Experimental study of the influence of salpinectomy on the ovarian reserve of mature female white rats = Експериментальне дослідження впливу сальпінгектомії на оваріальний резерв статевозрілих самиць білих щурів

181 ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНІ ПИТАННЯ БІОЛОГІЇ ТА МЕДИЦИНИ УДК 618.12-089.87:618.179:618.177:618.177-089.888.11-092.9 DOI http://dx.doi.org/10.5281/zenodo.17314413 1О. М. Носенко, 2О. А. Макарова, 1А. О. Варабіна ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ ВПЛИВУ САЛЬПІНГЕКТОМІЇ НА ОВАРІАЛЬНИЙ РЕЗЕРВ СТАТЕВОЗРІЛИХ САМИЦЬ БІЛИХ ЩУРІВ 1Одеський національний медичний університет 2ДУ "Інститут стоматології та щелепно-лицевої хірургії", Одеса Authors’ Information Носенко Олена Миколаївна ORCID: 0000-0002-7089-2476 Макаренко Ольга Анатоліївна ORCID:0000-0001-8029-4392 Варабіна Антоніна Олександрівна ORCID: 0000-0003-1807-2080 Summary. Nosenko O. M., Makarova O. A., Varabina A. O. EXPERIMENTAL STUDY OF THE INFLUENCE OF SALPINECTOMY ON THE OVARIAN RESERVE OF MATURE FEMALE WHITE RATS. – The Odessa National Medical University; e-mail: [email protected] aim of the study was to experimentally determine the effect of salpingectomy on the level of anti-Müllerian hormone (AMH) in sexually mature female white rats. Material and methods. The experiment included 20 sexually mature female white Wistar rats aged 4 months, weighing 210-230 g at the beginning of the study. Female rats were randomly divided into three experimental groups: a control group of 5 intact animals aged 4 months, a group of 10 female rats with removal of one fallopian tube at the age of 4 months, a group of 5 female rats with removal of both fallopian tubes at the age of 4 months. Blood was taken from all animals to determine the level of AMH at the age of 4 months and 7 months, i.e. in the operated animals before surgery and 3 months after unilateral/bilateral salpingectomy. AMH levels in blood serum were determined using enzyme-linked immunosorbent assay. Results. The initial levels of AMH in the studied groups of rats aged 4 months did not have significant differences and were (127.17±18.11) pg/ml in the control group, (108.59±7.00) pg/ml in the group with unilateral salpingectomy, (117.64±14.86) pg/ml in the group with bilateral salpingectomy (p>0.05), after 3 months they were respectively (120.84±15.59) pg/ml, (73.61±4.69) pg/ml (p<0.02), (65.56±8.17) pg/ml (p<0.01). The level of AMH after surgery did not depend on the volume of intervention - unilateral or bilateral salpingectomy (p>0.05), possibly due to a small sample. Conclusions. Unilateral or bilateral salpingectomy in sexually mature female Wistar white rats leads to a decrease in ovarian reserve over time, which is manifested by a decrease in AMH levels. Keywords: white rats, experimental study, salpingectomy, ovarian reserve, anti-Müllerian hormone. Резюме. Носенко О. М., Макарова О. А., Варабіна А. О. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ ВПЛИВУ САЛЬПІНГЕКТОМІЇ НА ОВАРІАЛЬНИЙ РЕЗЕРВ СТАТЕВОЗРІЛИХ САМИЦЬ БІЛИХ ЩУРІВ. Мета дослідження – експериментально визначити вплив сальпінгектомії на рівні антимюлерового гормону (АМГ) у статевозрілих самиць білих щурів. Матеріал і методи. В експеримент було включено 20 статевозрілих самиць білих щурів лінії Wistar віком 4 міс., вагою 210-230 г на початок дослідження. Самиць щурів випадковим методом поділили на три дослідні групи: контрольна група з 5 інтактних тварин віком 4 міс., група з 10 самиць щурів з видаленням однієї маткової труби у віці 4 міс., група з 5 самиць щурів з видаленням двох маткових труб у віці 4 міс. -------------------------------------------- © Носенко О. М., Макарова О. А., Варабіна А. О. 182 У всіх тварин була забрана кров для визначення рівня АМГ у віці 4 міс. і 7 міс., тобто у прооперованих тварин перед оперативним втручанням та через 3 міс. після однобічної/двобічної сальпінгектомії. Рівні АМГ у сироватках крові визначали за допомогою імуноферментного аналізу. Результати. Вихідні рівні АМГ у досліджуваних групах щурів віком 4 міс. не мали вірогідних відмінностей і склали у контролі (127,17±18,11) пг/мл, у групі з однобічною сальпінгектомією – (108,59±7,00) пг/мл, у групі з двобічною сальпінгектомією – (117,64±14,86) пг/мл (p>0,05), через 3 міс. відповідно дорівнювали (120,84±15,59) пг/мл, (73,61±4,69) пг/мл (р<0,02), (65,56±8,17) пг/мл (p<0,01). Рівень АМГ після операції не залежав від об’єму втручання – однобічної або двобічної сальпінгектомії (p>0,05), можливо, внаслідок малої вибірки. Висновки. Проведення однобічної або двобічної сальпінгектомії у статевозрілих самиць білих щурів лінії Wistar приводить з часом до зниження оваріального резерву, що проявляється зниженням рівнів АМГ. Ключові слова: білі щури, експериментальне дослідження, сальпінгектомія, оваріальний резерв, антимюлерів гормон. У гінекологічній практиці радикальні операції на маткових трубах найчастіше виконуються з приводу трубної вагітності, запальних захворювань та при непрохідності маткових труб у жінок з безпліддям.Захворювання маткових труб у 20% випадків є основним чинником безпліддя. Сактосальпінкс, спричинений дистальною оклюзією маткових труб, призводить до накопичення рідини в трубі(ах), і є особливо важкою формою захворювання маткових труб, що негативно впливає навіть на результати допоміжних репродуктивних технологій (ДРТ) [1-3]. Дійсно, при сактосальпінксівідбувається накопичення серозної або гнійної рідини, заблокованої в фаллопієвих трубах через їх дистальну оклюзію, переважно після інфекційного захворювання. Цей стан, який може досягати частоти 30% у жінок з трубним безпліддям, призводить до значного зниження рівня імплантації та вагітності, а також до збільшення рівня викиднів у пацієнток, які перенесли ембріональний перенос, порівняно з тими, хто не має сактосальпінксу [4]. Вважається, що хірургічне втручання на маткових трубах може покращити результати ДРТ у жінок з сактосальпінксом [2, 3, 5]. При цьому P. Capmas. etal. (2021) [6] не виявили різниці у відповіді яєчників на стимуляцію після сальпінгектомії, окрім зниження рівня антимюлерового гормону (АМГ) порівняно з відсутністю хірургічного втручання. Однак, за даними літератури, проведення сальпінгектомії до або після отримання ооцитів все ще є суперечливим, особливо у пацієнток старшого віку або зі зниженим оваріальним резервом. Навіть у молодих жінок з нормальним оваріальним резервом деякі клініцисти стурбовані тим, що сальпінгектомія може вплинути на оваріальний резерв. Вказується, що чим довший час між операцією та ДРТ, тим менша кількість отриманих ооцитів і нижчі накопичені показники вагітності та живонароджуваності [6]. У той же час метааналіз A. A.Mohamedetal. (2017) [4] дійшов висновку, що сальпінгектомія, здається, не зменшує оваріальний резерв у короткостроковій перспективі. Однак довгостроковий вплив сальпінгектомії на оваріальний резерв залишається невизначеним. M.Kobayashietal. (2022) [8] провели метааналіз досліджень у базах даних PubMed, EMBASE, Web of Science, Dynamedplus та Cochrane Controlled Trials Register з моменту їх створення до грудня 2020 року для визначеннявпливу сальпінгектомії на оваріальний резерв. Були включені дослідження, які порівнювали рівні АМГ та/або кількість антральних фолікулів (АКФ) між контрольною групою та групою сальпінгектомії або до та після операції.Мета-аналіз, що порівнював рівні АМГ до та після операції у тих самих пацієнтів, не показав значного зниження ні в одному випадку, незалежно від того, чи була це однобічна чи двобічна сальпінгектомія. У мета-аналізі, що порівнював рівні до та після двобічної сальпінгектомії, також не спостерігалося значного зниження АФК. Натомість, у дослідженні випадок-контроль у групі сальпінгектомії спостерігалися значно нижчі рівні АМГ у всіх мета-аналізах однобічної та двобічної хірургії (середня різниця: -0,31, 95% ДІ: - 183 0,55, -0,07), лише у випадках однобічної сальпінгоектомії (середня різниця: -0,28, 95% ДІ: - 0,50, -0,06) та лише у випадках двобічної сальпінгектомії (середня різниця: -0,71, 95% ДІ: - 1,19, -0,23). Група сальпінгектомії, яка включала однобічні та двобічні випадки, мала значно нижчу АФК порівняно з контрольною групою без хірургічного втручання (середня різниця: -1,31, 95% ДІ: -2,13, -0,48). Автори дійшли до висновку, що хоча це й не остаточно, схоже, що пацієнтки, які перенесли сальпінгектомію (однобічну або двобічну), мають знижений оваріальний резерв. Мета дослідження – експериментально визначити вплив сальпінгектомії на рівні антимюлерового гормону у статевозрілих самиць білих щурів. Матеріал і методи Дослідження виконано в рамках науково-дослідної роботи кафедри акушерства та гінекології Одеського національного медичного університету «Новітні лікувальнодіагностичні та профілактичні підходи при захворюваннях репродуктивної системи жінки та вагітності високого ризику» (2023-2027 рр., № державної реєстрації 0122U201370). Проведення дослідження ухвалено Комісією з питань біоетики Одеського національного медичного університету, протокол № 17 від 01.11.2023. Маніпуляції над тваринами проводили відповідно до вимог «Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментальних та інших наукових цілей» (Страсбург, 1986) [9], Наказу України № 249 від 01.03.2012 «Про затвердження Порядку проведення науковими установами дослідів і дослідів на тваринах» [10]. Експериментальні дослідження виконувалися на базі лабораторії біохімії та віварію ДУ "Інститут стоматології та щелепнолицевої хірургії НАМН України». В експеримент було включено 20 статевозрілих самиць білих щурів лінії Wistar віком 4 міс., вагою 210-230 г на початок дослідження. Щури були обрані як об'єкт дослідження у зв'язку зі схожістю з жінками закономірностей регуляції оваріально-менструального циклу, принципів будови системи кровота лімфопостачання, іннервації репродуктивних органів, а також завдяки їхньому добре охарактеризованому естральному циклу та безпечному поводженню. Коротка та точна тривалість естрального періоду щурів (4-5 днів) також робить їх дуже придатними і дозволяє проводити оцінку змін у ході експерименту за невеликий термін [11, 12]. Експериментальних тварин містили у стандартних умовах у пластикових клітинах з дрібною дерев'яною стружкою по 5 тварин у клітині. Щури знаходилися при дозованому освітленні (12:12 годин, світло в денний час) з контрольованим температурним режимом на стандартному харчуванні (корм Versele-LagaCompleteRat& Mouse для щурів і мишей), мали вільний доступ до води та їжі. Експеримент проводили у весняний період. Тривалість експерименту склала 3 міс. Самиць щуріввипадковим методом поділили на три дослідні групи: контрольна група К(n=5) –інтактні тварини віком 4 міс.; група 1(n=10) – самиці щурів з видаленням однієї маткової труби у віці 4 міс.; група 2(n=5)– самиці щурів з видаленням двох маткових труб. У всіх тварин була забрана кров для визначення рівня АМГ у віці 4 міс. і 7 міс., тобто у прооперованих тварин через 3 міс. після однобічної/двобічної сальпінгектомії.Рівні АМГ у сироватках крові визначали за допомогою імуноферментного аналізуна мультифункціональному мікропланшетному рідері Thermo Scientific™ Varioskan™ LUX (США) з використанням комерційного набору «Щурячий AMH (антимюлерів гормон) ELISA Kit ( E-EL-R3022)» (США) (чутливість 37,5 пг/мл, діапазон виявлення 62,5-4000 пг/мл). Оперативне втручання проводили з дотриманням правил асептики та антисептики під одноразовим внутрішньом'язовим наркозом тіопенталу (рис. 1). Тварин фіксували у положенні на спині. Шкіру на животі вибривали, обробляли 70%-им хлоргексидиновим спиртом. Проводили серединну лапаротомію, довжина розрізу складала трохи більше 3 см (див. рис. 1А). Маткові роги та придатки виводили в рану та обкладали стерильними серветками, змоченими у 0,9% розчині натрію хлориду. Виконували необхідний етапу дослідження оперативний об’єм –сальпінгектомію (див. рис. 1Б). Операційну рану вшивали пошарово. Після ушивання рану на шкірі обробляли йодинолом (див. рис. 1В). Тривалість операції становила 8-10 хв. При виконанні всіх етапів операції дотримувалися принципів 184 асептики та антисептики, мінімізації травм тканин і крововтрати, максимального скорочення часу операції, не допускали пошкодження тканини яєчників. Видалені маткові труби фіксували у нетральному формаліні (див. рис. 1Г) і досліджували гістологічно. Рис. 1. Експериментальне дослідження впливу сальпінгектомії на оваріальний резерв статевозрілих самицьбілих щурів: А – серединна лапаротомія; Б – етап видалення маткової труби; В – самиці щурів після операції, рана на шкірі оброблена йодинолом; Г – видалені маткові труби. При статистичній обробці матеріалу розраховували середнє (М) та похибку стандартного відхилення (±SEM). Для подальшого статистичного опрацювання використано t-критерій Стьюдента. Статистичне опрацювання отриманих результатів здійснювали за допомогою програми EXCELРезультат вважали значущим при р<0,05. Результати та їхобговорення Вихідні рівні АМГ у досліджуваних групах щуріввіком 4 міс. не мали вірогідних відмінностей і склали у групі К (127,17±18,11) пг/мл, у дослідній групі 1 – (108,59±7,00) пг/мл, у досліднійгрупі 2 – (117,64±14,86) пг/мл (p>0,05). Через 3 міс. у віковій групі 7 міс. щурів групи контролю рівень АМГ вірогідно не змінився і дорівнював (120,84±15,59) пг/мл. У дослідній групі1 через 3 міс. після однобічної сальпінгектомії АМГ складав (73,61±4,69) пг/мл, у дослідній групі 2 після двобічної сальпінгоектомії – (65,56±8,17) пг/мл (р1-к<0,02, p2-к<0,01, p1-2>0,05) (рис. 2). А Г Б В 185 Рис. 2. Сироваткові рівні АМГ у самиць щурів в динаміці експерименту. Рівень АМГ після операції не залежав від об’єму втручання – однобічної або двобічної сальпінгектомії (p>0,05), можливо, внаслідок малої вибірки. Визначення АМГрутинно використовується для оцінки резерву та функції яєчників у жінок тасамиць мишей та щурів у будь-якому віці. Це єдиний показник резерву яєчників, на який не впливає механізм зворотного зв'язку гіпоталамо-гіпофізарно-гонадної осі, і його можна перевіряти у фолікулярній та лютеїновій фазі жіночого менструального циклу та різних фазах естрального циклу мишей та щурів [13-16]. Проведене дослідження вперше оцінило в експерименті на статевозрілих самицях білих щурів вплив сальпінгектомії на оваріальний резерв і показало, що з часом рівень АМГ знижується у прооперованих тварин, незалежно від об’єму оперативного втручання – однобічної або двобічної сальпінгектомії. Висновки Проведення однобічної або двобічної сальпінгектомії у статевозрілих самиць білих щурів лінії Wistar приводить з часом до зниження оваріального резерву, що проявляється зниженням рівнів АМГ. Перспективи подальших досліджень. Визначення впливу однобічної та двобічної сальпінгектомії на оваріальний резерв у жінок. Література/References: 1. Ovarian Follicular Response Is Altered by Salpingectomy in Assisted Reproductive Technology: A Preand Postoperative Case-Control Study / Reitz L., Balaya V., Pache B., et al. // J. Clin. Med. – 2023. – Vol. 12 (15): 4942. 2. Surgical treatment for tubal disease in women due to undergo in vitro fertilisation / Melo P., Georgiou E. X., Johnson N., et al. // Cochrane Database Syst Rev. – 2020. – Vol.10 (10):CD002125. 3. El-Kharoubi AF. Tubal Pathologies and Fertility Outcomes: A Review / A. F. El-Kharoubi // Cureus. – 2023. – Vol. 15 (5): e38881. 4. Ovarian reserve after salpingectomy: a systematic review and meta-analysis / Mohamed A. A., Yosef A. H., James C., et al. // Acta Obstet. Gynecol. Scand. – 2017. – Vol. 96 (7). – P.795-803. 5. Schlaff W. D. A reconsideration of salpingectomy for hydrosalpinx before in vitro fertilization: why bother? / W. D. Schlaff // Fertil. Steril. - 2019. - Vol. 111 (4). - P. 650-651. 6. Capmas P. Management of Hydrosalpinx in the Era of Assisted Reproductive Technology: A Systematic Review and Meta-analysis / P. Capmas, E. Suarthana, T. Tulandi // J. Minim. Invasive Gynecol. – 2021. – Vol. 28 (3). – P. 418-441. 7. The influence of timing of oocytes retrieval and embryo transfer on the IVF-ET outcomes in patients having bilateral salpingectomy due to bilateral hydrosalpinx / Yilei H., Shuo Y., Caihong M., et al. // Front Surg. – 2023. – Vol. 9:1076889. 186 8. Effect of salpingectomy on ovarian reserve: A systematic review and metaanalysis / Kobayashi M., Kitahara Y., Hasegawa Y., et al. // J. Obstet. Gynaecol. Res. – 2022. – Vol. 48 (7). – P. 1513-1522. 9. European convention for the protection of vertebrale animals used for experimental and other scientific purposes. Strasburg. Council of Europe. - 1986. Vol. 123. - P. 51. 10. Наказ України № 249 від 01.03.2012 «Про затвердження Порядку проведення науковими установами дослідів і дослідів на тваринах». Міністерство освіти і науки, молоді та спорту України, 2012. V. Моніторинг виконання наукових експериментів [Order on Ukraine No. 249 dated 03/01/2012 “On the approval on the Procedure for carrying out research and investigations on animals by scientific institutions.” Ministry on Education and Science, Youth and Sports on Ukraine. 2012. V. Monitoring on scientific experiments]. 11. Kokane S. S. Sex Differences and the Role of Estradiol in Mesolimbic Reward Circuits and Vulnerability to Cocaine and Opiate Addiction / S. S. Kokane, L. I. Perrotti // Front Behav. Neurosci. – 2020. – Vol. 14. – P. 74. 12. Ajayi A. F. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update / A. F. Ajayi, R. E. Akhigbe // Fertil Res. Pract. –2020. – Vol. 6. – P. 5. 13. Novel role for anti-Müllerian hormone in the regulation of GnRH neuron excitability and hormone secretion / Cimino I., Casoni F., Liu X., et al. // Nat. Commun. – 2016. – Vol. 7. – P. 10055. 14. Relationship between serum müllerian-inhibiting substance and other reproductive hormones in untreated women with polycystic ovary syndrome and normal women / Cook C. L., Siow Y., Brenner A. G., Fallat M. E. // Fertil. Steril. –2002. – Vol. 77 (1). – P. 141-6. 15. Filippou P. Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS? // P. Filippou, R. Homburg // Hum. Reprod. Update. – 2017. – Vol. 23 (4). – P. 421-432. 16. Expression of the anti-Mullerian hormone, kisspeptin 1, and kisspeptin 1 receptor in polycystic ovary syndrome and controlled ovarian stimulation rat models / Risvanli A., Ocal H., Timurkaan N., et al. // Bosn. J. Basic Med. Sci. – 2020. – Vol. 20 (1). 37-43. Внесок авторів Носенко О.М. – концептуалізація (ААА); методологія (ВВВВ); формальний аналіз (ССС). Макаренко О. А. – збір даних (ЕЕЕ, ВВВ); методологія (ВВВВ); Варабіна А.О. – збір даних (ЕЕЕ, ВВВ); написання статті (ССС, ДДД): статистична обробка матеріалів (ААА, ВВВ, ССС). Всі автори прочитали й погодилися з опублікованою версією рукопису. Фінансування Це дослідження не отримало зовнішнього фінансування. Висновок комісії по біоетиці Для проведення дослідження отримано позитивне рішення комісії з біоетики Одеського національного медичного університету (протокол № 17 від 01.11.2023), дотримано основних морально-етичних принципів Гельсінської декларації Всесвітньої медичної асоціації з біомедичних досліджень. Заява про поінформовану згоду Від пацієнта (-ів) було отримано письмову поінформовану згоду на обробкуперсональних даних та їх подальше використання. Заява про доступність даних Вся інформація знаходиться у відкритому доступі, дані щодо конкретного пацієнтаможуть бути отримані на запит у провідного автора. Конфлікт інтересів Автори заявляють про відсутність конфлікту інтересів. Застосування штучного інтелекту – не застосовували Робота надійшла в редакцію 24.08.2025 року. Рекомендована до друку на засіданні редакційної колегії після рецензування