Estudio morfológico y anatómico en núculas de Nepeta L. (Lamiaceae) del suroeste de España

Ac a Bo ánica Malaci ana 27: 15 - 25  Málaga, 2002 ESTUDIO MORFOLÓGICO Y ANATÓMICO EN NUCULAS DE NEPETA L. (LAMIACEAE) DEL SUROESTE DE ESPAÑA Ma Angeles MARTÍN MOSQUERO, Rocío JUAN y Julio PASTOR RESUMEN. Es udio mo ológico)' ana ómico en miculas de Nepe a L. (Lamiaceae) del su oes e de España. Se desc ibe la mic omo ología y la ana omía de las núculas en las cinco especies de Nepe a L. p esen es en el su oes e de España: N. ca ana L., N. ame hys ina a . an ica ia Lade o & Ri as Goday, N. mul ib ac ea a Des ., N. ube osa L. subsp. ube osa y N. apuleii Uc ia, an o al mic oscopio óp ico (M.O.) como al mic oscopio elec ónico de ba ido (M.E.B.). Los esul ados han pe mi ido di e encia es ipos es uc u ales a endiendo básicamen e a la o namen ación de la núcula. Además, los ca ac e es ana ómicos han pe mi ido delimi a los axones es udiados undamen almen e a ni el del epica po, mesoca po y capa en empalizada. La exc eción de mucílago en las núculas de N. ame hys ina a . an ica ia ha pe mi ido di e encia cla amen e es e axón. Así mismo, a endiendo a los ca ac e es ca pológicos es udiados, se p opone una cla e pa a di e encia los ci ados axones. Palab as cla e. Núcula, mo ología, ana omía, mucílago, Nepe a, Lamioideae. ABSTRACT. Mo phological and ana omical s udies on nu le s o Nepe a L. (Lamiaceae) om Sou h-Wes Spain. The mic omo phology and ana omy o nu le s o he i e Nepe a L. species om Sou h-Wes Spain: N. ca/a ia L., N. ame hys ina a . an ica ia Lade o & Ri as Goday, N. mul ib ac ea a Des ., N. ube osa L. subsp. ube osa y N. apuleii Uc ia, a e desc ibed wi h ligh and scanning elec on mic oscopy. The esul s ha e showed he possibili y o di e en ia e h ee s uc u al nu le ypes basically a ending o nu le o namen a ion. Ana omical cha ac e s ha e allowed dis inguish he examined axa using epica p, mesoca p and scle enchyma ic cell laye cha ac e s. The mucilage sec e ion o N. a ne hys ina a . an ica ia nu le has allowed easily de ine his axon. Also, a key o di e en ia e he i e axa using ca pological cha ac e s is p o ided. Key wo ds. Nu le , mo phology, ana omy, mucilage, Nepe a, Lamioideae. INTRODUCCIÓN El géne o Nepe a L., de dis ibución undamen almen e asiá ica (Willis, 1966), p esen a su cen o de e olución en es a zona, concen ando casi el 40% de las especies. Aunque Can ino (1992) lo incluye en la sub amilia Nepe oideae, ibu Men hea, más ecien emen e Budan se & Lobo a (1997) siguiendo a au o es clásicos (Ben ham, 1876; B ique , 1895 - 1897; Wunde lich, 1967) lo incluyen en la sub amilia Lamioideae ( ibu Nepe eae) ca ac e izada po p esen a los es amb es pos e io es de mayo longi ud que 16  M.A. Ma ín Mosque o e al. los an e io es. De los axones econocidos en la Península Ibé ica (Ube a & Valdés, 1983), se es udian cinco p esen es en el Su oes e de España: N. ca ana y N. ame hys ina a . an ica ia de la sección Nepe a y N. ube osa subsp. ube osa, N. mul ib ac ea a y N. apuleii de la sección Subin e up ae (Ben h.) Ube a & Valdés. De en e las especies es udiadas, N. ube osa subsp. ube osa es el axón más ampliamen e dis ibuido, encon ándose de o ma ude al en suelos básicos de odo el á ea de es udio, mien as que el es o de axones p esen an hábi a s más es ingidos. Es e géne o ha sido ampliamen e es udiado desde un pun o de is a axonómico, como mues a el abajo de Hedge (1962) sob e el complejo de N. issa Ben h., la e isión de Ube a & Valdés (1983) en las especies ibé icas del géne o, y la de Neg ín Sosa & La Se na Ramos (1985) en la Maca onesia, o los abajos de Budan se (1991a, b, 1992a, b, c, d, 1993a, b) sob e dis in os géne os y secciones de la ibu Nepe eae. Respec o a las núculas, comen a los abajos clásicos sob e Lamiaceae de Wagne (1914), Fab e & Nicoli (1965) y Wojciechowska (1966), que incluyen algunas especies de Nepe a de las que sólo es án p esen es en el á ea de es udio N. ca ana y N. ube osa. O os au o es ambién han mos ado in e és po la ca pología del géne o pudiéndose des aca los abajos de Budan se (1993c, d) y Budan se & Lobo a (1997) en la ibu Nepe eae y el de Ube a (1981a) en la mayo ía de las especies ibé icas. MATERIAL Y MÉTODOS Las núculas se ija on en FAA du an e un mínimo de 24 ho as, pasándolo seguidamen e a e anol de 70% que ac uó de líquido conse an e has a que ue analizado. Los es igos se encuen an deposi ados en el Se icio Gene al de He ba io de la Uni e sidad de Se illa (SEV) ( e Anexo). El es udio mo ológico se lle ó a cabo en núculas madu as, ijadas y some idas a pun o c í ico. Dicho ma e ial se mon ó en po as u ilizando adhesi o de doble ca a. A con inuación se me alizó con o o-paladio y pos e io men e se examinó con un mic oscopio elec ónico de ba ido (M.E.B.) Philips LX-30. Los da os de longi ud y anchu a es án basados en el mues eo de 40- 240 núculas po axón. En el es udio ana ómico se han u ilizado núculas en dis in o es ado de madu ez, ijadas y deshid a adas median e la se ie de alcohol bu ílico e cia io (Johansen, 1940). Pos e io men e, se incluye on en pa a ina y se co a on a 9-12 mm de g oso . Una ez mon adas las secciones, se iñe on con sa anina alcohólica al 1% y as -g een alcohólico al 0.1%. Es as p epa aciones se mon a on de modo pe manen e pa a su pos e io obse ación al M.O. Los dibujos de los co es ana ómicos se ealiza on con ayuda de una cáma a cla a. Pa a la e minología se ha seguido undamen almen e a Fon Que (1993) y S ea n (1992). Pa a de ec a la p esencia de mucílago, las núculas se coloca on du an e un máximo de 48 ho as en cáma as húmedas y se les ealizó el «Tes del agua des ilada» (Albu que que & And ade, 1998). Aquellas en las que se de ec ó la p esencia de mucílago se pasa on a una solución de as -g een (0.1%) en alcohol de 70° du an e unos segundos, que iñó lige amen e el mucílago y pe mi ió ealiza las medidas del g oso del halo. Es os da os es án basados en un mues eo de 25 núculas po axón. Al mismo iempo, u ilizando una cuchilla y una lance a se oma on mues as de mucílago y se mon a on en po aobje os limpios, sob e las que se colocó un cub eobje os p e iamen e humedecido con una go a de agua des ilada. Los elemen os del mucílago en es as p epa aciones ue on analizados con ayuda del M.O. y desc i os según su o ma. A mes 17 Nepe a del SO de España RESULTADOS Las núculas madu as de los cinco axones es udiados mues an una g an a iabilidad en cuan o al amaño (0.9 -2.6 x 0.4- 1.6 mm). Son leñosas, y en gene al de con o no elíp ico u oblongo y lige amen e ígonas, aunque en N. apuleii el con o no puede se obo ado. El ápice y la base suelen se edondeados o sub uncados. El hilo, de mo ología más o menos eni o me y aspec o esponjoso, suele ocupa de 1/3 a 1/4 de la ca a en al de la núcula, p esen ando con ecuencia depósi os es é icos de ce as. Las núculas ienen sime ía do si en al y gene almen e son de colo neg o o pa do-oscu o. Su supe icie puede se lisa, coliculada o ube culada, es ando ecuen emen e cons i uida po células poligonales de pa edes adiales no isibles a más o menos supe iciales, con un su co en su unión, y pa edes angenciales ex e nas gene almen e es iadas. En odos los axones examinados, sal o en N. apuleii, se ha obse ado un indumen o, i egula men e dis ibuido o bien es ingido al ápice, cons i uido po pelos eglandula es bicelula es cuyo amaño oscila en e 10 - 35 p.m. En el pe ica po siemp e se han di e enciado epica po (epi), mesoca po (mes), capa en empalizada (c.c.) y endoca po(end) ( ig. I). El epica po gene almen e es á cons i uido po una capa de células pa enquimá icas isodiamé icas, ec angula es o ala gadas adialmen e, in ensamen e eñidas y de pa edes delgadas, aunque en N. ame hys ina a . an ica ia ambién pueden obse a se células mucilaginosas (c.m.). El mesoca po no malmen e es á o mado po una capa de células de isodiamé icas a ec angula es y de pa edes delgadas, sal o en N. ame hys ina a . an ica ia que puede p esen a has a es capas. La capa en empalizada es á o mada po escle eidas ala gadas adialmen e, en cuyo lumen pueden o no obse a se un núme o a iable de c is ales. Figu a I. Esquema de la sección del pe ica po. A: N. ame hys ina a . an ica ia. B: N. apuleii. Cu ícula: C; epica po: epi; mesoca po: mes; capa en empalizada: c. e.; endoca po: end; es a: ; célula mucilaginosa: c. m. Escalas: 50 1.1.m. D awings o sec ion o pe ica p. A: N. ame hys ina a . an ica ia. B: N. apuleii. Cu icle: C; epica p: epi; mesoca p: mes; escle enchyma ic cell laye : c. e.; endoca p: end; seed coa : ; mucilaginous cell: c. m. Scale ba s: 50/.Lm El endoca po es á cons i uido po una capa de células de ec angula es a isodiamé icas de pa edes delgadas, algunas de las cuales p esen an eng osamien os escala i o mes. La es a es bas an e simila en los cinco axones analizados, ya que es á cons i uida po una capa de células más o menos isodiamé icas y de pa edes delgadas que pueden p esen a la pa ed angencial ex e na cónca a o con exa. Las ca ac e ís icas gene ales de las núculas de los cinco axones es udiados se pueden e en la abla 1. Las obse aciones ealizadas han pe mi ido di e encia los siguien es ipos 18  M.A. Ma ín Mosque o e al. es uc u ales basados undamen almen e en la o namen ación de la núcula: Tipo I Núculas de 1.2-1.6 x 0.7-1.0 mm, sin mucílago. Supe icie lisa con le es ugas longi udinales, a eces con pequeños colículos apicales. No malmen e, en la egión apical se obse an pelos eglandula es bicelula es de 15- 20 p.m de longi ud, i egula men e dispues os y que pueden ex ende se hacia la mi ad de la ca a en al. Las escle eidas de la capa en empalizada ienen un lumen cen al i egula , ala gado adialmen e, donde con ecuencia se obse a un c is al de 2-7 p.m de diáme o ( ig. 2 a-e). En e los axones examinados únicamen e N. ca ana iene es e ipo de núcu las. de mucílago, y a la o ma y diáme o de los ubé culos, se pueden di e encia dos sub ipos. El sub ipo III A , que únicamen e incluye a N. ame hys ina a . an ica ia, se ca ac e iza po p esen a mucílago, y los ubé culos son uncados, de ap oximadamen e 100 p.m de diáme o, densamen e dispues os. El mucílago de es e axón es anspa en e, poco consis en e y homogeneo. El g oso de su halo es de 0.1 - 0.3 mm y en su ma iz se obse an espinas pa en es, heb as helicoidales y elemen os pel ados ( ig. 3 a-h). Po o o lado, el sub ipo M B , que incluye las es an es especies, ca ece de mucílago, y p esen a ubé culos edondeados de meno amaño (50 p.m de diáme o), que se disponen densamen e en N. mul ib ac ea a y laxamen e en N. apuleii ( ig. 3 i-u). Cla e de n ículas Tipo II Núculas de 0.9-1.4 x 0.4-0.8 mm, sin mucílago. Supe icie coliculada, a eces con pequeños ubé culos en el ápice. Ocasionalmen e, en la egión apical, se obse an pelos eglandula es bicelula es de IS- 25 pm de longi ud, i egula men e dispues os. Las escle eidas de la capa en empalizada ienen el lumen i egula men e es ellado, donde se obse an uno o a ios c is ales de 1-2 pm de diáme o ( ig. 2 -I). Sólo uno de los axones es udiados se incluye en es e Tipo: N. ube osa subsp. ube osa. Tipo III Núculas de 1.1-2.6 x 0.7-1.6 mm, con o sin mucílago. Supe icie ube culada, siendo los ubé culos más p onunciados en la egión apical. Las escle eidas de la capa en empalizada, ienen el lumen i egula men e es ellado ca en e de c is al o bien con uno o a ios c is ales de 1-7 p.m de diáme o. En es e ipo se incluyen N. a ne hys ina a . an ica ia, N. nul ib ac ea a y N. apuleii. No obs an e, a endiendo a la p esencia/ausencia I. Núculas lisas o coliculadas  2 1'. Núculas cla amen e ube culadas  3 2. N ículas cla amen e coliculadas, a eces con pequeños ubé culos apicales. Pe ica po de has a 65 pm de g oso . Lumen de las escle eidas i egula men e es ellado   N. ube osa subsp. ube osa 2'. Núculas lisas, a eces con pequeños colículos apicales. Pe ica po ^ 80 pm de g oso . Lumen de las escle eidas ala gado adialmen e   N. ca/a ia 3. Núculas ^ 2 mm, con mucílago. Tubé culos de casi I 00 pm de diáme o. Capa en empalizada 60 pin de g oso . Mesoca po ^ . 20 pm, con células no eñidas   N. aine hys ina a . an ica ia 3'. Núculas 5_ 1.6 mm, sin mucílago. Tubé culos de ap oximadamen e 50 p.m de diáme o. Capa en empalizada 55 pm de g oso . Mesoca po < 10 jim, con células in ensamen e eñidas  4 4. Tubé culos laxamen e dispues os. Hilo ocupando casi 1/3 de la ca a en al. Lumen de las escle eidas sin c is ales. Núculas glab as   N. apuleii 4'. Tubé culos densamen e dispues os. Hilo ocupando ap oximadamen e 1/4 de la ca a en al. Lumen de las escle eidas con c is ales. Núculas gene almen e con indumen o apical  N. mul ib ac ea a Nepe a del SO de Espana  19 , 4..ii . F.--'s ---  ,,,:- . -: .,' . ;. ... • -: :: • ‘0.1  - , , , ,,, O;., ., , ...... n 4 .,.., . 1- , . , ... .-,A,. i . ;- . / 41' N. • ''''' , k .  .  . . . '  ,.  ..  .  .. B A Figu a 2. NOculas de Nepe a. A — E, Tipo 1: N. ca ana. F— L, Tipo II: N. ube osa subsp. ube osa. Con o no do sal: A, F; con o no en al: B, G; de alles de la supe icie: C, D, H — K; sección del pe ica po: E, L. Escalas: 201.im (K, L); 50 pm (C, D, E, J); 200 pm (N, I); 500 pm (A, B, F, G). Nepe a's ou le s. A —E, Type I: N. ca ana. F — L, Type II: N, ube osa subsp. ube osa. Do sal ace: A, F; en al ace: B, G; de ails o su ace: C, D, H — K; sec ion o pe /ca p: E, L. Scale ba s: 20 pm (K, L); 50 pm (C, D, E, J); 200pm (N, I); 500 pm (A, B, F, G). 20  M.A. Ma ín Mosque o e al. DISCUSIÓN Los esul ados ob enidos pe mi en di e encia los axones p esen es en el á ea de es udio. De acue do con Wagne (1914), Wojciechowska (1966) y Ube a (1981a), la mayo ía de las especies p esen an núculas ube culadas. Según Budan se & Lobo a (1997), la p esencia de una supe icie lisa o ube culada se elaciona con la dis ibución del géne o, p esen ándose la mayo ía de los axones con núculas lisas hacia el es e y los de supe icie coliculada a ube culada hacia el oes e. De los es ipos p opues os a endiendo básicamen e a la o namen ación de las núculas, el I y II incluyen a N. ca ana y N. ube osa subsp. ube osa, espec i amen e, y el es o se incluye en el ipo III. Con an e io idad, Budan se (1993c) y Budan se & Lobo a (1997) es ablecie on en Nepe a dos g upos a endiendo a la o namen ación de la núcula. Uno in eg ado po especies con núculas lisas, coincidiendo con el ipo I, en el que además de N. ca ana incluyen especies pe enecien es a o as secciones como N. sibi ica Asche s. o N. o mosa Kud j. (sección Mac onepe a Ben h.), N. o dii Hemsl. (sección Appendicula ae Wu & Hsuan), N. longib ac ea a Ben h. (sección Glechoman he Poja k), N. ne osa Royle o N. c ispa Willd. (sección Spica ae Ben h.), o N. b a c ea a Ben h. y N. pe aea Ben h. (sección Mic onepe a (Boiss.) Rech.). Y el o o ep esen ado po especies con núculas o namen adas con ubé culos, e ugas o espinas. En es e g upo que coincide con los ipos II y III, además de inclui se especies de la sección Nepe a (N. anie hys ina s. I. y N. ube osa s. I.), ambién se conside an o as pe enecien es a las secciones Mic an hae (Boiss.) Poja k., Se anepe a Budan se o Schizonepe a Ben h. Respec o al indumen o, se han obse ado pelos eglandula es, con un núme o a iable de células, en odos los axones es udiados sal o en N. apuleii. Wagne (1914), Budan se (1993d) y Budan se & Lobo a (1997) en o os géne os de la ibu Nepe eae como Lophan hus, Agas ache y Meehania, y Wojciechowska (1966) en N. nuda L. y N. campho a a Boiss. & Held ., ambién indican la p esencia de pelos eglandula es. Los pelos glandula es son menos ecuen es en el géne o habiendo sido obse ados únicamen e en N. eydeae Webb & Be h. endémica de la egión Maca onésica (Neg ín Sosa & La Se na Ramos, 1985). No obs an e, la p esencia de pelos puede a ia den o de una especie, así Ube a (1981a) encuen a en N. nepe ella L. dos g upos de poblaciones, uno con núculas glab as y o o con pelos. An e io men e Wagne (1914) y Fab e & Nicoli (1965) no habían obse ado pelos en las núculas de Nepe a. Desde un pun o de is a ana ómico, el epica po es la egión con mayo a iabilidad en e los axones es udiados, e lejándose es o en la o mación de dis in os acciden es supe iciales. En e las especies con ubé culos, y de acue do con Ryding (1995) y Budan se & Lobo a (1997), se pueden di e encia po un lado las que p esen an células mucilaginosas en la pa e cen al de los ubé culos, como ocu e en N. ame hys ina a . an ica ia o en algunas especies de D epanoca yum o Lophan hus; y po o o las que ca ecen de dichas células, como N. mul ib ac ea a y N. apuleii. Según Ryding (1995) se obse a una endencia e olu i a hacia la pé dida de células mucilaginosas. Respec o al mesoca po, de acue do con Wagne (1914), Wojciechowska (1966), Makapo a (1967) y Budan se & Lobo a (1997), aunque lo no mal es que p esen en al menos una capa de células pequeñas, ec angula es e in ensamen e eñidas, N. a ne hys ina a . an ica ia cons i uye una excepción ya que p esen a un núme o a iable de capas, con células de mayo amaño, i egula es y sin eñi . En el caso de la capa en empalizada, según Nepe a del SO de España  21 Figu a 3. N ículas de Nepe a. A — H, Sub ipo III,: N. ame hys ina a . an ica ia. I - N, Sub ipo III B : I — K, N. apuleii; L — N, N. mul ib ac ea a. Con o no do sal: A, I; con o no en al: B — L; de alles de la supe icie: C — F, J, K, M; de alle del mucílago: G; sección del pe ica po: H, N. Escalas: 20 p.m (K); 50 pm (C, D, H, J, M, N); 100 p.m (E, F); 2001m (G); 500gm (A, B, I, L). Nepe a's ou le s. A — H, Sub ype Ill,: N. ame hys ina a . an ica ia. I - N, Sub ype Ill B .. I — K, N. apuleii; L — N, N. mul ib ac ea a. Do sal ace: A, I; en al ace: B — L; de ails o su ace: C — F, J, K, M; de ails o mucilage: G; sec ion o pe ica p: H, N. Scale ba s: 20 pin (K); 50 pm (C, D, H, J, M, N); 100 pm (E, F); 200pm (G); 500 pm (A, B, I, L). 22  M.A. Ma ín Mosque o e al. Budan se & Lobo a (1997) pa ece exis i una elación en e núculas lisas/lumen pequeño y núculas ube culadas/lúmenes g andes y ala gados; no obs an e, de acue do con Wojciechowska (1966), N. ca ana p esen a escle eidas con lumen ala gado adialmen e a pesa de sus núculas lisas. La p esencia de c is ales en el lumen, que es común en la mayo ía de los axones (Wagne , 1914; Wojciechowska. 1966; Ryding, 1995 y Budan se & Lobo a, 1997), no se ha obse ado en N. apuleii. En cuan o al mucílago no pa ece se un ca ác e muy común en Nepe a, ya que G ube (1974, 1981) sólo des aca su p esencia en cinco especies, y Budan se & Lobo a (1997) en cua o de las 92 especies analizadas en su abajo. En el á ea de es udio y de acue do con es os au o es, N. ame hys ina s. I. es la única que p esen a células mucilaginosas, localizadas en los ubé culos, aunque de acue do con Hedge (1962) no pa ece exis i una co elación en e la o namen ación de la núcula y la p esencia o ausencia de mucílago. Po o a pa e, Budan se & Lobo a (1997) es ablecen una co elación en e la p esencia de mucílago y el lumen es ellado de las escle eidas, que no se ha obse ado en la mayo ía de las especies aquí es udiadas sal o en N. ame hys ina a . an ica ia. Po los esul ados ob enidos, se obse a que las dos secciones ep esen adas en el á ea de es udio ienen cie a a iabilidad, ya que la sección Nepe a incluye los ipos I y 111,, y la sección Subin e up ae los ipos II y lI p . Según Ube a (1983), la sección Nepe a es á bien de inida desde un pun o de is a ca iológico, p esen ando un núme o básico secunda io x = 17 que p obablemen e se o iginó de x = 18 po aneuploidía; en cambio la sección Subin e up ae p esen a un núme o básico x = 9, al igual que las secciones Oxynepe a Ben h. y O honepe a Ben h. Si se conside an da os palinológicos (Ube a, 1981b) la sección Subin e up ae se ca ac e iza po un sup a e ículo bien ma cado, mien as que en la sección Nepe a es a iable. Teniendo en cuen a exclusi amen e los ca ac e es ana ómicos aquí analizados, se pueden di e encia cla amen e las dos secciones: así, la sección Nepe a p esen a capa en empalizada 60 pm y c is ales de has a 7 pm de diáme o, mien as que la sección Subin e up ae iene la capa en empalizada 55 pm y c is ales, cuando es án p esen es, de has a 2 pm de diáme o. En el caso de la sección Nepe a, y de acue do con Ube a (1981a, b) y Budan se & Lobo a (1997), hay que indica que N. ca ana, con núculas lisas y polen con e ículo poco ma cado, es muy di e en e a las es an es especies de la sección, lo que apoya ía la p opues a de Poja ko a (1967, sec., Budan se & Lobo a, 1997) de es ablece una subsección den o de la sección Nepe a que inclui ía a N. ca a ía. Po úl imo, en cuan o a la dispe sión, la mayo ía de las especies de Nepe a suelen compo a se como balis as pasi os (Bouman & Meeuse, 1992), aunque en N. ame hys ina a . an ica ia el mucílago exc e ado po las núculas pod ía ac ua como sis ema de ijación al igual que obse a on Hu chings & P ice (1999) en N. glechoma Ben h. ANEXO Ma e ial es udiado Nepe a ca ana L. SEVILLA: En e Cazalla de la Sie a y San Nicolás del Pue o, jun o a la ibe a del Huézna , 19.V111.1997, Ma ín Mosque o (SEV 149256). En e la Es ación de Cazalla de la Sie a y Cons an ina, jun o a la ibe a del Fluezna , 19.IX.1997, Ma ín Mosque o y San a-Bá ba a (SEV 149412). N. ame hys ina a . an ica ia Lade o & Ri as Goday MÁLAGA: An eque a, camino de subida al co co u ‘.0 Nepe a del SO de España  23 co C) > O o O CD  L s  scs cDT,  c l  s. s  es  C- s  s  ,  s CD  6  c-,1  .. .,  c..] , )  '71- 1- ccS CD C -O c l csi  c • i .  00 cc C V su a>  s.. . - c In  x I ., -7  cA  .1-  , 0 u ,  s  ,  s  s  > O  s 's  O CA  O c.> ,_.  In co n co cA  O , ) SZIS - 1C -  CV CV CO •71- 00 --- 00 c  5 17. ...  I  j)  e  I  e  e  e l l C) c) o O  CA cc C) CA  i.. O  A  A s..0 — CD • I )  CD cc  —  00 kn O • A 00 sU '' co E ---- = 7$ . -.  ...._-, o '0 cd "O 8 O.  --1 =  E  = - c 7 d =. E =  E  o.  ........ c '  E  .......  = =..  o  E c  o'  o ai - 5 =  c  a, o 0 - - 5  .......  7,7,  ,-.  E ‘--. u 7:7)  ,,,  o. E" o <.-J  o ,.  u  o  <,  'S  E"  ,...,  u  . - ,,,'  u O <1 O C  s O  U , c.:1 C. 0 M al.,  O  . 3  17.,. 0  Cl  '-ciTi o. 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