Suplemento 1: I Jornadas Científicas CIMB

Ars Pharm 59 (suppl1): 1 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Vol 59 (suppl 1) | Abril 2018 Ars Pharmaceutica REVISTA CIENTÍFICA | FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD DE GRANADA. ESPAÑA ISSN: 2340-9894 CIMB Centro de Investigación Biomédica Granada 21 de junio 2017 I Jornadas científicas CIBM Ars Pharm 59 (suppl1): 2 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Director F. Martínez-Martínez. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Directora Ejecutiva M. J. Faus. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Editora M. D. Ruiz-López. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Consejo de Redacción Artacho R (Nutrición y Bromatología, Univ. de Granada, España), Benrimoj C (Pharmacy Practice. Universidad Tecnología Sydney. Australia). Calleja MA. (Farmacia Hospitalaria. Hospital Virgen de las Nieves. Granada, España). Culebras J (Real Academia de Medicina y Cirugía Valladolid. Univ. de León, España). de Haro T (Análisis Clínico. Hosp. Clínico San Cecilio. Granada, España). Fernández-Llimós F. (Farmacia Social. Univ. de Lisboa, Portugal). Gastelurrutia MA. (Farmacia Comunitaria. San Sebastian, España). Mariño E. (Unidad Farmacia Clínica. Univ. de Barcelona, España). Moreno L. (Farmacología. Univ. CEU Cardenal Herrera. Valencia, España). Perez de la Cruz A (Nutrición Clínica. Hosp. Virgen de las Nieves. Granada, España). Quiles J (Fisiología, Univ. de Granada. Granada, España), Quintero B (Fisicoquímica. Univ. de Granada. Granada, España). Rabasco A. (F y Tecnología Farmacéutica. Univ. de Sevilla, España). Ruiz Martínez A (F y Tecnología Farmacéutica. Univ. de Granada. Granada, España). Sabater D (Pharmacy Practice. Univ. Tecnología Sydney. Australia). Valero Sanz J (Salud Pública e Historia de la Ciencia. Univ. Miguel Hernández. Elche, España). Veiga de Cabo J (Escuela Nacional de Medicina del Trabajo. Inst. de Salud Carlos III. Madrid, España. E-ISSN 2340-9894 Revista fundada en 1960 | Periodicidad trimestral | Un volúmen anual compuesto de cuatro numéros | Formato DIN-A4 Contacto de la Redacción Ars Pharmaceutica. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Campus de Cartuja s/n. 18071 -Granada. España email: [email protected] Edita Facultad de Farmacia de la Universidad de Granada. Publica Publisher Editorial Universidad de Granada Antiguo Colegio Máximo. Campus Universitario de Cartuja. 18071 - Granada España | Spain Editada bajo licencia CC 4.0 BY-NC-SA. https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ Toda la información sobre la revista en More info about the journal available on http://revistaseug.ugr.es/index.php/ars amplio, con especial énfasis en la Tecnología y Química Farmacéutica, Farmacología, y Atención Farmacéutica. Ha sido pionera en España en estas disciplinas, editada por la Facultad de Farmacia de la Universidad de Granada desde 1960 de manera ininterrumpida. Durante a convertirla en una revista electrónica de libre acceso. Esto ha supuesto una mayor accesibilidad de investigadores de todos los países a la publicación, lo que se ha podido comprobar por el número de visitas recibidas en la web, y un interés por publicar sus trabajos en ella. El hecho de aceptar trabajos en español o inglés indistintamente, también ha contribuido a aumentar el número de originales recibidos en la última década. Actualmente se encuentra indexada en las siguientes bases de datos/directorios/repertorios: - ñol en Ciencias de la Salud (IBECS), Latindex, SJR. SciELO, SCImago Journal & Country Rank, Scopus, ...y es nuestra intención aumentar su presencia en otras bases. Se han establecido de forma clara las distintas categorías de trabajos que se pueden publicar. Para agilizar el envío de originales a través de la web se ha desarrollado un sistema electrónico de envío. Se han habilitado recursos humanos y económicos, que nos permiten ofrecer Los informes dados por SCImago Journal & Country Rank en el año 2013, sitúan a nuestra revisa dentro del campo de las ciencias farmacéuticas en la posición 90/211, con un índice H de 12 y un SJR de 0,119. En el ámbito de las revistas españolas es la cuarta. - de calidad editorial otorgado por la FECYT , por un periodo de tres años. Por ello desde aquí; invitamos a todos los autores a enviar sus aportaciones a las distintas secciones de la revista. Ars Pharm 59 (suppl1): 3 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 CARTA DE LOS EDITORES Las primeras Jornadas del Centro de Investigación Biomédica han sido un éxito. Tenemos que felicitarnos todos, organizadores y participantes, por la gran calidad de las comunicaciones que se han presentado. Tuvimos un intenso día en que todos hemos participado con ilusión para mostrar a los demás nuestro trabajo. Todo buscamos alcanzar un nivel de excelencia en nuestras investigaciones. Espero que estas jornadas nos hayan permitido dar un paso más en este sentido. La ciencia también es compartir. Compartir lo que hacemos, compartir nuestras técnicas, compartir lo que hemos aprendido aquí o en centros lejanos y punteros. Las fuerzas individuales son limitadas, pero los granos de arena que cada uno aportamos hacen posible la creación del gran edificio de la Ciencia. Ese ha sido el principal objetivo de las jornadas: conocer que estamos haciendo, compartir nuestros conocimientos y ver las posibilidades de colaboración que tenemos con los que están trabajando al lado. Cuando estamos en nuestro laboratorio es muy fácil aislarnos y dedicarnos a resolver los problemas del día a día. Pero muchas veces esos problemas se solucionan con más rapidez consultando y conociendo como otros lo han resuelto antes. Y también tenemos que saber hacia dónde va el conocimiento. Por eso es tan importante asistir a las reuniones científicas y relacionarse con los demás grupos. Estamos preparando novedades interesantes en las próximas jornadas, pronto las conoceréis. Hasta entonces, trabajemos con ilusión y colaboremos entre todos para obtener los mejores resultados en nuestras investigaciones. Francisco Vives Montero Director del Centro de Investigación BiomédIca Cristina Sánchez Gónzalez Secretaria del Centro de Investigación Biomédica Ars Pharm 59 (suppl1): 4 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Association of sedentary time and physical fitness with ideal cardiovascular health in perimenopausal women. The flamenco project. Acosta Manzano P1*, Segura Jiménez V2, Coll Risco I3, Ruiz Cabello P3, Borges Cosic M1, Peces Rama AR1, Jiménez Marín N1, Rodriguez Ayllón M4, Delgado Fernández M1, Aparicio VA3. 1 Department of Physical Education and Sport, Faculty of Sport Sciences. University of Granada, Granada, Spain. 2 Department of Physical Education, Faculty of Education Sciences, University of Cádiz, Cádiz, Spain. 3 Biomedical Research Center. Institute of Nutrition and Food Technology. iMUDS. Department of Physiology, Faculty of Pharmacy. University of Granada, Granada, Spain. 4 PROFITH “PROmoting FITness and Health through physical activity” Research Group, Department of Physical Education and Sports, Faculty of Sport Sciences, University of Granada, Granada, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Aim: To examine the association of sedentary time and physical fitness with ideal cardiovascular health (CH) in perimenopausal women. Methods: A total of 123 perimenopausal women participated (52.7±7.5 years old). Time spent in different physical activity intensity levels (min/day) and in sedentary behaviors was objectively assessed with accelerometry (7 consecutive valid days). Physical fitness was assessed with the Senior Fitness Test battery plus handgrip strength and sit-and-reach tests. According to the American Heart Association (1), an adapted “Ideal CH index” was created from the cut-off values of several behaviors (tobacco, BMI, physical activity and diet) and factors (total cholesterol, blood pressure and glucose) for adults. A value of 1 was assigned for each ideal metric (factor/behavior) status and a value of 0 for each non-ideal metric status. Women meeting ≥4 ideal components were categorized as having an ideal CH whereas women meeting <4 ideal components were categorized as having a non-ideal CH. Results: After adjusting for age, menarche and monthly regular menstruation, perimenopausal women with an ideal CH spent less time in sedentary behaviors [mean difference (95% confidence interval) = 46 min/day (16, 77)] and showed higher scores in the 6 min walk test [24.6 meters (5.7, 43.5)], 30 second chair stand test [1 rep (0, 2)] and back scratch test [3.1 cm (0.4, 5.7)] compared to women with a non-ideal CH status (all, p<0.03). The effect size was overall medium (Cohen’s d ~0.5). Conclusion: The results suggest that reduced time in sedentary behaviors and greater values of cardiorespiratory fitness, lower-body muscular strength and flexibility are associated with a more favorable cardiovascular profile in perimenopausal women. References: Lloyd-Jones DM, Hong YL, Labarthe D, Mozaffarian D, Appel LJ, Van Horn L, et al. Defining and Setting National Goals for Cardiovascular Health Promotion and Disease Reduction The American Heart Association’s Strategic Impact Goal Through 2020 and Beyond. Circulation. 2010;121(4):586-613. Ars Pharm 59 (suppl1): 5 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Influencia del ejercicio físico y la ingesta de hidroxitirosol en el estado redox de ratas ejercitadas. Al Fazazi S1*, Casuso RA1, Hidalgo Gutiérrez A2, López LC2,3, Huertas JR1. 1Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos“José Mataix”, Departamento de Fisiología, Universidad de Granada, Granada, España. 2Instituto de Biotecnología, Centro de Investigación Biomédica, Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Granada, España. 3Centro de Investigación biomédica en Red de Fragilidad y envejecimiento saludable (CIBRFES), Universidad de Granada, España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. * Ambos autores contribuyeron igualmente en este trabajo. Introducción: El Hidroxitirosol (HT) es el principal componente fenólico del aceite de oliva, responsable de sus efectos beneficiosos en la salud y uno de los componentes más biológicamente activos y metabolizados por los humanos. El objetivo de nuestro estudio es describir los efectos de diferentes dosis de HT sobre la capacidad REDOX en ratas sedentarias y ejercitadas. Método: 40 ratas macho Wistar se distribuyeron en 6 grupos; Sedentarias (SED), SED con ingesta de 20mg/Kg/día de Hidroxitirosol (HT), SED con ingesta de 300 mg/Kg/día de HT, Ejercitadas (EXE), EXE con ingesta de 20 mg/Kg/día de HT, EXE con ingesta de 300 mg/Kg/día de HT. Durante 10 semanas de fase experimental se evaluó la velocidad máxima de carrera (3 test a lo largo del estudio) así como el trabajo realizado (diariamente). Se midieron Hemoglobina (HGB), y Hematocrito (HCT) en sangre, además, se evaluó el ensamblaje de Supercomplejos mitocondriales y la concentración de hidroperóxidos plasmáticos como marcador de peroxidación lipídica (estrés oxidativo). Resultados: En las ratas Sedentarias el HT indujo un efecto antioxidante sin implicar mejoras en el rendimiento deportivo. Sin embargo, en combinación con el ejercicio la dosis de 300 mg/Kg/Día produjo un efecto pro-oxidante. En otro estudio paralelo donde evaluamos los Supercomplejos mitocondriales, se observó que la actividad física en ratas favoreció el ensamblaje del Complejo I en Supercomplejos. Conclusiones: La dosis baja de HT obstaculiza las adaptaciones al ejercicio, mientras que una ingesta mayor de HT puede prevenir este efecto induciendo un efecto pro-oxidante. Líneas futuras: Pretendemos seguir evaluando los resultados relacionados con la biogénesis mitocondrial (Supercomplejos), y actualmente empezamos a analizar las manifestaciones genéticas que pueden verse implicadas en nuestro estudio. Referencias bibliográficas: Casuso RA, Martínez-López EJ, Nordsborg NB, Hita-Contreras F, MartínezRomero R, Cañuelo A, Martínez-Amat A. Oral quercetin supplementation hampers skeletal muscle adaptations in response to exercise training. Scand J Med Sci Sports. 2014; 24: 920–927. Enriquez JA. Supramolecular Organization Of Respiratory Complexes. Annu. Rev. Physiol. 2016; 78, 533-61. Hu T, He X-W, Jiang J-G, Xu X-L. Hydroxytyrosol and its potential therapeutic effects. J Agric Food Chem.2014;62:1449–1455. Lei XG. et al. Paradoxical Roles of antioxidant Enzymes: Basic Mechanisms and health Implications. Physiol. Re. 2016; 96, 3007-64. Yoshida Y, Umeno A, Shichiri M. Lipid peroxidation biomarkers for evaluating oxidative stress and assessing antioxidant capacity in vivo. J Clin Biochem Nutr.2013; 52: 9–16. Ars Pharm 59 (suppl1): 6 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Tenomodulin genetic variants on the x chromosome are associated with childhood obesity Anguita A1*, Olza J1,5, Ruperez AI2, Gil Campos M4,5, Cañete R 4,5, Moreno L2,5, Gil Á1,5, Bueno G2,5, Leis R3,5, Aguilera CM1,5. 1 Department of Biochemistry and Molecular Biology II, Institute of Nutrition and Food Technology “Jose Mataix”, Centre of Biomedical Research, University of Granada, Granada, Spain. 2 Health Sciences Institute in Aragon, Zaragoza, Spain; Pediatric Department, Lozano Blesa University Clinical Hospital, University of Zaragoza. Spain. 3 Unit of Investigation in Nutrition, Growth and Human Development of Galicia, Paediatric Department, Clinic University Hospital of Santiago, University of Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, Spain. 4 Unit of Pediatric Endocrinology, Reina Sofia University Hospital, Avda Menéndez Pidal s/n. 14004 Córdoba, Spain. 5 CIBER Fisiopatología de la Obesidad y la Nutrición (CIBEROBN), Madrid, Spain; Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Keywords: childhood obesity, glucose metabolism, genetics, tenomodulin, X chromosome Background and objectives: Current genetic association studies are usually focused on autosomal variants only, and the sex chromosomes are often neglected. In recent years, a number of statistical techniques and strategies have been widely described making much easier overcoming X-chromosome technical hurdles and including this region within genetic studies. Tenomodulin (TNMD) is a Xq22 chromosome anti-angiogenic locus which has been recently linked to different obesity-related phenotypes. These results have not been replicated to date. Given these facts, we have conducted a genetic association analysis in Spanish children population including several TNMD SNPs as potential candidate markers for obesity and metabolic dysfunctions. Methods: A total of 915 DNA samples from 258 normal weight, 177 overweight and 480 obese Spanish children (438 males,477 females) were genotyped for seven TNMD SNPs and associations with anthropometric measurements and glucose metabolism were investigated. Results: In our population, two previously reported linkage disequilibrium (LD) blocks were observed: haploblock-1 (rs2073162,rs2073163,rs4828038, and rs1155974) and haploblock-2 (rs11798018,rs5966709 and rs4828037). Several obesity-related phenotypes were gender-specific and separately associated. We identified rs4828038_T as one of the tag SNPs within the haploblock-1 and the one with the strongest association signals. Particularly, this variant showed association with anthropometric measurements such as BMI (P=0.0099,BETA=1.466) and BMI z-score (P=0.0035,BETA=0.636) in males. Regarding to glucose metabolism phenotypes, genetic associations with insulin resistance were observed; HOMA index (P=0.0105,BETA=0.226) and insulin levels (P=0.0184,BETA=0.919) in the female-male mixed group; and glucose levels (P=0.0130,BETA=2.137) in males. Conclusions: These data show that TNMD variants are associated with obesity and alterations in glucose metabolism in children population and, therefore, replicate some previous findings from adult human population. Conflict of Interest: None Disclosed Ars Pharm 59 (suppl1): 7 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Impresión 3D de constructos bioactivos basados en ácido hialurónico para la formación de neocartílago in vitro. Antich C1,2,3* , Jiménez G1,2,3 , Marchal JA1,2,3, Gálvez Martín P4 1Biopathology and Regenerative Medicine Institute (IBIMER), Centre for Biomedical Research, University of Granada, Granada E-18100, Spain. 2Biosanitary Research Institute of Granada (ibs.GRANADA), University Hospitals of Granada-University of Granada, Granada, Spain. 3Department of Human Anatomy and Embryology, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada E-18012, Spain. 4Advanced Therapies Area, Bioibérica S.A.U. Barcelona E-08029, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. *E-mail: [email protected] El cartílago articular es un tejido que tiene importantes funciones en la preservación y predisposición de la locomoción. Sin embargo, posee una limitada capacidad de reparación intrínseca tras ser dañado que requiere intervención médica. La ingeniería tisular se está considerando como una alternativa viable a los tratamientos actuales que no permiten reconstituir su estructura y función. En este contexto, la impresión en tres dimensiones (3D) está emergiendo como una tecnología innovadora capaz de crear construcciones 3D por deposición predeterminada de células y biomateriales, imitando el tejido nativo. Este estudio se enfocó en el uso de uno de los principales componentes del cartílago, el ácido hialurónico (HA), como hidrogel que contiene las células (biotinta) para la formación de constructos osteocondrales bioimpresos. Se evaluó la viabilidad, la proliferación y la diferenciación hacia cartílago articular en dicha construcción híbrida de ambas poblaciones celulares, condrocitos y células madre mesenquimales (MSCs), demostrando así que el HA es un material idóneo para la ingeniería del cartílago articular. Referencias bibliográficas: Ha CW, Park YB, Chung JY, Park YG.(2015). Cartilage Repair Using Composites of Human Umbilical Cord BloodDerived Mesenchymal Stem Cells and Hyaluronic Acid Hydrogel in a Minipig Model. Stem Cells Transl Med. Sep;4(9):1044-51 Kim IL, Mauck RL, Burdick JA. (2011). Hydrogel design for cartilage tissue engineering: a case study with hyaluronic acid. Biomaterials. 2011 Dec;32(34):8771-82. Liu, Y., Shu, X. Z., & Prestwich, G. D. (2006). Osteochondral defect repair with autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells in an injectable, in situ, cross-linked synthetic extracellular matrix. Tissue Engineering, 12(12), 3405–3416. Nakamura T, Sekiya I, Muneta T, Kobayashi E. (2015). Articular cartilage regenerative therapy with synovial mesenchymal stem cells in a pig model. Clin Calcium. Dec;23(12):1741-9. Panita Maturavongsadit, Jittima Amie Luckanagul, Kamolrat Metavarayuth, Xia Zhao, Limin Chen, Yuan Lin, and Qian Wang. (2016). Promotion of In Vitro Chondrogenesis of Mesenchymal Stem Cells Using In Situ Hyaluronic Hydrogel Functionalized with Rod-Like Viral Nanoparticles. Biomacromolecules, 2016, 17 (6), pp 1930–1938 Toh WS, Lim TC, Kurisawa M, Spector M.( 2012). Modulation of mesenchymal stem cells chondrogenesis in a tunable hyaluronic acid hydrogel microenvironment. Biomaterials. May;33(15):3835-45. Ars Pharm 59 (suppl1): 8 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Effects of a concurrent exercise program during pregnancy on colostrum and mature breast milk inflammatory markers. The GESTAFIT PROJECT Aparicio VA1*, Ocón O2, Diaz Castro J1, Acosta Manzano P3, Coll Risco I1, Borges Cósic M3, Jiménez Marín N1, Romero Gallardo L3, Moreno Fernández J1, Ochoa Herrera JJ1. 1 Department of Physiology, Faculty of Pharmacy and Institute of Nutrition and Food Technology, University of Granada, Spain. 2 Department and UGC of Gynaecology and Obstetrics. University Hospital Virgen de las Nieves. Granada, Spain. 3 Department of Physical Education and Sports, Faculty of Sport Sciences, University of Granada, Granada, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Aim: To assess the effects of an exercise intervention during pregnancy on colostrum and mature breast milk inflammatory markers. Methods: Sixty-six pregnant women were randomized to either an exercise (three 60-min sessions/week of concurrent aerobic and strength training), or control group from the 17th gestational week until delivery. For the present study specific aims, only those women able to produce enough milk were included for data analyses, resulting in 25 control and 21 exercise women. Some colostrum and mature breast milk pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines (fractalkine, interleukin (IL)-1β, IL-6, IL-8, IL-10, interferon (IFN)-γ, and tumour necrosis factor (TNF)-α) were measured by Luminex xMAP. Results: After adjustment for maternal age, body mass index and physical activity levels, colostrum from mothers that followed the exercise program presented 24% lower IL-6 and 46% lower IL-8 concentrations than colostrum from control women (both, p≤0.05). Colostrum from mothers that followed the exercise program showed a borderline significant (p=0.07) 20% lower TNF-α, and a no significant but with probable clinical meaningful 28% higher fractalkine, 19% lower IL-1 and 16% higher IL-10 concentrations. Mature milk from mothers in the exercise group showed the same trend, with a no significant but clinically meaningful 31% higher fractalkine, 26% lower IL-6, 24% lower IL-8, 18% lower IL-1, 21% lower TNF-α and 13% higher IL-10 concentrations. No clear effect of the exercise intervention was observed on INF-γ concentrations. Conclusion: The exercise training program designed and developed in the present study promoted a less pro-inflammatory Ars Pharm 59 (suppl1): 9 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 profile in colostrum and mature breast milk. Gene therapy corrects mitochondrial dysfunction in mefs and hscs from coq9r239x mice Barriocanal Casado E1,2*, Cueto Ureña C1,2, Muñoz P3, Mascaraque C1,2, Cobo M3, Hidalgo A1,2, Martín F3, López LC1,2. 1 Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Granada, Granada, Spain. 2 Instituto de Biotecnología, Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico Ciencias de la Salud, Armilla, Granada, Spain. 3 Centro Pfizer - Universidad de Granada - Junta de Andalucía de Genómica e Investigación Oncológica (GENYO), Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Granada, Spain. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Infusion of gene-corrected hematopoietic stem cells (HSCs) has been successful for the treatment of metachromatic leukodystrophy due to mutations in ARSA gene1-3. However, it remains unclear whether this strategy can be used in other neurological diseases. Here, we use a lentiviral vector to transfer a functional Coq9 gene into mouse embryonic fibroblasts (MEFS) and HSCs from a mouse model (Coq9R239X) of mitochondrial encephalopathy due to mutation in Coq9 gene4. Our results show that the CCoq9WP vector allows the overexpression of Coq9 mRNA and COQ9 protein in MEFs and HSCs from Coq9R239X mice. This effect results in the restoration of the hydroxylase COQ7 levels and normalization of Coenzyme Q9 and Demethoxyubiquine-9 levels. As a consequence, mitochondrial respiratory capacity was significantly increased in transduced Coq9R239X MEFs, demonstrating the functional efficiency of the CCoq9WP vector4. These results confirm that COQ9 protein interacts and regulates COQ7, being in that way essential for Coenzyme Q biosynthesis. Furthermore, our data demonstrate that, in vitro, it is possible to correct a Coq9 defect by overexpressing Coq9 mRNA using lentiviral vectors. This may open the possibility of testing the transplantation of transduced HSCs in vivo in order to get an effective treatment for mitochondrial encephalopathies. Referencias bibliográficas: Biffi, A. et al. Correction of metachromatic leukodystrophy in the mouse model by transplantation of genetically modified hematopoietic stem cells. J Clin Invest 113, 1118-29 (2004). Biffi, A. et al. Gene therapy of metachromatic leukodystrophy reverses neurological damage and deficits in mice. J Clin Invest 116, 3070-82 (2006). Biffi, A. et al. Lentiviral hematopoietic stem cell gene therapy benefits metachromatic leukodystrophy. Science 341, 1233158 (2013). Barriocanal-Casado, E. et al. Gene Therapy Corrects Mitochondrial Dysfunction in Hematopoietic Progenitor Cells and Fibroblasts from Coq9R239X Mice. PLoS One 11, e0158344 (2016). Ars Pharm 59 (suppl1): 16 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Enhancement of chemotherapy by high melatonin concentrations in head and neck cancer Florido J1*, Fernández Gil Bl1, Guerra Librero A1, Shen YQ1, Martinez Ruiz L1, García López S1, Mendivil Pérez MA2, Soto VM2, Acuña Castroviejo D1, Escames G1. 1 Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada, Avda. del Conocimiento s/n, 18016 Granada (Spain). 2 Grupo de Neurociencias de Antioquia, Sede de investigación Universitaria. Universidad de Antioquia. Medellín (Colombia). Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Background: It is well known that chemotherapy, act at different intracellular levels such as nucleus, membranes or mitochondria, which is the main melatonin target. So here, how oncostatic effects of this hormone have been reported, we evaluated whether melatonin can synergize with cisplatintherapy to enhance the cytotoxic effects of these treatments in vitro and in vivo. Furthermore, we evaluated the side effects of these treatments in other organs. Materials and Methods: The dose-dependent effects of melatonin were analysed in cisplatin-treated Cal-27 and SCC-9 tongue cell lines. Cells were maintained in DMEM medium, supplemented with 10% FBS at 37 ºC. Cells were treated with melatonin (100, 500 and 1000 μM) alone or in combination with 10 μM CDDP. The clonogenicity capacity, mitochondrial mass, ROS production, mitochondrial respiration, proliferative potential (MTT), apoptosis, nitrites levels, as well as antioxidant enzymes activity and western blot, were assessed. We also studied the effects of melatonin with CDDP in vivo. Xenografts mice with Cal-27 cells were treated with chemotherapy. Histochemical analyses were performed and immunohistochemical proliferation assays were performed. We evaluated LPO and nitrites levels in lung, liver, kidney and heart to analyse side effects of the treatment. Results: Melatonin produces an increase in the cytotoxic effects of chemotherapy in vitro. Melatonin also acts inhibiting the tumour growth and protecting other tissues from chemotherapeutic agents in vivo. Conclusion: High melatonin concentrations potentiate the cytotoxic effect of CDDP in vitro and in vivo. Referencias bibliográficas: Fernández-Gil B, et al. Plos One 2017; 12: e0174474.61-173 Abdel Moneim AE, et al. Int J Mol Sci 2017; 18(5). doi: 10.3390/ijms18051003. Ortiz F, et al. J Pineal Res 2015; 58: 34-49 Ars Pharm 59 (suppl1): 17 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 ADAMDEC1, EDNRB AND PTGS1/COX1, inflammation genes upregulated in the intestinal mucosa of obese rats, are downregulated by three probiotic strains Robles Sánchez C1,2,3*, Plaza Díaz J1,2,3, Abadía Molina F4, Morón Calvente V4, Sáez Lara MJ2,5, Ruiz Bravo A6, Jiménez Valera M6, Gil Á1,2,3,7, Gómez Llorente C1,2,3,7, Fontana L1,2,3,#. 1 Dept. Biochemistry and Molecular Biology II, School of Pharmacy, Granada. 2I nstitute of Nutrition and Food Technology “José Mataix”, Biomedical Research Center, Armilla, Granada. 3 ibs.GRANADA. 4 Dept. Cell Biology, School of Sciences, Granada. 5 Dept. Biochemistry and Molecular Biology I, School of Sciences, Granada. 6 Dept. Microbiology, School of Pharmacy, Granada. 7 CIBEROBN, Madrid. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. We have previously reported that administration of Lactobacillus paracasei CNCM I-4034, Bifidobacterium breve CNCM I-4035 and Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4036 to obese Zucker-Leprfa/fa rats attenuates liver steatosis and exerts anti-inflammatory effects. The goal of the present work was to investigate the modulation of gene expression in intestinal mucosa samples of obese Zucker-Leprfa/fa rats fed the probiotic strains using a DNA microarray and postgenomic techniques. We also measured secretory IgA content in the gut and lipopolysaccharide (LPS)-binding protein (LBP) in serum. Expression of three genes (Adamdec1, Ednrb and Ptgs1/Cox1) was up-regulated in the intestinal mucosa of the obese rats compared with that in the rats when they were still lean. Probiotic administration down-regulated expression of Adamdec1 and Ednrb at the mRNA and protein levels and that of Ptgs1/Cox1 at the mRNA level, and this effect was in part mediated by a decrease in both macrophage and dendritic cell populations. Probiotic treatment also increased secretory IgA content and diminished the LBP concentration. Based on results reported in this work and elsewhere, we propose a possible mechanism of action for these bacterial strains. Ars Pharm 59 (suppl1): 18 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Immunomodulatory effect of minocycline in intestinal inflammation Garrido Mesa J*, Vezza T, Hidalgo García L, Díaz Echave P, Rodríguez Nogales A, Algieri F, Camuesco D, Utrilla MP, Rodríguez Cabezas ME, Garrido Mesa N, Gálvez J. CIBER-EHD & IBIS, CIBM, University of Granada, Granada, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Minocycline exert specific immunomodulatory effects en macrophages that could underlay its beneficial action in intestinal inflammation[1]–[4]. The aim of the study was to evaluate the impact of minocycline on the course of the inflammatory response in DSS-colitis model in mice. Colitis was induced in male C57BL/6J mice by DSS administration in the drinking water (3%) for 5 days. Then, one group received minocycline (50 mg/kg/day) while coliticand healthy-control groups were given water. Mice were sacrificed after 2 and 4 days of treatment. The effect was evaluated by a disease activity index, histology, gene expression and cytokine production, and the analysis of leukocyte populations, from colonic lamina propria and blood, by FACS. Minocycline treatment improved the recovery of colitic mice, increasing mucosa barrier protection. However, some immune pathways were potentiated, especially after 2 days of treatment, which explains the immune changes observed at day 4: an increase in type-2 immune response, with increased eosinophils and Th2 populations; increased dendritic cells and macrophages, the latter showing and bias towards homeostatic phenotypes; and increased Tregs and Th17, while neutrophils were reduced. This effect was also characterized by increased production of IL-22 and GM-CSF, and upregulation of Alox15 expression, involved in the synthesis of pro-resolving lipid mediators. Minocycline accelerates mucosal healing and resolution[5]–[7] of acute intestinal inflammation, inducing regulatory and type-2 responses, which prevents the deleterious consequences of prolonged inflammation-associated tissue damage[8]. These immunomodulatory properties could be of great interest to face intestinal inflammatory disorders. Referencias bibliográficas: [1] N. Garrido-Mesa, A. Zarzuelo, and J. Gálvez, “What is behind the non-antibiotic properties of minocycline?,” Pharmacol. Res., vol. 67, no. 1, pp. 18–30, Jan. 2013. [2] N. Garrido-Mesa et al., “The intestinal anti-inflammatory effect of minocycline in experimental colitis involves both its immunomodulatory and antimicrobial properties,” Pharmacol. Res., vol. 63, no. 4, pp. 308–319, Apr. 2011. [3] C. R. Dunston, H. R. Griffiths, P. A. Lambert, S. Staddon, and A. B. Vernallis, “Proteomic analysis of the antiinflammatory action of minocycline,” Proteomics, vol. 11, no. 1, pp. 42–51, Jan. 2011. [4] L. Bonjoch, S. Gea-Sorlí, J. Jordan, and D. Closa, “Minocycline inhibits peritoneal macrophages but activates alveolar macrophages in acute pancreatitis,” J. Physiol. Biochem., vol. 71, no. 4, pp. 839–846, Dec. 2015. [5] N. Gagliani et al., “Th17 cells transdifferentiate into regulatory T cells during resolution of inflammation,” Nature, vol. 523, no. 7559, pp. 221–225, Jul. 2015. [6] A. L. Alessandri, L. P. Sousa, C. D. Lucas, A. G. Rossi, V. Pinho, and M. M. Teixeira, “Resolution of inflammation: mechanisms and opportunity for drug development,” Pharmacol. Ther., vol. 139, no. 2, pp. 189–212, Aug. 2013. [7] M. Cintolo, G. Costantino, S. Pallio, and W. Fries, “Mucosal healing in inflammatory bowel disease: Maintain or de-escalate therapy,” World J. Gastrointest. Pathophysiol., vol. 7, no. 1, pp. 1–16, Feb. 2016. [8] W. C. Gause, T. A. Wynn, and J. E. Allen, “Type 2 immunity and wound healing: evolutionary refinement of adaptive immunity by helminths,” Nat. Rev. Immunol., vol. 13, no. 8, pp. 607–614, 2013. Ars Pharm 59 (suppl1): 19 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Is the DNA methylation state associated to sequence variation? Gómez Martín C1,2*, Lebrón R1,2, Oliver JL1,2, Hackenberg M1,2. 1 Dpto de Genética, Facultad de Ciencias, Universidad de Granada, Campus de Fuentenueva s/n, 18071, Granada, Spain. 2 Lab. De Bioinformática, Centro de Investigación Biomédica, PTS, Instituto de Biotecnología, Avda. del Conocimiento s/n, Granada, Spain. Centro de Investigación Biomédioca (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Gene expression in eukaryotes is a regulated process taking place both at the preand post-transcriptional level. Prior to transcription, the chromatin state changes mainly due to several epigenetic marks such as the addition of methyl-groups to either DNA or histones. Once the promoter and other regulatory regions are accessible, the transcription level is determined by a complex network of transcription factors (TFs). Mammalian genomes are characterized by its global methylation, with the exception of CpG islands (CGIs). It is known that hyper-methylated CGIs silence the corresponding gene in a stable way1. Nevertheless, it is much less clear if the absence of methylation is a direct consequence of active transcription or if, on the contrary, it is a regulated process. Moreover, there are many examples indicating that genetic variation (SNPs) can affect gene expression and the DNA methylation state2,3. While the influence on gene expression of SNPs that manipulate a transcription factor binding site (TFBS) is well established, the relationship between sequence variation and DNA methylation is less well understood. In order to check if a particular genotype at a given locus can influence the DNA methylation of the corresponding region, we first generated the whole genome methylation maps and the corresponding genotype of 55 human samples. We found 193,676 SNPs that are statistically associated to the methylation state of one or more cytosines, sometimes located far away from the corresponding SNP. Future work will be directed to the characterization of these SNPs in a genome context. Referencias bibliográficas: 1. Jones, P. a. Functions of DNA methylation: islands, start sites, gene bodies and beyond. Nat. Rev. Genet. 13, 484–92 (2012). 2. Bell, J. T. et al. DNA methylation patterns associate with genetic and gene expression variation in HapMap cell lines. Genome Biol. 12, R10 (2011). 3. Jones, M. J., Fejes, A. P. & Kobor, M. S. DNA methylation, genotype and gene expression: who is driving and who is along for the ride? Genome Biol. 14, 126 (2013). Ars Pharm 59 (suppl1): 20 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Musashi-1 en regeneración ósea tras elevación de seno maxilar González de Buitrago JE1*, Padial Molina M1, Farias VA2, Couso Queiruga E1, O’Valle F3, Galindo Moreno P1. 1 Departamento de Estomatología. 2 Instituto de Biomedicina Regenerativa (IBIMER). 3 Departamento de Anatomía Patológica e IBIMER. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Universidad de Granada. Introducción: Musashi-1 (Msi1) es una proteína de unión a ARN que ha sido apenas analizada en tejido óseo. En otros campos se ha descrito su papel en el control de la proliferación y diferenciación de las células progenitoras. Objetivos: Comparar la expresión de Msi1 en hueso maxilar posterior nativo con hueso regenerado en esa misma zona. Materiales y Métodos: Se obtuvieron biopsias óseas del maxilar posterior (no injertado) durante la colocación de implantes en esa localización. También se obtuvieron biopsias de esa zona en pacientes a los que se les había sometido a regeneración ósea 6 meses antes mediante elevación del seno maxilar, utilizando hueso autógeno/xenoinjerto (1:1). Tras el procesamiento de las muestras, se realizó el estudio histológico e inmunohistoquímico. Otro grupo de biopsias fue utilizado para análisis de ARNm mediante PCR cuantitativa. Resultados: Msi1 se detectó en el 97% de las biopsias de hueso injertado frente al 67% en hueso nativo. En zonas injertadas Msi1 se localizó principalmente en células madre mesenquimales y esta expresión fue significativamente mayor que en hueso nativo. Los niveles de ARNm fueron también mayores en las biopsias de tejido óseo injertado que en las de hueso nativo. Conclusión: Msi1 parece intervenir en la regeneración ósea estimulando la proliferación de las células madre mesenquimales en ese tejido. Un mayor conocimiento del comportamiento de esta proteína en la cicatrización ósea podría permitir su uso como marcador de la maduración de un injerto o incluso como potenciador exógeno de la misma. Referencias bibliográficas: Galindo-Moreno, P., Avila, G., Fernández-Barbero, J. E., Aguilar, M., Sánchez-Fernández, E., Cutando, A., & Wang, H. (2007). Evaluation of sinus floor elevation using a composite bone graft mixture. Clinical Oral Implants Research, 18(3), 376-382. Hong, I., Lee, H., Choi, S., Kim, H., Yu, K., Seo, Y., . . . Kang, K. (2013). The effects of hedgehog on RNA binding protein Msi1 during the osteogenic differentiation of human cord blood-derived mesenchymal stem cells. Bone, 56(2), 416-425. doi:http://dx.doi.org/10.1016/j.bone.2013.07.016 Horisawa, K., Imai, T., Okano, H., & Yanagawa, H. (2010). The musashi family RNA-binding proteins in stem cells. Biomolecular Concepts, 1(1), 59-66. doi:http://dx.doi.org/10.1515/bmc.2010.005 Imai, T., Tokunaga, A., Yoshida, T., Hashimoto, M., Mikoshiba, K., Weinmaster, G., Okano, H. (2001). The neural RNA-binding protein Musashi1 translationally regulates mammalian numb gene expression by interacting with its mRNA. Molecular and Cellular Biology, 21(12), 3888-3900. Nagata, T., Kanno, R., Kurihara, Y., Uesugi, S., Imai, T., Sakakibara, S. Katahira, M. (1999). Structure, backbone dynamics and interactions with RNA of the C-terminal RNA-binding domain of a mouse neural RNA-binding protein, Musashi1. Journal of Molecular Biology, 287(2), 315-330. doi:10.1006/jmbi.1999.2596 Ars Pharm 59 (suppl1): 21 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Metabolic switch produced by melatonin at high concentration induces apoptosis in cancer Guerra Librero A1, Fernandez Gil BL1, Florido J1, Shen YQ1, Martinez Ruiz L1, Garcia Lopez S1, Molina Navarro MM2, Garcia Verdugo JM2, Acuña Castroviejo D1, Escames G1. 1 Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada, Avda. del Conocimiento s/n, 18016 Granada (Spain). 2 Institut Cavanilles de Biodiversitat i Biologia Evolutiva, Carrer Catedrático José Beltrán Martínez nº2, 46980 Paterna, València (Spain). Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Background: Cancer cells have some special features that give them the ability to change and resist different types of treatments. These changes are produced by modifications in the mitochondrial bioenergetics, that is a switch in the metabolism. Melatonin has oncostatic effects, but its mechanism of action is not well known. Our objective was to analyse whether the mitochondria and the metabolism are involved in the oncostatic effects of melatonin. Materials and Methods: The effects of high concentrations of melatonin (100 μM, 500 μM, and 1500 μM) were evaluated in Cal-27 cell lines. Cells were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS at 37ºC. Cells were treated with melatonin for 1, 3 and 5 days. The following parameters were analysed: proliferation, apoptosis, mitochondrial mass, electron microscopy, mitochondrial respiratory capacity, ROS production, activity of antioxidant enzymes and metabolomics study. Moreover, the in vivo oncostatic effect of melatonin was assessed in mice with Cal-27 xenografts. Mice were treated with melatonin (300 mg/kg s.c.) for 21 days. Immunohistochemical and MRI studies were performed. Finally, toxicity study of melatonin was performed using C57BL/6J with melatonin at high concentration for 6 months. Results: The results showed that melatonin induced a switch to aerobic mitochondrial metabolism that increased the ROS production, inducing cancer cell apoptosis. Melatonin also showed an oncostatic effect and histological changes. Melatonin did not show any side effects in healthy mice. Conclusion: Mitochondrial changes induced by melatonin lead to a metabolic switch in cancer cells inducing cellular dead but didn’t affect normal tissues. Referencias bibliográficas: Ortiz F, et al. J Pineal Res 2015; 58: 34-49 Escames G, et al. Hum Genetics 2012; 131:161-173 Ars Pharm 59 (suppl1): 22 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Revealing the immunomodulatory effect second-generation tetracyclines exert on macrophages Hidalgo García L, Garrido Mesa J, Camuesco D, Rodríguez Cabezas ME, Gálvez J. Department of Pharmacology, CIBER-EHD, ibs.GRANADA, CIBM, University of Granada, Granada (Spain). Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Introduction: although tetracyclines have been traditionally used because of their bacteriostatic properties, some of them have shown immunomodulatory properties. This has boosted the interest to use them in the treatment of various diseases, being inflammatory bowel disease (IBD) of remarkable interest (1). Objetive: even though tetracyclines have already shown anti-inflammatory properties in murine models of IBD, their effects on macrophages, a cell type that plays a key role in the development of the inflammatory process, is not well established (2,3). Thus, the objective was to characterize the effects of tetracyclines in a primary cell culture of Bone Marrow-Derived Macrophages (BMDM) from mice. Materials and Methods: cultured BMDM were seeded in 24-well and 6-well plates at a density of 5·105 cells/well. When confluency was reached, they were pre-treated with second-generation tetracyclines during 24 h, then cells were stimulated with LPS (10 ng/mL). After that, biochemical tests were carried out to study the differences in mRNA expression, protein and nitrites production and cellular viability. Results: the obtained results showed antagonic properties of tetracyclines over this cell type. On one hand, they downregulate iNOS expression, reducing NO· production after LPS stimulation. However, they enhanced the expression and production of pro-inflammatory mediators released during the immune response. Conclusion: in order to clarify how tetracyclines impact the activity in this cell type, it is necessary to continue performing new studies. This line of research could reveal tetracyclines as a new class of macrophage modulators, raising their interest for the management of pathologies where these cells play an active role. Referencias bibliográficas: 1.- Sapadin, A. N. & Fleischmajer, R. J. Am. Acad. Dermatol. 54, 258–265 (2006). 2.- Kloppenburg, M. et al. Antimicrob. Agents Chemother. 40, 934–940 (1996). 3.- D’Agostino, P. et al. Eur. J. Pharmacol. 346, 283–290 (1998). Ars Pharm 59 (suppl1): 23 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 SOX9 Y SOX8 mantienen el fenotipo del testículo adulto y evitan la reprogramación genética de macho a hembra Hurtado A*, Barrionuevo F, Kim GJ1, Palomino R, Real FM, Carmona FD, Scherer GD1, Burgos M, Jiménez R. Departamento de Genética, Universidad de Granada 1 Institute of Human Genetics, University of Freiburg, Germany Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. El mantenimiento del sexo en mamíferos implica que determinados genes clave deben permanecer activos en las gónadas diferenciadas de ambos sexos para evitar la reprogramación genética hacia el sexo opuesto, como se ha descrito en ovarios adultos tras la ablación de Foxl2. Dmrt1 tiene un papel similar en testículos postnatales, pero no se conoce su implicación en el mantenimiento del testículo adulto. Del mismo modo, Sox9 y Sox8 son necesarios para la fertilidad masculina postnatal, sin embargo, su función en el testículo adulto no ha sido investigada. Nosotros hemos demostrado que tras la deleción de Sox9 en células de Sertoli adultas de ratones fértiles Sox8-/-, se produce la reprogramación genética de testículo a ovario y las células de Sertoli se transdiferencian en células de la granulosa, que expresan Foxl2. Los testículos regresionan progresivamente culminando con la degeneración completa de los túbulos seminíferos, que llegan a ser acelulares y aparecen espacios vacíos en una matriz de células de Leydig. La proteína DMRT1 sólo permanece en las células no mutantes, indicando que Sox9 y Sox8 mantienen la expresión de Dmrt1 en el testículo adulto y, además, ambos genes aseguran la integridad del testículo controlando la expresión de proteínas estructurales y protegiendo a las células de Sertoli de la apoptosis temprana. Concluyendo, nuestro estudio ha aportado fuertes evidencias de que, además de su papel crucial durante el desarrollo testicular, Sox9, junto a Sox8 y coordinadamente con Dmrt1, controla el mantenimiento del testículo adulto. Referencias bibliográficas: Matson CK, Murphy MW, Sarver AL, Griswold MD, Bardwell VJ, Zarkower D. DMRT1 prevents female reprogramming in the postnatal mammalian testis. Nature. 2011a;476:101–104. doi: 10.1038/nature10239. Uhlenhaut NH, Jakob S, Anlag K, Eisenberger T, Sekido R, Kress J, Treier AC, Klugmann C, Klasen C, Holter NI, Riethmacher D, Schütz G, Cooney AJ, Lovell-Badge R, Treier M. Somatic sex reprogramming of adult ovaries to testes by FOXL2 ablation. Cell. 2009;139:1130–1142. doi: 10.1016/j.cell.2009.11.021. Barrionuevo FJ, Hurtado A, Kim GJ, Real FM, Bakkali M, Kopp JL, Sander M, Scherer G, Burgos M, Jiménez R. Sox9 and Sox8 protect the adult testis from male-to-female genetic reprogramming and complete degeneration. eLife. 2016; 5: e15635. doi: 10.7554/eLife.15635 Ars Pharm 59 (suppl1): 24 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 La experiencia previa de un alto reforzador produce un mayor consumo de alcohol en ratas Jiménez García AM1,2*, Ruiz Leyva L1,2, Morón I1,3, Cendán CM2. 1 Departamento de Psicobiología. Universidad de Granada (España). 2 Departamento de Farmacología. Instituto de Neurociencias F. Olóriz. Universidad de Granada (España). 3 Centro de Investigación Mente, Cerebro y Comportamiento (CIMCYC), Universidad de Granada (España). Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. El abuso de alcohol es una de las principales causas de importantes problemas sociales, económicos y de salud en todo el mundo. Algunas investigaciones indican que pueden deberse a que el alcohol actúa como un reforzamiento negativo de tal manera que reduce un estado emocional aversivo que se desea reducir (Manzo et al., 2014) o como un reforzamiento positivo asociado a experiencias positivas (Ortega et al., 2014). En el presente estudio se ha tratado de demostrar si el consumo de alcohol tras la experiencia de frustración (inducida mediante el paradigma denominado Contraste Sucesivo Negativo Instrumental o CSNi) produce alguna variación en el consumo de alcohol (Papini, 2009). Se utilizaron 36 ratas Wistar macho divididas en 4 grupos dependiendo de si iban a ser frustradas (grupos experimentales 72-12) o no (grupos control 12-12) durante el CSNi. Asimismo, se manipuló si recibían etanol (E) o agua (A) en las dos horas posteriores al procedimiento conductual. El experimento consistió en un total de 13 días de los cuales 10 formaban parte de la fase precambio (acceso a 12 ó 72 pellets) y 3 formaban parte de la fase postcambio (acceso a 2 pellets). Se ha encontrado frustración independiente de la sesión y un consumo significativamente superior en el grupo 72-12/E con respecto al 1212/E a partir del quinto día precambio. No se encontraron diferencias en el consumo de agua. Los resultados sugieren que los pellets puedan estar actuando como un reforzador positivo que se ha condicionado al consumo de alcohol incrementando el mismo. Los mecanismos subyacentes a estos efectos siguen siendo identificados. Referencias bibliográficas: Manzo, L., Gómez, M. J., Callejas-Aguilera, J. E., Fernández-Teruel, A., Papini, M. R., & Torres, C. (2014). Antianxiety self-medication induced by incentive loss in rats. Physiology and Behavior, 123, 86–92. Papini, M. R. (2009). Psicología comparada: Evolución y desarrollo del comportamiento. Bogotá: Manual moderno. Aprendizaje y comportamiento infantil 449453 Ortega, L. A., Norris, J. N., Lopez-Seal, F., Ramos, T., & Papini, M. R. (2014). Correlates of recovery from incentive downshift: A 17 preliminary selective breeding study. International Journal of Comparative Psychology, 27(2). Ars Pharm 59 (suppl1): 25 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Enriquecimiento selectivo de subpoblaciones de células madre cancerígenas basado en el secretoma de células madre mesenquimales. Jiménez G1,2,3*, Hackenberg M4,5, Catalina P6, Boulaiz H1,2,3, García MA1,2,7, Perán M1,8, López Ruiz E1,8, Ramírez A2,9, Morata Tarifa C1,2,10, Carrasco E1, Aguilera M2,11, Marchal JA1,2,3. 1 Biopathology and Regenerative Medicine Institute (IBIMER), Centre for Biomedical Research (CIBM), University of Granada, Granada E-18100, Spain. 2Biosanitary Research Institute of Granada (ibs.GRANADA), University Hospitals of Granada-University of Granada, Granada, E-18071, Spain. 3 Department of Human Anatomy and Embryology, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada, E18016, Spain. 4 Department of Genetic, Faculty of Science, University of Granada, Granada E-18001, Spain. 5 Laboratory of Bioinformatics, Centre for Biomedical Research (CIBM), University of Granada, Granada E-18100, Spain. 6 Andalusian Public Health System Biobank, Centre for Biomedical Research (CIBM), Ministry of Health-University of Granada, Granada E-18100, Spain. 7 Department of Oncology, University Hospital Virgen de las Nieves, Granada E-18014, Spain. 8 Department of Health Sciences, University of Jaén, Jaén E-23071, Spain. 9Houston Methodist Cancer Center, Houston, TX 77030, USA. 10Braman Family Breast Cancer Institute, UM Sylvester Comprehensive Cancer Center, University of Miami Miller School of Medicine, Miami, Florida, FL 33136, USA. 11 Department of Microbiology, Faculty of Pharmacy, University of Granada, Granada E-18071, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Sapin. Las células madre cancerígenas (CSCs) son responsables del inicio, metástasis y recurrencia del cáncer. Sin embargo, el papel desempeñado por las células tumorales diferenciadas y el microambiente es crucial durante la tumorigénesis. En este estudio, hemos analizado el medio condicionado (CM) obtenido a partir de células madre mesenquimales (MSCs) para establecer su papel en el enriquecimiento y mantenimiento de las CSCs. Nuestros resultados apoyan la capacidad del secretoma de las MSCs para facilitar la selección y el mantenimiento de las subpoblaciones de CSCs que se caracterizan por presentar: (i) alta expresión de marcadores superficiales característicos de CSCs y actividad de la enzima ALDH1, (ii) baja tasa de proliferación, con detección del ciclo celular en fase G1, (iii) un aumento de la expresión de genes de pluripotencia (NANOG, SOX2, OCT4 y KLF4), (iv) la capacidad de desarrollar un proceso tumoral y retener in vivo la expresión de marcadores y genes de pluripotencia asociados a las CSCs. El posterior análisis del secretoma de las MSCs mostró cuatro citoquinas relevantes (IL6, IL8, IL12 e IL23) y siete factores de crecimiento (EGF, FGF, GMCSF, HGF, MCSF, VEGF y PIGF1) para el enriquecimiento de las CSCs, siendo la combinación de IL6 y HGF la que mejores resultados presentó. En este trabajo se describe un nuevo medio de cultivo basado en la combinación de IL6 y HGF que permite enriquecer y mantener en cultivo durante largos periodos de tiempo las CSCs. Referencias bibliográficas: Patent: Culture medium and method for enriching and maintaining cancer stem cells (cscs) using said medium Ref: ES201400666PCT/ES2015/070606 / WO2016/020572 Mimeault, M. & Batra, S. K. Molecular Biomarkers of Cancer Stem/Progenitor Cells Associated with Progression, Metastases, and Treatment Resistance of Aggressive Cancers. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2014; 23, 234–254. Vermeulen, L., de Sousa e Melo, F., Richel, D. J. & Medema, J. P. The developing cancer stem-cell model: clinical challenges and opportunities. Lancet. Oncol. 2012; 13, e83-9 Bremnes, R. M. et al. The role of tumor stroma in cancer progression and prognosis: emphasis on carcinoma-associated fibroblasts and non-small cell lung cancer. J. Thorac. Oncol. 2011; 6, 209–17. Ars Pharm 59 (suppl1): 32 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Morfología mitocondrial durante el ejercicio físico Casuso R*, Martín Albo J, Nordsborg N, Hebberecht M, Salmerón LM, Huertas JR. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix Verdú” Laboratorio 116. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. En células cultivadas, las perturbaciones metabólicas que ocurren durante el ejercicio físico influyen sobre los procesos de fusión y fisión mitocondrial, pero no es conocido si el ejercicio de manera aguda altera la morfología mitocondrial y las interacciones de membrana en vivo (Picard et al., 2013). Para estudiar esta alteración hemos analizado biopsias musculares de nadadores tras ejercicio físico agudo, las biopsias se realizaron en reposo, tras series de 50m y 3 h después y tras series de 200 m y 3 h después. Para cuantificar la morfología mitocondrial se usó un enfoque de microscopía electrónica (TEM) con cortes transversales y longitudinales, se analizaron las imágenes utilizando el programa IMAGEJ y se utilizaron como parámetros, para determinar la alteración, form factor, aspect ratio, roundness, circularity. Tras series de 200 m se ha observado un mayor número de mitocondrias ramificadas y complejas (aspect ratio) con respecto a las biopsias analizadas en reposo lo que sugiere que el ejercicio físico agudo puede alterar la morfología de las mitocondrias. Referencias bibliográficas: Picard, M., Gentil, B. J., McManus, M. J., White, K., St. Louis, K., Gartside, S. E., … Turnbull, D. M. (2013). Acute exercise remodels mitochondrial membrane interactions in mouse skeletal muscle. Journal of Applied Physiology, 115(10), 1562–1571. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.00819.2013 Ars Pharm 59 (suppl1): 33 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Implementación de normas bpl en el servicio de experimentación animal/cic. una oportunidad para el desarrollo de I+D+I con empresas Zúñiga JM*, Braojos JP, Gamarra E, Gonzalez A, Morales B, Muñoz B, Nieto A, Rodriguez A, Rodriguez P, Ruiz C, Urquiza I. Servicio de Unidad de Producción y Experimentación Animal /CIC/CIBM, Armilla, 18071, Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Objetivos: A menudo nuestros investigadores, a pesar de disponer de los recursos humanos y materiales, no pueden acceder a proyectos y/o contratos con empresas al carecer de procesos de trazabilidad estandarizados. Las BPL son un instrumento para ello, y permiten que los estudios realizados y los productos evaluados obtengan la certificación para poder ser registrados en las diferentes Agencias. Ámbito de aplicación: Instalación de Producción y Experimentación con capacidad para producir y/o mantener modelo animales estandarizados. Se definen y acotan los estudio posibles y programados (master schudule).Se parte de un estudio de toxicidad subcrónica de un compuesto de polifenoles rico en hidroxitirosol (OCDE-408). Actuaciones: Se diseñan y establecen cerca de 40 PNTs* de control (7), desinfección-esterilización (3), técnica experimentales (15), gestión (8) sistema de calidad (4), y otros (9), incluidas las especificas de BPL. Igualmente se certifican y validan 16 equipos incluidos en el Sistema de Barrera de la instalación o destinados a tomas de muestras y/o conservación de estas. Igualmente la validación del HVAC y el SCADA de control integral de la instalación. El proceso está en la fase final de evaluación interna por la empresa auditora (QTI) y pendiente de la certificación final por parte de la AEMPS. *Procedimientos Normalizados de Trabajo Referencias bibliográficas: - Directiva 2004/10/CE4, Aplicación principios BPL y al control de su aplicación - OCDE. Monografías específicas sobre BPL. www.oecd.org - RD 822/1993 y RD 1369/2000. Principios de BPL. Aplicación de estudios no clínicos sobre sustancias y productos químicos - RD 2043/1994 y Orden 14/4/2000. Inspección y verificación BPL -AEMPS. Agencia Española del Medicamento y Productos Sanitarios. www.aemps.gob.es, Ars Pharm 59 (suppl1): 34 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Mitochondrial dysfunction induces different responses in sulfide metabolism Mascaraque C1,2*, Ziosi M3, Hidalgo Gutiérrez A1,2, Barriocanal Casado E1,2, Prokisch H4, Schuelke M5, Quinzii C3, López LC1,2. 1 Departmento de Fisiología, Facultad de Medicina, Universidad de Granada, Granada, Spain. 2 Instituto de Biotecnología, Centro de Investigación Biomédica, Universidad de Granada, Granada, Spain. 3 Department of Neurology, Columbia University Medical Center, New York, NY, USA. 4 Institute of Human Genetics, Technische Universität München, München, Germany. 5 Department of Neuropediatrics, Charité‐Universitätsmedizin Berlin, Berlin, Germany. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Sulfide metabolism in mammalian cells mainly consists of the transulfuration (biosynthetic) and the hydrogen sulfide (H2S) oxidation (catabolic) pathways, being the latter one involved in the mitochondrial energy production through the activity of Sulfide:Quinone Oxidoreductase (SQR). Recently, we have reported that under severe CoQ deficiency the levels of SQR are drastically reduced, inducing alteration H2S oxidation pathway1. Also HEK-293 cells and muscle with depleted mtDNA show an activation of serine biosynthesis and transsulfuration pathway that is dependent on the transcription factor ATF42,3. These data suggest that both the transulfuration and the H2S oxidation pathways are inter-regulated and may respond to mitochondrial dysfunction. Here we evaluate the enzymes of the sulfide metabolism in conditions of mitochondrial dysfunction, sulfur aminoacids availability and changes in SQR. Our results show that mitochondrial dysfunction does not induce an uniform and common response in the sulfide metabolism and is not dependent of the sulfur aminoacids availability. Furthermore, we observe correlative changes the transulfuration and the H2S oxidation pathways. These data may show the importance of sulfide metabolism for mitochondrial functionality. References: 1 Luna-Sanchez, M. et al. CoQ deficiency causes disruption of mitochondrial sulfide oxidation, a new pathomechanism associated with this syndrome. EMBO Mol Med 9, 78-95, doi:10.15252/emmm.201606345 (2017). 2 Bao, X. R. et al. Mitochondrial dysfunction remodels one-carbon metabolism in human cells. Elife 5, doi:10.7554/ eLife.10575 (2016). 3 Nikkanen, J. et al. Mitochondrial DNA Replication Defects Disturb Cellular dNTP Pools and Remodel One-Carbon Metabolism. Cell Metab. 23, 635-648, doi:10.1016/j.cmet.2016.01.019 (2016). Ars Pharm 59 (suppl1): 35 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 In-bioreactor ultrasonic monitoring of 3D culture human engineered cartilage Melchor J1,2*, López Ruiz E3,4, Soto JM5, Jiménez G2,4,6, Antich C2,4,6, Perán M3,4, Baena JM4, Rus G1,2, Marchal JA2,4,6. 1 Department of Structural Mechanics, University of Granada, Politécnico de Fuentenueva, Granada, Spain. 2 Biosanitary Research Institute of Granada (ibs.GRANADA), University Hospitals of Granada-University of Granada, Granada, Spain. 3 Department of Health Sciences, University of Jaén, Jaén, Spain. 4 Biopathology and Regenerative Medicine Institute (IBIMER), Centre for Biomedical Research, University of Granada, Granada, Spain. 5 Dpto de Óptica. Facultad de Ciencias Físicas. Universidad Complutense de Madrid, Spain. 6 Department of Human Anatomy and Embryology, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Las técnicas de generación de cartílago mediante ingeneiría tisular es uno de los tratamientos más prometedores para las patologías de cartílago articular1,2. En este estudio se ha diseñado un biorreactor para implementar la monitorización en tiempo real de los procesos de formación de tejidos neo-cartilaginosos a través del análisis de señales ultrasónicas. Se fabricaron scaffolds de ácido poliláctico (PLA) para sembrar condrocitos humanos en ellos y después cultivarlos en el biorreactor integrado con ultrasonidos (US). Las señales recibidas por los sensores se analizaron mediante la interacción ultrasonido-tejido y por un tratamiento estocástico de la evolución de la matriz extracelular (ECM). Para reconstruir la velocidad y la atenuación de las señales extraídas, se combinó un problema inverso basado en algoritmos genéticos con una propagación iterativa computacional. Los datos fueron validados frente a las mediciones de evolución de los cultivos de condrocitos 3D in vitro evaluados por la proliferación, observaciones morfológicas y ultraestructurales, parámetros bioquímicos y análisis de la expresión génica. Los parámetros reconstruidos desde la monitorización ultrasónica (velocidad, atenuación, cambios de densidad) demostraron ser útiles para determinar indirectamente parámetros de proliferación de cultivo celular de una manera no invasiva. La correlación significativa mostrada entre glicosaminoglicanos (GAG) y colágeno II (Col II) con la evolución del amortiguamiento elástico de la nueva ECM refuerza la viabilidad de utilizar técnicas ultrasonicas para evaluar la funcionalidad de los condrocitos. En consecuencia, los US pueden utilizarse para monitorizar la proliferación de condrocitos y la formación de ECM en el contexto de la ingeniería del cartílago 3D. Referencias bibliográficas: 1. López-Ruiz E, Jiménez G, García MÁ, et al. Polymers, scaffolds and bioactive molecules with therapeutic properties in osteochondral pathologies: what’s new? Expert Opin Ther Pat. 2016;26(8):877-890. doi:10.1080/1354 3776.2016.1203903. 2. Camarero-Espinosa S, Rothen-Rutishauser B, Foster EJ, Weder C. Articular cartilage: from formation to tissue engineering. Biomater Sci. 2016;4(5):734-767. doi:10.1039/c6bm00068a. Ars Pharm 59 (suppl1): 36 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Paternal and maternal preconception and prenatal urinary concentrations of bisphenol a and size at birth Mustieles V1*, Messerlian C2, Mínguez Alarcón L2, Fernandez MF1, Ford JB2, Williams P3,4, Hauser R2,4,5. 1 Instituto de Investigación Biosanitaria (ibs.GRANADA), Hospitales Universitarios de Granada, Spain. University of Granada, Centro de Investigación Biomédica, Granada, Spain. 2 Department of Environmental Health, Harvard T.H. Chan School of Public Health, Boston, MA, USA. 3 Department of Biostatistics, Harvard T.H. Chan School of Public Health, Boston, MA, USA. 4 Department of Epidemiology, Harvard T.H. Chan School of Public Health, Boston, MA, USA. 5 Vincent Obstetrics and Gynecology, Massachusetts General Hospital and Harvard Medical School, Boston, MA, USA. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Corresponding author for abstract submission: Vicente Mustieles ( [email protected] ) Background: Bisphenol A (BPA) is a synthetic chemical widely used in the manufacturing of polycarbonate plastics and epoxy resin food can liners, among other consumer products. While pregnancy exposure to BPA has been associated with lower infant size at birth, there is limited data on the effect of exposure before conception. Methods: The study comprised 346 singletons born to 346 mothers and 190 fathers participating in a prospective preconception cohort of subfertile couples from Boston, USA. We estimated both mean preconception and prenatal exposure by averaging urinary ln-BPA concentrations in multiple paternal (n=477) and maternal (n=1370) samples collected before pregnancy, and maternal pregnancy samples collected in each trimester (n=760). Infant birth weight (BW) and head circumference (HC) were abstracted from delivery records. We estimated the association of BPA concentrations with BW and HC using multivariable linear regression. Results: Maternal preconception urinary BPA concentrations were associated with a significant decrease in both BW and HC: each ln-unit increase was associated with a BW decrease of -119 grams (95%CI: -212, -27), and a HC decrease of -0.60 centimeters (95%CI: -1.2, -0.03). Additionally, a borderline significant trend between maternal prenatal BPA concentrations and lower BW was also observed (-75 grams, 95%CI: -153, 2). Father’s preconception BPA concentration was not associated with either outcome. Conclusions: These results are consistent with prior studies on prenatal exposure and further suggest that the maternal preconception period may also be a sensitive window for BPA effects on infant size at birth. Ars Pharm 59 (suppl1): 37 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Urinary bisphenol a concentrations and levels of reproductive hormones and cortisol in peripubertal boys: The INMA-GRANADA COHORT. Mustieles V1,2, Ocón Hernandez O1,3, Mínguez Alarcón L4, Dávila Arias C1, Pérez Lobato R1, Calvente I1, Arrebola JP1,2,5, Vela Soria F1, Rubio S6, Hauser R4,7, Olea N1,2,5, Fernández MF1,2,5. 1Instituto de Investigación Biosanitaria (ibs.GRANADA), Hospitales Universitarios de Granada, Spain. 2 Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. 3University of Granada, Department of Obstetrics and Gynecology, Granada, Spain 4Department of Environmental Health, Harvard T.H. Chan School of Public Health, Boston, MA, USA. 5CIBER de Epidemiología y Salud Pública (CIBERESP), Spain. 6University of Córdoba, Institute of Fine Chemistry and Nanochemistry, 14017 Córdoba, Spain. 7Department of Epidemiology, Harvard T.H. Chan School of Public Health, Boston, MA, USA; Vincent Obstetrics and Gynecology, Massachusetts General Hospital and Harvard Medical School, Boston, MA, USA. Corresponding author for abstract submission: Vicente Mustieles ( [email protected] ) Background: Bisphenol A (BPA) is a well-known endocrine disrupting compound. Although several studies have investigated the effect of BPA exposure and reproductive hormones in humans, results have been inconsistent. Objective: To explore the cross-sectional relationship between BPA exposure and levels of reproductive hormones and cortisol in peripubertal boys. Methods: We evaluated 158 peripubertal boys aged 9-11 years from the Environment and Childhood (INMA) birth cohort in Granada, Spain. Urinary BPA concentrations were quantified by liquid chromatography-mass spectrometry and serum levels of total testosterone (TT), luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH) and cortisol were measured by electrochemiluminescence immunoassay. Results: After adjustment for confounders, linear regression models showed that urinary BPA concentrations were positively associated with serum TT levels (β=1.24, 95% CI =1.04, 1.50), and negatively with serum cortisol levels (β=0.92, 95% CI=0.86, 0.99). When urinary BPA concentrations were categorized in tertiles, boys in the 3rd tertile showed 50% higher serum TT levels and 17% lower serum cortisol levels compared to boys in the 1st tertile. Additionally, urinary BPA concentrations were also significantly associated with higher TT:LH and TT:cortisol ratios, but not with serum LH or FSH levels. Conclusions: Our results suggest a possible involvement of BPA at the adrenal gland, resulting in a differential production of androgens/cortisol during this important period of development. However, given the cross-sectional design of our study, the heterogeneous results reported in the previous literature, and the scant experimental research on BPA effects at the adrenal gland, the present findings should be interpreted with caution. Ars Pharm 59 (suppl1): 38 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Transparencia en investigación animal Nieto Ruiz de Zárate AI Unidad de Experimentación Animal Centro de Instrumentación Científica. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. El uso de modelos animales en investigación ha experimentado un gran cambio en la última década y parte de este cambio lo han propiciado grupos opositores a su uso, que llevaron su propuesta de eliminación completa de la experimentación con animales hasta el Parlamento Europeo. Fruto de este debate, ha sido la creación de un Acuerdo de Transparencia sobre el Uso de Animales en Experimentación coordinado por la Confederación de Sociedades Científicas de España (COSCE) a la que nuestra Universidad se ha adherido. Este acuerdo nos exige mejorar la información que se trasmite a la sociedad sobre el uso de los animales para concienciar sobre sus beneficios. A día de hoy, uso de modelos animales es esencial para comprender el desarrollo y tratamiento de muchas enfermedades y al mismo tiempo, hay que imponer unas estrictas normas de conducta para conseguir un tratamiento ético de los animales. Se deben aplicar los principios de las 3Rs, reemplazando los animales cuando sea posible, reduciendo su número al estrictamente necesario y refinando los métodos para mejorar el bienestar de los animales. Los investigadores deben ser los que transmitan a la sociedad de forma clara y cualificada la importancia del uso de animales en investigación. Por otro lado, desde las Unidades de Experimentación Animal, anualmente se remiten a las autoridades el número y usos de los animales y esa información es publicada en la página web del MAPAMA. Los resúmenes no técnicos de todos los proyectos autorizados son también publicados en esa misma web. Referencias bibliográficas: Documento COSCE sobre el uso de animales en Investigación Científica. Disponible en: http://www.cnb.csic.es/ documents/divulg/AnimalResearchCOSCE.pdf Directiva 2010/63 relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos. Diario oficial de la Unión Europea.L276/33-L276/79. 20 de octubre de 2010. Programa de control oficial sobre el bienestar de animales en la investigación y docencia. Versión 2016. Consejería de Agricultura, Pesca y Desarrollo Rural. Dirección General y Producción Agrícola y Ganadera.16 de febrero de 2016. Ars Pharm 59 (suppl1): 39 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Obtención y caracterización de exosomas de células madre estromales de origen intraoral Olaechea A1*, Padial Molina M2, Farias VA1, Capitán Sobrino D1, Carrasco Carmona A1, O’Valle F3, Galindo Moreno P2. 1 Instituto de Biomedicina Regenerativa (IBIMER). 2 Departamento de Estomatología. 3 Departamento de Anatomía Patológica e IBIMER. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Universidad de Granada. Introducción: Las células madre estromales (MSC) se pueden aislar de diversos tejidos, incluyendo la cavidad oral. Los mecanismos de comunicación intercelular son diversos. En los últimos años ha ganado especial interés el campo de las vesículas extracelulares y, particularmente, los exosomas para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas. Objetivos: Obtención y caracterización por tamaños de exosomas de células madre estromales de origen intraoral. Materiales y Métodos: Se cultivaron MSC de hueso nativo maxilar (ABSC), germen dental (DGSC), pulpa dental (DPSC) y ligamento periodontal (PDLSC). Tras confirmar su fenotipo y capacidad multipotente, se cultivaron en hyperflasks con 500 ml de medio DMEM convencional con FBS libre de microvesículas. Tras 48 horas, este medio fue después sometido a ultracentrifugaciones diferenciales. Los pellets fueron resuspendidos en 50µl de PBS y posteriormente evaluados mediante microscopía electrónica de transmisión. Las imágenes obtenidas fueron evaluadas mediante Image J para determinación de la distribución de tamaños de las vesículas. Resultados: La distribución de tamaños mostró rangos de diámetros dentro de lo descrito para las vesículas extracelulares de otros orígenes. Se encontraron diferencias significativas entre los tamaños de las vesículas extracelulares producidas por ABSC en comparación con todas las demás siendo de diámetro mayores. Las vesículas extracelulares de DGSC y DPSC fueron también de tamaño significativamente menor que las de PDLSC. Conclusión: Las MSC de origen intraoral son capaces de producir vesículas extracelulares que pueden ser aisladas de manera eficiente mediante técnicas de ultracentrifugación. La distribución por tamaños es concordante con lo previamente definido. Referencias bibliográficas: 1.- Liu, J., Yu, F., Sun, Y., Jiang, B., Zhang, W., Yang, J., Xu, G.T., Liang, A., Liu, S. (2015) Concise reviews: Characteristics and potential applications of human dental tissue-derived mesenchymal stem cells. Stem Cells 33: 627-638. Ars Pharm 59 (suppl1): 40 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Evaluation of the antioxidant activity of persea americana extracts against paraquatinduced oxidative stress in parkinson’s disease models Ortega Arellano H1, Vélez Pardo C1, Jiménez Del Rio M1, Escames G2. 1 School of Medicine, Medical Research Institute, Neurosciences Research Group, University of Antioquia (UdeA), Av. 62 # 52-59, Building 1, Lab 412; SIU Medellin (Colombia). 2 Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada, Avda. del Conocimiento s/n, 18016 Granada (Spain). Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Background: Parkinson’s disease (PD) is a common progressive neurodegenerative disorder caused by genetic and environmental factors leading to oxidative damage and the loss of dopaminergic neurons. Research has focused on strategies to protect these neurons from dying. The natural products are accepted as potential antioxidant agents in PD. However, no data is available to establish whether Persea americana extracts protect against oxidative stress (OS) in PD models. Our objective was to study the effects of the methanolic extracts of P. americana var. Hass, Fuerte, Reed and Collin reed in oxidative stress in vivo model of Parkinson’s disease. Materials and Methods: The methanolic extracts of P. americana were obtained by percolation, rotary-evaporation and lyophilization process. Subsequently, we determined HPLC profile, total polyphenol content (TPC) and the antioxidant activity in vitro (e.g. ORAC, ABTS and FRAP). The knockdown TH-GAL4>UAS-Parkin(RNAi)+/- D. melanogaster and the Swiss albino mice were treated with paraquat (PQ) and P. americana extracts. Survival of flies, motor activity and lipid peroxidation (LPO) were evaluated. Results: The HPLC revealed that the majority components in the extracts were procyanidins, flavanol monomers and chlorogenic acids. Direct correlation was observed between TPC and in vitro antioxidant capacity, which depended on the variety of the fruit and its different parts. The P. americana extracts increased survival, recovered the motor activity and reduced LPO of flies and mice against PQ-induced OS. Conclusion: This study might contribute to the design of new antioxidant compounds, which constitutes a novel source for therapy approaches against OS in familiar PD. Referencias bibliográficas: Ambegaokar SS, et al. Neurobiol Dis 2010;40:29-39. Mao Z and Davis R. Front Neural Circuits 2009; 3:5. Oboh G, et al. . Basi. Clin Physio. Pharmacol 2016; 27:131-140. Ars Pharm 59 (suppl1): 41 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 New suicide gene therapy for non-small cell lung cancer Hernández R1,2*, Morote M2, García B2, Mesas C2, Rama AR1,3. 1 Departamento de Anatomía y Embriología Humana, Universidad de Granada, Granada, España. 2 Instituto de Biopatología y Biomedicina Regenerativa, Universidad de Granada, Granada, España. 3 Departamento de Ciencias de la Salud, Universidad de Jaén, Jaén, España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Objetivo: El cáncer de pulmón es la principal causa de mortalidad por cáncer en todo el mundo. La quimioterapia y radioterapia han demostrado ser eficaces, sin embargo, a menudo causan una toxicidad considerable. En los últimos años, la terapia génica se ha presentado para mejorar la respuesta de los pacientes con cáncer de pulmón avanzado sin dañar el tejido normal. La terapia génica clásica suicida se basa en el uso de genes de origen bacteriano o viral cuyas enzimas codificantes transforman el profármaco no tóxico en una molécula tóxica. El gen E de E. Coli codifica para una proteína de membrana con un dominio tóxico que no necesita profármacos. Hemos investigado este gen como una nueva terapia génica suicida para el tratamiento contra el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC). Métodos: El gen E se clonó en el vector pcDNA3.1 (pcDNA3.1-E) y la línea NSCLC A-549 se cultivó como monocapa (ML) y como esferoides tumorales multicelulares (MTS). Para estudiar el efecto inhibidor del crecimiento del gen E, se transfectaron las células A-549 ML y MTS con pcDNA3.1-E o pcDNA3.1 vacío (control) y se compararon con A-549 ML y MTS parental, respectivamente. A-549 ML se evaluó mediante ensayo MTT y A-549 MTS por modulación de los volúmenes de crecimiento. La microscopía electrónica de transmisión (TEM) y microscopía electrónica de barrido (SEM) se utilizaron para analizar los poibles cambios ultraestructurales de las células A-549 transfectadas. Resultados: El crecimiento de las células control fue similar al de las células parentales, mientras que las A-549/ pcDNA3.1-E mostraron una inhibición significativa y dependiente del tiempo del crecimiento (42,2% a 92 h). TEM reveló mitocondrias dilatadas con matrices claras y crestas alteradas en las A-549/pcDNA3.1-E; También, SEM mostró una desaparición progresiva de microvillosidades y evaginaciones de la membrana celular. Ninguna característica fue observada en las células parentales y ni en las de control para ambas técnicas. Los análisis de volumen de A-549 MST mostraron hallazgos similares a ML, con una disminución de volumen significativa y dependiente del tiempo. La mayor disminución de volumen fue de 35,2% en A-549 MTS/pcDNA3.1-E después de 96 h en comparación con la MTS parental. Los MTS control mostraron el un volumen promedio similar a los MTS parentales. Conclusiones: Nuestros resultados mostraron que el gen E es capaz de inhibir el crecimiento de la línea A-549, presentándose como una nueva terapia génica suicida para el tratamiento contra el NSCLC, cuya ventaja es la no necesidad de un profármaco para su acción de muerte celular. Referencias bibliográficas: 1. E phage gene transfection associated to chemotherapeutic agents increases apoptosis in lung and colon cancer cells. Rama AR, Prados J, Melguizo C, Alvarez PJ, Ortiz R, Madeddu R, Aranega A. Bioeng Bugs. 2011 MayJun;2(3):163-7. 2. E phage gene transfection enhances sensitivity of lung and colon cancer cells to chemotherapeutic agents. Rama AR, Prados J, Melguizo C, Ortiz R, Alvarez PJ, Rodríguez-Serrano F, Hita F, Ramos JL, Burgos M, Aranega A. Int J Oncol. 2010 Dec;37(6):1503-14. Ars Pharm 59 (suppl1): 48 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Evaluación del efecto de aceites de oliva virgen con diferente contenido en compuestos bioactivos sobre biomarcadores de daño endotelial Sánchez Rodríguez E1, Biel Glesson S2, Fernández Navarro JR2, Calleja MÁ2, Espejo Calvo JA3, Romero C4, Covas MI5, Fitó Colomer M6, Gil Á1, Martínez de Victoria E7, Mesa García MD1. 1 Departamento de Bioquímica y Biología Molecular II. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix” (INyTA). Universidad de Granada, Granada. 2 Fundación para la Investigación Biosanitaria de Andalucía Oriental, Granada. 3 Instituto para la Calidad y Seguridad Alimentaria S.L., Granada. 4 Departamento de Biotecnología de los Alimentos. Instituto de la Grasa (IG-CSIC). Universidad Pablo de Olavide, Sevilla. 5 NUPROAS (Nutritional Project Assessment), Handesbolag (NUPROAS HB), Nacka. 6 Instituto Hospital del Mar de Investigaciones Biomédicas. CIBEROBN ciber de la Fisiopatología de la Obesidad y Nutrición. Parque de Investigación Biomédica de Barcelona, Barcelona. 7 Departamento de Fisiología. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix” (INyTA). Universidad de Granada, Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. El aceite de oliva virgen (AOV) ha demostrado ser protector frente a la enfermedad cardiovascular debido a sus compuestos bioactivos, importantes por sus propiedades antioxidantes. El objetivo del estudio es evaluar el efecto de la administración de tres AOV con distinto contenido en compuestos bioactivos sobre marcadores de daño endotelial. Se realizó un estudio de intervención cruzado, aleatorizado, controlado y doble ciego en 51 adultos sanos. Se evaluaron los beneficios del consumo de un AOV control, con bajo contenido en compuestos fenólicos (124 ppm), un AOV optimizado, con elevado contenido en compuestos fenólicos (490 ppm), y un aceite enriquecido, (488 ppm de compuestos fenólicos) al que se le añadieron ácidos triterpénicos obtenidos de la propia aceituna (350 ppm). Los voluntarios tomaron 30 mL diarios en crudo de cada uno de los aceites durante 3 semanas, separados por periodos de lavado de dos semanas y utilizaron el mismo tipo de aceite para cocinar. Se determinaron marcadores de función endotelial en plasma utilizando la tecnología xMAP y ELISA. Los resultados a tiempo inicial y tras tres semanas de intervención con cada aceite, se compararon mediante un modelo lineal mixto ajustado, considerando significativo p < 0,05. Los tratamientos con AOV control y optimizado redujeron la concentración de endotelina-1 plasmática sin observarse cambios en el resto de biomarcadores de daño endotelial determinados. En conclusión, la ingesta diaria de 30 mL de AOV con al menos 124 ppm de compuestos fenólicos durante tres semanas puede mejorar la función endotelial en voluntarios sanos. Referencias bibliográficas: Biel, S.; Mesa, M.-D.; de la Torre, R.; Espejo, J.-A.; Fernández-Navarro, J.-R.; Fitó, M.; Sánchez-Rodriguez, E.; Rosa, C.; Marchal, R.; Alche, J. de D.; Expósito, M.; Brenes, M.; Gandul, B.; Calleja, M. A.; Covas, M.-I. The NUTRAOLEOUM Study, a randomized controlled trial, for achieving nutritional added value for olive oils. BMC Complement. Altern. Med.2016, 16, 404. Ars Pharm 59 (suppl1): 49 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Implicación del receptor sigma-1 en la analgesia opioide de origen inmune durante la inflamación Tejada MA1, Montilla García A1, Cronin SJ2, Penninger JM2, Baeyens JM1 Cobos EJ1. 1 Facultad de Medicina, Instituto de Neurociencias y Centro de Investigación Biomédica, Universidad de Granada. 2 Institute of Molecular Biotechnology, Viena. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Durante la inflamación, las células inmunes infiltradas en el foco inflamatorio liberan simultáneamente sustancias pronociceptivas y péptidos opioides endógenos (POEs), aunque su potencial analgésico está poco explorado. Se ha descrito que el antagonismo del receptor σ1 periférico potencia la analgesia inducida por fármacos opioides. Nuestro objetivo fue estudiar si el receptor σ1 es capaz de modular la analgesia opioide endógena de origen inmune durante la inflamación. La hiperalgesia inflamatoria frente al estímulo mecánico y térmico se evaluó en ratones a las 3 h tras la administración intraplantar de carragenina. La administración de los antagonistas selectivos σ1 BD-1063 y S1RA abolió la hiperalgesia inflamatoria. Este efecto fue revertido por el antagonista opioide periférico naloxona-metiodida, lo que sugiere que durante la inflamación se producen POEs susceptibles de ser modulados por el receptor σ1. De hecho, detectamos un marcado incremento en la concentración de β-endorfina en la pata inflamada, y la captura de este POE mediante la administración de un anticuerpo selectivo en la zona inflamada revirtió el efecto antihiperalgésico del antagonismo σ1. La administración in vivo de un anticuerpo frente a Ly6G disminuyó simultáneamente la infiltración de neutrófilos, los niveles de β-endorfina y los efectos antihiperalgésicos de los antagonistas σ1, por lo que la presencia de los neutrófilos portadores de POEs en el sitio inflamado es necesaria para los efectos de los antagonistas σ1. En conclusión, la inhibición del receptor σ1 produce analgesia opioide en el lugar de la inflamación mediante la potenciación de los efectos de POEs de origen inmune. Este es un mecanismo dirigido a maximizar el potencial analgésico inducido por células inmunes que de manera natural se acumularán en la zona inflamada. Referencias bibliográficas: 1Ji RR, Xu ZZ, Gao YJ. Emerging targets in neuroinflamation-driven chronic pain. Nat Rev Drug Discov. 2014, 13(7):533-48 2Hua S, Cabot PJ. Mechanisms of peripheral immune-cell-mediated analgesia in inflammation: clinical and therapeutic implications. Trends Pharmacol Sci. 2010, 31(9):427-33 3Kim FJ, Kovalyshyn I, Burgman M, Neilan C, Chien CC, Pasternak GW. Sigma 1 receptor modulation of G-proteincoupled receptor signaling: potentiation of opioid transduction independent from receptor binding. Mol Pharmacol. 2010, 77(4):695-703. 4Sánchez-Fernández C, Montilla-García Á, González-Cano R, Nieto FR, Romero L, Artacho-Cordón A, Montes R, Fernández-Pastor B, Merlos M, Baeyens JM, Entrena JM, Cobos EJ. Modulation of peripheral μ-opioid analgesia by σ1 receptors. J Pharmacol Exp Ther. 2014, 348:32-45. 5Cobos EJ, Entrena JM, Nieto FR, Cendán CM, Del Pozo E. Pharmacology and therapeutic potential of σ1 receptor ligands. Curr Neuropharmacol 2008, 6:344–366. Ars Pharm 59 (suppl1): 50 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Combination of melatonin and rapamycin as a potential therapeutic strategy for head and neck cancer: melatonin protects normal cells from rapamycin associated toxicity but acts as a pro-oxidant agent inducing cancer cells apoptosis. Ying Qiang S1, Guerra Librero A1, Fernandez Gil BI1, Florido J1, Martinez Ruiz L1, Ortega Arellano HF2, Escames G1. 1 Biomedical Research Center, Health Sciences Technology Park, University of Granada, Granada, Spain. 2 Medical Research Institute, Faculty of Medicine, University of Antioquia, Medellin, Colombia. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. The excess activity of mTOR signaling network is regarded as a frequent event in some prevalent human cancers [1, 2]. Rapamycin, the mTOR inhibitor, has been clinically proven to be an effective anti-tumor agent [3]. However, the antitumor activity of rapamycin has been confirmed only in a limited subset of cancer types because of the negative feedback loop from S6K1 to AKT signaling [4, 5]. In clinical trials of mTOR inhibitors, a number of adverse events have been also identified [6]. Among them, mucositis is regarded as the most severe one. Melatonin possess the ability of suppressing neoplastic growth in a variety of tumors with different mechanisms [7]. Besides, melatonin can prevent the activation of multiple pathways associated with oral mucositis [8, 9]. Given all that, we assumed that the combination of rapamycin and melatonin could be a potential cancer therapeutic strategy. We analyzed the interaction between rapamycin and different concentrations of melatonin using head and neck cancer cell lines in vitro, and HNC xenografts mice in vivo. We found that high concentration of melatonin exhibited anti-tumor effect and blocked the negative feedback loop from S6K1 to AKT signaling. Melatonin was also observed to cause reactive oxygen species (ROS) production. We confirmed that mitochondrial was the main target of melatonin. Melatonin improved the mitochondrial function, resulting in the ROS accumulation. Nevertheless, ROS accumulation resulted in severe oxidative damage of mitochondrial and finally led to mitophagy or even apoptosis. We also found that melatonin administration reduced rapamycin associated toxicity to healthy organs. In summary, melatonin can be used as an adjuvant agent with rapamycin and minimize the side effects in tumor therapy. Referencias bibliográficas: 1. Vander Broek, R., et al., The PI3K/Akt/mTOR axis in head and neck cancer: functions, aberrations, cross‐talk, and therapies. Oral diseases, 2015. 21(7): p. 815-825. 2. Matter, M.S., et al., Targeting the mTOR pathway in hepatocellular carcinoma: Current state and future trends. Journal of Hepatology, 2014. 60(4): p. 855-865. 3. Benjamin, D., et al., Rapamycin passes the torch: a new generation of mTOR inhibitors. Nature Reviews: Drug Discovery, 2011. 10(11): p. 868-880. 4. Rodrik-Outmezguine, V.S., et al., mTOR kinase inhibition causes feedback-dependent biphasic regulation of AKT signaling. Cancer discovery, 2011. 1(3): p. 248-259. 5. Engelman, J.A., Targeting PI3K signalling in cancer: opportunities, challenges and limitations. Nature Reviews: Cancer, 2009. 9(8): p. 550-562. 6. Pallet, N. and C. Legendre, Adverse events associated with mTOR inhibitors. Expert opinion on drug safety, 2013. 12(2): p. 177-186. 7. Cardinali, D., et al., Melatonin-Induced Oncostasis, Mechanisms and Clinical Relevance. J. Integr. Oncol. S., 2016. 1: p. 2. 8. Ortiz, F., et al., Melatonin blunts the mitochondrial/NLRP3 connection and protects against radiation‐induced oral mucositis. Journal of pineal research, 2015. 58(1): p. 34-49. 9. Reiter, R., et al., Melatonin in the oral cavity: physiological and pathological implications. Journal of periodontal research, 2015. 50(1): p. 9-17. Ars Pharm 59 (suppl1): 51 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Melatonin reduces renal mitochondrial dysfunction and endoplasmatic reticulum stress in diabetic obese rats Visiedo L, Agil A. Instituto de Neurociencias. Centro de Investigación Biomédica (CIBM) de la Universidad de Granada. Abstract: Type 2 diabetes mellitus (T2DM) is a major public health problem worldwide, as a consequence of the expanding pandemic of obesity. Our group has previously shown the melatonin effects at diabesity (obesity and diabetes mellitus type 2) including a browning effect and an improvement at mitochondrial level. Moreover, some data suggest that melatonin could restore mitochondrial/endoplasmic reticulum (RE) function, which are altered as a result of the cell damage and oxidative stress associated with obesity and T2DM in potentially affected organ, such as the kidney (diabesitic nephropathy). However, the effect of melatonin at organular level in kidney hasn’t been studied yet in this model of obesity-T2DM. The aim of this work was to study whether chronic melatonin treatment has a beneficial effect in kidneys of diabetic obese rats, well as those that control organular functionality (mitochondrion and endoplasmic reticulum). Male Zucker diabetic fatty (ZDF; n = 10) rats and lean littermates (ZL; (n = 10)) were given either melatonin (10 mg/kg BW/ day) orally for 16 wk (starting from 5 wk) (M-ZDF and M-ZL) or vehicle as control groups (C-ZDF and C-ZL). Electron transfer chain (C IV), Super oxide dysmutase (SOD) and nitrites were measured spectrophotometrically. Western Blot analysis was used as indicator of mitochondrial dynamic (MFN2, OPA-1, DRP-1) and an indicator of the endoplasmic reticulum stress (ERS) (GRP78, PERK, IRE-1, ATF-6) and apoptosis (JNK, BAX, Caspase-3). Kidney morphology was evaluated by histopathology. Melatonin improves mitochondrial dysfunction in kidney ZDF rats by increasing activities of mitochondria, significantly enhances C IV activity and antioxidant enzyme (SOD), and reduces reactive oxygen species (ROS) and reactive nitrogen species (RNS). Melatonin treatment to ZDF rats decreases significantly kidney ERS and modulates apoptosis pathway. Melatonin decreased glomerular area. Thus, it is concluded that chronic oral melatonin reduces mitochondria dysfunction, ER stress and its downstream apoptosis in ZDF rats. Therefore, it may be beneficial in the treatment of obesity-diabetic nephropathy. References: Jimenéz-Aranda A, Fernández-Vázquez G, Serrano MM, Reiter RJ, Agil A. Melatonin improves mitochondrial function in inguinal white adipose tissue of Zücker diabetic fatty rats. J Pineal Res. 2014 . Funding: Project SAF 2013-45752-R & 2016-79794-R. Spanish Ministry of Economy and Competitiveness & FEDER. Ars Pharm 59 (suppl1): 52 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Producción y caracterización de exopolisacáridos producidos por bacterias gram positivas Alajar Tortosa P1,2,3, Toral Navarro L1,2,3, Castro D1,2,3, Martínez Checa Barrero F1,2, Rodríguez González MA1,2, Béjar Luque V1,2. 1 Departamento de Microbiología, Facultad de Farmacia, Granada, España. 2 Centro Investigación Biomédica (CIBM), Instituto Biotecnología, Armilla, Granada, España. 3 Xtrem Biotech S.L., Centro Europeo de Empresas e Innovación, Armilla, Granada, España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Los exopolisacáridos son polímeros orgánicos de origen microbiano, liberados al espacio extracelular, que participan en la formación de agregados microbianos y/o biofilms, siendo los responsables de la unión entre células y otros materiales junto a un sustrato. Están compuestos en su mayoría por hidratos de carbono, pero también presentan en su composición otros componentes como son proteínas y ácidos urónicos. Los exopolisacáridos presentan una serie de funciones como la capacidad de formar agregados celulares siendo los responsables de la formación de biofilms, así como la capacidad de actuar como barrera protectora que protege al microorganismo frente a la acción de sustancias tóxicas o de la desecación [1]. El objetivo de este trabajo se centra en el estudio de la producción de exopolisacáridos a partir de bacterias aisladas, tanto en ambientes salinos como en ambientes normales. También se caracterizan dichos exopolisacáridos, determinándose su contenido en proteínas e hidratos de carbono, así como su actividad emulgente y la viscosidad que presentan los exopolisacáridos cuando se presentan en solución. Los resultados muestran unos rendimientos en la producción de exopolisacáridos entre los 3,96 g/l y los 0,068 g/l. Además presentan una alta viscosidad comportándose como fluidos pseudoplásticos, y con una buena actividad emulgente. En lo referente a la composición de los exopolisacáridos, presentan un bajo contenido en proteínas, así como un contenido en hidratos de carbono bajo. References: [1] Nwodo, U. U., Green, E., & Okoh, A. I. (2012). Bacterial exopolysaccharides: functionality and prospects. International journal of molecular sciences, 13(11), 14002-14015. Ars Pharm 59 (suppl1): 53 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Application of a new 3D-bioprinter in tissue and organ regeneration Jiménez G1,2,3, , Antich C1,2,3*, López Ruiz E1,4, Baena JM1, Lisón G1,2, Marchal JA 1,2,3. 1 Biopathology and Regenerative Medicine Institute (IBIMER), Centre for Biomedical Research, University of Granada, Granada E-18100, Spain. 2 Biosanitary Research Institute of Granada (ibs.GRANADA), University Hospitals of Granada-University of Granada, Granada, Spain 3 Department of Human Anatomy and Embryology, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada E-18012, Spain. 4 REGEMAT 3D S.L., Avenida de la innovación 1, 18100, Armilla, Granada, Spain, 4 Department of Health Sciences, University of Jaén, Jaén E-23071, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. *E-mail: [email protected] Tissue engineering has emerged as a new strategy to generate artificially functional tissue and organs substitutes. In this attempt, 3d printing technology has gained enormous attention as it enables to fabricate 3d biological constructs that mimic the structure and function of native tissue by controlled 3d deposition of tissue components, cells and matrix materials. In this study we present a new bioprinter, designed by REGEMAT 3D, with an innovative and enhanced fabrication system that combine two processes: fused deposition modelling of thermoplastic polymer to obtain the stiff structure combined with Injection Volume Filling (IVF) as cell delivery method. In addition, we have demonstrated the biocompatibility of this novel printing procedure by testing viability, proliferation and cytoskeletal organization of bioprinted cells. This technology means a great advance in the regenerative medicine field, since the combination of multiple cell types and a wide range of materials would allow the generation of any type of tissue and organ. References: Billiet, T., M. Vandenhaute, et al. (2012). “A review of trends and limitations in hydrogel-rapid prototyping for tissue engineering.” Biomaterials 33(26): 6020-6041. Boland, T., T. Xu, et al. (2006). “Application of inkjet printing to tissue engineering.” Biotechnol J 1(9): 910-917. Chang R1, Nam J, Sun W. Effects of dispensing pressure and nozzle diameter on cell survival from solid freeform fabrication-based direct cell writing. Tissue Eng Part A. 2008 Jan;14(1):41-8. doi: 10.1089/ten.a.2007.0004. Khalil, S. and W. Sun (2007). “Biopolymer deposition for freeform fabrication of hydrogel tissue constructs.” Materials Science and Engineering: C 27(3): 469-478. Tsang, V. L. and S. N. Bhatia (2004). “Three-dimensional tissue fabrication.” Adv Drug Deliv Rev 56(11): 1635-1647. Ars Pharm 59 (suppl1): 54 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Desarrollo de un nuevo sistema de bioimpresión 3D para la regeneración de tejidos y órganos Jiménez G1,2,3, , Antich C1,2,3*, López Ruiz E1,4, Baena JM1, Griñán Lisón1,2, Marchal JA 1,2,3. 1 Biopathology and Regenerative Medicine Institute (IBIMER), Centre for Biomedical Research, University of Granada, Granada E-18100, Spain. 2 Biosanitary Research Institute of Granada (ibs.GRANADA), University Hospitals of Granada-University of Granada, Granada, Spain. 3 Department of Human Anatomy and Embryology, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada E-18012, Spain. 4 REGEMAT 3D S.L., Avenida de la innovación 1, 18100, Armilla, Granada, Spain, 4 Department of Health Sciences, University of Jaén, Jaén E-23071, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. La ingeniería tisular ha surgido como una nueva estrategia para generar artificialmente sustitutos funcionales de tejidos y órganos. La tecnología de impresión en tres dimensiones (3D) ha despertado una gran atención en dicho enfoque, ya que permite fabricar constructos biológicos en 3D que imitan el tejido nativo, estructural y funcionalmente, mediante la deposición controlada de los componentes del tejido: células y elementos de la matriz. En este estudio se presenta una nueva bioimpresora 3D, diseñada por REGEMAT 3D, con un innovador y mejorado sistema de fabricación que combina dos procesos: modelado de deposición por fusión de polímero termoplástico, para la obtención de la estructura rígida, combinada con el sistema de relleno por inyección de volumen (FIV) como método de dispensación celular. Además, se ha demostrado la biocompatibilidad de este nuevo procedimiento de impresión 3D mediante pruebas de viabilidad, proliferación y organización del citoesqueleto de las células bioimpresas. Esta tecnología significa un gran avance en el campo de la medicina regenerativa, ya que la combinación de una amplia gama de materiales y múltiples tipos celulares permitiría la generación de cualquier tipo de órgano y/o tejido. Referencias bibliográficas: Billiet, T., M. Vandenhaute, et al. (2012). “A review of trends and limitations in hydrogel-rapid prototyping for tissue engineering.” Biomaterials 33(26): 6020-6041. Boland, T., T. Xu, et al. (2006). “Application of inkjet printing to tissue engineering.” Biotechnol J 1(9): 910-917. Chang R1, Nam J, Sun W. Effects of dispensing pressure and nozzle diameter on cell survival from solid freeform fabrication-based direct cell writing. Tissue Eng Part A. 2008 Jan;14(1):41-8. doi: 10.1089/ten.a.2007.0004. Khalil, S. and W. Sun (2007). “Biopolymer deposition for freeform fabrication of hydrogel tissue constructs.” Materials Science and Engineering: C 27(3): 469-478. Tsang, V. L. and S. N. Bhatia (2004). “Three-dimensional tissue fabrication.” Adv Drug Deliv Rev 56(11): 1635-1647. Ars Pharm 59 (suppl1): 55 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Α-Actina como marcador de daño muscular sarcomérico en pruebas de fuerza máxima incremental Aragón Vela J, Barranco Ruiz Y, Casals C, Casuso RA, Fontana L, Huertas JR. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix Verdú”, laboratorio 116. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada. España. Introducción: El ejercicio de resistencia, especialmente en contracciones excéntricas, puede generar daño en el músculo esquelético debido a estímulos mecánicos y al estrés oxidativo. Además, la cantidad de masa muscular involucrada podría afectar a dicho daño. El objetivo de este estudio fue evaluar el daño muscular sarcomérico y el estrés oxidativo en respuesta a distintos ejercicios de fuerza e identificar el umbral de fatiga en músculos individuales. Métodos: 20 sujetos realizaron un test de fuerza máxima incremental en squat y press banca, ejercicios con movimientos explosivos y de corta duración. Se les extrajeron tres muestras de sangre: en reposo, 15 minutos y 24 horas post-ejercicio. Como marcadores de daño muscular se emplearon lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK-MB) y α-actina en suero. Se realizó un registro electromiográfico de los músculos más implicados en cada ejercicio. Resultados: Los valores de CK-MB y LDH a los15 minutos y 24 horas post-test, fueron significativamente más altos en press banca. Los valores electromiográficos se ajustaron a una regresión exponencial, que nos permitió identificar un punto de ruptura asociado al umbral de fatiga muscular. Conclusiones: A cargas equivalentes de trabajo, el ejercicio de press banca genera mayor daño muscular que el ejercicio de squat. Además, hemos desarrollado un método electromiográfico, rápido y, no invasivo que permite determinar el umbral de fatiga en deportes de muy corta duración y de movimientos explosivos, donde no son aplicables las variables fisiológicas clásicas. Referencias bibliográficas: Lucía, a, Sánchez, O., Carvajal, a, & Chicharro, J. L. (1999). Analysis of the aerobic-anaerobic transition in elite cyclists during incremental exercise with the use of electromyography. British Journal of Sports Medicine, 33(3), 178–185. Mäestu, J., Cicchella, A., Purge, P., Ruosi, S., Jürimäe, J., & Jürimäe, T. (2006). Electromyographic and neuromuscular fatigue thresholds as concepts of fatigue. Journal of Strength and Conditioning Research / National Strength & Conditioning Association, 20(4), 824–828 Calbet, JAL, Gonzalez-Alonso, J, Helge, JW, Søndergaard, H, Munch-Andersen, T, Saltin, B, et al. Central and peripheral hemodynamics in exercising humans: Leg vs arm exercise. Scand J Med Sci Sport 25: 144–157, 2015. Jamurtas, AZ, Theocharis, V, Tofas, T, Tsiokanos, A, Yfanti, C, Paschalis, V, et al. Comparison between leg and arm eccentric exercises of the same relative intensity on indices of muscle damage. Eur J Appl Physiol 95: 179–185, 2005. Farup, J and Sørensen, H. Postactivation potentiation: upper body force development changes after maximal force intervention. J Strength Cond Res 24: 1874–1879, 2010. Ars Pharm 59 (suppl1): 56 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Papel de los receptores sigma-1 en la potenciación de la analgesia morfínica en un modelo de dolor visceral murino. Artacho Cordón A, Romero L, Baeyens JM, Cendán CM. Departamento de Farmacología e Instituto de Neurociencias. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Los receptores sigma-1 (RS-1) juegan un papel muy relevante en distintos tipos de dolor [1] incluido el dolor visceral [2], y se ha demostrado que este receptor modula la analgesia opioide en modelos de dolor somático [3]. Sin embargo, no está estudiado si esta modulación es extensible al dolor visceral, cuya prevalencia clínica es muy relevante. Por lo tanto, se pretende estudiar el uso potencial de antagonistas RS-1 asociados con morfina como posible estrategia terapéutica para el tratamiento del dolor visceral. Se usaron ratones CD-1 salvajes y knockout para RS-1 (KO). Los fármacos fueron: morfina, naloxona, naloxona metiodida, BD-1047, BD-1063, NE-100 y S1RA. Las respuestas dolorosas espontáneas y la hiperalgesia mecánica referida (evaluada mediante la aplicación en el abdomen de filamentos de von Frey) fueron inducidas por la administración intracolónica de capsaicina al 0,1%. En ratones salvajes, el efecto de la morfina (2 mg/ kg), una dosis que produce una reducción moderada de las respuestas dolorosas pero no produce ningún efecto en la hiperalgesia mecánica fue potenciado por todos los antagonistas RS-1 evaluados, siendo mayor esta potenciación en la hiperalgesia mecánica referida. La naloxona revirtió la potenciación morfínica inducida por los antagonistas RS-1, mientras que la naloxona metiodida revirtió completamente la potenciación observada en el dolor referido pero solo parcialmente en dolor agudo. Ningún antagonista RS-1 potenció el efecto de la morfina en animales KO. Estos resultados sugieren que los antagonistas sigma-1 podrían tener un efecto potenciador sobre la analgesia morfínica con utilidad para el tratamiento del dolor visceral. Referencias bibliográficas: 1. Cobos EJ, Entrena JM, Nieto FR, Cendán CM, Del Pozo E. Pharmacology and therapeutic potential of sigma-1 receptor ligands. Curr Neuropharmacol. (2008) 6:344-66 2. Gonzalez-Cano, R., Merlos, M., Baeyens, J. M., Cendan, C. M. σ1 receptors are involved in the visceral pain induced by intracolonic administration of capsaicin in mice. Anesthesiology (2013) 118, 691-700. 3. Sánchez-Fernández, C., Nieto, F. R., González-Cano, R., Artacho-Cordón, A., Romero, L., Montilla-García, Á., Zamanillo, D., Baeyens, J. M., Entrena, J. M., Cobos, E. J. Potentiation of morphine-induced mechanical antinociception by σ1 receptor inhibition: Role of peripheral σ1 receptors. Neuropharmacology (2013) 70, 348-358. Ars Pharm 59 (suppl1): 57 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Use of a sigma-1 receptor antagonist as treatment of neuropathic pain produced by spared nerve injury in mice Bravo Caparrós I1,2, Nieto FR1,2, Perazzoli G3, Baeyens JM1,2, Cobos EJ1,2. 1 Department of Pharmacology, School of Medicine, University of Granada, 18016 Granada, Spain. 2 Institute of Neuroscience, Biomedical Research Center, University of Granada, 18100 Armilla, Granada, Spain. 3 Department of Human Anatomy and Embryology, School of Medicine, University of Granada, 18016 Granada, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Background and aims: Sigma-1 receptors (σ1Rs) are an emerging target for the treatment of neuropathic pain [1]. The role of σ1Rs in neuropathic pain induced by nerve compression is known, but their participation on peripheral neuropathy induced by nerve transection is unexplored. Therefore, we investigated the effect of pharmacological and genetic blockade of σ1Rs in the neuropathic pain associated to the sciatic nerve spared nerve injury (SNI) model. Methods: SNI was performed on female CD1 wild-type (WT) and σ1Rs knockout (σ1Rs-KO) mice [2]. Mechanical allodynia (von Frey test) [3], cold-allodynia (acetone test) [4] and heat hyperalgesia (Hargreave’s test) [5] were tested previously to SNI and during three weeks following injury. The effect of σ1Rs antagonist S1RA (16-64 mg/kg, s.c.) and agonist PRE-084 (32 mg/kg, s.c.) were tested seven days after SNI. Results: WT mice developed prominent cold and mechanical allodynia after SNI, whereas σ1Rs-KO did not develop cold allodynia and showed reduced mechanical allodynia. These effects were mimicked by the administration of S1RA to neuropathic WT mice, and the effects of the σ1 antagonist were reversed by PRE-084. σ1Rs-KO and WT mice showed a similar thermal hyperalgesia after SNI. However, S1RA abolished SNI-induced thermal hyperalgesia in WT mice, an effect which was reversed by PRE-084. Conclusion: σ1 receptors have a relevant role in SNI-induced neuropathic pain. The pharmacological antagonism of this receptor can be useful to prevent and/or treat neuropathic pain produced by nerve section. Acknowledgments: Supported by the Spanish Government (SAF2016-80540-R, FPU and Juan de la Cierva-Incorporación grants), Junta de Andalucía (P11-CTS-7649) and Research Program of University of Granada. References: [1] Sánchez-Fernández C, Entrena JM, Baeyens JM, Cobos EJ. Sigma-1 Receptor Antagonists: A New Class of Neuromodulatory Analgesics. Adv Exp Med Biol 2017;964:109-132. [2] Decosterd I, Woolf CJ. Spared nerve injury: an animal model of persistent peripheral neuropathic pain. Pain 2000;87:149-58. [3] Chaplan SR, Bach FW, Pogrel JW, Chung JM, Yaksh TL. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Method 1994;53:55-63. [4] Nieto FR, Cendán CM, Sánchez-Fernández C, Cobos EJ, Entrena JM, Tejada MA, Zamanillo D, Vela JM, Baeyens JM. Role of Sigma-1 Receptors in Paclitaxel-Induced Neuropathic Pain in Mice. J Pain 2012;13(11):1107-21. [5] Nieto FR, Entrena JM, Cendán CM, Pozo ED, Vela JM, Baeyens JM. Tetrodotoxin inhibits the development and expression of neuropathic pain induced by paclitaxel in mice. Pain 2008;137(3):520-31. Ars Pharm 59 (suppl1): 64 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Servicios generales en el CIBM unidades de resonancia magnética nuclear animal y de microscopia electrónica (CIC) Ibáñez AF, Tassi M. Centro de Instrumentación Científica. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. UNIDAD DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR ANIMAL [RMA] La imagen por resonancia magnética (IRM) es una técnica tomográfica basada en la resonancia magnética nuclear (RMN). La IRM es una de las herramientas más potentes para el estudio in vivo de multitud de procesos fisiológicos y fisiopatológicos. Las principales ventajas son la ausencia de radiaciones ionizantes, la versatilidad en el manejo del contraste y la capacidad multiplanar. Las IRM utilizadas en diagnóstico clínico y preclínico aprovechan la RMN del núcleo de H-1, principalmente, y es la energía liberada por los spines de H-1, tras la aplicación de radiofrecuencia, bajo un campo magnético, la que se pondera y potencia en los parámetros de interés. UNIDAD DE MICROSCOPIA ELECTRONICA [ME] La unidad de Microscopia Electrónica del CIC ubicada en el CIBM ofrece servicio tanto de preparación de muestras como de análisis ultraestructural por el Microscopio Electrónico de Transmisión (MET). Las muestras tales como tejidos o pellets pueden ser procesadas para la obtención de cortes semifinos (menos de 1 µm) para su estudio por microscopia óptica, o ultrafinos (60-80nm) para su estudio por MET, mientras que partículas en suspensión (bacterias, microvisículas, exosomas, proteínas, etc.) son marcadas por tinción negativa para poder observarse directamente en el MET. El microscopio del que disponemos (Leo906E-Carl Zeiss Microscopy) nos permite magnificaciones hasta 600.000x con una resolución de 0.34nm, está equipado con un sistema digital de adquisición de imágenes y un software para la realización de mediciones directamente en pantalla. Información adicional http://cic.ugr.es/servicios-y-unidades/ficha.php?codServicio=2&unidad=93 http://cic.ugr.es/servicios-y-unidades/ficha.php?codServicio=6&unidad=72 Ars Pharm 59 (suppl1): 65 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Niveles de metales en placenta y efectos cognitivos en niños en edad preescolar: proyecto infancia y medio ambiente (INMA) Freire C1,2,3, Amaya E1, Gil F3, Fernández MF1,2,3, Andiarena A4, Rodriguez Dehli C5, Guxens M2,6, Llop S7, Olea N1,2,3. 1 Centro de investigación Biomédica, Universidad de Granada. 2 Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada (ibs.GRANADA). 3 CIBER de Epidemiología y Salud Pública (CIBERESP). 4 Instituto de Investigación Sanitaria BIODONOSTIA. 5 Servicio de Pediatría, Hospital San Agustín, Avilés. 6I nstituto de Salud Global de Barcelona (ISGlobal). 7 FISABIO-Universitat Jaume I, Universitat de València. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Objetivo: Evaluar el posible efecto de la exposición temprana Pb, Hg, Cd, arsénico (As), cromo (Cr) y manganeso (Mn) en la función cognitiva a los 4-5 años de edad. Métodos: Se exploró la asociación entre los niveles de dichos elementos en muestras aleatorias de placenta, recogidas entre 2000 y 2008, y la función cognitiva en cinco de las cohortes de nacimiento del estudio Infancia y Medio Ambiente (INMA) (Asturias, Granada, Guipuzkoa, Sabadell y Valencia). Los niveles de metales fueron determinados mediante espectrofotometría de absorción atómica con horno de grafito (Pb, Cd, Hg, Mn) y generación de hidruros en el caso del As. El desarrollo neuropsicológico fue evaluado a los 4-5 años de edad usando las escalas McCarthy de Aptitudes y Psicomotricidad para niños (MSCA). El análisis final se realizó con 280 niños para los que se disponía de información de exposición a metales, función cognitiva y covariables relevantes. Resultados: Tras ajustar por los factores de confusión, los niveles de As se asociaron con una menor puntuación en la función ejecutiva global y verbal y en el área numérica, los de Hg con un peor desempeño en memoria verbal, función verbal del cortex posterior y función motora, y los de Mn se mostraron inversamente asociados con las puntuaciones obtenidas para las funciones perceptivo-manipulativa y función visual del cortex posterior. No se observaron efectos negativos para Cd, Cr y Pb. Conclusiones: La exposición fetal a metales neurotóxicos puede ser un factor de riesgo para alteraciones del neurodesarrollo infantil. Ars Pharm 59 (suppl1): 66 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Analysis of economic cost and technical criteria to include samples of hematopoietic precursors not valid for clinical use in a biobank to research use Gómez Cabañas L1,4,6, De La Torre Ortega L1,6, Gómez Ramírez R1,2,6, Miranda Serrano B1, Romero Vega E5, Barbero Garcés MA5, Sánchez López AM1,2,3,4,6. 1 Biobanco del Sistema Sanitario Público de Andalucía, Granada. 2Plataforma “Red Nacional de Biobancos”-ISCIII. 3Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada, Ibs Granada. 4Plataforma de Recursos Biomoleculares y Bioinformáticos-ISCIII. 5Centro Regional de Transfusión Sanguínea y Banco Sectorial de Tejidos de Cádiz. 6Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universida de Granada, Granada, España. Background: Numerous hematopoietic progenitors’ units (HP units) are discarded for clinical use because the transplant for which they were collected wasn’t carried out. Due to the enormous value and potential interest of these samples the SSPA (Andalusian Public Health System) Biobank recovered them for their possible use in research. With this purpose we evaluate the viability of hematopoietic cells and validate the preservation process and the best final storage format for its possible splitting and final distribution. Methods: We first analyzed the initial viability of cells after thawing and then we studied the effect of the preservation process on freezing and defreezing total recovery and viability under different conditions: DMSO concentration and the freezing method. Finally, we analyzed the economic costs of the different process. Results: We observe an average viability of 70% after hematopoietic cells initial thawing, so the samples would be suitable for research purposes. Regarding the preservation process we did not observe any difference related to cell viability between the DMSO concentrations and freezing methods. However, we find differences in the economic cost associated with each of these methods of freezing, resulting cheaper the preservation method with refrigerant containers at -80ºC. Conclusions: PH units discarded for clinical use can be splitted and derived for research applications. Furthermore, the technical and economic analysis of the different processes indicates that the best method is a freezing ramp with refrigerant containers at -80ºC and a 7-10% of DMSO, only due to economic reasons, since no technical differences are observed. References: Dijkstra-Tiekstra et al. 2014. Optimization of the freezing process for hematopoietic progenitor cells:effect of precoolingo, initial dimethyl sulfoxide concentration, freezing program, and storage in vapor-phase or liquid nitrogen on in vitro White blood cell quality. Transfusion, volume 54, p. 3155-3163 UNE-EN ISO/IEC 17025:2005: Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y calibración. AENOR. Junio 2005. Supplementary guidelines in good manufacturing practice: validation. Analytical method validation. In: WHO Expert Committee on Specifications for pharmaceutical Preparations. Fortieth report. Geneva, World Health Organization, 2006, Annex 4, (WHO Technical Report Series, No. 937 Ars Pharm 59 (suppl1): 67 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Dopamine d1 receptors blockade in the nucleus accumbens shell and attenuation of flavor neophobia in rats Grau Perales A, Morillas E, Gómez Chacón B, Navarro Expósito A, Juan B, Morón I, Gallo M. Dept. Psychobiology. Institute of Neurosciences. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. The attenuation of neophobia to a novel flavor over repeated exposures is associated with changes in its hedonic value as the flavor becomes more palatable. Previous studies have suggested a role of the nucleus accumbens (Nacc) in processing taste palatability which is affected by aging. To explore the role of Nacc in flavor neophobia during aging, we applied c-Fos immunohistochemistry as an index of neural activity of the Nacc Core and Shell. Twenty one adult (5-month-old) and 24 aged (24-month-old) male Wistar rats were exposed to a 3% cider vinegar solution for 1, 2 or 6 consecutive days (n=7 adult and n=8 aged rats/group). Aged rats exhibited slower attenuation of flavor neophobia than adult rats. This was consistent with the Nacc pattern of c-Fos activity. Adult rats exhibited increased Nacc Shell activity on day 2 compared to days 1 and 6, while this increase was delayed to day 6 in aged rats. Adult rats did not show differences in the number of Nacc Core c-Fos positive cells. However, increased c-Fos expression was found on day 6 compared to days 1 and 2 in the case of aged rats, suggesting changes in the activity of neural circuits during normal aging that could underlie the slower attenuation of flavor neophobia in aged rats. We then explored the implication of D1 dopamine receptors in the Nacc Shell during flavor recognition memory. Forty adult (five-month-old) male Wistar rats were exposed to water (n=18) or 3% cider vinegar solution (n=22) for six consecutive days using 15-minute drinking sessions. They received i.c. injections of vehicle or the D1 receptors antagonist SCH23390 (1µl per hemisphere, 5µg/µl) into the Nacc Shell 15 minutes prior to the drinking session on day two. The behavioral results indicated a neophobic response to the vinegar solution in all the groups. The control group receiving vehicle showed attenuation of flavor neophobia. However, rats that received SCH23390 did not increase consumption of vinegar on day two. In addition, the groups exposed to water did not differ in consumption. These results are consistent with previous reports relating the area with the acquisition of learned taste aversions and support an additional role of the nucleus accumbens shell in flavor recognition memory mediated by D1 dopamine receptors. Reference: Supported by PSI2014-57643-P (MINECO.Spain). A.B Grau-Perales is recipient of a predoctoral grant (FPU 14/1531). Ars Pharm 59 (suppl1): 68 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Importancia de la validación de normalizadores de heterogeneidad tumoral para el análisis de los patrones de expresión de mirs en cancer Griñan Lison C1,2 ,Morata Tarifa C1,2,3, Picón M1,2,3, Boulaiz H1,2,4, Perán M1,5, Garcia MA1,2,6, Marchal JA1,2,4. 1 Instituto de Biopatología y Medicina Regenerativa (IBIMER), Universidad de Granada. 2 Instituto Biosanitario de Granada (ibs.GRANADA). 3 Braman Family Breast Cancer Institute, Sylvester Comprehensive Cancer Center, Universidad de Miami, Escuela de Medicina Miller, Miami. 4 Departamento de Anatomia Humana y Embriología, Universidad de Granada. 5 Departamento de Ciencias de la Salud, Universidad de Jaén . 6 Hospitales Universitarios de Granada, Hospital UniversitarioVirgen de las Nieves, Departamento de Oncología,Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Los microRNAs oncogénicos (miRs) han surgido como biomarcadores diagnósticos y nuevos dianas moleculares para las terapias con fármacos anticancerígenos. La PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) es una de las técnicas más usadas para analizar miRs. Sin embargo, varios estudios muestran discrepancias, lo que sugiere que el uso de normalizadores inadecuados podría sesgar los resultados. La heterogeneidad tumoral dificulta aún más la selección de un adecuado control normalizador endógeno. En este sentido, hemos evaluado cinco miRs reverenciados comúnmente (U6, rRNA5s, SNORD44, SNORD24 y hsa-miR-24c-3p) utilizando algoritmos RedFinder para realizar un análisis de expresión de estabilidad en i) las células normales de colon, ii) Y iii) subpoblaciones de células madre cancerígenas (CSCs) aisladas en base de su actividad ALDH y a su sensibilidad diferencial cuando se exponen a tripsina. Hemos identificado SNORD44 como un adecuado gen housekeeping para qPCR comparando células normales y células tumorales. Sin embargo, este miR no fue un normalizador útil para las subpoblaciones de CSCs versus subpoblaciones sin propiedades CSCs. Además, se muestra por primera vez que hsa-miR-24c-3p es el normalizador más estable para estas dos subpoblaciones. También en el análisis bioinformático y qPCR hemos identificado diferentes patrones de expresión miR en cáncer de colon versus células no tumorales utilizando los normalizadores adecuados previamente seleccionados. Nuestros resultados alientan a un análisis más profundo de los patrones de expresión de miRs en la heterogeneidad tumoral, para posibles estudios diagnósticos y terapéuticos, y enfatizan así la importancia de seleccionar normalizadores adecuados que asegure la robustez y fiabilidad de los estudios. Referencias bibliográficas: Volinia S et al. A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets. Proc Natl Acad Sci USA 103, 2257–2261, doi: 10.1073/pnas.0510565103 (2006) Dheda K et al. The implications of using an inappropriate reference gene for real-time reverse transcription PCR data normalization. Anal Biochem 344, 141–143, doi: 10.1016/j.ab.2005.05.022 (2005) Morata Tarifa C. et al. Low adherent cancer cell subpopulations are enriched in tumorigenic and metastatic epithelialto-mesenchymal transition-induced cancer stem-like cells. Sci Rep 6, doi: 10.1038/srep18772 (2016) Saumet A, & Lecellier CH. microRNAs and Personalized Medicine: Evaluating Their Potential as Cancer Biomarkers. Adv Exp Med Biol 888, 5-15. doi: 10.1007/978-3-319-22671-2_2 (2015) Appaiah HN et al. Persistent upregulation of U6:SNORD44 small RNA ratio in the serum of breast cancer patients. Breast Cancer Res 13, R86. doi: 10.1186/bcr2943 (2011) Herzig DO & Tsikitis VL. Molecular markers for colon diagnosis, prognosis and targeted therapy. Surg Oncol 111, 96-102. doi: 10.1002/jso.23806 (2015) Garcia DM et al. Weak seed-pairing stability and high target-site abundance decrease the proficiency of lsy-6 and other microRNAs. Nat Struct Mol Biol 18 (10), 1139-46. doi: 10.1038/nsmb.2115 (2011) Ars Pharm 59 (suppl1): 69 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Regenerative therapies applied to central nervous system diseases: differentiation from mesenchymal stem cells to neural lineage cells Hernández R1 2, Berdasco M3, Jiménez Luna C2, Zafra I2, Vélez C1 2, Melguizo C1 2. 1 Biosanitary Institute of Granada (ibs.GRANADA), SAS-Universidad de Granada, Granada, Spain. 2 Institute of Biopathology and Regenerative Medicine (IBIMER). 3 Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL), Barcelona, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. At the present moment, degenerative diseases of the central nervous system (CNS) do not have an effective treatment. Stem cell research presents itself as a very promising tool in this field. Adipose tissue has been widely used for obtaining human mesenchymal stem cells (hMSCs) [1-2], which have the capacity to differentiate themselves into mesodermal origin cells [3] and nervous system cells [4] in vitro. The aim of this study was to isolate and characterize mesenchymal stem cells from lipoaspirates samples obtained from patients at the Health Hospital of Granada. These cells were characterized by flow cytometry for specific mesenchymal stem cells markers like CD73+, CD105+ and CD90+, being negative for hematopoietic antigens like CD45, CD34 and CD133. The culture of these cells was made with three differentiating medium composed by different growth factors such as EGF, FGF, HGF or VEGF among others; NEU 1, NEU 2 and NEU 3 that lasted 21, 15 and 10 days respectively. The result was a significant morphological change and the expression of neuronal lineage markers such as nestin, NFM, tubulin III or functional marker like SNAP25, in immunohistochemical characterization, western and RT-PCR studies. The results indicate that differentiation of mesenchymal stem cells obtained from lipoaspirate samples to neuronal lineage is possible, and a better understanding of the mechanism of reprogramming adult stem cells could be a promising tool in the treatment of neurodegenerative diseases. References: 1. Rezanejad, H., et al., In vitro differentiation of adipose-tissue-derived mesenchymal stem cells into neural retinal cells through expression of human PAX6 (5a) gene. Cell Tissue Res, 2014. 356(1): p. 65-75. 2. Qu, X., et al., Differentiation of reprogrammed human adipose mesenchymal stem cells toward neural cells with defined transcription factors. Biochem Biophys Res Commun, 2013. 439(4): p. 552-8. 3. Hu, F., et al., Effects of epidermal growth factor and basic fibroblast growth factor on the proliferation and osteogenic and neural differentiation of adipose-derived stem cells. Cell Reprogram, 2013. 15(3): p. 224-32. 4. Zhao, Y., et al., Neurogenic differentiation from adipose-derived stem cells and application for autologous transplantation in spinal cord injury. Cell Tissue Bank, 2014. Ars Pharm 59 (suppl1): 70 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Nueva metodología analítica para la cuantificación de disruptores endocrinos-no persistentes en leche matena Iribarne Durán LM1*, Vela Soria F1, Jiménez Díaz I1, Olea N1,2,3, e-mail:[email protected] 1 Instituto de Investigación Biosanitaria (ibs.GRANADA. Complejo Hospitalario Universitario de Granada. 2 Instituto de Investigación Biosanitaria (ibs.GRANADA), Universidad de Granada, España. 3 CIBER de Epidemiología y Salud Pública (CIBERESP), España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Palabras clave: Leche materna, disruptores endocrinos, análisis químico, banco de leche. Objetivo: La exposición a Disruptores Endocrinos (DEs), sustancias exógenas capaces de alterar la homeostasis del sistema endocrino, presentes en numerosos objetos de uso cotidiano, está relacionada con numerosos efectos adversos en salud. El objetivo de este trabajo es validar una metodología analítica para cuantificar la exposición a una selección de DEs nopersistentes en leche materna. Metodología: Se ha desarrollado una metodología que incluye el tratamiento de muestras mediante microextracción dispersiva líquido-líquido (implicando tratamiento enzimático, precipitación de proteínas y extracción) y cuantificación de analitos mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem. Se ha llevado la optimización y validación del método en 15 muestras donadas al Banco de Leche Materna de Granada. Resultados: Se han obtenido límites de cuantificación (0.3-0.7 ng/mL), detección (0.1-0.2 ng/mL), y desviaciones estándar relativas entre 4.3%-14.8%, para los DEs seleccionados: metilparaben, el compuesto detectado con mayor frecuencia (11/15, mediana= 2.5 ng/mL), seguido de benzofenona-3 (9/15). Otros compuestos detectados en menor proporción incluyeron propilparaben (6/15), etilparaben (5/15), bisfenol A (4/15) y butilparaben y benzofenona-1 (1/15), cuyas medianas de concentración estaban por debajo del límite de detección. Discusión/Conclusión: La metodología propuesta permite la determinación simultánea de varios DEs de manera rápida y con bajo coste, por lo que es idónea para su utilización en estudios de biomonitorización de estos contaminantes ambientales. Referencias: 1: Rodríguez-Gómez R, Jiménez-Díaz I, Zafra-Gómez A, Ballesteros O, Navalón A. A multiresidue method for the determination of selected endocrine disrupting chemicals in human breast milk based on a simple extraction procedure. Talanta. 2014;130:561-70. 2: Jiménez-Díaz I, Zafra-Gómez A, Ballesteros O, Navalón A. Analytical methods for the determination of personal care products in human samples: an overview. Talanta. 2014;129:448-58. 3: Hines EP, Mendola P, von Ehrenstein OS, Ye X, Calafat AM, Fenton SE. Concentrations of environmental phenols and parabens in milk, urine and serum of lactating North Carolina women. Reprod Toxicol. 2015;54:120-8. Ars Pharm 59 (suppl1): 71 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Correlación entre factores de virulencia y las moléculas señal de quorum sensing en tres patógenos marinos Izquierdo P1, Torres M1,2, Reina JC1, Llamas I1,2. 1 Departamento de Microbiología, Facultad de Farmacia, Universidad de Granada, Granada, España. 2 Instituto de Biotecnología, Centro de Investigación Biomédica, Parque Tecnológico de la Salud, Armilla, España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Los patógenos bacterianos más comunes que afectan a la acuicultura pertenecen al género Vibrio y son los responsables de muchas enfermedades como el blanqueamiento de corales y la septicemia hemorrágica (vibriosis) en peces y moluscos1. Durante los últimos años, se ha asociado la virulencia de diferentes bacterias patógenas con los sistemas quorum sensing (QS), un sofisticado mecanismo para coordinar la expresión génica en función de la densidad celular mediante la difusión de pequeñas moléculas señal, como las N-acilhomoserin lactonas (AHLs). Debido a ello, muchos de los organismos competidores han desarrollado diferentes estrategias con el fin de interrumpir los sistemas QS, como es el caso de la producción de enzimas degradadoras de AHLs, que se conoce como quorum quenching (QQ)2. En el presente estudio se evalúa la expresión de los factores de virulencia en las especies patógenas V. mediterranei, V. coralliilyticus y V. owensii tras la inactivación de la producción de moléculas AHLs. Para ello, se construyeron mutantes de estas cepas afectadas en la síntesis de AHLs mediante la transferencia de plásmidos que contienen lactonasas y seguidamente se llevaron a cabo numerosas pruebas fenotípicas. Los resultados indican claramente que existe una correlación entre la producción de AHLs y la expresión de algunos factores de virulencia en las tres cepas patógenas de Vibrio estudiadas. La información de esta investigación contribuye al desarrollo de nuevas terapias futuras basadas en la interrupción de AHLs, una de las alternativas más prometedoras actualmente para combatir las enfermedades infecciosas en acuicultura. Referencias bibliográficas: 1 Lafferty, K.D., Harvell, C.D., Conrad, J.M., Friedman, C.S., Kent, M.L., Kuris, A.M. 2015. Ann Rev Mar Sci 7: 471–496. 2 Defoirdt, T., Boon, N., Sorgeloos, P., Verstraete, W., and Bossier, P. 2008. ISME J 2: 19–26. Ars Pharm 59 (suppl1): 72 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Improve of the paclitaxel activity by the use of polymeric nanoparticles of lactic and glycolic acid: assay in multicellular spheroids from lung cancer cells Jiménez Lopez J1,2, Cabeza L1,2, El-Hammadi M3, Martín Balderas L3, Leiva MC1,2, Perazzoli G1,2, Melguizo C1,2, Prados JC1,2, Ortiz R4. 1 Institute of Biopathology and Regenerative Medicine (IBIMER), 18100 Granada, Spain. 2 Biosanitary Institute of Granada (ibs.GRANADA), SAS-Universidad de Granada, Granada, Spain. 3 Department of Pharmacy and Pharmaceutical Technology, University of Sevilla, 41012 Sevilla, Spain. 4 Department of Health Science, University of Jaén, 23071 Jaén, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Paclitaxel(PTX) is a cytotoxin used as a drug of choice for the treatment of various types of solid tumors, including breast and lung cancer. However, its commercial formulation (Taxol®) has been associated with several side effects such as hematologic toxicity, bone marrow depression, and painful peripheral neuropathy. A promising type of polymeric nanoparticles of lactic and glycolic acid loaded with this drug (PLGA-PTX) for the treatment of lung cancer is proposed to solve these limitations. The results of proliferation assays showed significant dose reduction IC50 with PLGA-PTX up to 3.6 and 3.7 times lower in two human lung tumor cell lines A549 and NCI-H460, compared to free PTX. No inhibition was observed in the growth with blank nanoparticles. For cellular uptake studies with fluorescence microscopy, A549 was incubated with Nile red (NR) and NR-loaded NPs at different times. The results obtained suggest that NP-PTX facilitate the incorporation of NR into the cell compared with free NR. Finally, multicellular tumour spheroids (MTS) assays in A549 were performed and MTS were treated with PTX, PLGA-PTX and blank NPs at the IC50 dose of free PTX. MTS growth was monitored with imaging microscopy and the apoptosis induced was analyzed by a TUNEL assay. PLGA-PTX caused a significant reduction in the volume of MTS(73%) in comparison to free PTX(46%). In addition, the number of apoptotic cells was higher in MTS treated with PLGA-PTX. The set of results presented in this work suggest that the association of paclitaxel with nanoparticles improves the antitumor effect of the drug and facilitates its incorporation into the tumor cells. References: [1] Contreras-Cáceres, R., Leiva, M.C., Ortiz, R. et al., Nano Research (2017) 1-20 [2] Ma, P., & Mumper, R. J., Journal of Nanomedicine & Nanotechnology, 02 (2013) 1-16 [3] Sadat Tabatabaei Mirakabad, F., et al, Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 15 (2014) 517–535 [4] Sun, Y. B.; Yu, B.; Wang, G. Y.; Wu, Y. S.; Zhang, X. M.; Chen, Y. M.; Tang, S. Q.; Yuan, Y.; Lee, R. J.; Teng, L. S. et al. Colloids Surf. B Biointerfaces, 123 (2014) 716–723 Ars Pharm 59 (suppl1): 73 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Pancreatic ductal adenocarcinoma early detection: new biomarkers based on gene and metabolomics expression profiles Jiménez Luna C1, Hernández R1,2, Rojas I3, Alvarez PJ1, Martinez Galan J4, Delgado JR4, Torres C5, Perales S5, Ríos S6, Díaz C6, Pérez J6, Linares A5, Prados J1,2, Caba O7. 1 Institute of Biopathology and Regenerative Medicine (IBIMER), Granada, Spain. 2 Biosanitary Institute of Granada (ibs.GRANADA), SAS-Universidad de Granada, Granada, Spain. 3 Department of Computer Architecture and Computer Technology, University of Granada, Granada, Spain. 4 Department of Oncology, Virgen de las Nieves University Hospital, Granada, Spain. 5 Department of Biochemistry and Molecular Biology I, University of Granada, Granada, Spain. 6 Foundation Center of Excellence, Innovative Medicines Research (MEDINA) of Andalucia, Granada, Spain. 7 Department of Health Science, University of Jaén, Jaén, Spain. Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is the most common type of pancreatic cancer (90% of cases) [1]. In comparison to other malignancies, the outcome of patients is strongly bad, in fact, the 5 years survival rate is only 5% [2]. At the time of diagnosis, over 80% of patients present an advanced tumor stage, where no curative therapy exists [3]. A desired strategy to improve prognostic of these patients is early diagnosis, however, the only biomarker approved by the FDA for PDAC, the CA-19.9, lacks both specificity and sensitivity as a diagnostic marker [4], which it highlights the urgent need for accurate diagnosis biomarkers. The availability of genomic and metabolomics technologies, has led to an increasing interest in liquid biopsy as a potential source of biomarkers. In order to enable early detection of disease, our objective was to identify new biomarkers in peripheral blood, which differentiate between PDAC patients and healthy individuals. We observed a differential gene expression profile between peripheral blood mononuclear cells from 18 PDAC patients and 18 controls, by microarray and RT-qPCR techniques. Our analysis showed two genes, CLEC4D and IRAK3, which could identify PDAC patients with 86% sensitivity and 100% specificity. Additionally, we present the main findings observed from a metabolomics untargeted approach carried out with serum from patients and controls. In this regard, we determined that it is possible to discriminate these two groups using the differential concentration levels of specific phospholipids, such as different types of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine and other metabolites such p-cresol sulfate. References: 1. Biankin, A.V., et al., Pancreatic cancer genomes reveal aberrations in axon guidance pathway genes. Nature, 2012. 491(7424): p. 399-405. 2. Buchholz, M., et al., Specialized DNA arrays for the differentiation of pancreatic tumors. Clin Cancer Res, 2005. 11(22): p. 8048-54. 3. Yeo, T.P., et al., Pancreatic cancer. Curr Probl Cancer, 2002. 26(4): p. 176-275. 4. Baine, M.J., et al., Transcriptional profiling of peripheral blood mononuclear cells in pancreatic cancer patients identifies novel genes with potential diagnostic utility. PLoS One, 2011. 6(2): p. e17014. Ars Pharm 59 (suppl1): 80 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Feeding restriction in grouped rats. Aggregate influence on relationship from the behavioural and hormonal point of view Moneo M, Morón I1, Zúñiga JM2. 1 Department of Psychobiology. University of Granada.Campus Cartuja. Granada-18011. Spain. 2 Servicio de Producción y Experimentación Animal/CIC. Centro de Investigación Biomédica, Armilla, 18071, Spain. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. The single-housing associated with caloric restriction (CR) may pose many logistical problems. Thus, it is necessary to study the effects of CR in conditions in which animals are group-housed. In the present research were studied: (i) the possible differences in the proportion of the weights and social behaviour in ad libitum and CR (at 70%) conditions, (ii) the eventual inequalities in the proportion of the weights and social behaviour (the time spent eating under the feeder as an indicator of dominance and empathy, and the number of “pushes” as an indicator of aggressiveness) in brother and non-brother rats in CR conditions, and (iii) to compare the concentrations of corticosterone (stress biomarker) in serum in ad libitum and CR conditions. Results confirm the effectiveness of the CR associated with the housing in groups of three, with independence of the consanguinity. Equally, all the results exposed suggest not only the viability, but also the suitability of apply an aggrupation of the rats in long-periods of CR maintenance. Finally, these results open de possibility of performing groupings in RC conditions avoiding isolation and improving the welfare level. Referencias bibliográficas: Nuneset al. (2005), Neuropsychobiology, 51(4), 248-255; Stranahanet al. (2006), Nature neuroscience, 9(4), 526-533; Weindruchet al. (1985), J Nutr, 116(4), 641-54; Yanaiet al. (2003), Neurobiology of aging, 25(3), 325-332; Yu (1996), Free radical biology and medicine, 21(5), 651-668 Ars Pharm 59 (suppl1): 81 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 A murine-based endometriosis model reveals the chemoattractant properties of menstrual blood-derived stromal cells Martínez Aguilar R, Ruiz Magaña MJ, Romero Pinedo S, Ruiz Ruiz MC, García Olivares E, Abadía Molina AC. IBIMER, Centro de Investigación Biomédica. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular e Inmunología, Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Endometriosis is a gynecological disorder classically defined as the presence of endometrial tissue out of the uterine cavity (1). Despite affecting between 5% and 15% of women at childbearing age, its origin remains elusive although several hypotheses have been proposed, such as the retrograde menstruation or the erroneous homing of endometrial precursors (2,3). The aim of this work was to develop an in vivo mEnSC (menstrual blood-derived endometrial stromal cells)-based murine model of endometriosis in order to achieve a better comprehension of its ethiopathogeny and development. 7-11 weeks old BALB/c female mice were intraperitoneally injected a 4% thioglycollate (TGC) dose to generate an inflammatory context. Twenty four hours later, mEnSC-established cell lines were intraperitoneally administrated. After 4 days, mice were sacrificed to perform a peritoneum lavage and localize the endometriotic foci. Mice without mEnSCs and/or TGC injection were used as controls. Chemokines expression was analyzed by RT-PCR; endometriotic foci were evaluated by RT-PCR and confocal microscopy; peritoneum lavage populations were studied by flow cytometry. Mice treated with mEnSCs after the inflammatory insult experiment a variation in the peritoneum populations, such as a decrease in the percentage of macrophages and a rise in the neutrophil number, in contrast with controls. The analysis of endometriotic foci reveals that mEnSCs use peritoneum adipose tissue as scaffold to recruit macrophages and neutrophils. For its part, mEnSCs mRNA analysis shows a basal expression of macrophage and neutrophil chemoattractants. Our results suggest that mEnSCs, along with an inflammatory context, might play a key role in the endometriosis’ ethiopathogeny by the expression of chemotactic factors and recruitment of immune populations. Referencias bibliográficas: 1.- Vercellini, P., P. Vigano, E. Somigliana, and L. Fedele. 2014. Endometriosis: pathogenesis and treatment. Nat Rev Endocrinol 10: 261-275. 2.- Halme, J., M. G. Hammond, J. F. Hulka, S. G. Raj, and L. M. Talbert. 1984. Retrograde menstruation in healthy women and in patients with endometriosis. Obstet Gynecol 64: 151-154. 3.- Gargett, C. E., K. E. Schwab, J. J. Brosens, P. Puttemans, G. Benagiano, and I. Brosens. 2014. Potential role of endometrial stem/progenitor cells in the pathogenesis of early-onset endometriosis. Mol Hum Reprod 20: 591-598. Ars Pharm 59 (suppl1): 82 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Establecimiento del modelo experimental Caenorhabditis Elegans para el estudio de compuestos procedentes de la industria agroalimentaria de interés en investigación biomédica Martínez López S1, Varela López A1, Cordero MD1, Battino M2, Quiles JL1. 1 Institute of Nutrition and Food Technology “José Mataix Verdú”, Biomedical Research Center, Department of Physiology, University of Granada, Granada, Spain. 2 Department of Scienze Cliniche Specialistiche ed Odontostomatologiche, Università Politecnica delle Marche, Ancona, Italy. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Caenorhabditis elegans es un nematodo minúsculo de vida libre y distribución ubicua con un ciclo de vida que pasa por 4 estados larvarios hasta llegar al estado adulto. Presenta múltiples similitudes con animales superiores en términos de metabolismo, estructura y función de orgánulos, regulación de genes, biología de proteínas, etc. Por otro lado, entre el 60 y el 80% de los genes humanos tienen un ortólogo en el genoma de C. elegans y el 40% de los genes asociados con enfermedades humanas tienen ortólogos en C. elegans. La alimentación, la nutrición, los productos agroalimentarios y los compuestos de origen natural representan una fuente muy importante de sustancias protectoras de la salud. Un problema a la hora de buscar moléculas de interés biomédico provenientes de la industria agroalimentaria es la elección de un adecuado modelo experimental en el que realizar los ensayos. Tradicionalmente, los cultivos celulares y los roedores han sido modelos muy relevantes. No obstante, ambos presentan diversos inconvenientes, referidos en el primer caso a la ausencia de procesos fisiológicos complejos propios de organismos multicelulares, y en el segundo al coste de los estudios y diversas consideraciones bioéticas. Nuestro laboratorio ha implantado C. elegans como modelo experimental ya que a lo anteriormente mencionado se suma el hecho de que este modelo no está sujeto a control por parte de los comités de ética en experimentación animal, es un modelo barato, permite el trabajo en modo de alto rendimiento y hay disponible un elevado número de cepas que reproducen diferentes patologías. Ars Pharm 59 (suppl1): 83 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Efecto de los compuestos fenólicos presentes en diferentes variedades de aceite de oliva virgen extra sobre el osteoblasto Melguizo Rodríguez L1, 2, De Luna Bertos E1, 2, Ramos Torrecillas J1, 2, Rivas A4, Ruiz Rodríguez C1, 2,5, Martínez OG1, 2. 1 Departamento de Enfermería. Facultad de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada. 2 Grupo de Investigación Biosanitario (BIO277). Instituto Biosanitario, ibs.granada. 3 Departamento de Estomatología. Facultad de Odontología. Universidad de Granada. 4 Departamento de Nutrición y Bromatología. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. 5 Instituto de Neurociencias “Federico Oloriz”, Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Introducción: La salud ósea constituye uno de los principales problemas de salud pública a nivel mundial. Según la Organización Mundial de la Salud, la osteoporosis es el segundo problema sanitario asistencial en el mundo. En Europa, existen grandes diferencias en la distribución de la prevalencia de osteoporosis, encontrándose mejores resultados, en cuanto a severidad de la patología, en los países del área mediterránea lo que podría estar relacionado con el mayor consumo de aceite de oliva virgen extra. Objetivo: Determinar el efecto de los compuestos fenólicos procedentes de distintas variedades de aceite de oliva virgen extra (Picual, Arbequina, Picudo y Hojiblanca) sobre la diferenciación, expresión antigénica y capacidad fagocítica de osteoblastos de la línea celular MG-63. Material y Métodos: Las células fueron tratadas con los distintos extractos fenólicos a una concentración de 10-6M durante 24h. La expresión antigénica (CD54, CD80, CD86, HLA-DR) y la capacidad fagocítica fueron analizadas mediante citometría de flujo. La actividad fosfatasa alcalina fue evaluada mediante espectrofotometría. Resultados: A las 24h de tratamiento se observó un incremento significativo de la actividad fosfatasa alcalina y una reducción de la expresión de los antígenos CD54, CD80 y HLA-DR y de la actividad fagocítica en comparación con los controles (células sin tratar). Conclusiones: Estos resultados sugieren que los compuestos fenólicos presentes en distintas variedades de aceite de oliva virgen extra pueden modular diferentes parámetros relacionados con la función y la diferenciación del osteoblasto. Palabras clave: Olive oil extracts, osteoblasts, differentiation, antigenic expression, phagocytosis. Referencias bibliográficas: Cauley, J. A. Osteoporosis: fracture epidemiology update 2016. Curr. Opin. Rheumatol. 2017, 29 (2), 150–156. García-Martínez, O.; Luna-Bertos, E. D.; Ramos-Torrecillas, J.; Ruiz, C.; Milia, E.; Lorenzo, M. L.; Jimenez, B.; Sánchez-Ortiz, A.; Rivas, A. Phenolic Compounds in Extra Virgin Olive Oil Stimulate Human Osteoblastic Cell Proliferation. PLOS ONE 2016, 11 (3), e0150045. Reyes-Botella, C.; Montes, M. J.; Vallecillo-Capilla, M. F.; Olivares, E. G.; Ruiz, C. Antigenic phenotype of cultured human osteoblast-like cells. Cell. Physiol. Biochem. Int. J. Exp. Cell. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2002, 12 (5–6), 359–364. Ruiz, C.; Pérez, E.; García-Martínez, O.; Díaz-Rodríguez, L.; Arroyo-Morales, M.; Reyes-Botella, C. Expression of cytokines IL-4, IL-12, IL-15, IL-18, and IFNgamma and modulation by different growth factors in cultured human osteoblast-like cells. J. Bone Miner. Metab. 2007, 25 (5), 286–292. Ruiz, C.; Pérez, E.; Vallecillo-Capilla, M.; Reyes-Botella, C. Phagocytosis and allogeneic T cell stimulation by cultured human osteoblast-like cells. Cell. Physiol. Biochem. Int. J. Exp. Cell. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2003, 13 (5), 309–314. Ars Pharm 59 (suppl1): 84 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Fuerza de agarre como modelo translacional de dolor artrítico Montilla García Á1,2, Tejada MA1,2, Perazzoli G1,2, Entrena JM2,3, Fernández Segura E1, Cañizares FJ1, Cobos EJ1,2. 1 Facultad de Medicina, Universidad de Granada, Granada, Spain. 2 Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, Spain. 3 Centro de Instrumentación Científica, Universidad de Granada, Granada, Spain. La pérdida de la fuerza de agarre en pacientes artríticos correlaciona con el dolor, y se usa como indicador de la eficacia del tratamiento farmacológico. Los modelos animales de dolor deben aproximarse a la situación clínica para mejorar la translación de los descubrimientos preclínicos al paciente. Nuestro objetivo fue estudiar la fuerza de agarre en el ratón artrítico como indicador de dolor. La inflamación articular se indujo mediante la administración periarticular de CFA en los tobillos de ratones CD1. Los animales artríticos mostraron un masivo infiltrado inmune periarticular en el tobillo, así como una disminución de la fuerza de agarre y alodinia mecánica. Sin embargo, la alodinia mecánica persistente más tiempo que los déficits en la fuerza de agarre. Por tanto, la fuerza de agarre y el umbral de von Frey, manifiestan aspectos diferentes del fenotipo doloroso. Los opioides oxicodona y tramadol produjeron una completa recuperación del agarre, mientras que ibuprofeno, celecoxib y paracetamol produjeron un efecto máximo más limitado. Estos datos concuerdan con su eficacia analgésica en humanos. Además, la ablación in vivo de neuronas TRPV1+ abolió la alodinia táctil sin alterar los déficit de fuerza de agarre, lo que indica que la neurobiología de la alodinia táctil y los déficit de fuerza de agarre difieren. Nuestros resultados indican que la fuerza de agarre es un buen indicador de dolor en animales artríticos. Este parámetro aproxima la valoración preclínica del dolor al fenotipo doloroso del paciente; esta metodología podría incrementar la translación de nuevos analgésicos desde el laboratorio a la clínica. Referencias bibliográficas: Chaplan, S.R., Bach, F.W., Pogrel, J.W., Chung, J.M., Yaksh, T.L., 1994. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. J Neurosci Methods 53, 55-63. Cobos, E.J., Portillo-Salido, E., 2013. “Bedside-to-bench behavioral outcomes in animal models of pain: beyond the evaluation of reflexes. Curr Neuropharmacol 11, 560-591. Fraser,A., Vallow,J., Preston,A., Cooper,R.G., 1999. Predicting ‘normal’ grip strength for rheumatoid arthritis patients. Rheumatology (Oxford) 38, 521-528. Gotzsche,P.C., Johansen,H.K., 2000. Short-term lowdose corticosteroids vs placebo and nonsteroidal antiinflammatory drugs in rheumatoid arthritis. Cochrane.Database.Syst.Rev. CD000189. Hallert,E., Bjork,M., Dahlstrom,O., Skogh,T., Thyberg,I., 2012. Disease activity and disability in women and men with early rheumatoid arthritis (RA): an 8-year followup of a Swedish early RA project. Arthritis Care Res (Hoboken.) 64, 1101-1107. Julius, D., 2013. TRP Channels and pain. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 29, 355–384 Ars Pharm 59 (suppl1): 85 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Evaluación de la exposición del riesgo a contaminantes de la dieta, a través de estudios de dieta total. Proyecto TDS-EXPOSURE (FP7KBBE-2011-5; Nº 289108) Moreno Martínez A1, De Victoria, Muñoz EM1,2, De Victoria Muñoz IM, Yago Torregrosa MD1,2, Mañas Almendros M1,2, Martínez Burgos MA1,2. 1 Instituto de Nutrición y Tecnología de Alimentos “José Matáix” (INYTA). Centro de Investigación Biomédica (CIBM). Universidad de Granada. Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud (PTS). 2 Departamento de Fisiología. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Introducción: Los estudios de dieta total (EDT, en inglés TDS) tienen por objeto proporcionar datos representativos sobre la contaminación de los alimentos consumidos por una población y su exposición a sustancias de interés en salud pública (EFSA et al., 2011), permitiendo proporcionar una concentración promedio de sustancias químicas presentes en los mismos (Elegbede et al., 2017). Palabras clave: Estudios de Dieta Total, Contaminantes, Bases de Datos, FoodCaseRisk Objetivos: • Identificar la información sobre exposición y riesgo desde TDS. • Estimar la ingesta dietética de contaminantes en alimentos procedentes de TDS. • Aumentar el número de TDS europeos. • Armonizar sus métodos. • Desarrollar una base de datos para evaluadores y gestores de riesgos. Objetivos específicos La UGR ha participado en: • Work package 3 (WP3 Food sampling: foods products collection). • Work package 6 (WP6 Database management, description). WP3 • Diseñar el plan estratégico de muestreo de productos alimenticios, en el marco de TDS europeos. • Establecer criterios para formular muestras de alimentos representativos. • Definir listas de la compra. WP6 • Desarrollar y probar un sistema de gestión de contaminantes de alimentos (FoodCASE-Risk), para su uso con TDS en Europa. Metodología WP3 • Análisis de datos y estadístico. WP6 • Sistema de gestión: FoodCASE. Ars Pharm 59 (suppl1): 86 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Resultados WP3 • Análisis de Datos: Base de datos de alimentos (fuente: 180 documentos). Estadísticas individuales de ingesta. • Análisis cualitativo: Diseño de un protocolo para la recolección de alimentos. WP6 • Implementación de FoodCASE-Risk. • Mantenimiento y apoyo para estudios piloto de TDS. Conclusiones: TDS-EXPOSURE establece un legado de métodos armonizados de muestreo y análisis para futuros estudios de exposición al riesgo de contaminantes, a través de la dieta. Referencias bibliográficas: 1European Food Safety Authority; Food and Agriculture Organization; World Health Organization. Towards a harmonised Total Diet Study approach: a guidance document. EFSA, 2011. EFSA Journal 2011; 9(11): 2450. 2Elegbede C.F., Papadopoulos A., Anna Elena Kolbaum, et al. TDS exposure project: How and when to consider seasonality in a total diet study? Food and Chemical Toxicology 2017, vol. 105: 119–126. Ars Pharm 59 (suppl1): 87 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Actualización de la base de datos española de composición de alimentos (bedca) (versión 2.1) Moreno Martínez A1, Martínez Burgos MA1,2, De Victoria Muñoz IM1, Yago Torregrosa MD1,2, Mañas Almendros M1,2, De Victoria Muñoz EM1,2. 1 Instituto de Ciencia y Tecnología de los Alimentos (INYTA). Centro de Investigación Biomédica (CIBM). Universidad de Granada. Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud (PTS). 2 Departamento de Fisiología. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Univerisdad de Granada, Granada, España. Palabras clave : Bases de datos de Composición de Alimentos; BEDCA; EuroFIR Introducción: Las tablas y bases de datos de composición de alimentos (BDCAs) son herramientas necesarias para conocer el valor nutricional de los alimentos y servir de guía a la población, profesionales de la nutrición, gobiernos e industria alimentaria (Williamson, 2005). La heterogeneidad de información entre BDCAs hace necesaria una estandarización, para su uso a nivel europeo (Slimani, 2007; Martínez-Victoria et al., 2015). Objetivo: Actualización de la BDCA española (BEDCA) (www.bedca.net), por el método combinado, según estándares de EuroFIR (www.eurofir.org). Metodología: 1. Sistemas de descripción y codificación de alimentos: a) FoodEx2, establecido por EFSA. b) LanguaL (versión 2008), establecido por EuroFIR. 2. Literatura científica (fuente de datos analíticos). 3. Software Excel (datos y metadatos). 4. BEDCA (versión 2.0). 5. Paquete SPSS (versión 22.0). Resultados: 1. Estandarización de componentes para cada alimento. 2. Actualización de métodos y referencias asociadas. 3. Descripción y codificación doble de los alimentos: a) FoodEx2 b) LanguaL 4. Incorporación de 22 nuevos componentes (57 totales): ácidos grasos individuales, carotenoides no provitamínicos (datos propios) y azúcares simples. 5. Recogida de datos de alimentos sin gluten. 6. Elaboración de un listado de alimentos con azúcares añadidos y naturales de los alimentos, según método propuesto por JCY Louie et al. (2015). Conclusiones: BEDCA es, actualmente, la única BDCA desarrollada en España con datos documentados y compilados según estándares de EuroFIR e incluida en FoodExplorer (http://www.eurofir.org/foodexplorer/instructionfoodexplorer. html). Ars Pharm 59 (suppl1): 88 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 BEDCA permite a usuarios y profesionales de la Nutrición y Salud Pública la utilización online de datos de composición de alimentos de calidad. Referencias bibliográficas: Williamson, C. EuroFIR. Synthesis report No 2: The Different Uses of Food Composition Databases (2005). Slimani N., Deharveng G., Unwin I., et al. The EPIC nutrient database project (ENDB): a first attempt to standardize nutrient databases across the 10 European countries participating in the EPIC study. Eur J Clin Nutr, 61 (2007), pp. 1037–1056. Martínez de Victoria E., Martínez de Victoria I., Martínez Burgos M.A. Intake of energy and nutrients; harmonization of Food Composition Databases. Nutr Hosp 2015, 31 (Supl.3): 168-76. Louie J.C., Moshtaghian H., Boylan S., et al. A systematic methodology to estimate added sugar content of foods. Eur J Clin Nutr, 2015 Feb;69(2):154-61. Ars Pharm 59 (suppl1): 89 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Effect of vanadium on calcium homeostasis, osteopontin mRNA expression, and bone microarchitecture in diabetic rats Sánchez González C1, Moreno L1, López Cháves C1, Nebot E1,2, Pietschmann P2, Rodríguez Nogales A3, Gálvez J3, Montes Bayón M4, Sanz Medel A4, Llopis J1. 1 CIBM, IMUDS, Department of Physiology, Faculty of Pharmacy, University of Granada, E-18071 Granada, Spain. 2 Department of Pathophysiology and Allergy Research, Center for Pathophysiology, Infectiology and Immunology, Medical University of Vienna, Austria. 3 CIBERehd, Department of Pharmacology, University of Granada, 18071 Granada, Spain. 4 Department of Analytical Chemistry, Faculty of Chemistry, University of Oviedo, 33007 Oviedo, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. We examine whether alterations caused by diabetes in calcium homeostasis, expression of osteopontin and the microarchitecture of bone are corrected by exposure to vanadium. Four study groups were examined over five weeks: control (C), diabetic (DM), diabetic treated with 1 mg V/d (DMV), and diabetic treated with 3 mg V/d (DMVH). Vanadium was supplied in drinking water as bis(maltolato)oxovanadium(IV). Calcium was measured in the food, faeces, urine, serum, kidneys, liver, muscles, and femur. Osteopontin gene expression was determined in the liver, and the bone microarchitecture was studied using micro-computed tomography. In the DM group, food intake as well as calcium absorbed and retained and liver osteopontin mRNA increased, while Ca in the serum and femur decreased, and the bone microarchitecture worsened, compared to the control. In the DMV group, the amount of Ca absorbed and retained was similar to DM rats. Although the Ca content in the femur increased and osteopontin mRNA decreased, there were no significant changes in the bone microarchitecture, in comparison to the DM rats. In the DMVH group, the amount of Ca absorbed and retained, and the serum and femur content were equivalent to the control. The levels of osteopontin mRNA decreased and bone mineralization improved, compared to the DM group. We conclude that treatment with 3 mg V per d of the glucose lowering agent bis(maltolato)oxovanadium(IV) causes a decrease in osteopontin mRNA, which could favour the normalization of changes in Ca homeostasis and bone microarchitecture, both at the cortical and trabecular levels, caused by diabetes. Ars Pharm 59 (suppl1): 96 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Implication of MGMT, MMR, P-Glycoprotein and CD133 expression as potential mechanisms of temozolomide resistance in glioblastoma cell lines Perazzoli G1, Ortiz R2, Cabeza L1,3, Caba O2, Vélez C1,3, Prados J1,3, Melguizo C1,3. 1 Biosanitary Institute of Granada (ibs.GRANADA), SAS-Universidad de Granada, Granada, Spain. 2 Department of Health Science, University of Jaén, Jaén, Spain. 3 Institute of Biopathology and Regenerative Medicine (IBIMER). 4 Biomedical Research Center (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. The current treatment of cancer have in the development of drug resistance one of the leading causes of treatment failure and limited the effectiveness of many drugs, leading to disease recurrence and death. The resistance mechanisms developed by the cells depend heavily on the type of tumor. In brain tumors, such as glioblastoma multiforme, the most common primary brain tumor in adults1 treated with temozolomide (TMZ), the most studied resistance mechanism is mediated by O6 methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) protein2. However it is not the only mechanism involved in the resistance. Other mechanisms as the mismatch repair (MMR) complex3, P-glycoprotein4, and/or the presence of cancer stem cells5 may also be implicated. The aim of our study is to analyze all these mechanisms of resistance in four nervous system tumor cell lines. Based on our results we can classified this cell lines into two groups by low (A172 and LN229) and high (SF268 and SK-N-SH) basal MGMT expression. A surprising fact is that cell lines with no MGMT expression, associated with a low TMZ IC50 showed a high MMR complex expression, whereas cell lines with high MGMT expression and high TMZ IC50 did not express the MMR complex. In addition to this we see that in lines without basal expression of MGMT variation on this protein causes a significant increase in the TMZ IC50, unlike those cell lines with basal expression of MGMT in which their IC50 does not undergo any change. In contrast, P-glycoprotein and CD133 was found to be unrelated to TMZ resistance in these cell lines. These results may be relevant in understanding the phenomenon of TMZ resistance, especially in glioblastoma multiforme patients laking MGMT expression, and may also aid in the design of new therapeutic strategies to improve the efficacy of TMZ in glioblastoma multiforme patients. Referencias bibliográficas: 1 Shahar T, Nossek E, Steinberg DM, Rozovski U, Blumenthal DT, Bokstein F,et al. The impact of enrollment in clinical trials on survival of patients with glioblastoma. J Clin Neurosci Off J Neurosurg Soc Australas. 2012;19(11):1530-4. 2 Melguizo C, Prados J, Gonzalez B, Ortiz R, Concha A, Alvarez PJ, et al. MGMT promoter methylation status and MGMT and CD133 immunohistochemical expression as prognostic markers in glioblastoma patients treated with temozolomide plus radiotherapy. J Transl Med. 2012;10:250. 3 Yoshimoto K, Mizoguchi M, Hata N, Murata H, Hatae R, Amano T, et al. Complex DNA repair pathways as possible therapeutic targets to overcome temozolomide resistance in glioblastoma. Front Oncol. 2012;2:186. 4 Binkhathlan Z, Lavasanifar A. P-glycoprotein inhibition as a therapeutic approach for overcoming multidrug resistance in cancer: current status and future perspectives. Curr Cancer Drug Targets. 2013;13(3):326-46 5 Choy W, Nagasawa DT, Trang A, Thill K, Spasic M, Yang I. CD133 as a marker for regulation and potential for targeted therapies in glioblastoma multiforme. Neurosurg Clin N Am. 2012;23(3):391-405. Ars Pharm 59 (suppl1): 97 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Modelos animales para el estudio del síndrome metabólico: modelo genético vs modelo inducido por la dieta Martínez R, Kapravelou G, Galisteo M, Nebot E, Aranda P, López Jurado M, Porres JM. Departamentos de Fisiología y Farmacología. Facultad de Farmacia. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos. Instituto mixto Universitario Deporte y Salud. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. El síndrome metabólico (SM) es un conjunto de alteraciones tales como la obesidad central, dislipidemias, glucosa plasmática elevada, aparición de resistencia a la insulina, presión sanguínea elevada y un estado pro-inflamatorio/protrombótico (Grundy, 2016). Debido al incremento de su prevalencia en la población actual, es necesario diseñar modelos animales para hallar los mecanismos implicados en su desarrollo. Esta patología implica a factores genéticos y a factores medioambientales, por lo que en nuestros estudios utilizamos tanto modelos genéticos (rata Zucker Fatty) como modelos inducidos por la dieta (rata Sprague Dawley) donde ensayamos distintas estrategias para tratar o prevenir el desarrollo del SM: (i) intervenciones dietéticas, (ii) realización de actividad física o (iii) intervenciones farmacológicas. Actualmente nuestro equipo de investigación están implementando estas tres estrategias: (i) Las leguminosas así como sus extractos o hidrolizados proteicos han sido testadas en diferentes modelos establecidos para el estudio del SM (Martínez et al., 2016b) siendo efectivas en la prevención y tratamiento de distintas alteraciones que aparecen en el desarrollo de este síndrome (Kapravelou et al., 2013; Martínez et al., 2016a). (ii) La realización de actividad física es una estrategia idónea para mejorar distintas alteraciones del SM como la resistencia a la insulina y las alteraciones del metabolismo lipídico (Kapravelou et al., 2015). Por último, (iii) la estrategia terapéutica ha puesto de manifiesto el papel que el sistema endocannabinoide juega en la regulación del metabolismo, la administración de fármacos específicos han conseguido prevenir el desarrollo de esteatosis hepática y en general mejorar el perfil lipído (Merroun et al. 2013). Referencias bibliográficas: Grundy, S.M. (2016). Metabolic syndrome update. Trends Cardiovasc. Med. 26, 364–373. Kapravelou, G., Martínez, R., Andrade, A.M., Sánchez, C., Chaves, C.L., López-Jurado, M., Aranda, P., Cantarero, S., Arrebola, F., Fernández-Segura, E., et al. (2013). Health promoting effects of Lupin (Lupinus albus var. multolupa) protein hydrolyzate and insoluble fiber in a diet-induced animal experimental model of hypercholesterolemia. Food Res. Int. 54, 1471–1481. Kapravelou, G., Martinez, R., Andrade, A.M., Nebot, E., Camiletti-Moirón, D., Aparicio, V.A., Lopez-Jurado, M., Aranda, P., Arrebola, F., Fernandez-Segura, E., et al. (2015). Aerobic interval exercise improves parameters of Non Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) and other alterations of metabolic syndrome in obese Zucker rats. Appl. Physiol. Nutr. Metab. Martínez, R., Kapravelou, G., Porres, J.M., Melesio, A.M., Heras, L., Cantarero, S., Gribble, F.M., Parker, H., Aranda, P., and López-Jurado, M. (2016a). Medicago sativa L., a functional food to relieve hypertension and metabolic disorders in a spontaneously hypertensive rat model. J. Funct. Foods 26, 470–484. Martínez, R., López-Jurado, M., Wanden-Berghe, C., Sanz-Valero, J., Porres, J.M., and Kapravelou, G. (2016b). Beneficial effects of legumes on parameters of the metabolic syndrome: a systematic review of trials in animal models. Br. J. Nutr. 116, 402–424. Merroun, I., Sánchez-González, C., Martínez, R., López-Chaves, Carlos., Porres, JM., Aranda, P., Llopis, J., Galisteo, M., Zarzuelo, A., Errami, M., López-Jurado, M. (2013). Novel effects of the cannabinoid inverse agonist AM 251 on parameters related to metabolic syndrome in obese Zucker rats. Metabolism. 62, 1641–1650. Ars Pharm 59 (suppl1): 98 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 New suicide gene therapy for non-small cell lung cancer Morote M2, Hernández R1,2, García B2, Mesas C2, Rama AR1,3. 1 Departamento de Anatomía y Embriología Humana, Universidad de Granada, Granada, España. 2 Instituto de Biopatología y Biomedicina Regenerativa, Universidad de Granada, Granada, España. 3 Departamento de Ciencias de la Salud, Universidad de Jaén, Jaén, España. 4 Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Objetivo: El cáncer de pulmón es la principal causa de mortalidad por cáncer en todo el mundo. La quimioterapia y radioterapia han demostrado ser eficaces, sin embargo, a menudo causan una toxicidad considerable. En los últimos años, la terapia génica se ha presentado para mejorar la respuesta de los pacientes con cáncer de pulmón avanzado sin dañar el tejido normal. La terapia génica clásica suicida se basa en el uso de genes de origen bacteriano o viral cuyas enzimas codificantes transforman el profármaco no tóxico en una molécula tóxica. El gen E de E. Coli codifica para una proteína de membrana con un dominio tóxico que no necesita profármacos. Hemos investigado este gen como una nueva terapia génica suicida para el tratamiento contra el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC). Métodos: El gen E se clonó en el vector pcDNA3.1 (pcDNA3.1-E) y la línea NSCLC A-549 se cultivó como monocapa (ML) y como esferoides tumorales multicelulares (MTS). Para estudiar el efecto inhibidor del crecimiento del gen E, se transfectaron las células A-549 ML y MTS con pcDNA3.1-E o pcDNA3.1 vacío (control) y se compararon con A-549 ML y MTS parental, respectivamente. A-549 ML se evaluó mediante ensayo MTT y A-549 MTS por modulación de los volúmenes de crecimiento. La microscopía electrónica de transmisión (TEM) y microscopía electrónica de barrido (SEM) se utilizaron para analizar los poibles cambios ultraestructurales de las células A-549 transfectadas. Resultados: El crecimiento de las células control fue similar al de las células parentales, mientras que las A-549/ pcDNA3.1-E mostraron una inhibición significativa y dependiente del tiempo del crecimiento (42,2% a 92 h). TEM reveló mitocondrias dilatadas con matrices claras y crestas alteradas en las A-549/pcDNA3.1-E; También, SEM mostró una desaparición progresiva de microvillosidades y evaginaciones de la membrana celular. Ninguna característica fue observada en las células parentales y ni en las de control para ambas técnicas. Los análisis de volumen de A-549 MST mostraron hallazgos similares a ML, con una disminución de volumen significativa y dependiente del tiempo. La mayor disminución de volumen fue de 35,2% en A-549 MTS/pcDNA3.1-E después de 96 h en comparación con la MTS parental. Los MTS control mostraron el un volumen promedio similar a los MTS parentales. Conclusiones: Nuestros resultados mostraron que el gen E es capaz de inhibir el crecimiento de la línea A-549, presentándose como una nueva terapia génica suicida para el tratamiento contra el NSCLC, cuya ventaja es la no necesidad de un profármaco para su acción de muerte celular. Referencias bibliográficas: 1. E phage gene transfection associated to chemotherapeutic agents increases apoptosis in lung and colon cancer cells. Rama AR, Prados J, Melguizo C, Alvarez PJ, Ortiz R, Madeddu R, Aranega A. Bioeng Bugs. 2011 MayJun;2(3):163-7. 2. E phage gene transfection enhances sensitivity of lung and colon cancer cells to chemotherapeutic agents. Rama AR, Prados J, Melguizo C, Ortiz R, Alvarez PJ, Rodríguez-Serrano F, Hita F, Ramos JL, Burgos M, Aranega A. Int J Oncol. 2010 Dec;37(6):1503-14. Ars Pharm 59 (suppl1): 99 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Estudio de proliferación y expresión de marcadores en fibroblastos humanos tratados con láser de diodo Illescas Montes R1, Melguizo Rodríguez L2, Manzano Moreno FJ3, García Martínez O2, Ruiz C2,4, Ramos Torrecillas J2. 1 Grupo Biosanitario (BIO277). Departamento de Enfermería. Facultad de Enfermería de Melilla, Universidad de Granada. Instituto de Investigación Biosanitaria ibs.GRANADA. 2 Grupo Biosanitario (BIO277). Departamento de Enfermería. Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Granada. Instituto de Investigación Biosanitaria ibs.GRANADA. 3 Grupo Biosanitario (BIO277). Departamento de Estomatología. Facultad de Odontología, Universidad de Granada. Instituto de Investigación Biosanitaria ibs.GRANADA. 4 Instituto de Neurociencias “Federico Oloriz”. Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Introducción: En biomedicina existen distintos tipos de láseres que producen efectos en los tejidos según sus características. Por otra parte, en el proceso de cicatrización de heridas, el fibroblasto es la principal población implicada en su regeneración. Objetivo: Analizar el efecto del láser de diodo de 940nm sobre el crecimiento y la diferenciación de los fibroblastos humanos en cultivo a distintas dosis de radiación y diferentes pautas de tratamiento. Metodología: La línea de fibroblastos epiteliales humanos (CCD-1064Sk) fue tratada con un láser de diodo (ezLase) de 940nm a distintas dosis de energía (potencia: 0.2 a 1 W y densidad de energía: 1 a 7 J/cm2) y bajo distintos modos de transmisión (continuo o pulsado). Después de 24h y/o 72h de la irradiación, se estudió el crecimiento celular (MTT assay), el ciclo celular (citometría de flujo) y diferenciación celular (expresión de fibronectina y α-actina mediante inmunofluorescencia). Resultados: El tratamiento incrementó la proliferación de fibroblastos a las 24h y 72h, en función de la dosis de energía aplicada, considerando 0.2W, 0.5W y densidad de energía entre 1 y 4 J/cm2 como parámetros más efectivos, indistintamente del modo de transmisión. No observamos cambios significativos en el ciclo celular respecto al control. Observamos un incremento de expresión de α-actina de las células tratadas, susceptible de diferenciación celular. Conclusiones: El láser usado presenta propiedades bioestimulantes sobre el fibroblasto, al estimular la capacidad proliferativa y la diferenciación celular, sin alterar el ciclo celular. Estos datos justifican su posible utilidad clínica en regeneración de heridas. Palabras clave: Wound healing, Fibroblasts, Diode laser, Biostimulation, Cell culture. Referencias bibliográficas: 1. De Lima FJC, de Oliveira Neto OB, Barbosa FT, et al. Is there a protocol in experimental skin wounds in rats using low-level diode laser therapy (LLDLT) combining or not red and infrared wavelengths? Systematic review. Lasers Med Sci 2016; 31: 779–787. 2. Huertas RM, De Luna-Bertos E, Ramos-Torrecillas J, et al. Effect and Clinical Implications of the Low-Energy Diode Laser on Bone Cell Proliferation. Biological Research For Nursing 2014; 16: 191–196. 3. Manzano-Moreno FJ, Medina-Huertas R, Ramos-Torrecillas J, et al. The effect of low-level diode laser therapy on early differentiation of osteoblast via BMP-2/TGF-β1 and its receptors. Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery Ars Pharm 59 (suppl1): 100 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 2015; 43: 1926–1932. 4. Medina-Huertas R, Manzano-Moreno FJ, De Luna-Bertos E, et al. The effects of low-level diode laser irradiation on differentiation, antigenic profile, and phagocytic capacity of osteoblast-like cells (MG-63). Lasers Med Sci 2014; 29: 1479–1484. 5. Manzano-Moreno FJ, Ramos-Torrecillas J, De Luna-Bertos E, et al. High doses of bisphosphonates reduce osteoblast-like cell proliferation by arresting the cell cycle and inducing apoptosis. Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery 2015; 43: 396–401. 6. Darby IA, Laverdet B, Bonté F, et al. Fibroblasts and myofibroblasts in wound healing. Clin Cosmet Investig Dermatol 2014; 7: 301–311. 7. Ramos-Torrecillas J, De Luna-Bertos E, García-Martínez O, et al. Use of platelet-rich plasma to treat pressure ulcers: a case study. Journal of Wound Ostomy & Continence Nursing 2013; 40: 198–202. Ars Pharm 59 (suppl1): 101 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Caracterización de enzimas degradadoras de ahls encontradas en cepas de Stenotrophomonas Maltophilia aisladas de invertebrados marinos Reina JC1, Ruiz N1, Llamas I1,2. 1 Departamento de Microbiología. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada, España. 2 Universidad de Granada, Instituto de Biotecnología, Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Granada, España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Distintas bacterias patógenas marinas regulan la expresión de genes de virulencia mediante un sistema de comunicación celular denominado quorum sensing (QS)1, mediado por la producción de moléculas señal que difunden al exterior y que, al alcanzar una concentración umbral, desencadenan la expresión de determinados genes. Por ello, la inhibición de los sistemas QS es una de las estrategias más prometedoras para controlar las infecciones en general y las que afectan a la acuicultura en particular2. Uno de los mecanismos en los que se basa se denomina quorum quenching (QQ)3, y consiste en la degradación enzimática de las moléculas señal, siendo las más comunes y estudiadas las moléculas del tipo N-acilhomoserin lactonas (AHLs). En este trabajo se presenta un estudio de los sistemas de inhibición QQ de cuatro cepas bacterianas pertenecientes a la especie Stenotrophomonas maltophilia, aisladas de la microbiota de animales pertenecientes a los phyla Echinodermata y Cnidaria. Se ha determinado tanto el rango de moléculas AHLs sintéticas que degradan las bacterias objeto de estudio como la actividad QQ sobre AHLs de origen natural producidas por los patógenos marinos Vibrio coralliilyticus, V. owensii y V. mediterranei utilizando los biosensores Agrobacterium tumefaciens NTL4 (pZRL4), Chromobacterium violaceum CV026 y C. violaceum VIR07. También se ha caracterizado el tipo de enzima QQ, resultando ser una acilasa, y se ha amplificado por PCR el gen con actividad QQ en las bacterias seleccionadas utilizando primers específicos y los productos de PCR se han clonado en Escherichia coli, demostrando su actividad QQ. Referencias bibliográficas: 1. Natrah FMI, Defoirdt T, Sorgeloos P, Bossier P. Disruption of Bacterial Cell-to-Cell Communication by Marine Organisms and its Relevance to Aquaculture. Mar Biotechnol. 2011;13(2):109-126. doi:10.1007/s10126-010-9346-3. 2. Grandclément C, Tannières M, Moréra S, Dessaux Y, Faure D. Quorum quenching: role in nature and applied developments. FEMS Microbiol Rev. 2016;40(1):86-116. doi:10.1093/femsre/fuv038. 3. Dong Y, Zhang L. Quorum Sensing and Quorum-Quenching Enzymes. J Microbiol. 2005;43(February):101-109. Ars Pharm 59 (suppl1): 102 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Recomendaciones para la prevención del cáncer dadas por el código europeo contra el cáncer: análisis de la situación en España Reina I, Arriaga A, Benítez E, Olea N, Fernández MF. Instituto de Investigación Biosanitaria (ibs.GRANADA). CIBER de Epidemiología y Salud Pública (CIBERESP), España. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Programa de Doctorado Medicina Clínica y Salud Pública coautores El cáncer es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el mundo, con un aumento progresivo y continuo en la incidencia de algunos tumores durante los últimos años, constituyendo uno de los problemas de salud pública más importantes en la actualidad. Los estudios epidemiológicos, revisados por la Agencia Internacional de Investigación sobre el Cáncer (IARC), revelan que más de la mitad de los casos podrían prevenirse, por lo que es necesario incrementar los esfuerzos en encontrar estrategias adecuadas para evitar esta enfermedad (prevención primaria). La IARC ha propuesto recomendaciones que constituyen el Código Europeo contra el Cáncer (CECC), con el propósito de dar a conocer los principales factores de riesgo susceptibles de modificación. El objetivo de nuestro trabajo ha sido analizar la aplicación de estas recomendaciones en España. Para ello se han revisado estudios epidemiológicos y datos aportados por organismos nacionales que informan sobre salud en España. Los datos recogidos permiten afirmar que nuestra población presenta un perfil de riesgo de cáncer elevado, determinado, entre otros, por factores conductuales y hábitos dietéticos que favorecen la aparición de cáncer. Muchos de estos factores son modificables tales como el cambio a dietas más saludables, la disminución del sedentarismo que ha traído consigo una elevada prevalencia de sobrepeso y obesidad, además de la disminución del consumo de alcohol, la erradicación del hábito tabáquico y la promoción de ambientes libres de carcinógenos en las ciudades, los hogares y los lugares de trabajo. En conclusión, mediante la educación sanitaria se podría disminuir la incidencia del cáncer en nuestro país de forma eficiente. Referencias bibliográficas: 1. GLOBOCAN 2012: Estimated Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide in 2012. Disponible en: http:// globocan.iarc.fr/Default.aspx 2. Ferlay J, Soerjomataram I, Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int J Cancer 2015;136(5):E359-86. 3. Galceran J, Ameijide A, Carulla M, Mateos A, Quirós JR, Rojas D et al. Cancer incidence in Spain, 2015. Clin Transl Oncol 2017. [Epub ahead of print]. 4. REDECAN: Red Española de Registros de Cáncer. http://redecan.org 5. Schüz J, Espina C, Villain P, Herrero R, Leon ME, Minozzi S, et al. European Code against Cancer 4th Edition: 12 ways to reduce your cancer risk. Cancer Epidemiol 2015;39(Suppl 1):S1–S10. 6. Stewart BW. Priorities for cancer prevention: lifestyle choices versus unavoidable exposures. Lancet Oncol 2012;13(3):e126-33. Ars Pharm 59 (suppl1): 103 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Participación en programas externos para la garantía de calidad en la cartera de servicios del biobanco del SSPA Rejón JD1,2,3,4,5, Gutiérrez Aranda I1,2,5 , Catalina P1,2,3,4,5, Lucena Aguilar G1,2,4,5, Carrillo Ávila JA1,5,De la Puente R1,4,5, Gómez Cabañas L1,4,5, Del Pino Zumaquero A1,5, Ligero G1,2,3,4,5, Aguilar Quesada R1,2,3,4,5. 1 Biobanco del Sistema Sanitario Público de Andalucía, Granada. 2 Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada, Ibs Granada. 3 Plataforma “Red Nacional de Biobancos”-ISCIII. 4 Plataforma de Recursos Biomoleculares y Bioinformáticos-ISCIII. 5 Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Introducción: Los programas externos para la garantía de calidad son una herramienta que permiten verificar y/o validar la precisión, exactitud y eficacia de los procedimientos de procesamiento y caracterización de las muestras biológicas, determinando el grado de adecuación de todos los elementos que contribuyen (método, equipos y personal técnico) e identificando potenciales problemas mediante la monitorización regular de los resultados. El Biobanco del SSPA ha elegido estos programas para la evaluación periódica de los procedimientos asociados a su cartera de servicios. Material y métodos: Para cada servicio ofrecido por el Biobanco del SSPA se seleccionó el esquema (test de evaluación) correspondiente de entre los descritos en el programa para la garantía de calidad. Resultados: Desde el inicio en 2011 de la participación del Biobanco del SSPA en programas externos para la garantía de calidad se ha incrementado el número de esquemas de 1 a 15 en 2016, cubriéndose el 30 % de los servicios ofrecidos. Del resto de servicios, sólo 6% fueron cubiertos/evaluados mediante el contacto con laboratorios de referencia. Los resultados obtenidos muestran la identificación de 4 oportunidades de mejora, que han llevado a la modificación de los procedimientos implicados, y una desviación en la detección de un equipo, que ha sido revisada. Conclusión: La participación en estos programas ha permitido evaluar y validar los procedimientos implantados en el Biobanco del SSPA y extender la cartera de servicios mejorando la calidad de los mismos. Conscientes de los beneficios aportados, la búsqueda de esquemas ofrecidos por entidades afines y la creación de otros nuevos mediante diferentes iniciativas es necesaria. Ars Pharm 59 (suppl1): 104 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Efecto del bis (maltolato) oxovanadio (iv) y otros metales (cobre y manganeso) sobre la viabilidad de células HEPG2 Rivas García L1, Sánchez González C1, Moreno Terrón L1, López Chaves C1, Montes Bayón M2, Aranda Ramírez P1, Llopis González J1. 1 Departamento de Fisiología, Centro de Investigación Biomédica, Instituto Mixto de Deporte y Salud, Facultad de Farmacia, Universidad de Granada, Campus Cartuja s/n, ES18071Granada, España. 2 Departamento de Química Física y Analítica. Facultad de Química. Universidad de Oviedo. Oviedo. España. Centro de investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Palabras clave: vanadio, manganeso, cobre, HepG2. El vanadio es un elemento traza involucrado en el metabolismo de hidratos de carbono mejorando la sensibilidad a la insulina. Sin embargo, se ha demostrado su toxicidad ligada a su carácter pro-oxidante. Cobre y manganeso son elementos esenciales, presentes en numerosas enzimas, contribuyendo en la defensa antioxidante [1,2]. El objetivo fue evaluar el efecto de la exposición al vanadio de forma aislada o conjunta con Cu o Mn (elementos con capacidad antioxidante) de células hepáticas (involucradas en el metabolismo glucídico y lipídico), con el fin de tratar de neutralizar los efectos deletéreos del V en la terapia antidiabética. Para los experimentos in vitro la línea HepG2 se expuso a concentraciones crecientes de V (bis(maltolato)oxovanadio), Mn (cloruro) y Cu (cloruro), y a combinaciones entre elementos. El tiempo de exposición fue de 32 h. Se estudió la viabilidad celular por la prueba del MTT. El V ocasionó un descenso significativo de la viabilidad celular en las concentraciones más altas. Mn y Cu ocasionaron un aumento significativo en la viabilidad, siendo más intenso al aumentar su concentración (especialmente en el caso del Mn); esta asociación también fue apreciable al combinar estos metales. Cuando se expuso a las células a una combinación de Cu y V no se observan cambios en la viabilidad celular. La exposición combinada de células a Mn y V causó un aumento significativo de la viabilidad para las dosis más altas. Se concluye que la exposición de células hepáticas a vanadio ocasiona un descenso en la viabilidad posiblemente atribuible a sus propiedades prooxidantes, situación que revierte cuando la exposición al vanadio se hace de forma combinada con Mn, elemento con propiedades antioxidantes. Estos resultados podrían ayudar a minimizar la toxicidad del vanadio en el tratamiento farmacológico de la diabetes mellitus. Referencias bibliográficas: [1] Thompson K.H.; Orvig C. J Inorg Biochem 2006, 100, 1925-1935. [2] Sanchez-Gonzalez C.; Bermudez-Peña C.; Guerrero-Romero F.; Trenzado C.E.; MontesBayon M.; Sanz-Medel A.; Llopis J. Br J Nutr 2012, 108, 893-899. Ars Pharm 59 (suppl1): 105 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Genetic relationship between the RS9939609 FTO polymorphism, body mass index and depression Agudo M1, Gutierrez B1,2, Cervilla J1,2, Ching Lopez A1,2, Molina E3, McKenney K1, Ruiz Perez I4, Rodriguez Barranco M5, Rivera M1,6. 1Institute of Neurosciences, Centre of Biomedical Research, University of Granada, Granada, Spain. 2Department of Psychiatry, Faculty of Medicine, University of Granada, Granada, Spain. 3Department of Nursing, Faculty of Nursing, Phisiotherapy and Podiatry, University of Seville, Seville, Spain. 4Andalusian School of Public Health and CIBERESP. 5Andalusian School of Public Health. 6Departament of Biochemistry and Molecular Biology II, Faculty of Pharmacy, University of Granada, Granada, Spain.Biomedical Research Center, University of Granada. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Introduction: Obesity and depression are highly prevalent major public health problems that frequently co-occur (1). The role of the FTO gene in body mass index (BMI) and obesity has been confirmed in many studies (2,3). Recently, we reported the first study showing that depression modifies the effect of the FTO on BMI (4). The aim of this study is to investigate the genetic influence of the FTO rs9939609 polymorphism, BMI and depression and try to replicate previous findings. Methods: The PISMA-ep is a cross-sectional epidemiological study of mental disorders based on a representative sample of the adult population of Andalusia (5). The sample consists of 337 individuals with depression and 921 psychiatrically healthy controls. Linear regression models for quantitative traits assuming an additive genetic model were applied to test the association between this polymorphism and BMI. Finally, we performed interaction analysis between the rs9939609, depression and BMI. Results: We found that individuals with depression had significantly higher BMI values compared to controls (p<0.01). The rs9939609 polymorphism was significantly associated with BMI in the whole sample (p<0.05) and in controls (p<0.05), but not in depressive cases (p>0.05). There was no significant interaction between rs9939609, depression and BMI (p>0.05). Conclusion: This study provides additional support for an association between BMI and depression in a representative sample of the Spanish population. We found an association between the rs9939609 polymorphism that is in keeping from previous reports. Given the relevance of exploring the genetic relationship between obesity and depression and to overcome the issue of insufficient sample size, we are working on the genotyping of the remaining 3,000 samples that constitute the entire PISMA-ep target population. Referencias bibliográficas: (1) WHO. 2008. (2) Luppino FS et al. Arch Gen Psychiatry 2010. (3) Fawcett KA, Barroso I, Trends Genet, 2010. (4) Rivera M et al. Molecular Psychiatry, 2012. (5) Cervilla et al. Revista de Psiquiatría y Salud Mental, 2016. Ars Pharm 59 (suppl1): 112 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Estudio del gen tenomodulina y su relación con otros genes implicados en el metabolismo de adipocitos humanos diferenciados Ruiz Ojeda FJ, Gómez Llorente C, Rupérez Cano AI, Gil Á, Aguilera CM. Departamento de Bioquímica y Biología Molecular II, Facultad de Farmacia. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix”, Centro de Investigación Biomédica. Universidad de Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Introducción y objetivos: Tenomodulina (TNMD) es una proteína transmembrana inhibidora de la angiogénesis y que participa en la diferenciación adipogénica (1). Nuestro grupo ha observado, tanto por análisis de genoma completo como por qRT-PCR, una sobreexpresión en el tejido adiposo omental de TNMD en niños obesos prepúberes (3). El objetivo del presente trabajo fue estudiar la posible función metabólica de TNMD y su relación con la adipogénesis en adipocitos humanos diferenciados. Metodología: Células madre mesenquimales derivadas de tejido adiposo humano (ADSCs) se diferenciaron hasta adipocitos durante 14 días. Los adipocitos diferenciados (d14) fueron incubados con un adenovirus-5 (Ad-5) que contenían un plásmido con un sh-RNA-TNMD o bien sh-RNA-scrambled (control) durante 48 h y se analizaron diferentes genes relacionados con el metabolismo y adipogénesis como “CCAAT/enhancer-binding protein alpha” (C/EBP-α), receptor activado por proliferador de los peroxisomas-gamma (PPAR-γ), transportador de glucosa 4 (GLUT4) y Adiponectina (ADIPOQ). Resultados: La expresión génica y proteica de TNMD aumentó de forma significativa durante la diferenciación. La inhibición de TNMD, tanto de mRNA como proteína, fue de alrededor de un 90 % en los adipocitos incubados con el vector Ad-5-sh-RNA-TNMD frente al Ad-5 control. La expresión génica de C/EBP-α, PPAR-γ, GLUT4 y ADIPOQ fue significativamente más baja en las células donde TNMD fue inhibida con el Ad-5-shRNA-TNMD. Conclusiones: La TNMD se sobreexpresa en los adipocitos diferenciados a partir de ADSCs. La inhibición de TNMD da lugar a una alteración de genes implicados en el metabolismo y adipogénesis en los adipocitos. Referencias bibliográficas: 1Senol-Cosar O, Flach RJ, DiStefano M, Chawla A, Nicoloro S, Straubhaar J, et al. Tenomodulin promotes human adipocyte differentiation and beneficial visceral adipose tissue expansion. Nat Commun. 2016; 7:10686. 2Aguilera CM, Gomez-Llorente C, Tofe I, Gil-Campos M, Cañete R, Gil Á. Genome-wide expression in visceral adipose tissue from obese prepubertal children. Int J Mol Sci. 2015; 16(4): 7723-37. Ars Pharm 59 (suppl1): 113 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Analysis of the b-glucocerebrosidase and b-galactosidase lysosomal enzymes activity in the patogenesis of parkinson disease Ruz C1, Bandrés Ciga S1, Barrero FJ2, Pelegrina J2, Gutiérrez J2, Mínguez A2, Gallo C3, Luna M3, Vives F1, Duran R1. 1 Department of Physiology and Institute of Neurosciences “Federico Olóriz”, Centre of Biomedical Research, University of Granada, Spain. 2 Movement Disorders Unit, University Hospital “Health Campus”, Granada, Spain. 3 Department of Physiology, Centre of Biomedical Research, University of Granada, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Lysosomes play a key role in protein clearance but also in catabolism of glucosphingolipids. Several studies have demonstrated that lysosomal dysfunction is a central event in neurodegenerative diseases such as Parkinson’s disease (PD). Here, we aimed to study the contribution of lysosome in the pathogenesis of PD through the analysis of β-glucocerebrosidase (β-GBA) and β-galactosidase activities in peripheral blood leucocytes from sporadic PD patients. In addition, we are now analyzing other lysosomal enzymes, explore their impact on lipid and protein metabolism as well as cognitive impairment. 31 PD patients and 29 age-matched healthy controls were initially subjected under study. We first analyzed the β-glucocerebrosidase (β-GBA) and β-galactosidase activity in leucocytes according to van Dijk et al., (2013). Statistical analysis was performed using the SPSS software. Mann-Whitney U tests was used for all group comparisons. β-GBA activity was significantly lower in PD patients compared to healthy controls (PD group: 10.44 ± 3.42 nmol/min/ mg; healthy control gro up: 12.00 ± 4.22 nmol/min/mg; p value = 0.038). No differences were found between groups, relative to β-galactosidase activity. Enzymatic activity was correlated to protein concentration in both groups. Despite the number of samples in each group needs to be increased to get clearer differences, our results show that β-GBA activity, but not β-galactosidase activity, significantly decreases in patients suffering from sporadic PD. These results encourage to develop new and efficient pharmacological approaches aimed to restore the impaired lysosomal enzyme activities. References: Manzoni C, Lewis P. FASEB Journal 2013; 27:3424-3429. Sidransky E. et al. New England Journal of Medicine 2009; 361:1651-1661. Van Dijk KD. et al. Movement Disorders 2013; 28:747-754. Ars Pharm 59 (suppl1): 114 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Laboratorio de microscopía de fluorescencia y confocal del cibm, equipamiento, técnicas y aplicaciones Santos AM. Centro de Instrumentación Científica UGR, sede CIBM. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. E-mail: [email protected] La unidad de Microscopía de Fluorescencia y Confocal (MFC) se enmarca dentro del Servicio de Microscopía del Centro de Instrumentación Científica (CIC) de la Universidad de Granada. El laboratorio MFC, ubicado en el CIBM, está diseñado para prestar apoyo científico-tecnológico dentro del área de la Microscopía óptica convencional y sus técnicas derivadas: microscopía de fluorescencia, microscopía de escaneo láser Confocal, microscopía de célula viva y preparación de muestras histológicas. La unidad MFC cuenta, entre otros, con los siguientes equipos: microscopio Confocal espectral de alta velocidad Nikon A1, equipado con un incubador para observaciones de célula viva; microscopio de fluroescencia Leica DM5500B; estación de trabajo para análisis de imágenes confocales mediante el software NIS-Elements. Dentro de la preparación de muestras histológicas, nuestro laboratorio cuenta con el equipamiento necesario para la fijación, procesado e inclusión de muestras en parafina, seccionamiento (micrótomo y criostato) y tinciones histológicas convencionales. Los equipos cuentan con agendas de reserva on-line así como con la posibilidad de ser utilizados tanto en presencia del técnico responsable de la unidad como en régimen de autoservicio por usuarios independientes. Entre las aplicaciones disponibles en el laboratorio MFC se encuentran el procesado y la observación de muestras histológicas, la adquisición de imágenes digitales, el estudio de la expresión de marcadores fluorescentes de muestras vivas o fijadas en dos y tres dimensiones, reconstrucciones 3D a partir de imágenes confocales, estudios de time-lapse y célula viva, FRAP, congelación y seccionamiento de biopsias, tinción de Hematoxilina-Eosina, etc. Referencias bibliográficas: Pawley (ed), 2006. Handbook of Biological Confocal Microscopy, 3rd Edition. http://cic.ugr.es/servicios-y-unidades/ficha.php?codServicio=6&unidad=73 https://www.nikoninstruments.com/en_EU/Products/Confocal-Microscopes/A1 Ars Pharm 59 (suppl1): 115 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Evaluación del efecto de aceites de oliva virgen con diferente contenido en compuestos bioactivos sobre biomarcadores de inflamación Sánchez Rodríguez E1, Biel Glesson S2, Fernández Navarro JR2, Calleja MA2, Espejo Calvo JA3, Roca M4, Covas MI5, Fitó Colomer M6, Gil Á1, De Victoria EM7, Mesa García MD1. 1 Departamento de Bioquímica y Biología Molecular II. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix” (INyTA). Universidad de Granada, Granada. 2 Fundación para la Investigación Biosanitaria de Andalucía Oriental, Granada. 3 Instituto para la Calidad y Seguridad Alimentaria S.L., Granada. 4 Departamento de Fitoquímica de los Alimentos. Instituto de la Grasa, Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Universidad Pablo de Olavide, Sevilla. 5 NUPROAS (Nutritional Project Assessment), Handesbolag (NUPROAS HB), Nacka. 6 Instituto Hospital del Mar de Investigaciones Biomédicas. CIBEROBN ciber de la Fisiopatología de la Obesidad y Nutrición. Parque de Investigación Biomédica de Barcelona, Barcelona. 7 Departamento de Fisiología. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix” (INyTA). Universidad de Granada, Granada. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. El aceite de oliva virgen (AOV) ha demostrado protección frente a la enfermedad cardiovascular, principalmente debido a su contenido en compuestos bioactivos con propiedades antioxidantes y antiinflamatorios. El objetivo del estudio es evaluar el efecto de la administración de tres AOV con distinto contenido en compuestos bioactivos sobre marcadores de inflamación. Se realizó un estudio de intervención cruzado, aleatorizado, controlado y doble ciego en 51 adultos sanos. Se evaluaron los beneficios del consumo de un AOV control, con bajo contenido en compuestos fenólicos (124 ppm), un AOV optimizado, con elevado contenido en compuestos fenólicos (490 ppm), y un aceite enriquecido, obtenido a partir del mismo AOV optimizado (488 ppm de compuestos fenólicos) al que se le añadieron ácidos triterpénicos obtenidos de la propia aceituna (350 ppm). Los voluntarios tomaron 30 mL diarios en crudo de los tres aceites durante 3 semanas, separados por periodos de lavado de dos semanas y utilizaron el mismo tipo de aceite para cocinar. Se determinaron marcadores de inflamación en plasma mediante la tecnología xMAP. Los resultados a tiempo inicial y tras tres semanas de intervención con cada aceite, se compararon mediante un modelo lineal mixto ajustado, considerando (p<0,05) significativo. La ingesta diaria de 30 mL de AOV enriquecido con ácidos triterpénicos durante tres semanas disminuyó la concentración de IL-8 y TNF-α plasmática en voluntarios sanos. La presencia de ácidos triterpénicos en un AOV con elevado contenido en compuestos fenólicos proporcionó un efecto antiinflamatorio adicional al observado tras el consumo de un AOV sin estos compuestos. Referencias bibliográficas: Biel, S.; Mesa, M.-D.; de la Torre, R.; Espejo, J.-A.; Fernández-Navarro, J.-R.; Fitó, M.; Sánchez-Rodriguez, E.; Rosa, C.; Marchal, R.; Alche, J. de D.; Expósito, M.; Brenes, M.; Gandul, B.; Calleja, M. A.; Covas, M.-I. The NUTRAOLEOUM Study, a randomized controlled trial, for achieving nutritional added value for olive oils. BMC Complement. Altern. Med.2016, 16, 404. Ars Pharm 59 (suppl1): 116 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Metallomics: the role of metal in organism Sánchez González C, López Chaves C, Moreno Terrón L, Onieva Aguayo C, Rivas García L, Aranda Ramírez P, Llopis González J. Dpto. Fisiología. Facultad de Farmacia. Instituto de Nutrición y Tecnología de los Alimentos “José Mataix”. Centro de Investigación Biomédica. Universidad de Granada Avda. del Conocimiento. PTS. Armilla. Granada. The emerging field of metallomics refers to the entirety of research activities aimed at the understanding of the molecular mechanisms of metal-dependent life processes. The role of metals in organisms is considered on the basis, not only of the total levels, biodistribution and metabolism of the different metals and other elements, but also of the abundance of metalloproteins and metallometabolites. The concept of metallomics focuses on analytical techniques and methods for the probing of interactions between metal ions and the organism’s genome and the derived -omes: proteome and metabolome. Particular attention is paid to the in vivo screening for the native metal-protein and metal-metabolite complexes by speciation analysis: hyphenated techniques that combine a high-resolution separation technique (gel electrophoresis, chromatography or capillary electrophoresis) with sensitive elemental (inductively coupled plasma, ICP) or molecular (electrospray or MALDI) mass spectrometric detection. The contribution of bioinformatics to the prediction of metalbinding sequences in proteins and the role of molecular biology approaches for the detection of metal-dependent genes, proteins and metabolites are highly relevant [1]. Omic technologies (i.e. genomics, metallomics, proteomics, metabolomics) are very powerful tools to characterize the global biological response to different interventions, patologycal states, pharmacologycal treatments and environmental exposures. Recent new generation of analytical approaches to obtain massive information from biological samples, such as metallomics to characterize the entirety metal biomolecules in an organism (metallome) and metabolomics to decipher the whole molecules with mass less than 1,000 Da, are now available for nutritional and biological purposes[2]. Referencias bibliográficas: 1. Mounicou S, Szpunar J, Lobinski R. Metallomics: The concept and methodology. Chem Soc Rev 2009;38(4):1119-38. 2. Szpunar J. Advances in analytical methodology for bioinorganic speciation analysis: Metallomics, metalloproteomics and heteroatom-tagged proteomics and metabolomics. Analyst 2005;130(4):442-65. Ars Pharm 59 (suppl1): 117 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Halophilic bacteria chemotaxis towards aromatic hydrocarbons Tena M1,2, Llamas I1,2, Toral L1,2,3, Béjar V1,2, Sampedro I1,2. 1 Department of Microbiology, Pharmacy Faculty, Campus de Cartuja s/n, 18071 Granada, Spain. 2 Biomedical Research Center (CIBM), Biotechnology Institute, Avda del Conocimiento s/n, 18100, Armilla, Granada, Spain. 3 Xtrem Biotech S.L., European Business Innovation Center, Avenida de la Innovación, 1, 18016, Armilla, Granada, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Background: Hydrocarbon pollution has spread to hypersaline environments, which are appreciated for their economic, ecological and scientific importance [1]. Bioremediation efficiency is limited by the heterogeneous distribution or the reduced bioavailability of the pollutants [2]. However, available information demonstrates that chemotaxis increases biodegradation efficiency [3]. As the presence of the salt is a limiting factor in bioremediation processes, technologies using halophilic bacteria could be a promising approach to use in hypersaline environments. Nevertheless, the chemotactic response of halophilic bacteria toward hydrocarbons involved in this response are essentially unknown. Objectives: The main objectives of this study are to classify hydrocarbons for their capability to attract (or not) the halophilic bacterium H. anticariensis FP35T and to analyse the potential of this bacterium to catabolize aromatic compounds. Methods: Chemotaxis is quantified using a modified Adler capillary assay [4]. PCR amplification with degenerate primers for genes encoding ring-cleaving enzymes and HPLC studies are using to study the catabolic versatility of FP35T. Conclusions: The behavioural motility response known as chemotaxis renders H. anticariensis FP35T capable of responding to pollutants. We have found that hydrocarbons like naphthalene and phenol are chemoattractant for this halophilic bacterium in a dosedependent manner. Furthermore, the presence of genes encoding ring-cleaving enzymes in the β-ketoadipate pathway for aromatic catabolism suggest that H. anticariensis FP35T have the potential to catabolize aromatic compounds and might be use in bioremediation processes in environments with high salinity. References: 1. Le Borgne et al. (2008). J Mol Microbiol Biotechnol. 15: 74-92. 2. Pandey and Jain (2002). Appl Environ Microbiol. 68:5789-5795. 3. Bhushan et al. (2004). Biochem Biophys Res Commun. 316: 816-821. 4. Parales et al. (2000). Appl Environ Microbiol.66: 4098-4104. Ars Pharm 59 (suppl1): 118 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Biological control of Botrytis Cinerea by lipopeptides from Bacillus sp Toral L1,2,3, Rodríguez M1,2, Béjar V1,2, Sampedro I1,2. 1 Department of Microbiology, Pharmacy Faculty, Campus de Cartuja s/n, 18071 Granada, Spain. 2 Biomedical Research Center (CIBM), Biotechnology Institute, AvdadelConocimiento s/n, 18100, Armilla, Granada, Spain. 3 Xtrem Biotech S.L., European Business Innovation Center, Avenida de la Innovación, 1, 18016, Armilla, Granada, Spain. Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. Background: Botrytis cinerea is a filamentous fungus classified as the second most important phytopathogen worldwide. Due to the low efficiency of control strategies against this fungus it causes important economic and agricultural losses in vineyards, and in tomato and strawberry crops. Objetives: The main objectives of this study are to characterize the antifungal activity of strain Bacillus sp. against B. cinerea and to identify the compounds that are responsible for its activity. Methods: In vitro techniques antibiosis, microscopy studies, determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bacterial concentration (MBC), identification and characterization of lipopeptides using PCR and electrospray Q-TOF mass spectrometry. Conclusions: The strainBacillus sp. exhibited antifungal activity against B. cinerea in solid and liquid medium (inhibition rates of 60% and 100%, respectively). Microscopy studies revealed a morphological alteration of phytopathogen in interaction with the strain subject of study. Molecular and mass spectrometry analyzes confirmed that Bacillus sp. secretes various forms of surfactin, iturin/mycosubtilin and fengycin. We demonstrate that these are the main compounds that have a bio-control ability. Ars Pharm 59 (suppl1): 119 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Naip expression increases in rat liver regeneration Toribio Castelló S1,5, Plaza Díaz J2,4,5, Morón Calvente V1,5, Sáez Lara MJ3,4,5, Robles Sánchez C4,5, Fontana L2,4,5, Abadía Molina F1,5. 1Department of Cell Biology, Faculty of Science, University of Granada, Spain. 2Department of Biochemistry and Molecular Biology II, School of Pharmacy, University of Granada, Spain. 3Department of Biochemistry and Molecular Biology I, Faculty of Science, University of Granada, Spain. 4Institute of Nutrition and Food Technology “José Mataix”. 5Biomedical Research Centre (CIBM), University of Granada, Granada, Spain. NAIP (NLR-family/apoptosis inhibitory protein) belongs to the IAP (Inhibitor of Apoptosis) and NLR (NOD-Like Receptor) protein families. As a receptor of pathogen/damaged associated molecular patterns (PAMPs/DAMPs), NAIP is involved in the innate immune response, is also a fundamental component of the NLRC4 inflammasome1 and participates in caspase-1 activation leading to inflammatory cytokine secretion. Recently, we have reported the implication of NAIP with cell proliferation2. The aim of this study is to analyze NAIP expression in the hepatic regenerative process. Eight female Wistar rats were used. The major liver lobe of the rats was removed. Hepatectomized rats were sacrificed 3 days (n=4) and 7 days (n=4) after surgery, and pieces from both regenerated and intact liver lobes were taken. Total RNA and proteins were extracted and analyzed by qRT-PCR and western blotting. Normal and regenerated liver histology was also assessed. NAIP mRNA showed a 3-fold increase at day 3 after hepatectomy, and a 2-fold increase at day 7 after hepatectomy. NAIP protein levels exhibited a 2-fold higher expression in the regenerating liver lobe compared with the intact lobe from the same animal 3 days after hepatectomy. Histological analysis in regenerating liver parenchyma showed very few, or absent lobule central veins. Interestingly, lentiviral NAIP overexpression in the hepatic WRL68 cell line has shown a significant increase in the G2/M phase of the cell cycle (34%) compared to normal WRL68 cells (19.4%). This study shows the implication of NAIP in liver regeneration. Further studies are needed to elucidate the role of NAIP in both cell cycle progression and liver regeneration. References: 1. Maltez VI, Miao EA. NAIP inflammasomes give the NOD to bacterial ligands. Trends in immunology 2014; 35(11):503–4. 2. Abadía-Molina F, Morón-Calvente V, Baird SD, Shamim F, Martín F, MacKenzie A3. Neuronal apoptosis inhibitory protein (NAIP) localizes to the cytokinetic machinery during cell division. Scientific Reports 2017; Enero 6;7:39981. doi: 10.1038/srep39981. Ars Pharm 59 (suppl1): 120 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Intestine anti-inflammatory effects of oligosaccharides derived from lactulose in the tnbs model of rat colitis Vezza T1, Algieri F1, Rodríguez Nogales A1, Garrido Mesa J1, Utrilla MP1, Montilla A2, Cardelle Cobas A2, Olano A2, Corzo N2, Garrido Mesa N1, Zarzuelo A1, Rodríguez Cabezas ME1, Gálvez J1. 1CIBER-EHD, Department of Pharmacology, Institute of Bio-Health Research, CIBM, University of Granada, Spain. 2 Departamento de Bioactividad y Análisis de Alimentos, Instituto de Investigación en Ciencias de la Alimentación CIAL (CSIC-UAM), Madrid, Spain. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Introduction: The manipulation of the intestinal microbiota by the administration of prebiotics seems to be an interesting approach in the management of IBD. Previous studies have demonstrated the intestine anti-inflammatory effects of the prebiotic lactulose. The aim of the present study was to test the preventative effects of oligosaccharides derived from lactulose with prebiotic properties (OsLu), in the TNBS model of rat colitis. Methods: Wistar rats (200 g) were assigned to four groups (n=10): Non colitic, control colitic and treated groups, which were given lactulose or OsLu in the drinking water (2.5% -w/v-) for three weeks. TNBS colitis was induced after two weeks of treatment, and colonic evaluation was performed one week after. The analysis of gene expression in the colonic samples was performed by real time quantitative PCR (RT-qPCR), by determining pro-inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, IL-17), chemokines (MCP-1 and CINC-1), iNOS, the mucins MUC-2 and MUC-3 and the trefoil factor TFF3. Microbiota was also characterized by PCR analysis of bacterial counts of lactobacilli, bifidobacteria, clostridia and bacteroides in the intestine contents. Results: Both Lactulose and OsLu, showed intestine anti-inflammatory effects, as evidenced by the reduced expression of pro-inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, IL-17) and chemokines (CINC-1, MCP-1), and increased expression of MUC2, MUC-3 and TFF-3, thus revealing the restoration of the colonic epithelial integrity. Only OsLu lowered iNOS and IL-17 expression. The prebiotic treatments also promoted a recovery of both lactobacilli and bifidobacteria counts when compared with the control colitic group. Discussion / Conclusion: OsLu shows greater anti-inflammatory properties than lactulose, probably due to inhibition of iNOS expression and reduction of T17 cell activity in the inflamed tissue together with the restoration of the luminal microbiota balance. This also improved intestinal membrane integrity and promoted a faster recovery of the inflamed tissue. Ars Pharm 59 (suppl1): 121 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Análisis comparativo de metodologías de esterilización de sangre periférica y extracción de ARN para la detección de biomarcadores Carrillo Ávila JA1,2, De La Puente R1, Catalina P1,2, Lucena Aguilar G1,2, Garrancho Pérez J1, Haro Mariscal C1, Miranda B1, Aguilar Quesada R1,2. 1 Biobanco del Sistema Sanitario Público de Andalucía. 2 Instituto de Investigación Biosanitaria de Granada. ibs.GRANADA. Centro de Investigación Biomédica (CIBM), Universidad de Granada, Granada, España. Existen una gran variedad de procedimientos de estabilización de sangre periférica y extracción de ARN que proporcionan rendimientos y calidad del ARN derivado muy diversos, con resultados contradictorios en la bibliografía e incluso en discordancia con las especificaciones de los fabricantes. Por este motivo y para el establecimiento del procedimiento más apropiado, nos proponemos el estudio comparativo de rendimiento y calidad del ARN extraído mediante diferentes metodologías, así como el análisis de su aplicabilidad para detección de biomarcadores. Previa solicitud del Consentimiento Informado, se obtuvieron 300 muestras de sangre de 25 individuos sanos (12 muestras de cada donante: 8 tubos Tempus® y 4 tubos Paxgene®) procediéndose a su codificación. La extracción de ARN se realizó por duplicado y a su vez por 2 técnicos diferentes utilizando 3 metodologías: A) Tempus Spin RNA Isolation kit para tubo Tempus®, B) MagMAX for Stabilized Blood Tubes RNA Isolation kit para tubo Tempus® y C) PAXgene blood miRNA kit para tubo Paxgene®. A continuación se realizó el análisis espectrofotométrico y de determinación del RIN de las muestras de ARN. Se observaron diferencias significativas en cuanto a rendimiento, pureza e integridad de las muestras de ARN extraídas mediante las 3 metodologías. Los rendimientos más altos se obtuvieron con la metodología A, mientras que los resultados de integridad y pureza fueron mejores para las metodologías A y C. En cualquier caso se observó una buena reproducibilidad entre los duplicados. La metodología A presentó una mejor relación coste/muestra pero sin garantías de recuperación de los miRNA. Ars Pharm 59 (suppl1): 128 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Estudio del gen tenomodulina y su relación con otros genes implicados en el metabolismo de adipocitos humanos diferenciados ................................................................................................................................................................... 112 Evaluación de la estabilidad genómica de dietas a base de leche de cabra o vaca suplementadas con ácido fólico ....... 76 Evaluación de la exposición del riesgo a contaminantes de la dieta, a través de estudios de dieta total. Proyecto TDS-EXPOSURE (FP7-KBBE-2011-5; Nº 289108) .................................................................................................... 85 Evaluación del daño ocasionado en lípidos, proteínas y ADN por la exposición a nanopartículas de oro. Estudio in vitro e in vivo ............................................................................................................................................................ 28 Evaluación del efecto de aceites de oliva virgen con diferente contenido en compuestos bioactivos sobre biomarcadores de daño endotelial .................................................................................................................................. 48 Evaluación del efecto de aceites de oliva virgen con diferente contenido en compuestos bioactivos sobre biomarcadores de inflamación ..................................................................................................................................... 115 Evaluation of the antioxidant activity of persea americana extracts against paraquatinduced oxidative stress in parkinson’s disease models .............................................................................................................................................. 40 Feeding restriction in grouped rats. Aggregate influence on relationship from the behavioural and hormonal point of view .............................................................................................................................................................................. 80 Fuerza de agarre como modelo translacional de dolor artrítico ....................................................................................... 84 Gene therapy corrects mitochondrial dysfunction in mefs and hscs from coq9r239x mice ............................................. 9 Genetic relationship between the RS9939609 FTO polymorphism, body mass index and depression ........................... 105 Gut microbiota is involved in the of blood pressure control in spontaneously hypertensive rats ................................... 26 Halophilic bacteria chemotaxis towards aromatic hydrocarbons ..................................................................... 117 Human predecidual stromal cells are closely related to pericytes ................................................................................... 111 Immunomodulatory effect of minocycline in intestinal inflammation .................................................................... 18 Implementación de la caracterización de líneas celulares en el biobanco del SSPA: identificación de líneas celulares y detección de micoplasma ................................................................................................................................................ 14 Implementación de normas bpl en el servicio de experimentación animal/cic. una oportunidad para el desarrollo de I+D+I con empresas ................................................................................................................................................... 33 Implicación del receptor sigma-1 en la analgesia opioide de origen inmune durante la inflamación ............................. 49 Implication of MGMT, MMR, P-Glycoprotein and CD133 expression as potential mechanisms of temozolomide resistance in glioblastoma cell lines ..................................................................................................... 96 Importancia de la validación de normalizadores de heterogeneidad tumoral para el análisis de los patrones de expresión de mirs en cancer ............................................................................................................................................... 68 Impresión 3D de constructos bioactivos basados en ácido hialurónico para la formación de neocartílago in vitro ...... 7 Improve of the paclitaxel activity by the use of polymeric nanoparticles of lactic and glycolic acid: assay in multicellular spheroids from lung cancer cells ............................................................................................................... 72 Ars Pharm 59 (suppl1): 129 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 In-bioreactor ultrasonic monitoring of 3D culture human engineered cartilage .................................................................. 35 Increased medial prefrontal cortex activation during the habituation of flavor neophobia in adult and aged rats .......... 91 Influencia del ejercicio físico y la ingesta de hidroxitirosol en el estado redox de ratas ejercitadas ................................. 5 Influencia del pH sobre la inducción de apoptosis en osteoclastos tratados con alendronato ............................................ 31 Intervención en actividad física en supervivientes de cáncer de mama ......................................................................... 108 Intestine anti-inflammatry effects of oligosaccharides derived from lactulose in the tnbs model of rat colitis ... 120 Is the DNA methylation state associated to sequence variation? ....................................................................................... 19 La experiencia previa de un alto reforzador produce un mayor consumo de alcohol en ratas ........................................ 24 La leche de cabra fermentada mejora el estado antioxidante total .................................................................................. 75 Laboratorio de citometria de flujo ................................................................................................................................... 95 Laboratorio de microscopía de fluorescencia y confocal del cibm, equipamiento, técnicas y aplicaciones ................. 114 Macrophage infiltration into the dorsal root ganglia (DRG) following spared nerve injury (SNI) is reduced in sigma-1 receptor knockout mice ................................................................................................................................................... 58 Marcadores volatiles urinarios como herramienta diagnóstica y de screening del cáncer de próstata ........................... 47 Melatonin reduces renal mitochondrial dysfunction and endoplasmatic reticulum stress in diabetic obese rats ............ 51 Metabolic switch produced by melatonin at high concentration induces apoptosis in cancer ........................................ 21 Metallomics: the role of metal in organism .................................................................................................................. 116 Mitochondrial dysfunction induces different responses in sulfide metabolism ........................................................ 34 Modelo de abuso de alcohol en ratones: desarrollo del paradigma “driking in the dark” en cepa de baja preferencia ... 45 Modelos animales para el estudio del síndrome metabólico: modelo genético vs modelo inducido por la dieta ........... 97 Morfología mitocondrial durante el ejercicio físico ..................................................................................................... 32 Musashi-1 en regeneración ósea tras elevación de seno maxilar ...................................................................................... 20 Naip expression increases in rat liver regeneration ................................................................................................... 119 New suicide gene therapy for non-small cell lung cancer ........................................................................................ 98 New suicide gene therapy for non-small cell lung cancer ............................................................................... 41 Niveles de metales en placenta y efectos cognitivos en niños en edad preescolar: proyecto infancia y medio ambiente (INMA) ............................................................................................................................................................. 65 Nueva metodología analítica para la cuantificación de disruptores endocrinos-no persistentes en leche matena ........... 70 Obesidad y metales: su relación con parámetros espermáticos ................................................................................. 77 Obtención de células madre estromales de origen intraoral ......................................................................................... 12 Ars Pharm 59 (suppl1): 130 Primeras Jornadas Científicas CIBM | Granada 21 de junio 2017 Obtención y caracterización de exosomas de células madre estromales de origen intraoral ....................................... 39 Optimización de procedimientos de caracterización de líneas celular pluripotenciales en el biobanco del sistema sanitario público de Andalucía ................................................................................................................ 123 Pancreatic ductal adenocarcinoma early detection: new biomarkers based on gene and metabolomics expression profiles .............................................................................................................................................................................. 73 Papel de los receptores sigma-1 en la potenciación de la analgesia morfínica en un modelo de dolor visceral murino ...... 56 Papel del envejecimiento y de la alimentación con diferentes fuentes grasas (aceites de oliva virgen, girasol o pescado) en la morfometría mitocondrial de músculo liso de aorta de rata ........................................ 92 Participación en programas externos para la garantía de calidad en la cartera de servicios del biobanco del SSPA ... 103 Paternal and maternal preconception and prenatal urinary concentrations of bisphenol a and size at birth .............. 36 Pathomechanisms in primary coenzyme q deficiency ................................................................................................... 107 Potencial de diferenciación de células madre estromales de origen intraoral .......................................................... 11 Pre-pregnancy mother´s body mass index associates with offspring cognitive outcomes and gut microbiota ............... 13 Producción y caracterización de exopolisacáridos producidos por bacterias gram positivas .......................................... 52 Propiedades funcionales y aplicaciones biotecnológicas de los exopolisacáridos extraídos de bacterias gram negativas ... 110 Recomendaciones para la prevención del cáncer dadas por el código europeo contra el cáncer: análisis de la situación en España ........................................................................................................................................................ 102 Regenerative therapies applied to central nervous system diseases: differentiation from mesenchymal stem cells to neural lineage cells ...................................................................................................................................................... 69 Revealing the immunomodulatory effect second-generation tetracyclines exert on macrophages ................................... 22 Servicios generales en el CIBM unidades de resonancia magnética nuclear animal y de microscopia electrónica (CIC)... 64 SLAMF8. Role in the modulation of microbicidal functions in macrophages .................................................................. 44 SOX9 Y SOX8 mantienen el fenotipo del testículo adulto y evitan la reprogramación genética de macho a hembra .......... 23 Te ayudamos a transferir tus resultados de investigación .................................................................................................. 125 Tenomodulin genetic variants on the X chromosome are associated with childhood obesity ............................................ 6 Toxicity of radiotherapy is enhanced by high concentration of melatonin in head and neck cancer cells ........................... 15 Transparencia en investigación animal ............................................................................................................................ 38 Urinary bisphenol a concentrations and levels of reproductive hormones and cortisol in peripubertal boys: The INMA-GRANADA COHORT. .......................................................................................................................................... 37 Use of a sigma-1 receptor antagonist as treatment of neuropathic pain produced by spared nerve injury in mice ........ 57