
TANDA 3
MEDIA
29,932
29,836
30,240

32
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
0,261
0,613
0,361
COEFICIENTE DE
VARIACIÓN (%)
0,87 %
2,05 %
1,19 %
REPRODUCIBILIDAD
CONSIDERANDO
MEDIAS
CONJUNTO VALORES
MEDIA
30,003
30,003
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
0,211
0,457
COEFICIENTE DE VARIACIÓN (%)
0,70 %
1,52 %
RECUPERACIONES
RECUPERACION MEDIA
104,00 %
RANGO
107,80 %
101,59 %
INCERTIDUMBRE
INCERTIDUMBRE DE ENSAYO (CON
COEFICIENTE DE PROBABILIDAD DEL 95%)
2,031
INCERTIDUMBRE RELATIVA (%)
6,77 %
Con la ob ención se de las es ince idumb es ela i as co espondien es a los
di e en es angos que hemos abajado, se calcula su media, y es e alo es la ince idumb e
media ela i a de nues o mé odo de p o eína Dumas.
% de INCERTIDUMBRE MEDIA RELATIVA
11,27%
Se obse a cla amen e una disco dancia en los esul ados de % de ince idumb e ela i a
de ango bajo espec o a los del ango medio y al o, pues es e alo es 3 eces mayo . Con es os
esul ados la mejo opción es hace una alidación po angos, abajando con una
ince idumb e exclusi a pa a ango bajo (po ejemplo alo es de % p/p p o eína meno es del
10%, aplica án un % de ince idumb e del 20,67%), y o a ince idumb e pa a el es o de angos
(po ejemplo alo es de % p/p p o eína mayo es del 10%, aplica án un % de ince idumb e del
6,77%). Po comodidad y po que el obje i o del abajo es compa a los dos di e en es mé odos
de alidación, se abaja con la ince idumb e media de 11,27%. El p incipal p oblema que puede
causa usa una única ince idumb e es que los con oles dia ios de abajo que se encuen en
con alo es meno es del 10% no cumplan con el alo obje i o, y se enga que epe i la anda
de abajo.
33
6.4 Valo ación de las ince idumb es de los dos mé odos de alidación ( e ospec i a
y p ospec i a).
Es el momen o de llega al obje i o p incipal de es e abajo, que además de la ealización
del mé odo de análisis de p o eína po Dumas pa a p oduc os cá nicos, consis e en su
alidación. El obje i o es compa a las dos o mas de alidación pa a conclui cual es más
p ecisa, y más iable de u iliza , y es o se puede compa a con dos esul ados que se ob ienen
en ambas alidaciones: % ince idumb e ela i a y % de ecupe ación.
Resul ados inales:
- Validación e ospec i a: ince idumb e ela i a media 11,98 % y % de ecupe ación
medio: 97,35%
- Validación p ospec i a: ince idumb e ela i a media 11,27% y % de ecupe ación
media: 98,26%.
Se puede conclui que las ince idumb es ela i as son simila es an solo exis e una
di e encia de 0,71%, y en el po cen aje de ecupe ación los esul ados igualmen e son muy
simila es con una di e encia de 0,91%.
Ambos mé odos de alidación han demos ado su u ilidad sin apo a g andes di e encias
en los esul ados inales.
Las mayo es di e encias que se ap ecian en e los dos mé odos de alidación son el
iempo que cues a ealiza las alidaciones: pa a el caso de alidación e ospec i a, el iempo
es co o, pe o es necesa io dispone de mucha in o mación documen al, ambién es necesa io
que el labo a o io pa icipe en eje cicios in e compa ación pa a el análisis que se quie a alida ;
además no malmen e es di ícil encon a muchos alo es ú iles pa a la alidación, po lo que en
algunos casos las alidaciones no suelen se ep esen a i as. Pa a las alidaciones p ospec i as,
es necesa io con a con ma e iales de e e encia ce i icados con la can idad su icien e pa a
ealiza las andas de abajo. Asimismo, dispone de un buen plan de alidación, aco a ía los
iempos de abajo, aunque el iempo depende de los mé odos que alida no es lo mismo
alida un análisis di ec o (Ej. pH) que un mé odo que necesi e diges iones…(Ej. análisis de
espec o o ome ía), lo que puede a ia de unos pocos días a a ias semanas. Pe o,
independien emen e del iempo, es e ipo de alidación pe mi e la ob ención de muchos
esul ados di e en es, que apo an muchos da os a la alidación.
34
7- CONCLUSIONES
Como p incipales conclusiones del abajo se des aca:
• T as la cons a ación de que no exis en di e encias signi ica i as en e los dos mé odos de
análisis de p o eína (Dumas y Kjeldahl), se edac a, e isa y alida el mé odo cuan i a i o de
análisis de p o eínas po combus ión y conduc i idad é mica (Dumas) pa a p oduc os
cá nicos. Es e mé odo se inco po a á así al lis ado de mé odos in e nos del Labo a o io
Ag oambien al.
• T abaja con un labo a o io que iene implan ado un sis ema de calidad obus o ha acili ado
an o la ob ención de esul ados de p o eína, p oceden es de su pa icipación en eje cicios
in e labo a o io, como la ealización con esos esul ados de la alidación e ospec i a a
a és de sus p opios o ma os in e nos ac edi ados. Finalmen e se ha ob enido una
ince idumb e álida con los da os de análisis de p o eína ecopilados de 22 eje cicios
in e compa ación. Es e p ocedimien o de alidación no supone un cos e adicional, pues o
que el abajo es aba ya ealizado como pa e del con ol de calidad.
• La alidación p ospec i a pe mi e ob ene la ince idumb e po angos de abajo, y es ima
el lími e de de ección y el lími e de cuan i icación. Sin emba go, es e ipo de alidación, al
necesi a ob ene los da os median e un abajo expe imen al en el labo a o io, equie e un
iempo de abajo ex a, e implica además un consumo de eac i os y ma e iales de
e e encia, lo que supone un cos e adicional.
• Se ha comp obado que pa a alida el mé odo de análisis de p o eína po Dumas, los dos
sis emas u ilizados ( e ospec i o y p ospec i o), o ecen esul ados simila es, y se pueden
u iliza indis in amen e según los obje i os plan eados.
• Finalmen e, queda documen ado y alidado el p ocedimien o pa a la de e minación de
p o eína po el mé odo Dumas, con unos pa áme os de ca ac e ización que son acep ables
pa a el uso p e is o de los esul ados.
35
8- CONCLUSIONS
The main conclusions o he wo k a e as ollows:
• Following he inding ha he e a e no signi ican di e ences be ween he wo p o ein
analysis me hods (Dumas and Kjeldahl), he quan i a i e me hod o p o ein analysis by
combus ion and he mal conduc i i y (Dumas) o mea p oduc s is d a ed, e ised and
alida ed. This me hod will hus be inco po a ed in o he lis o in e nal me hods o he
“Labo a o io Ag oambien al”.
• Wo king wi h a labo a o y ha has a obus quali y sys em in place has acili a ed bo h he
ob aining o p o ein esul s om i s pa icipa ion in in e labo a o y exe cises and he use o
hese esul s o e ospec i e alida ion h ough i s own in e nal acc edi ed o ma s.
Finally, a alid unce ain y has been ob ained wi h he p o ein analysis da a collec ed om
22 in e compa ison exe cises. This alida ion p ocedu e does no in ol e any addi ional
cos , since he wo k was al eady done as pa o quali y con ol.
• P ospec i e alida ion makes i possible o ob ain he unce ain y by wo king anges, and o
es ima e he limi o de ec ion and he limi o quan i ica ion. Howe e , his ype o
alida ion, since i equi es ob aining he da a h ough expe imen al wo k in he labo a o y,
equi es ex a wo k ime, and also in ol es he consump ion o eagen s and e e ence
ma e ials, which en ails an addi ional cos .
• I has been p o en ha o alida e he p o ein analysis me hod by Dumas, he wo sys ems
used ( e ospec i e and p ospec i e), o e simila esul s, and can be used indis inc ly
acco ding o he objec i es se .
• Finally, he p ocedu e o p o ein de e mina ion by he Dumas me hod is documen ed and
alida ed, wi h cha ac e iza ion pa ame e s ha a e accep able o he in ended use o he
esul s.
42
-0,01
-0,23
0,40
-0,35
-0,09
-0,42
0,25
-0,03
0,84
-0,37
0,38
-0,17
0,67
-0,40
0,19
-0,24
0,09
-0,27
0,65
-0,86
0,25
-0,22
0,03
-0,02
0,17
-0,14
1,89
-0,39
0,15
-0,20
0,33
-0,30
0,07
-0,04
0,52
-0,41
1,81
-0,43
0,97
-0,31
0,64
-0,43
0,92
-0,78
0,75
-0,34
0,02
-0,07
0,01
-0,07
0,61
-0,23
1,04
-0,24
0,23
-0,60
0,66
-0,19
0,07
-0,27
0,63
-1,15
0,25
-0,22
0,51
-0,05

43
1,63
-0,09
1,34
-0,39
0,52
-0,15
Tabla 27. Aplicación del es es adís ico -s uden y alo es de calculada y abulada pa a una
p obabilidad del 95% y 38 g ados de libe ad
Media
0,52
-0,31
Des iación
es ánda
0,501
0,244
nº da os
39
39
calculada
0,165
0,202
abulada
2,024
2,024
En ambos casos las calculadas mues as alo es in e io es a las abuladas, po lo que no hay
di e encias signi ica i as en e los mé odos de análisis de p o eína.
Dumas e sus Kjeldahl
Dumas e sus Kjeldahl
di e encias EN LABORATORIO
di e encias CON VALORES CONSENSO
44
Anexo II: Tabla de la dis ibución -s uden , donde al a co esponde a la
p obabilidad y co esponde a los g ados de libe ad.
45
Anexo III Mé odo de análisis de p o eína po mé odo Dumas en p oduc os cá nicos.
LABORATORIO AGROAMBIENTAL
MÉTODOS DE ENSAYO
NITRÓGENO Y PROTEÍNA BRUTA POR EL MÉTODO DUMAS EN DERIVADOS CÁRNICOS.
Documen o: MT-XXX-XX
Re isión: 0
Fecha ap obación:
Pagina 1 de 11
Elabo ado po : And ea Pé ez Li e y An onio López Aliaga
Fi ma:
Re isado po : Jesús Be án Aso
Fi ma:
Ap obado po : Nicolás Abancens Teje o
Fi ma:
Dis ibuido po el je e de la Unidad de Ga an ía de Calidad.
CAMBIOS INTRODUCIDOS RESPECTO A LA REVISIÓN ANTERIOR:
Respec o a las pe sonas cuali icadas pa a la e isión an e io , ESTA REVISIÓN:
¿REQUIERE RECUALIFICACIÓN?: x NO (Cambios meno es que se les comunican) □ SI
(Sólo pa a el caso de mé odos)
¿SE REQUIERE REVISIÓN DE LA VALIDACIÓN?: x NO □ SI Fecha: ________ ¿CAMBIA EL PLAN DE
CONTROL DE CALIDAD?: x NO □ SI Fecha: ________
46
0.ÍNDICE
1. OBJETO. 3
2. ALCANCE. 3
2.1.-) Campo de aplicación. 3
2.2.-) Obje o some ido a ensayo. 3
2.3.-) Pa áme os y magni udes a de e mina . 3
3. SEGURIDAD E HIGIENE. 3
4. DEFINICIONES. 3
5. DESCRIPCIÓN. 4
6. REALIZACIÓN.
6.1.-) Equipos. 4
6.2.-) Ma e iales y eac i os. 4
6.3.-) Condiciones de ealización. 5
6.4.-) P ocedimien os elacionados. 5
6.5.-) Documen os eque idos. 5
6.6.-) Regis os gene ados. 5
6.7.-) Aplicaciones in o má icas 5
6.8.-) P ocedimien o o ealización 6
7. CONTROL DE CALIDAD. 9
7.1.-) Con ol de la azabilidad. 9
7.2.-) Repe ibilidad. 9
7.3.-) Análisis de endencias. 10
7.4.-) Ensayos de ap i ud. 10
8. RESPONSABILIDADES. 10
9. REFERENCIAS. 11
9.1.-) Documen os in e nos. 11
9.2.-) Documen os ex e nos. 11
10. ANEXOS. 11
47
1. OBJETO.
Desc ibe el p ocedimien o pa a la de e minación de ni ógeno y su con e sión en p o eína po
combus ión y de ec o de conduc i idad é mica. Mé odo de ensayo AOAC 990.03
2. ALCANCE.
2.1.-) Campo de aplicación.
De e minación de ni ógeno (p o eína b u a) en odo ipo de p oduc os y de i ados cá nicos con
un limi e in e io de abajo de 0.8 % de ni ógeno (5% en p o eína).
2.2.-) Obje o some ido a ensayo.
De i ados y p oduc os cá nicos.
2.3.-) Pa áme os y magni udes a de e mina .
El pa áme o a de e mina es el ni ógeno que al mul iplica lo po un ac o (se usa el ac o
6,25) nos da el con enido en p o eína. El esul ado se exp esa en % p/p, no malmen e sob e
ma e ia na u al.
3. SEGURIDAD E HIGIENE. I p o is o de guan es
4. DEFINICIONES.
- De i ados cá nicos: Son los p oduc os alimen icios p epa ados o al o pa cialmen e con ca nes
o menudencias de los animales ci adas en el pun o 1.1 del anexo I del Reglamen o 853/2004 del
Pa lamen o Eu opeo y del Consejo de 29 de ab il de 2004 po el que se es ablecen no mas
especi icas de higiene de los alimen os de o igen animal y some idos a ope aciones especi icas
an es de su pues a al consumo. Se án p epa ados o p oduc os cá nicos según lo es ablecido en
la no ma i a comuni a ia de aplicación.

48
- Mé odo Dumas: Mé odo de de e minación del ni ógeno po combus ión de la mues a. Es
una al e na i a muy iable, segu a y limpia al mé odo Kjeldahl (mé odo o icial po RD 2257/1994
no6).
- P o eína: Mac omolécula o gánica cons i uida po aminoácidos, cuya composición elemen al
incluye Ca bono, Hid ógeno, Oxigeno y Ni ógeno, y en muchos casos ambién Azu e. Son
componen e undamen al de los se es i os, y son esenciales en la alimen ación de los animales.
Po e mino medio con ienen un 16 % de ni ógeno, po lo que 6,25 g de p o eína con ienen 1
g de ni ógeno. De es e modo, el ac o 6,25 se u iliza con ecuencia pa a ob ene la p o eína a
pa i del con enido de ni ógeno.
- P o eína B u a: To al de p o eína con enida en odos los componen es de la mues a, ob enida
a a és del ni ógeno o al en la mues a.
5. DESCRIPCIÓN.
La mues a se combus iona a 850oC, en el p oceso de combus ión se gene a CO2,H2O,N2, NOx.
P ime o los gases se hacen pasa po cob e calien e pa a qui a el oxígeno y educi los óxidos
de ni ógeno a ni ógeno molecula . A con inuación los gases se pasan po un p ime il o
(Lecoso b) donde se queda e enido el dióxido de ca bono, seguidamen e se hacen pasa po un
segundo il o (Anhid ona) donde se e iene el agua apo . Finalmen e el ni ógeno molecula
con helio po ado es medido en una celda de e mo conduc i idad di e encial. El esul ado inal
se mues a como po cen aje en peso de ni ógeno con el ac o que le in oduces al p og ama
e calcula el % de p o eína.
6. REALIZACIÓN.
6.1.-) Equipos.
• - Analizado de ni ógeno LECO FP-528
• - Balanza con esolución de 1mg.
6.2.-) Ma e iales y eac i os.
• - Res os de mues a de eje cicios de in e compa ación (pa a usa como e e encia).
• - Capsulas de la ón o es año: D.20mm
• - EDTA- 9,56 % de ni ógeno ±0.06
• - Gases: Gas po ado – He o A (40psi) Gas de combus ión – O2 (40psi) y Gas neumá ico
– ai e comp imido lib e de agua y acei e (40psi).
49
- Reagen ube epacking: Glass wool
Anhyd ona
Lecoso b
- Fu nace il e ube:
Qua z wool s ips
S eel wool
- Reduc ion hea e ube epacking: Coppe s icks
Coppe u nings
N-Ca alys
- Combus ion ube:
Honeycomb ce amic
Qua z wool s ips
Fu nace eagen magnesium oxide beads Fu nace eagen
Alumina oxide pelle s
6.3.-) Condiciones de ealización.
No se equie en condiciones ambien ales especiales.
6.4.-) P ocedimien os elacionados.
• - Ins ucción Técnica de calib ación y e i icación de balanzas (IT-GEN-301)
• - Ins ucción Técnica de p epa ación de mues as (IT-ALI-101).
6.5-) Documen os eque idos.
• - Hoja de abajo (FT-ALI-010).
• - Lib o de equipo de la balanza.
• - Lib o de equipo del Analizado de ni ógeno LECO FP-528 (AN-ALI-01).
• - E aluación de los con oles de calidad (FT-ALI-303).
6.6-) Regis os gene ados.
• - Hoja de abajo (FT-ALI-010).
• - Bole ín de análisis (FT-UGC-023).
50
- E aluación de los con oles de calidad (FT-ALI-303)
6.7-) Aplicaciones in o má icas.
• - So wa e del Analizado de ni ógeno LECO FP-528
• - P og ama in o má ico pa a e aluación de los con oles de calidad (PRG-ALI-008)
6.8.-) P ocedimien o o ealización.
a) Con oles p e ios.
Encende el equipo, posee un in e up o en la pa e on al con dos posiciones On y O , y el
o denado . Deja que el sis ema se calien e y es abilice du an e una o dos ho as. Encende el
so wa e.
An es de comenza con el análisis de las mues as se debe comp oba una se ie de pun os:
Tempe a u a del ho no de combus ión: debe se ap oximadamen e 850 oC. Tempe a u a del
ubo de educción: debe se ap oximadamen e 750 oC.
Si es o no es así deja que el equipo se es abilice y alcance dicha empe a u a. Menú
Con igu a ion – Sys em :
• - Combus ion u nace empe a u e: pone 850 oC
• - Reduc ion Hea e : pone 750 oC
Bo ón Acep a .
Pa a comp oba la empe a u a: Menu Diagnos ics – Ambien s, allíˆ emos las empe a u as.
2. Posibles ugas de los gases en el sis ema, an o de oxígeno como de helio, pa a ello hay que
ealiza un es de ugas pa a cada uno de los gases.
Tes de ugas (Leak Check):
A) ab i las lla es de los gases, comp oba en el manóme o que la p esión sea 2,5 ba es (es a
ma cado con una aya neg a) y el paso de los mismos (F8 ON)
B) Menu Diagnos ics – Leak Check – pes aña Leak Check
C) Oxygen: bo ón Oxigen Leak Check
Helio: bo ón Helium Leak Check
b) P epa ación de la mues a.
51
La mues a pa a la ealización del análisis, se p epa a según ins ucción écnica IT-ALI-101.
c) P ocedimien o.
1- Blancos
Realiza una se ie de blancos (sin cápsula, solamen e pasando los gases), has a e que el
con enido de ni ógeno es in e io al 0.04% ni ógeno. Realiza dos blancos más con capsulas sin
mues a.
Pa a el análisis de blancos en el equipo:
Menú Sample – Login. Rellena odos los campos (Nomb e mues a, peso, mé odo habi ual y
ac o de p o eína).
Seleccionamos los esul ados de los blancos con la cápsula y amos a:
Menú con igu a ion-blank y acep a , el equipo end ሠen cuen a el alo de es os blancos a la
ho a de calcula el ni ógeno de las mues as
Una ez el equipo es á a pun o, se han comp obado las empe a u as, se ha hecho el chequeo
de los gases y se han ealizado los blancos, amos a calib a el equipo.
2- Calib ación
Ob ención de la ec a de calib ado
Pa a ob ene la ec a de calib ado pesamos al ededo de 0.050g, 0.100g, 0.150g, 0.200g, 0.250
g, de EDTA, en sus espec i as cápsulas de la ón se cie an y se in oducen en el ca usel pa a su
análisis (pa a comenza el análisis p esiona el bo ón Analyze F5).
Tipo de cu a----De p ime o den (sin ija en el o igen)
Peso----1/ce i icado.
La calib ación se conside a co ec a cuando en odos los pun os que o man pa e de la ec a, el
% de ni ógeno del EDTA, es é comp endido en el in e alo 9.56 ± 0.06%. Si alguno de los pun os
no cumple es e equisi o se pod ሠelimina siemp e y cuando queden al menos 4 pun os, o en
o o caso se debe ሠepe i la calib ación, (pendien e ec a en e 0.900 y 1.100).