Diagnóstico de las dermatofitosis en el perro y el gato

CLINICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 11 Número 4 Octubre/Diciembre 1991 Artículos originales ].R. García E. Ynaraja Clínica Veterinaria San Francisco de Asís CI Alusranre, 6 28002 Madrid 21 Diagnóstico de las derrnatofitosis en el perro y el gato. RESUMEN En este artículo se revisan los diferentes métodos de diagnóstico utilizables en los cuadros clínicos de dermatofitosis, comentando su utilidad, ventajas, inconvenientes y complementariedad. PALABRAS CLAVE Perro; Gato; Dermatofitos; Cultivo füngico. ABSTRAcr In this paper it is reviewed the diagnostic procedures for e/inic presentation of dermatophytosis, thúr benefits, drawback and complementariety, KEY WORDS Dog; Cat; Dermatophytos; Pungal culture, 219 ].R. García E. Ynaraja Las derrnatofitosis constituyen una de las enfer22 medades cutáneas más frecuentemente diagnosticadas sin identificación del agente causal, lo que lleva, en muchas ocasiones, a errores diagnósticos y a fracasos en el tratamiento posterior, si bien es cierto que en cuadros leves este error puede pasar desapercibido al producirse una cierta mejoría del cuadro debido al efecto anti-inflarnatorio que sobre la piel ejercen algunos antifúngicos. No hay que olvidar, además, que las derrnatofitosis pueden presentarse como lesiones cutáneas muy diferentes a la tradicional forma anular, lo que hace imposible un diagnóstico sin identificar el agente causal. ORIGEN Los-dermatofitos constituyen un grupo de hongos rniceliares caracterizados por su queratinofilia y su actividad queratinolítica, lo que les permite la asimilación de la queratina como nutriente. Existen cerca de 40 especies conocidas de derrnatofitos, muchas de las cuales sólo se han aislado del suelo. Taxonómicamente, fueron clasificados dentro de la clase Deuteromycetes (hongos imperfectos) pero en 16 de ellos ya se ha descrito la fase teleornórfica o sexual, clasificándose por tanto en la clase Ascomycetes. Esto ha originado cierta confusión, dado que diferentes especies de Ascomycetes pueden producir el mismo género-forma asexual. Por otro lado, la demostración del estado perfecto requiere la utilización de técnicas micológicas especiales, no asequibles al veterinario clínico. En consecuencia, la clasificación que utilizaremos se basa en la forma conidial o asexual, lo que sitúa los derrnatofitos en tres géneros: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton. DISTRIBUCIÓN Todos los dermatofitos parecen haberse originado de formas geofílicas, pero muchos de ellos han abandonado su existencia saprofítica, convirtiéndose en parásitos ocasionales u obligados. Epidemio lógicamente los dermatofitos se clasifican, según el habitar en que viven habitualmente, en: - Geófilos: pueden ser de vida estrictamente 220 Diagnóstico de la dermarofirosis en el perro y el gato. saprofita, sobre la queratina presente en el suelo, siendo habitualmente no patógenos o bien pueden parasitar ocasionalmente al hombre y a los animales. Entre estos últimos se encuentra Microsporum gypseum. - Zoófilos: tienen su hábitat en los animales aunque ocasionalmente pueden encontrarse en el suelo. Incluye hongos como Microsporum canis o Trichophyton mentagrophytes. - Antopófilos: sólo pueden vivir parasitando al hombre. Es el caso del género Epidermophyton. FORMAS CLÍNICAS Microsporum canis origina la típica forma anular (Fig. 1) o bien una foliculitis-forunculosis en el perro y el gato, dermatitis miliar y alopecia irregular en el gato y muy raramente pseudomicetoma. Microsporum gypseum y Trichophyton mentagrophytes pueden causar foliculitis-forunculosis, kerion (Fig. 2) Y muy raramente onicomicosis o pseudomicetoma. Una última presentación clínica frecuente en personas, pero de aparición muy rara en perro y gato son las reacciones en «ides» o derrnatofítides, lesiones no parasitadas, a distancia, consistentes en múltiples vesículas estériles que son el resultado de reacciones de hipersenbilidad al derrnatofito y que llevan, por tanto, un paralelismo evolutivo con el foco infeccioso primario. RECOGIDA DE MUESTRAS Las muestras siempre han de tomarse de la zona periférica de la lesión, dado que el proceso clínico origina una reacción inflamatoria de la piel que puede destruir el hongo. Con el fin de reducir al máximo la contaminación cutánea superficial se limpia la zona de donde se va a tomar la muestra con alcohol de 70 0. - Pelos: se toman, con unas pinzas, del borde de la lesión. La porción basal del pelo contiene el mejor material. En portadores asinromáticos (generalmente gatos con M. canis) o en lesiones extensas puede tomarse la muestra pasando un cepillo de dientes previamente esterilizado o inmerso J.R. García E. Ynaraja en clorhexidina al 2% (técnica de MacKenzie). 24 - Uñas: las mejores muestras se obtienen mediante raspado o pequeñas piezas de corte en las zonas cercanas al lecho ungueal. - Piel: los dermatofitos crecen sobre las células foliculares o epidérmicas. Por tanto, en lesiones con poco pelo, puede obtenerse una buena muestra mediante un raspado de las zonas periféricas. Debido a la reacción inflamatoria, si esta muestra se observa al microscopio, podrán apreciarse, además de las esporas fúngicas, neutrófilos, macrófagos, linfocitos y células plasmáticas. PROCEDIMIENTOS DIAGNÓSTICOS 1. Lámpara de Wood Aproximadamente el 50% de las infecciones producidas por M. canis producen una fluorescencia verde-amarillenta al ser expuestas a una fuente de luz ultravioleta. Se pueden producir falsos positivos debido a costras, queratina o diversos medicamentos. En las infecciones verdaderas los pelos individualmente deben presentar fluorescenera, Para este procedimiento se pueden utilizar las lámparas de Wood, con dos tubos situados a cada lado de una lupa o bien linternas de luz ultravioleta cuyo coste es mucho menor. Para utilizar la lámpara de Wood correctamente, hay que dejarla calentar, una vez encendida, durante S ó 10minutos, tiempo necesario para que se estabilice la longitud de onda de la luz. Después se exponen las lesiones a la luz durante otros :> minutos, dado que en algunas ocasiones, la fluorescencia puede tardar este tiempo en aparecer. La causa no se conoce, aunque se sospecha que puede ser debido a la presencia de bajas concentraciones del rnetabolito fúngico que interfiere con la luz ultravioleta. Los casos positivos nos ayudarán a comenzar cuanto antes el tratamiento y a elegir las muestras para el cultivo. 2. Examen directo El examen directo de los pelos, escamas o raspado de uñas permite la observación de artrospo222 Diagnóstico de la derrnatofitosis en el perro y el gato. Fig. 1. Dermatofitom con la típicaforma anular, en un CachOTTO de Boxer. Fig. 2. Kerion, foliculitis supurativa consecuencia de una inftcción fúngica y bacteriana. Fig. 3 .. Pelo inftctado por M. canis. La superficie está cubierta por artroconidias. Aparecen también querasinocitos degenerados. CUNICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 11 Número 4 Octubre/Diciembre 1991 ras o hifas sobre el material parasitado. Para favorecer la identificación de éstas, se pueden utilizar sustancias que disgregan la queratina y aclaran la preparación. Habitualmente se utiliza el KOH en una concentración que va desde el 10% hasta el 40% según sea la naturalza de la queratina: para estructuras fácilmente destruibles, como el pelo, es preferible utilizar una baja concentración, mientras que en el material con hiperqueratosis, como las uñas, ésta debe ser alta. El procedimiento consiste en poner el material a examinar sobre un portaobjetos, añadir 1 ó 2 gotas de la solución de KOH, poner un cubreobjetos y calentar suavemente la preparación durante un minuto. En cualquier caso hay que tener en cuenta que la mayoría de las invasiones fúngicas en pequeños animales son ectótricas; es decir, las hifas pueden verse dentro de la cutícula del pelo, pero crecen hacia afuera, formando artoconidias que aparecen en un patrón de mosaico en la superficie del pelo (Fig.3). Sólo en un reducido número de casos, en infecciones producidas por determinadas especies de Trichophyton se producen infecciones endótricas, en las cuales se forman conidias dentro de la cutícula del pelo sin romperse ésta. Por estas razones no es necesario emplear soluciones queratinolíticas y aclarantes y sólo utilizando un procedimiento de tinción ligeramente aclarante como es el caso del azul algodón lactofenol es suficiente para observar las artrosporas. El examen directo presenta importantes obstáculos, debido al gran número de artefactos que pueden aparecer en la preparación: melanosomas, queratinocitos degenerados, cristales de colesterol. .. Además, varios hongos, como es el caso del género Alternana, pueden presentarse en animales sanos como contaminantes accidentales, siendo imposible diferenciarlos de los dermatofitos en el examen directo. Por todo lo expuesto, el examen directo es diagnóstico en menos de un 30% de los casos, lo que unido a la alta posibilidad de falsos positivos hacen poco recomendable este método como diagnóstico definitivo. 3. Cultivo Los medios de cultivo habitualmente utilizados Diagnóstico de las derrnarofitosis en el perro yel gato. toman como base el agar glucosado y peptonado de Sabouraud. A partir de él se pueden agrupar 25 los medios en dos tipos: - Agar Sabouraud: medio que generalmente lleva añadido un antibiótico (gentamicina y/o cloranfenicol) para minimizar la posibilidad de un crecimiento bacteriano. Este es el medio estándar de cultivo fúngico, y en él crecerán todo tipo de hongos. Su ventaja radica en que al ser transparente, permite observar el color del reverso de la colonia, lo que es de gran importancia para la identificación final. - DTM (Derrnatophyte Test Medium): es un agar Sabouraud al que se le ha añadido un antibiótico (generalmente cloranfenicol), un fungstático (cicloheximida) y un indicador de pH (rojo fenol). Este medio disminuye la posibilidad de crecimiento bacteriano y de hongos contaminantes sensibles a la cicloheximida. El rojo fenal constituye una ayuda adicional al virar del amarillo al rojo en presencia de un medio alcalino. Los dermatofitos utilizan como substrato metabólico las proteínas y al digerirlas eliminan metabolitos alcalinos, lo que produce un cambio de color del amarillo al rojo. Este cambio debe coincidir con el comienzo de crecimiento de la colonia y, por lo general, debe ser completamente evidente entre los 2 a 8 días del inicio del cultivo. No hay que olvidar que otros hongos cuyo primer substrato es la glucosa utilizan, al agotarse ésta, las proteínas produciendo un viraje tardío (más de 10 días) del color del medio. Por tanto, las colonias deben ser examinadas diariamente para apreciar el cambio inicial de color. El DTM es un medio que reduce la dificultad de identificación de los derrnatofitos pero su observación macroscópica no es definitiva como método diagnóstico: hay varias especies de Candida, Aspergz¡lus, Geozrich urn y diversas bacterias que pueden provocar en los primeros días, un viraje al rojo del medio. Por último, hay que recordar que el DTM, al ser un medio coloreado, no permite la observación del reverso de las colonias. Comercialmente, estos medios pueden adquirirseen placas de Petri, en tubos o en láminas dobles (Mycoline). En nuestra clínica el procedimiento habitual es el cultivo primario en «Micolines'" (Bio Merieux), 223 J.R. Garda E. Ynaraja 26 Fig. 4. Preparación de una muestra. Con unas pinzas se presiona ligeramente el celofán sobre el cultivo. Microsporum s. Gentamicina Cloranfenicol Fig. 6. Colonia de M. canis en Agar Sabouraud cuya ventaja es la presencía de dos láminas, una de Agar Sabouraud con gentamicina y cloranfenicol, y otra de DTM. El inconveniente es que, debido a la disposición de las láminas, no es posible observar el color dei reverso de la colonia. En caso de que esto sea necesario para la identificación, realizamos un segundo cultivo de la colonia aislada en una placa de Perri con Agar Sabouraud. IDENTIFICACIÓN Para el diagnóstico de una dermatofitosis no basta con la identificación macroscópica sino que es necesaria una observación microscópica del hongo. Ambos procedimientos son completamentarios y, en muchos casos, serán necesarios los dos simultáneamente para llegar a un diagnóstico definitivo. 224 Diagnóstico de la derrnarofitosis en el perro yel gato, Fig. 5. Preparación de una muestra. El celofán se sitúa sobre una gota de azul algodón tacsofenol. Microsporum Fig. 7. Colonia de M: canis en DTM. El medio ha virado a rojo. Las colonias de hongos deben examinarse después de que el micelio tenga 1 cm de diámetro, pero antes de que se produzca la confluencia de diferentes colonias individuales. Macroscópicamente hay que fijarse en la textura, pigmento y velocidad de crecimiento de la colonia. Además, es necesario examinar el micelio microscópicamente, lo que se ve facilitado con una tinción de azul algodón lactofenol, aunque sirven otras tinciones como el verde brillante y tinciones de tipo Romanowsky. La toma de muestras para la identificación microscópica se realiza fácilmente del siguiente modo: - Se pone una gota de azul algodón Iactofenol o de la tinción elegida sobre un portaobjetos. - Se corta un trozo de celofán y, cogiéndolo con unas pinzas, se presiona ligeramente la parte adhesiva sobre la colonia fúngica. No hay que ejercer una excesiva presión para evitar tomar una muestra de micelio demasiado gruesa (Fig. 4). CLINICA VETERINARlA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 11 Número 4 Octubre/Diciembre 1991 Fig. 8. Macroconidias de M. gypseum. Fig. 9. Macroconidia de T. mentagrophytes. Forma de cigarropuro. Alternaria S. Gentamicina Cloranfenicol Fig. 10. Colonia de Alternaria en Agar Sabouraud. Diagnóstico de las dermarofitosis en el perro yel gato. 27 Fig. 11. Macroconidias de Alternaria. Forma de maza. En algunos casos, similares a Microsporum. Se diferencian por los septos transversales. Fig. lZ. Colonia de Penicillium en Agar Sabouraud. Fig. 13. Conidióforos de Penicillium. Aspecto arboriforme. 225 ].R. García E. Ynaraja 28 Fig. 14. Colonia de Aspergillus. - Se sitúa el trozo de celo sobre la gota de tinción; se coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio (Fig. 5). - Si se desea conservar las preparaciones durante un tiempo mayor, pueden sellarse con laca de uñas transparente. A la hora de hacer la identificación hay que recordar que los dermatofitos sufren habitualmente un proceso de mutación en los cultivos a medida que van envejeciendo, conocido como pleomorfismo, por el cual existe una pérdida parcial o total de la esporulación con transformación de las colonias en una masa de micelio estéril. Todas las características de la cepa se pierden haciendo imposible su identificación. Por esta razón, es necesario observar los cultivos con frecuencia, tanto para su identificación como para el posterior aislamiento de una colonia concreta. IDENTIFICACIÓN DE DERMATOFITOS 1. Microsporum canis: es un derrnatofito zoofílico, aunque frecuentemente produce infecciones en personas. Aproximadamente la mitad de las lesiones presenta fluorescencia verde-amarillenta. - Aspecto macroscópico: en Agar Sabouraud las colonias son de blancas a color ante, de textura algodonosa (Figs, 6y 7), y con un reverso que va del amarillo al naranja o naranja-marrón. - Aspecto microscópico: se observan hifas, con 226 Diagnóstico de la derrnarofitosis en el perro y el gato. abundante presentación de macroconidias; éstas tienen forma de huso, con paredes gruesas, equinuladas, formando un botón en la parte distal. Las rnacroconidias contienen entre 6 y 15 células. Las rnicroconidias son de presentación rara; son pequeñas, unicelulares y claviformes o elongadas. 2. Microsporum gypseum: es un derrnatofito geofílico, pero que frecuentemente infecta tanto a animales como a personas. Las colonias no presentan fluorescencia o si lo hacen ésta es muy mate. - Aspecto macroscópico: las colonias son de . crecimiento rápido, con una textura de pulverulenta a granular, y color de ante a canela. El reverso presenta una coloración entre amarillo pálido y tostado. - Aspecto microscópico: existen gran cantidad de rnacroconidias de aspecto grande, elipsoide, con paredes finas que contienen entre 3y9 células, siendo más abundantes las de 6 células. Estas macroconidias carecen del botón terminal que presentan las de M. canis (Fig. 8). Pueden observarse microconidias unicelulares, sésiles y claviforrnes. 3. Trichophyton mentagrophytes: es un derrnatofito generalmente zoofílico, que frecuentemente infecta a las personas y que puede vivir saprofíricamente en el suelo. No produce fluorescencia con la lámpara de Wood. - Aspecto macroscópico: las colonias zoofílicas presentan una superficie plana de pulverulenta a granular, de color blanco a cremoso y con un reverso marrón, tostado o de color vino. - Aspecto microscópico: la principal característica es la producción de microconidias globosas, que habitualmente aparecen en forma de racimo. De aparición menos frecuente son las macroconidias con forma de cigarro puro y de paredes finas y lisas (Fig. 9). CONTAMINANTES Vamos a revisar únicamente alguno de los contaminantes más habituales que pueden ser identificados por la aparición de formas reproductivas características. -Alternaria: Macroscópicamente aparecen como colonias algodonosas de un color que va del gris al negro (Fig. 10). Las conidias aparecen con formas globosas, piriformes u ovaladas. Son mul- CLINICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 11 Número 4 Octubre/Diciembre 1991 ticelulares y tienen divisiones tanto longitudinales como transversarles (Fig. 11). En nuestra clínica es el contaminante más frecuente. - Penici/lium: El color de la colonia comienza siendo blanco y posteriormente evoluciona hacia una gran variedad de colores, aunque más frecuentemente hacia el gris (Fig. 12). La textura suele ser algodonosa. Microscópicamente los conidióforos presentan un aspecto arboriforme, con fialoconidias unicelulares en sus bordes (Fig. 13). - Aspergi/lus: El crecimiento inicial es de color blanco para posteriormente evolucionar hacia diversos colores más oscuros, con un aspecto de pulverulento a algodonoso (Fig. 14). Microscópicamente, desde el conidióforo, con forma esférica, se producen cadenas de fialoconidias en todas direccrories. Diagnóstico de las derrnarofirosis en el perro yel gato. CONCLUSIÓN 29 El diagnóstico de las derrnatofitosis pasa por el estudio complementario del aspecto macroscópico y microscópico de sus colonias. Si bien es cierto que en algunos casos los tratamientos iniciados sin una identificación previa del hongo causante ofrecen una cierta mejoría por los efectos antiinflarnatorios de algunos fármacos, no lo es menos que la no identificación conduce, en muchas ocasiones al error diagnóstico, al fracaso terapéutico y a soslayar posibles problemas epidemiológicos tanto en animales como en el hombre. BIBLIOGRAFÍA 1. Bevier Diane E. Infecrious skin disease in rhe dog anc the car IV. Proceedins AAHH's 57th Annua! Meering. 1990. 2. Camacho].C. Dermatosis fitoparasirarias en: Plan de Perfeccionamiento en dermatología. Schering Corporarion. 1990. 3. Carrer G.R. Dermatophytes and Dermarophyrosis, en Diagnosric Procedures in vererinary bacreriology and micology fourrh ed. Ed. Thomas. 1984. 4. Cowelland Tyler.Curaneous and subcuraneous lesions, En Diagnosric citology of rhe dog and the car. American Vererinary Publicarions. 1989. 5. Moriello Karen A. 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