Variación del perfil polifenólico de diatomeas Phaeodactylum tricornutum cultivadas en agua de mar enriquecida en cobre (II)

VARIACIÓN DEL PERFIL POLIFENÓLICO DE DIATOMEAS Phaeodac ylum ico nu um CULTIVADAS EN AGUA DE MAR ENRIQUECIDA EN COBRE (II) A oa López, Milag os Rico, A idane González, Magdalena San ana, Melcho González y No ma Pé ez. Depa amen o de Química, Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, Campus de Ta i a, 35017 Las Palmas de G an Cana ia, Cana y Islands, Spain. e-mail: [email p o ec ed] TABLA DE CONTENIDOS • In oducción • Técnicas • Cul i o • SPE- HPLC • DPPH • Resul ados y discusión • C ecimien o • Concen ación de poli enoles • Conclusiones INTRODUCCIÓN -Phaeodac ylum ico nu um- Pe enecenalaclasedia omeas,quesonalgas unicelula es p esen es en abundancia en el i oplanc on. Las dia omeas se ca ac e izan po posee una pa ed celula imp egnada en sílice. Phaeodac ylum ico nu um es la única especie que compone el géne o Phaeodac ylum.Seencuen aen dis in as zonas cos e as al ededo del mundo, con g andes a iaciones de salinidad. Debido a que ue de las p ime as dia omeas en la que se desc ibió la secuencia genómica comple a ha sido some ida a mul i ud de ensayos. INTRODUCCIÓN -Phaeodac ylum ico nu um- P. T ico nu um puede exis i en di e en es mo ologías. Las condiciones ambien ales in luyen en los cambios en la mo ología y el amaño de es as algas (Ma ino e al., 2007). Se pueden p oduci esos cambios en condiciones de al as concen aciones de cob e (Ma kina y Aizdaiche , 2006 ). * (1) De Ma ino e al., (2007) Jou nal o Phycology. 43:992-1009. (2) Ma kina e al., (2006) Russian Jou nal o Plan Physiology. 53-3: 343-347. TRIRRADIADA FUSIFORME OVALADA INTRODUCCIÓN -COBRE- El cob e es un me al que apa ece en bajas concen aciones en el océano y que in e iene en algunos p ocesos biológicos. La con aminación po pa e del homb e de ie as de cul i o y de los ecosis emas acuá icos, hace que se inc emen e en el medio la can idad de es e me al. Es e exceso en la concen ación de cob e p oduce una disminución del c ecimien o de mic oalgas, llegando a inhibi lo. (F anklin e al., 2002) * (1) F anklin e al. (2002) En i onmen al Toxicology and Chemis y. 21/11: 2412-2422. INTRODUCCIÓN -COBRE- Cuando los o ganismos se encuen an en esas condiciones de oxicidad po ele adas concen aciones de me ales desa ollan mecanismos de de ensa en e a es a oxicidad. **(1) Jung e al (2003) Plan and Soil 252:301-312. (2) Ko acik and Klejdus (2008) Plan Cell Rep., 27, 605–615. (3) Quideau e al. (2011) Angewand e Chemie. 50/3: 586-621. A ni el ex acelula Libe ación de poli enoles (Jung e al., 2003) A ni el de pa ed celula Poli enoles asociados (Ko acik e al., 2008; Jung e al., 2003). A ni el in acelula Inhibición de adicales lib es y quelacion de me ales (Quideau e al., 2011). INTRODUCCIÓN -POLIFENOLES- POLIFENOLES SIMPLES FENILPROPANOIDES FENOL ÁCIDO GÁLICO ÁCIDO CINAMICO ÁCIDO SINAPICO FLAVONOIDES FLAVONAS FLAVONOLES FLAVANOLES OH COOH OH OHHO COOH COOH OH OMeMeO O O O O OH O OH INTRODUCCIÓN -POLIFENOLES- Los o ganismos p oducen es os compues os en espues a a los dis in os ipos de es és que su en. La p incipal ca ac e ís ica de es os compues os es su capacidad an ioxidan e.* –INHIBEN RADICALES Y ESPECIES REACTIVAS DEL OXÍGENO (ERO).* –AGENTES QUELANTES DE IONES DE METALES PESADOS.** *(1)Ri e o e al.(2001) Plan Science 160: 315-321.(2) T eu e D (2006) En i onmen al Chemis y Le e s.4/3:147-157 **(1) Ben es e al. (2011) Molecules. 16/2:1749-1760.. (2) Neudö e e al. (2006) J. Ag ic. Food Chem. 54:1898-1905 T ans e encia de hid ogeno: RADICAL· + POLIFENOL-H → RADICAL-H + POLIFENOL· T ans e encia de elec ones: RADICAL·++ POLIFENOL → RADICAL + POLIFENOL·+ Me al++ POLIFENOL → [POLIFENOL-Me al ] MÉTODOS PRECONCENTRACIÓN P epa amos la mues a (0.1g/5mL HCl) Columna SPE C omabond Easy Eluciones sucesi as 2mL (2%NaOH) Concen a has a 0.5 mL MÉTODOS PRECONCENTRACIÓN 2.5L Agua de ma con exudados 3 Columnas SPE C omabond Easy Eluciones en me anol Concen a has a 0.5 mL MÉTODOS ANÁLISIS MÉTODOS ANÁLISIS 60μL MUESTRA COLUMNA HPLC C18 ISOCRÁTICO: MeOH / H2O (1% Ac. Fó mico) DETECTOR UV – DIODO DE ARRAY MÉTODOS -DPPH- Capacidad del an ioxidan e pa a neu aliza el adical DPPH. 1 mL de la disolución de DPPH 0.1 mM + 0.2 mL del ex ac o de alga. Se calcula el po cen aje de inhibición. (1- Absex /AbsDPPH)×100 RESULTADOS Y DISCUSIÓN -CRECIMIENTO- La densidad inicial de P.T ico nu um 1·104células·mL-1 Exis e una elación en e [Cu] y el descenso en el núme o de células. El pa áme o de inhibición del c ecimien o en biomasa, EC50,se alcanza a una concen ación de 35ug/mL (Mo eno-Ga ido e al., 2000) 3 Cul i os -0 ug / L Cob e (Blanco) -20 ug / L Cob e -50 ug / L Cob e * Mo eno-Ga ido e al.(2000) Eco oxicology and En i onmen al Sa e y. 47:112-116. RESULTADOS Y DISCUSIÓN -CRECIMIENTO- 52% 78% 100% 0 50 100 Blanco Cob e 20 Cob e 50 % C ecimien o RESULTADOS Y DISCUSIÓN -CRECIMIENTO- 471% 52% 78% 100% 0 100 200 300 400 500 Blanco Cob e 20 Cob e 50 Hie o 50 % C ecimien o RESULTADOS Y DISCUSIÓN -CONCENTRACIÓN DE POLIFENOLES- BLANCO [Cu] 20μg L-1 [Cu] 50μg L-1 [Fe] 50μg L-1 Gen ísico* 21.3 ± 0.7 27 ± 1 42 ± 2 11.5 ± 0.8 Mi ice ina* 17.9 ± 0.2 38 ± 3 43 ± 2 66 ± 3 Sinápico* 72 ± 1.1 71.7 ± 3.1 136.9 ± 10.7 60 ± 4 Que ci ina* 74.7 ± 1.2 81.7 ± 1.4 148.8 ± 3.7 70 ± 2 Kaemp e ol* 61.6 ± 2.5 75.5 ± 2.44 121.6 ± 1.5 64 ± 2 Apigenina* 63.0 ± 0.8 77.9 ± 1.8 128.8 ± 1.9 61 ± 2 * (μg·celulas-1)·10 10 FILTROS RESULTADOS Y DISCUSIÓN -CONCENTRACIÓN DE POLIFENOLES- (μg·celulas-1)·10 10 0 20 40 60 80 100 120 140 160 SINAPICO QUERCITRINA KAEMPFEROL APIGENINA AC. GENTISICO MIRICETINA Blanco [Cu]=20ug [Cu]=50ug [Fe]=50ug FILTROS VARIACIÓN DEL PERFIL POLIFENÓLICO DE DIATOMEAS Phaeodac ylum ico nu um CULTIVADAS EN AGUA DE MAR ENRIQUECIDA EN COBRE (II) A oa López, Milag os Rico, A idane González, Magdalena San ana, Melcho González y No ma Pé ez. Depa amen o de Química, Uni e sidad de Las Palmas de G an Cana ia, Campus de Ta i a, 35017 Las Palmas de G an Cana ia, Cana y Islands, Spain. e-mail: [email p o ec ed] MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN