Estudio químico y actividad citotóxica de compuestos de Pulicaria burchardii y Pulicaria canariensis ssp. lanata

J.Triana1, M.López1,F.J.Pérez1, J.González-Platas2, J.F.León3, J.C. Hernández3, I. Brouard3, J. Bermejo3 y F. Estévez4 1Departamento de Química. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria, Campus de Tafira. 35017. Las Palmas de Gran Canaria - Gran Canaria - España. 2Departamento de Física Fundamental. Universidad de La Laguna. 3Instituto de Productos Naturales y Agrobiología, CSIC-Instituto Universitario de Bio-Orgánica "Antonio González“. 4Departamento de Bioquímica. Universidad de Las Palmas de Gran Canaria El g El gé énero nero Pulicaria Pulicaria ( (Asteraceae Asteraceae: : Inuleae Inuleae; ; Inulinae Inulinae) est ) está árepresentado representado en las Islas Canarias por tres especies localizadas en las isla en las Islas Canarias por tres especies localizadas en las islas m s má ás s orientales de las que dos son end orientales de las que dos son endé émicas micas P. burchardii P. burchardii Hutch Hutch y y P. P. canariensis Bolle canariensis Bolle, que a su vez presenta dos subespecies , que a su vez presenta dos subespecies P. canariensis P. canariensis ssp. canariensis ssp. canariensis, previamente estudiada por nuestro grupo , previamente estudiada por nuestro grupo [1] [1], y , y P. P. canariensis ssp. lanata canariensis ssp. lanata [2] [2]. . En el presente trabajo damos a conocer los resultados obtenidos En el presente trabajo damos a conocer los resultados obtenidos del del estudio qu estudio quí ímico de los extractos etan mico de los extractos etanó ólicos de las partes a licos de las partes aé éreas de reas de P. P. burchardii burchardii A. A. Hans Hans. & . & Sund Sund. . ssp. burchardii ssp. burchardii y de y de P. canariensis ssp. lanata P. canariensis ssp. lanata. . De P. burchardii se aislaron siete compuestos incluyendo tres productos aromáticos: vainillina, ácido-4-hidroxibenzóico y escopoletina; los esteroles: estigmasterol y β-sitosterol y dos triterpenos pentacíclicos: 11-oxoα-amirina y 3β-hidroxitaraxaster-20-en-30-al (A), para el que no habían sido reportado sus datos espectroscópicos por haberse aislado en cantidad de traza [3]. De P. canariensis ssp. lanata, se obtuvieron once compuestos incluyendo los productos aromáticos: ácido ferúlico y 5,7-dihidroxi-3,3´,4´- trimetoxiflavona (B); β-amirina, estigmasterol, 3-palmitato y 3-miristato de 3β,16β-dihidroxilupeol, 3β,16β-dihidroxilupeol (calenduladiol), los sesquiterpenos pulicanadienal A y B [1] y pulicanadieno B [1], así como un nuevo ácido sesquiterpénico (1E, 5E)-8β-acetoxi-4α-hidroxi-7βH-germacra1(10),5-dien-14-óico (1). Los compuestos conocidos fueron identificados por comparación de sus datos físicos y espectroscópicos con los reportados en la bibliografía. El compuesto (1) se obtuvo como un sólido cristalino, de fórmula molecular C17H26O5Na por HRFABMS (m/z 333.1683, calculado 333.1678). Su espectro IR presenta bandas de carbonilo conjugado con doble enlace (1693, 1635 cm-1) y una banda ancha (3177 cm-1) característica de grupo carboxílico. Su espectro de 13C RMN y experimentos DEPT nos muestra señales para un total de diecisiete carbonos, destacando la presencia de ácido carboxílico α,β-insaturado (δC174.2, 147.6 y 145.7), además de la señal de un metino oxigenado (δC70.1) y un grupo acetilo (δC 21.0 y 170.6). Su espectro de 1H RMN (figura I) exhibe las señales de un protón de metino oxigenado con acetato δH4.99 (s br); un grupo isopropilo a δH0.83 (d, J=6,6) y 0.81 (d, J=6,8); un metilo sobre un carbono portador de un grupo hidroxílico terciario δH1.35 (s); tres protones olefínicos, uno de ellos a δH6.63 (m) cuyo desplazamiento a campo bajo nos confirma la presencia de conjugación en la molécula, permitiéndonos ubicar el grupo α,β insaturado sobre C-14 y el doble enlace entre C-1 y C-10, estando los dos restantes como un multiplete a δH5.23; observándose también la señal de un metilo de un grupo acetilo a δH2.05. La metilación de (1) produjo (1a) en cuyo espectro de 1H RMN (figura II) destacamos la presencia de un singulete a δH3.73 (s,3H) que confirma la estructura de ácido carboxílico. El espectro de IR de (1a) sigue mostrando una banda de absorción característica de grupo hidroxilo, por lo que teniendo en cuenta la metilación del grupo carboxílico, la existencia de un grupo acetilo y que no da reacción al acetilar, concluimos que la estructura debe poseer un hidroxilo terciario. La estereoquímica relativa de C-15 se estableció mediante experimentos NOESY donde, como en el caso de Pulicanadienal B [1], se detectan correlaciones entre CH3-15, H-7 y H-5. La estereoquímica absoluta del compuesto (1) fue confirmada por análisis de difracción de rayos X (figura I), resultando ser el ácido (1E, 5E)-8β-acetoxi-4α-hidroxi-7βH-germacra-1(10),5dien-14-óico, el cual no hemos encontrado descrito en la bibliografía consultada. Este trabajo fue financiado en parte por el Ministerio de Educación y Ciencia, la Fundación de Desarrollo Regional Europea (SAF2007-62536) y el Instituto Canario de Investigación del Cáncer (RED PRODNAT CANCER). Se estudió el efecto de los compuestos (A), (1) y los flavonoides (B), (C), (D), (E) y (F) sobre la viabilidad y el crecimiento de células leucémicas humanas HL-60 en cultivo utilizando el ensayo del MTT [ 4]. Nuestros resultados ponen de manifiesto que todos estos compuestos son débilmente citotóxicos frente a esta línea celular. Los flavonoides presentaron menores valores de CI50 que el resto de los compuestos (Tabla 1). Figura I) 1H RMN y Rayos X de (1) Figura II) 1H RMN de (1a) a 70ºC Estudio Químico y Actividad Citotóxica de Compuestos de Pulicaria burchardii y Pulicaria canariensis ssp. lanata 1Introducción 2 5Referencias 3Ensayos biológicos [1] Triana, J.; López, M.; Pérez, F. J.; González-Platas, J.; Quintana, J.; Estévez, F.; León, F.; Bermejo, J. “Sesquiterpenoids from Pulicaria canariensis and their cytotoxic activities”. J. Nat. Prod. 2005. 68, 523. [2] Bramwell, D.; Bramwell, Z. I. “Flores silvestres de las Islas Canarias”. 2001. Rueda S.L. Ed. Madrid [3]Shiojima, K.; Suzuki, H.; Kodera, N.; Ageta, H.; Chang, H.-C.; Chen, Y.-P. “Composite constituents: thirty-nine triterpenoids including two novel compounds from Ixeris chinensis”. Chem. & Pharm. Bull. 1996. 44, 509. [4] Rubio, S. Quintana, J. López, M. Eiroa, J.L. Triana, J. Estévez, F. “Phenylbenzopyrones structure-activity studies identify betuletol derivatives as potential antitumoral agents”. Eur. J. Pharmacol. 2006. 548, 9. 4Agradecimientos O OCH3 OCH3 OCH3 OR1 R2O O (B) R1=R2=H (C) R1=H; R2=Ac (D) R1=Ac; R2=Ac (E) R1=H; R2=Me (F) R1=Ac; R2=Me >100 >100 38 30 20 26 39 (1) (A) (B) (C) (D) (E) (F) CI50 (µM)Línea celular HL - 60 Tabla 1 Efectos de los compuestos obtenidos y sus derivados sobre la viabilidad de las células tumorales humanas. COOCH 3 H3COH CH3 CH3 OAc COOH OAc CH3 CH3 H3COH Resultados y discusión