Efecto del fluoruro de sodio al 2% en la remineralización del esmalte después del blanqueamiento dental con peróxido de hidrógeno al 38%

1 UNIVERSIDAD DE SEVILLA DEPARTAMENTO DE ESTOMATOLOGIA TRABAJO DE TESIS DOCTORAL EFECTO DEL FLUORURO DE SODIO AL 2% EN LA REMINERALIZACIÓN DEL ESMALTE DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO AL 38%. Tesis presentada para obtener el grado de Doctor, por: ROBERTO MÉNDEZ MAYA DIRECTORES DE TESIS: DR. RAFAEL LLAMAS CADAVAL DRA. AMPARO JIMÉNEZ PLANAS Tampico Tamaulipas, Febrero, 2015 2 D. RAFAEL LLAMAS CADAVAL Y Dª. AMPARO JIMÉNEZ PLANAS, DOCTORES EN MEDICINA Y CIRUGÍA Y PROFESORES TITULARES DE UNIVERSIDAD, ADSCRITOS AL DEPARTAMENTO DE ESTOMATOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD DE SEVILLA, CERTIFICAN QUE: D. Roberto Méndez Maya ha realizado bajo nuestra dirección los trabajos de investigación del proyecto de Tesis Doctoral titulado:“EFECTO DEL FLUORURO DE SODIO AL 2% EN LA REMINERALIZACIÓN DEL ESMALTE DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL CON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO AL 38%”. Sevilla, 7 deFebrerode 2015. Dr. Rafael Llamas Cadaval Dra. Amparo Jiménez Planas 3 AGRADECIMIENTOS 4 Agradezco a mis Directores de Tesis; Dr. Rafael Llamas Cadaval y Dra. Amparo Jiménez Planas, por su apoyo y orientación que me brindaron incondicionalmente para la elaboración del presente trabajo de investigación. A mis compañeros profesores Dr. Héctor Téllez Jiménez, Dra. Violeta Cecilia Tinoco Cabriales y Dr. Rogelio Oliver Parra por su ayuda para culminar la presente Tesis. Al Dr. Luis Vidal Ponce Cabrera y Dra. Teresa Flores Reyes, por estar en todo momento apoyando con sus conocimientos y su grandiosa ayuda con el equipo de medición (LIBS) usado en el estudio. Agradecimientos para el Ing. Jorge Humberto Luna Domínguez por su gran aportación en la asesoría estadística de este proyecto. Gracias Dr. Jorge Humberto Luna Lara por brindarme la oportunidad de estar dentro del grupo de profesores de inicio en el Doctorado, por su apoyo incondicional y ser un ejemplo de esfuerzo y dedicación en su trabajo además de ser un gran motivador para alcanzar siempre los triunfos propuestos en la vida. Desearía no dejar fuera de este apartado a todo profesor y/o persona que en algún momento apoyo en esta investigación. 5 Agradezco a Dios por darme la oportunidad de continuar superándome profesionalmente y lograr un sueño más en mi vida. A mis padres, papá Gero (finado) y mamá Pola por sus grandes sacrificios que hicieron en su vida apoyándome para continuar superándome. A mi esposa Adriana por apoyarme en todo momento durante esta etapa, sacrificando muchas cosas personales para continuar adelante y que gracias a tu aliento se pudo terminar este proyecto. A mi hijo Ricardo quien eres nuestra felicidad y motivación en la vida. 6 ÍNDICE 7 Página I.INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………………10 A) ESTRUCTURA DEL ESMALTE………………………………………………….13 1. CARACTERÍSTICAS FÍSICAS DEL ESMALTE………………………14 2. VARILLAS DEL ESMALTE………………………………………………15 3. INTERRELACIONES DE LAS VARILLAS…………………………….16 4. ESTRÍAS DE RETZIUS…………………………………………………..17 5. ESTRÍAS TRANSVERSALES…………………………………………..18 6. BANDAS DE HUNTER-SCHREGER…………………………………...18 7. ESMALTE NUDOSO……………………………………………………...19 8. PENACHOS Y LAMINILLAS DEL ESMALTE…………………………19 9. LÍMITE AMELODENTINARIO…………………………………………...20 10. SUPERFICIE DEL ESMALTE…………………………………………...20 B) COMPLETO DENTINO-PULPAR………………………………………………..22 1. PULPA DENTAL…………………………………………………………..22 2. DENTINA…………………………………………………………………..24 C) ALTERACIONES CROMÁTICAS EN LA ESTRUCTURA DENTAL………33 D) BLANQUEAMIENTO DENTAL…………………………………………………..34 1. BLANQUEAMIENTO EN DIENTES VITALES………………………..35 2. BLANQUEAMIENTO EN DIENTES NO VITALES……………………37 3. BIOLOGÍA DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL………………………38 4. MECANISMO DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL…………………..40 5. CAMBIOS EN LA ESTRUCTURA DENTAL OCASIONADOS POR EL BLANQUEAMIENTO………………………………………………………43 E) DESMINERALIZACIÓNREMINERALIZACIÓN DEL ESMALTE DENTAL.48 1. DESMINERALIZACIÓN…………………………………………………..49 8 Página 2. REMINERALIZACIÓN……………………………………………………..49 F) EQUIPOS DE MEDICIÓN………………………………………………………….61 1. ESPECTROSCOPIA DE PLASMA INDUCIDO POR LÁSER…….....62 II. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA………………………………………………...68 III. HIPÓTESIS……………………………………………………………………………….71 A) HIPÓTESIS DEL ESTUDIO…………………………………………………………72 B) HIPÓTESIS NULA……………………………………………………………………72 IV. JUSTIFICACIÓN………………………………………………………………………...73 V. OBJETIVOS DEL ESTUDIO……………………………………………………………76 A) OBJETIVO GENERAL……………………………………………………………….77 B) OBJETIVOS ESPECÍFICOS………………………………………………………..77 VI. MATERIALES Y MÉTODOS…………………………………………………………..79 A) DISEÑO DEL ESTUDIO…………………………………………………………..80 1. POBLACIÓN DEL ESTUDIO……………………………………………..80 B) MUESTRA…………………………………………………………………………...80 1. TIPO DE MUESTREO……………………………………………………..80 2. TAMAÑO DE LA MUESTRA……………………………………………...81 3. CRITERIOS DE SELECCIÓN………………………………………….…81 C) VARIABLES DEL ESTUDIO……………………………………………………….83 1. VARIABLES INDEPENDIENTES………………………………………83 2. VARIABLE DEPENDIENTE…………………………………………….84 D) LÍMITES DEL ESTUDIO…………………………………………………………...85 E) PROCEDIMIENTO………………………………………………………………….85 1. ETAPA 1. SECCIONADO DE LOS DIENTES………………………….85 2. ETAPA 2. FABRICACIÓN DE ESPECÍMENES………………………..92 3. ETAPA 3. APLICACIÓN DEL AGENTE BLANQUEADOR……………99 9 Página F) PLAN DE ANÁLISIS ESTADÍSTICO……………………………………………105 VII. RESULTADOS………………………………………………………………………..107 A) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL ANTES DEL BLANQUEAMIENTO……………………………………………………………...111 B) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL INMEDIATAMENTE DESPUES DEL BLANQUEAMIENTO………………………………………………………..112 C) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 24 HORAS DESPUES DEL BLANQUEAMIENTO……………………………………………………………..114 D) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 7 DÍAS DESPUES DEL BLANQUEAMIENTO……………………………………………………………...116 E) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 14 DÍAS DESPUES DEL BLANQUEAMIENTO…………………………………………………………...…117 F) ANÁLISIS COMPARATIVO DE LOS DIFERENTES ELEMENTOS SEGÚN LOS DIFERENTES GRUPOS DE INVESTIGACIÓN…………………………119 VIII. DISCUSIÓN…………………………………………………………………………...125 A) EFECTO DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO SOBRE EL ESMALTE……..126 B) EVALUACIÓN DEL CONTENIDO MINERAL (LIBS)………………………….128 C) AGENTES BLANQUEADORES CON DESENSIBILIZANTES………………130 IX. CONCLUSIONES……………………………………………………………………...133 X. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………135 16 esmalte próximos a la dentina, no hay estructura varillar. Cuando las varillas recién formadas tienen 3µm de ancho y están ampliamente separadas entre sí, estas aumentan gradualmente de ancho hasta llegar a 6µm a expensas de la sustancia inter-varillar a medida que atraviesa el esmalte y a nivel de la superficie adamantina su estructura es irregular e inexistente.(11) Cada ameloblasto es primariamente responsable de la formación de la varilla además, una porción de la región inter-varillar que rodea una varilla en particular, está formada por el mismo ameloblasto. Es claro que los procesos de Tomes son esenciales para la orientación de los cristales y por lo tanto para la formación de las varillas. El esmalte adyacente a la superficie de la dentina se forma antes de que exista el proceso de Tomes y por lo tanto carece de estructura varillar, dado que todos los cristales se alinean uniformemente, casi perpendiculares a la dentina. El esmalte carente de varillas o aprismático se ubica en los 30µm más externos del esmalte de todos los dientes primarios y en el tercio gingival del esmalte de los dientes permanentes.(11) 3. INTERRELACIONES DE LAS VARILLAS Las varillas tienden a mantenerse en hileras dispuestas circunferencialmente alrededor del eje mayor del diente donde las varillas de cada hilera corren en una dirección generalmente perpendicular a la superficie del diente, con una ligera inclinación hacia la cúspide a medida que se dirigen hacia la superficie externa. Cerca del extremo de las cúspides las hileras tienen un radio pequeño y las varillas en dirección más vertical. En el esmalte cervical, 17 las hileras de los varillas corren principalmente en dirección horizontal; sólo unas pequeñas hileras se inclinan apicalmente. La disposición de las hileras de los varillas posee importancia clínica, porque el esmalte se fractura entre hileras adyacentes.(11) Sobrepuesta a esta disposición de las hileras, se hallan otros dos patrones que complican la estructura del esmalte. Primero, cada varilla, a medida que corre hacia la superficie, tiene un transcurso ondulante doblándose a la derecha y a la izquierda en el plano transversal del diente (excepto en el esmalte cervical) y arriba y abajo en el plano vertical. Segundo, aunque las varillas en una hilera corren en direcciones similares, hay un cambio de dirección de alrededor de 2°entre hileras sucesivas. (11) 4. ESTRÍAS DE RETZIUS Son líneas de crecimiento incremental y en un corte longitudinal se ven como series de bandas oscuras, que reflejan los sucesivos frentes en la formación del esmalte; en el corte transversal se ven como anillos concéntricos, los cuales son prominentes en la mayor parte de los dientes humanos permanentes, menos prominentes en el esmalte posnatal y raros en el esmalte prenatal. Perturbaciones sistémicas tales como fiebres, que afectan la amelogénesis producen líneas incrementales acentuadas. Los patrones similares de líneas incrementales se encuentran en diferentes dientes del mismo individuo.(11) 18 5. ESTRÍAS TRANSVERSALES El esmalte humano se forma a una velocidad de aproximadamente 4µm por día y los cortes de desgaste del esmalte revelan lo que parecen ser bandas periódicas o estriaciones transversales que se verifican a intervalos de 4µm; la microscopía electrónica de barrido revela constricciones alternadas y expansiones de las varillas en algunas regiones del esmalte, las que pueden explicar este aspecto bandeado en los cortes por desgaste.(11) Por otra parte, la aparición de estriaciones transversales podría resultar también de interrelaciones estructurales entre grupos de varillas más que de la modificación de una sola, por eso lo que puede parecer estriaciones transversales de varilla cortadas longitudinalmente, son muchas veces grupos de ellas cortadas oblicuamente.(11) 6. BANDAS DE HUNTER-SCHREGER Son un fenómeno óptico ocasionado únicamente por cambios en la dirección de las varillas, las cuales se ven más claramente en cortes longitudinales por desgaste observados con luz reflejada y se encuentran en los cuatro quintos internos del esmalte y aparecen como bandas alternadamente claras y oscuras que pueden revertirse mediante la alteración de la dirección de la iluminación incidente.(11) 19 7. ESMALTE NUDOSO A nivel de las cúspides y bordes incisales de los dientes, las varillas aparecen como entrelazándose en una disposición aparentemente compleja conocida como esmalte nudoso. Las varillas se disponen en anillos concéntricos alrededor del eje longitudinal del diente y dentro de cada anillo las varillas se disponen como ondulando hacia atrás y hacia delante.(11) 8. PENACHOS Y LAMINILLAS DEL ESMALTE Pueden compararse con las fallas geológicas y se ven mejor en cortes transversales de esmalte, dichos penachos del esmalte o de Linderer, se proyectan en el esmalte por una corta distancia desde la unión amelodentinaria y son hipomineralizados y aparentan ser ramificados conteniendo mayores concentraciones de proteína del esmalte que el resto de éste. Las laminillas se extienden en profundidades variables desde la superficie del esmalte y corresponden a defectos lineales de orientación longitudinal llenos de proteínas del esmalte o de desechos orgánicos de la cavidad bucal.(11) Los penachos y laminillas se demuestran usualmente en los cortes por desgaste, y que pueden ser mostrados en cortes cuidadosamente desmineralizados del esmalte, debido a su mayor contenido de proteínas. La proteína de los penachos es una variedad de alto peso molecular, similar a la enamelina. Una diferente relación del esmalte varillar y de la zona inter-varillar crea los planos menos mineralizados y debilitados, mientras que la falla de 20 bloques de esmalte se produce para aliviar las tensiones internas producidas por cambios dimensionales a medida que madura el tejido, cuando hay una falla, ésta bloquea la salida normal de la proteína del esmalte ocasionando de esta manera, el mayor contenido orgánico de penachos y laminillas estos, no tienen importancia clínica y no parecen ser sitios de vulnerabilidad aumentada al ataque de las caries.(11) 9. LÍMITE AMELODENTINARIO La unión entre el esmalte y la dentina se establece a medida que estos dos tejidos duros se forman y se le ve como un perfil ondulante o festoneado en los cortes por desgaste, en el microscopio electrónico de barrido se muestra como una serie de surcos que aumentan la superficie y probablemente también la adhesión entre el esmalte y la dentina.(11) 10. SUPERFICIE DEL ESMALTE La superficie del esmalte se caracteriza por varias formaciones, una de éstas constituye las estrías de Retzius y se extienden a menudo desde el límite amelodentinario hasta la superficie externa del esmalte, donde las estrías encuentran la superficie y forman valles poco profundos conocidos como periquimatías, estos corren linealmente en un plano horizontal en la superficie coronaria. Además, las laminillas o fracturas del esmalte aparecen como líneas melladas en varias regiones de la superficie dentaria. El microscopio electrónico muestra que la estructura superficial del esmalte varía con la edad, 21 en los dientes aún no erupcionados, la superficie adamantina muestra una cutícula amorfa de unos 0.5 a 1.5µm de espesor e inmediatamente por debajo de la cutícula hay una capa de cristalitos pequeños, empaquetados, de unos 5 nanómetros de espesor, con material cuticular entre ellos; entremezclados y sobre esta capa de cristalitos hay grandes cristales aplanados distribuidos al azar. La capa de cristalitos finos penetra en la zona sub-superficial del esmalte, donde los cristalitos se hallan densamente empaquetados y su tamaño es del orden de los 50 nanómetros.(11) En los dientes erupcionados la capa sub-superficial forma la superficie adamantina, indicando que la cutícula primaria y la capa superficial de cristalitos pequeños se pierden rápidamente por abrasión, atrición y erosión, otros cambios que ocurren en el esmalte con la edad son cambios de color, cambios en la permeabilidad y cambios en la naturaleza de su capa superficial. El color de los dientes se hace más oscuro con la edad, si esto es causado por un cambio en la estructura del esmalte es un tema aún sujeto a discusión y mientras que éste oscurecimiento podría deberse al agregado en el esmalte de material orgánico proveniente del medio y también podría lograrse por una intensificación del color de la dentina, que se ve a través del esmalte translúcido y adelgazado. (11) No hay duda de que el esmalte se hace menos permeable con la edad, el esmalte joven se comporta como una membrana semipermeable, permitiendo el lento pasaje de agua y sustancias de pequeño peso molecular a través de los poros que existen entre los cristales. Con la edad, los poros 22 disminuyen y los cristales adquieren más iones y aumentan de tamaño. Debido a que la mayor parte del agua se ubica en los poros, se cree que el contenido acuoso del esmalte también disminuye con la edad. La capa superficial del esmalte dicta la mayoría de los cambios que ocurren dentro de las profundidades del esmalte y con la edad, la composición de la capa superficial cambia a medida que se verifica el intercambio iónico con el medio bucal. Si el ion flúor se incorpora o es absorbido por el cristal de hidroxiapatita, el cristal se hace más resistente a la disolución efectuada por los ácidos, lo cual explica en parte, el papel del flúor en las caries y su prevención. Está bien establecido que la presencia del ion flúor aumenta las reacciones químicas que originan la precipitación del fosfato de calcio, puesto que hay un equilibrio entre los iones de calcio y los iones de fosforo en la fase en solución (saliva) y la fase sólida (esmalte) en la cavidad bucal. Cuando una región localizada de esmalte ha perdido mineral (tal como en la lesión de mancha blanca), puede remineralizarse si el agente destructor, la placa dental, se remueve y la reacción de remineralización estará muy aumentada por la presencia del flúor.(11) B) COMPLEJO DENTINO-PULPAR 1. PULPA DENTAL La pulpa dentaria forma parte del complejo dentino-pulpar, que tiene su origen embriológico en la papila dental, el tejido pulpar y dentario conforman estructural, embriológica y funcionalmente una verdadera unidad biológica 23 conocida como complejo dentino-pulpar. La pulpa está formada por un 75% de agua y un 25% de materia orgánica, estando ésta última constituida por células y matriz extracelular representada por fibras y sustancia fundamental.(12) a) Zonas topográficas de la pulpa Por la disposición de sus componentes estructurales, existen en la pulpa cuatro regiones diferentes, desde el punto de vista histológico. Las zonas identificadas desde la pre-dentina (dentina sin mineralizar) hacia la pulpa son: 1. Zona dentinoblástica. 2. Zona sub-dentinoblástica u oligocelular de Weil. 3. Zona rica en células. 4. Zona central de la pulpa o tejido pulpar propiamente dicho.(12) b) Actividades funcionales de la pulpa  Inductora: se pone de manifiesto durante la amelogénesis, ya que es necesario el depósito de dentina para que se produzca la síntesis y el depósito del esmalte.  Formativa: la capacidad dentinogénica se mantiene mientras dura su vitalidad, la elaboración de la dentina está a cargo de los dentinoblastos y, según el momento en que ésta se produce, surgen los distintos tipos de dentina: primaria, secundaria o adventicia y terciaria o reparativa. Esta última variedad se elabora en respuesta a distintos irritantes, como, 24 por ejemplo, biológicos (caries), físicos (calor, presión) o químicos (sustancias nocivas procedentes de algunos materiales dentales).  Nutritiva: la pulpa nutre a la dentina a través de las prolongaciones dentinoblásticas y de los metabolitos que, desde el sistema vascular pulpar se difunden a través del licor dentinario.  Sensitiva: mediante los nervios sensitivos, responde, ante los diferentes estímulos o agresiones, con dolor dentinario o pulpar. En la sensibilidad de la pulpa y la dentina no interesa la naturaleza del agente estimulante ya que la respuesta es siempre de tipo dolorosa. El dolor dentinal es agudo y de corta duración, mientras que el dolor pulpar es sordo y pulsátil, persistiendo durante cierto tiempo.  Defensiva o reparadora: tiene una notable capacidad reparadora, formando dentina ante las agresiones. Las dos líneas de defensa son: 1) formación de dentina peritubular con estrechamiento de los conductos, para impedir la penetración de microorganismos hacia la pulpa, ésta esclerosis dentinaria representa la primera defensa pulpar frente al avance de una caries y 2) formación de dentina terciaria, reparadora o de irritación, la cual es elaborada por los nuevos dentinoblastos que se originan de las células ectomesenquimáticas o célula madre de la pulpa.(12) 2. DENTINA La dentina, también llamada sustancia ebúrnea o marfil, es el eje estructural del diente y constituye el tejido mineralizado que conforma el mayor 25 volumen de la pieza dentaria, cuyo espesor varía según el diente, por ejemplo en los incisivos inferiores es mínimo (de 1 a 1,5mm), mientras que en los caninos y molares es de 3mm aproximadamente, en cada diente en particular, el espesor es mayor en los bordes incisales o cuspídeos y menor en la raíz. En la estructura de la dentina podemos distinguir dos componentes básicos: la matriz mineralizada y los conductos o túbulos dentinarios que la atraviesan en todo su espesor y que alojan a los procesos dentinoblásticos, dichos procesos dentinoblásticos son largas prolongaciones citoplasmáticas de las células especializadas llamadas dentinoblastos, cuyos cuerpos se ubican en la región periférica de la pulpa, éstas células producen la matriz colágena de la dentina y también participan en el proceso de mineralización de la misma, siendo, por lo tanto, responsables de la formación y del mantenimiento de la dentina. Los cuerpos celulares de los dentinoblastos están separados de la dentina mineralizada por una zona de matriz orgánica no mineralizada denominada pre-dentina.(13) De lo anteriormente expuesto se desprende que la dentina y la pulpa:  Conforman una unidad estructural, dado que las prolongaciones de los dentinoblastos están incluidas en la dentina.  Conforman una unidad funcional, ya que la pulpa mantiene la vitalidad de la dentina, y a su vez la dentina protege a la pulpa.  Comparten un origen embrionario común, pues ambas derivan del ectomesénquima que forma la papila del germen dentario. 32 áreas de la dentina, que incrementan localmente la permeabilidad, son túbulos gigantes de 5 a 50µm de diámetro en la dentina coronaria en la zona de los cuernos pulpares, en su recorrido, los túbulos dentinarios presentan pequeñas curvaturas secundarias de forma sinusoidal, normalmente regulares en todo el trayecto, que indican el trayecto en espiral que realizan los odontoblastos mientras migran hacia el centro del diente durante la dentinogénesis y cada vuelta en espiral tiene 12µm de longitud aproximadamente. Los túbulos dentinarios presentan ramificaciones colaterales o túbulos secundarios muy delgados 1µm de diámetro, los cuales presentan en su trayecto final ramificaciones terminales de diferentes tamaños con un promedio de ± 0,46µm. (13) Los túbulos están rodeados por un anillo a pared denominado dentina peritubular, tubular o matriz peritubular (mayor de 1µm), el cual está muy mineralizado y puede distinguirse claramente en el microscopio óptico en cortes por desgaste en los que los túbulos hayan sido seccionados de forma transversal. (13)  Matriz intertubular o dentina intertubular: la matriz intertubular se distribuye entre las paredes de los túbulos dentinarios y su componente fundamental son las fibras de colágeno que constituyen una malla fibrilar, entre la cual y sobre la cual se depositan los cristales de hidroxiapatita que son semejantes a los existentes en la dentina peritubular. 33 f) Unidades estructurales secundarias Se definen como aquellas estructuras que se originan a partir de las unidades estructurales básicas por variaciones en la mineralización o como resultado de la interrelación de las unidades básicas con el esmalte o cemento periféricos, dichas estructuras pueden observarse en cortes por desgaste y son las siguientes; líneas incrementales o de crecimiento, dentina interglobular o espacios de Czermack, zona granulosa de Tomes.(13) g) Dentinogénesis Es el conjunto de mecanismos por los cuales la papila dental elabora, por medio de sus células especializadas, los odontoblastos, una matriz orgánica que más tarde se calcifica para formar la dentina. En la dentinogénesis se pueden considerar tres etapas; elaboración de la matriz orgánica compuesta por una trama fibrilar y componente fundamental amorfo, maduración de la matriz y precipitación de sales minerales (calcificación o mineralización).(13) C) ALTERACIONES CROMÁTICAS EN LA ESTRUCTURA DENTAL Por lo general, las manchas pueden dividirse en extrínsecas (localizadas sobre la parte externa del diente) e intrínsecas (localizadas dentro del diente), además con el paso del tiempo, las manchas extrínsecas pueden convertirse 34 en intrínsecas, dichas manchas pueden ir, de adentro hacia fuera o de fuera hacia adentro y clínicamente el color es muy variable, además de que la tinción puede ser generalizada o bien específica de un diente o de parte del diente. (14) La causa de las pigmentaciones o decoloraciones dentarias pueden ser sistémicas o locales y a su vez se dividen en exógenas o extrínsecas y endógenas o intrínsecas.(15) Estas pigmentaciones pueden ser multifactoriales y afectan tanto a dientes vitales como a dientes no vitales.(16) Todas las sustancias que causan coloraciones anormales en los dientes se llaman cromogénicas, dentro de las causas exógenas tenemos agentes cromógenos primarios como el té, vino, nicotina, colorantes alimentarios etc. Existen agentes cromógenos secundarios que son sustancias no teñidas como el fluoruro de estaño que por reacciones químicas reductoras se convierten en cromógenas, solo una reacción inversa de oxidación puede revertirse el proceso y pueden cambiar de color. Dentro de las causas endógenas locales existen diversas causas como la degradación pulpar, medicamentos y los materiales de obturación. Las causas sistémicas pueden ser enfermedades congénitas (dentina opalescente hereditaria, deficiencia vitamínica, eritroblastosis fetal) terapia de antibióticos (tetraciclina) y fluorosis dental o decoloraciones causadas por la edad.(17) D) BLANQUEAMIENTO DENTAL Las primeras técnicas de blanqueamiento fueron descritas en 1864 por Truman, quién describió una variedad de medicamentos como el hipoclorito de 35 sodio, el perborato de sodio y el Peróxido de Hidrógeno, los cuales han sido usados solos o en combinación y con o sin la activación por calor. (18) El blanqueamiento ambulatorio se introdujo desde 1961, colocando una mezcla de perborato de sodio en el paciente, con citas frecuentes al dentista.(19) Después fue reemplazado por el uso de Peróxido de Hidrógeno al 30 o 35% para mejorar el efecto del blanqueamiento. (20)Posteriormente se redujo la concentración del Peróxido de Hidrógeno utilizando Peróxido de Carbamida al 10%.(21) 1. BLANQUEAMIENTO EN DIENTES VITALES Los pacientes que desean blanquear sus dientes pueden elegir sobre tres tipos básicos de tratamientos para blanquear sus dientes vitales:  Blanqueamiento realizado por el dentista en el consultorio dental.  Blanqueamiento ambulatorio realizado por el paciente en su casa pero con la supervisión y la elaboración de guardas prefabricados por un profesional respetando la anatomía gingival.  Blanqueamiento que el paciente se realiza sin supervisión del dentista comprando productos de autoservicio en cualquier tienda.(22) a) Blanqueamiento en el consultorio dental:(23) En este tratamiento el agente blanqueador es a base de Peróxido de Hidrógeno al 35% y puede o no ser activado por luz, éste es un método más 36 eficaz porque el Peróxido de Hidrógeno se maneja en su más alta concentración y el dentista tiene el control del material evitando el daño de los tejidos pulpares, así como de los periodontales a través del aislamiento del campo operatorio obteniendo resultados inmediatos. b) Blanqueamiento ambulatorio con férula realizada por el dentista: El agente blanqueador en este procedimiento es a base de Peróxido de Carbamida al 10%,(24) donde se le explica al paciente dependiendo de las indicaciones de cada fabricante, el uso y la aplicación del agente blanqueador, los resultados se observan generalmente a las tres semanas utilizándolo entre dos y seis horas diarias dependiendo de la casa comercial y es importante indicarle al paciente una técnica de cepillado adecuada para poder eliminar el agente blanqueador por completo de los dientes.(25) c) Blanqueamiento que el paciente realiza con productos de autoservicio: En los últimos años los laboratorios han incorporado este tipo de agentes al mercado y existen muchas presentaciones debido a la gran demanda, los más nuevos son las tiras para blanqueamiento que contienen una capa fina de gel (0.1-0.2 mm) de Peróxido de Hidrógeno al 6.5% o del 14% y los barnices de Peróxido de Carbamida al 18% que usados indiscriminadamente puede causar hipersensibilidad a los cambios térmicos, 37 así como una irritación irreversible de la pulpa y al periodonto, siendo obligación de los dentistas informar y advertir a los pacientes de los posibles efectos nocivos. (26) Raoufi y Cols.(27) concluyeron que las pastas dentales conteniendo hidroxiapatita o peróxido de calcio no producen ninguna reducción de la pigmentación dental comparado con un placebo de pasta dental con flúor. 2. BLANQUEAMIENTO EN DIENTES NO VITALES Al estar presente una decoloración en un diente no vital significa que la pigmentación proviene de la cámara pulpar. La etiología de una decoloración en dientes no vitales es por la presencia de productos hemáticos o bacterianos dentro de los conductos (necrosis pulpar) y mala técnica al realizar un tratamiento de conductos como una mala apertura de la cavidad o una mala técnica durante el corte de la gutapercha, (28)éste blanqueamiento es realizado por el odontólogo en el consultorio y consiste en eliminar de la cámara pulpar, a un diente previamente tratado con endodoncia, todos los agentes decolorantes y tejido necrótico existente. Existen tres procedimientos para blanquear dientes no vitales:(29) a) Técnica ambulatoria: Se utiliza una mezcla de Perborato de Sodio y Peróxido de Hidrógeno al 35% y se puede utilizar un algodón para darle consistencia a la mezcla, se lleva 38 a la cavidad de la cámara pulpar y se coloca una obturación en la superficie, el paciente debe regresar a la semana para evaluar el blanqueamiento obtenido, es un tratamiento mucho más prolongado. (30) b) Técnica inmediata (termocatalítica): Consiste en activar la mezcla de Perborato de Sodio con Peróxido de Hidrógeno al 35% y algodón a través de un instrumento caliente que se coloca sobre el algodón, un diente no vital soporta una temperatura de hasta 73°C, éste procedimiento se realiza tres veces como máximo, el blanqueamiento obtenido se observa en ese momento y es mucho más efectivo. (30) c) Combinación de ambas técnicas: Consiste en aplicarle al paciente en el consultorio dental la técnica termocatalítica y a su vez indicarle que se le realice la técnica ambulatoria. (30) 3. BIOLOGÍA DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL El Peróxido de Carbamida al 10% es una sustancia difundida en la actualidad para el blanqueamiento de dientes vitales, la cual se caracteriza por disociarse en presencia de H2O y tener como productos intermedios al Peróxido de Hidrógeno al 3% y urea al 7% y como productos finales al H2O y O2 (oxígeno).(31-33) 39 El oxígeno es un elemento biradical cuya función es participar en la producción metabólica de energía a partir de la generación de ATP por la ruta de fosforilación oxidativa, especialmente en la cadena transportadora de electrones y participar en la producción de las especies reactivas de oxígeno responsables del daño a las membranas celulares, los aminoácidos y proteínas, los carbohidratos y los ácidos nucleicos.(34, 35) Entre las principales especies reactivas de oxígeno están los radicales hidroxilos, el superóxido y el Peróxido de Hidrógeno, otras rutas alternativas sugieren la formación de radicales libres a partir de la reacción de Fentón, la cual involucra la presencia de iones y subespecies metálicas y la reacción de Haber-Weiss que a su vez genera hidroxilo a partir de Peróxido de Hidrógeno y superóxido.(36) Éste mecanismo se da de forma natural en las reacciones de las células contra cuerpos extraños sin embargo, pese a su elevada efectividad para dañar estructuras biológicas, no afectan directamente las células asociadas a la respuesta inmune debido a mecanismos de control disponibles en la célula sana, que involucran la descomposición del Peróxido de Hidrógeno a oxígeno y agua por la acción de enzimas como la superóxido, dismutasa, la catalasa, la glutamato peroxidasa y vitaminas como el tocoferol, los carotenos y el ácido ascórbico.(34, 36) Tales mecanismos de control podría ser los responsables de que pese a su demostrada citotoxicidad, el Peróxido de Hidrógeno a concentraciones 40 menores del 35% sea clasificado como una sustancia no irritante de la piel y en solución con concentraciones menores al 3% solo causan irritaciones transitorias en las mucosas en humanos.(35, 36) 4. MECANISMO DEL BLANQUEAMIENTO DENTAL El blanqueamiento es un proceso de decoloración o blanqueamiento que puede ocurrir en una solución o sobre una superficie. (37) Los materiales que producen el color en una solución o sobre una superficie son típicamente o generalmente compuestos orgánicos que poseen cadenas extendidas o conjugadas de compuestos simples o dobles alternados y a veces incluyen heterátomos, carbonyl y anillos de fenil en el sistema conjugado los cuales se conocen algunas veces como cromóforos. El blanqueamiento y decoloración de un cromófero puede ocurrir mediante la destrucción de uno o más de los compuestos dobles en la cadena conjugada, disolviendo la cadena o por medio de la oxidación de otros químicos en la cadena. (37) El Peróxido de Hidrógeno oxida una amplia variedad de compuestos orgánicos e inorgánicos, y su mecanismo de acción en estas reacciones es variable y depende del sustrato, el medio ambiente y la catálisis. En general, el mecanismo de blanqueamiento por medio del Peróxido de Hidrógeno no es muy bien comprendido y puede formar un número de diferentes especies de oxígeno activo dependiendo de las condiciones de la reacción, incluyendo la temperatura, el pH, la luz y la presencia de metales transicionales.(38) Bajo condiciones alcalinas, el Peróxido de Hidrógeno para blanqueamiento generalmente procede a través del ion negativo peri hidroxilo (HO2-), otras condiciones pueden permitir la formación 41 de radicales libres, por ejemplo, mediante la disolución hemolítico de un compuesto O-H en Peróxido de Hidrógeno para formar HO + 0 OOH y 2OOH (radical hidroxilo), respectivamente. Bajo reacciones iniciadas foto químicamente usando luz o láser, la formación de radicales hidroxilo de Peróxido de Hidrógeno se incrementa, por lo tanto, los mecanismos por medio de los cuales los dientes son blanqueados por materiales oxidantes como el Peróxido de Hidrógeno y el Peróxido de Carbamida actualmente no son completamente comprendidos.(39) Considerando la literatura disponible, la evidencia apunta hacia la difusión inicial del Peróxido en y a través del esmalte para alcanzar la unión del cemento con la dentina y regiones de la dentina y efectivamente, experimentos in vitro han demostrado la penetración de bajos niveles de peróxido en las cámaras pulpares de dientes extraídos después de ser expuestos durante 15- 30 minutos,(39, 40) los niveles medidos de Peróxido en estos experimentos son considerablemente mucho menores que lo necesario para producir la inactivación de una enzima pulpar.(41) Mientras el Peróxido se difunde en el diente, puede reaccionar con materiales orgánicos coloreados encontrados dentro de la estructura dental resultando en una reducción del color. Esto es particularmente evidente en la dentina como lo realizado por McCaslin y Cols. (42) quienes usando dientes humanos seccionados y montados sobre láminas de vidrio y siguiendo un blanqueamiento externo con Peróxido de Carbamida, demostraron cambios de coloración de la dentina. Efectivamente, el tratamiento de especímenes de 48 de minerales desde el esmalte, usaron espectroscopia con reflectancia infraroja, espectroscopia Raman, espectroscopia de absorción atómica, fluorescencia de Rayos X con reflexión total, estudiando en su composición química en % peso los siguientes elementos químicos; Ca, P, Na, K, Mg, Si, F, Cl y O. E) DESMINERALIZACIÓNREMINERALIZACIÓN DEL ESMALTE DENTAL El proceso de desmineralización – remineralización es un ciclo continuo pero variable y se repite con la ingesta de alimentos específicamente los carbohidratos que al metabolizarse en la placa dental, forman ácidos que reaccionan en la superficie del esmalte. Cediendo iones de calcio y fosfato que alteran la estructura cristalina de la hidroxiapatita, pero tornándola más susceptible a ser remineralizada. Sino continúa la producción de ácidos después de 30 a 45 minutos, el pH subiría y los minerales que se encuentran en forma iónica, buscarán incorporarse a la estructura dentaria.(69) La irreversibilidad se da cuando la cantidad de cristales removidos, ocasiona el colapso de la matriz de proteína estructural. Por lo que se debe; a) disminuir el incremento proporcional del ácido producido por las bacterias acumuladas en la placa dentobacteriana, b) evitar que se pierda la permeabilidad del esmalte, procurando agentes químicos como el fluoruro, que facilitan la insolubilidad del esmalte, c) estimular los mecanismos por los 49 cuales, los minerales puedan precipitarse dentro de la lesión y puedan remineralizarse.(69) 1. DESMINERALIZACIÓN Se entiende por desmineralización al proceso de remoción de minerales del esmalte que se hallan en forma iónica, aunque también se puede definir como la disolución por medios ácidos que transformaron a las moléculas minerales sólidas, en iones minerales que sólo existen en solución. Debido a la actividad de desmineralización y remineralización que se presenta en la superficie dental y dependiendo de la magnitud y duración de cada uno de ellos el resultado es el equilibrio o desequilibrio que conduce a la salud o la enfermedad, lo cual quiere decir que el estado de salud dental de un individuo depende del grado de equilibrio entre la hidroxiapatita que forma parte del esmalte dental y los iones calcio y fosfato que se encuentran solubilizados en el fluido oral que rodea al diente.(69) 2. REMINERALIZACIÓN Es un fenómeno complejo que depende de cualidades relacionadas con la saliva y la presencia de flúor, por lo que existen variaciones individuales.(70,71) La remineralización es un proceso de precipitar calcio, fosfato y otros iones en la superficie o dentro del esmalte parcialmente desmineralizado, dichos iones pueden proceder de la disolución del tejido mineralizado, de una fuente externa 50 o de una combinación de ambos; proceso mediante el cual se depositan minerales en la estructura dentaria y la remineralización ocurre bajo un pH neutro, condición por la cual, los minerales presentes en los fluidos bucales se precipitan en los defectos del esmalte desmineralizado. Se ha considerado a la remineralización como una deposición de minerales después de una pérdida de ellos o de un ataque ácido.69) Justino y Cols.(72) mencionaron que los efectos adversos del blanqueamiento en dientes vitales con Peróxido de Carbamida no fueron observados cuando simularon las condiciones orales y que la saliva parece tener un efecto de remineralización sobre el esmalte dental, usaron Peróxido de Carbamida al 10% con polímero de carboxipolimetileno (Carbapol), y estudiaron el Calcio con usando un espectrofotómetro de absorción atómica con una detección límite de Calcio de 0.05 microgramos, los resultados fueron expresados en microgramos Ca/ml gel. Concluyeron que el efecto de la remineralización de la saliva puede prevenir el efecto de la desmineralización provocado por el tratamiento de blanqueamiento en el humano. La interacción dinámica in vivo del esmalte/saliva es un factor que generalmente no es incorporado dentro de los experimentos in vitro.(73) La saliva tiene una acción de limpieza, capacidad de amortiguador del pH (Buffer) y habilidad de remineralización, algunos electrolitos inorgánicos contenidos en la saliva (calcio, fosforo y fluoruros) son participantes importantes en el proceso de remineralización.(74) 51 Sasaki y Cols. (75) concluyeron que existen muchos cambios en la micromorfología superficial del esmalte al ser observados en el MEB a 1500X y que no hallaron cambios en su microdureza cuando los especímenes fueron expuestos a agentes blanqueadores con Peróxido de Carbamida al 10% y Peróxido de Hidrógeno al 7.5%, por 1 h/día y durante 21 días correspondiendo clínicamente al período de blanqueamiento de 3 semanas; todos los especímenes fueron sumergidos en 13.5 ml de saliva artificial (pH=7.0) en contenedores individuales a una temperatura de 37°C ± 1°C la saliva fue cambiada cada 2 días por un período de 14 para evaluar el período de postratamiento y una posible remineralización de la solución de saliva sobre la microdureza del tejido dental. Rodrigues y Cols.(76) determinaron que los agentes blanqueadores de uso en la casa como son el Peróxido de Hidrógeno al 7.5% (PolaDay), PolaDay al 9.5%, Day Whiteal 7.5% yDay White al 9.5% y agentes de uso en el consultorio, marca Pola Office conteniendo 35% de Peróxido de Hidrógeno y Opalescence XtraBoost al 38%, causaron una disminución en el número de dureza Knoop (KHN), aunque estos valores fueron recuperados después del tratamiento, demostrando la importancia de la saliva en la recuperación del contenido mineral. Para evaluar los efectos morfológicos en el esmalte Cadenaro y Cols.(77) aplicaron in-vivo dos agentes de blanqueamiento de Peróxido de Hidrógeno al 38% (Opalescence Xtra Boost) y Peróxido de Carbamida al 35% (Rembrandt Quik Start) y al analizar la rugosidad en réplicas de resina epóxica, encontraron 52 que no hay alteraciones en la rugosidad de superficie después de múltiples aplicaciones. Xu y Cols.(78) investigaron la influencia del pH (3.0, 5.0, 7.0) de los agentes blanqueadores con diferentes soluciones; Peróxido de Hidrógeno al 30% y Ácido Clorhídrico sobre las propiedades de la superficie del esmalte encontraron alteraciones significantes con una aparente erosión en los grupos con un pH de 3.0, los cambios los analizaron con espectroscopia Raman y concluyeron que no son evidentes las alteraciones morfológicas o composición química de la superficie del esmalte donde las soluciones blanqueadoras presentaban un pH neutro o alcalino y que las soluciones blanqueadoras con bajo valor en su pH afectan con mayor significancia al esmalte. En su estudio en dientes de bovinoCunha y Cols. (79)aplicaron pasta de fosfato de calcio amorfo antes y después de blanquear con Peróxido de Hidrógeno al 35% y Peróxido de Carbamida al 37% para investigar la eficacia del blanqueamiento y los posibles cambios en la rugosidad y dureza del esmalte, reportando que el uso de fosfato de calcio amorfo es capaz de prevenir cambios negativos en el esmalte y que podría ser aplicado antes y después del protocolo de blanqueamiento. D’Amario y Cols. (80)analizaron la histomorfología del esmalte después de repetidas aplicaciones de Peróxido de Hidrógeno al 38% realizado por un profesional en especímenes de esmalte de incisivos humanos en sus superficies bucales, entre las aplicaciones del blanqueamiento y antes de la 53 evaluación con MEB a 200X, 500X, 1000X y 3000X, los especímenes fueron mantenidos en saliva artificial por 1 semana, en los resultados predominaron las depresiones cuando el procedimiento fue repetido tres o cuatro veces los autores recomendaronfinalmente que aunque los resultados de este estudio fueron in vitro, el procedimiento de blanqueamiento no debe usarse indiscriminadamente. Spalding y Cols.(81) realizarondiferentes tratamientos a un grupo de premolares y molares, los cuales consistían en exponer la superficie vestibular de un grupo de dientes al Peróxido de Hidrógeno al 35% (Opalescence Xtra, Ultradent Products) activado durante 10 minutos con luz, posteriormente ésta luz fue retirada dejando actuar por 10 minutos más el agente sobre el diente, otro tratamiento consistió en el mismo procedimiento anteriormente mencionado, pero bajo la presencia de saliva natural obtenida inmediatamente después de evaluar el pH (pH entre 6.8 y 7.0); finalmente un tercer grupo, se trabajó bajo las mismas condiciones de los dos anteriores y se almacenaron en saliva por 24 horas a 37°C sin embargo, a éste grupo se le reforzó el tratamiento con Peróxido de Carbamida al 10% por 12 horas. Los resultados arrojados de éste estudio fueron los siguientes: el aspecto morfológico (MEB a 500 y 1000X) de la superficie del esmalte presentó mayor alteración al contacto con el Peróxido de Hidrógeno al 35% mostrando una tendencia a incrementar la densidad de picaduras de la superficie y dando un aspecto poroso al esmalte sin embargo, en los dientes que estuvieron expuestos a saliva natural se observaron precipitados en la superficie, probablemente debido al potencial de remineralización de la saliva. 54 Tschoppe y Cols.(82) estudiaron in-vitroel efecto del flúor sobre la remineralización del esmalte en bovinos, concluyendo que no hay ninguna influencia del fluoruro de sodio contenido dentro de los geles blanqueadores en la remineralización y que los valores del pH varían, así como los compuestos del fluoruro de los geles que pueden afectar los patrones de remineralización.Mencionan que las futuras investigaciones deberían centrarse en la influencia de la concentración de fluoruro en los agentes químicos para el aclaramiento dental. Kielbassa y Cols.(83) investigaron los efectos de los dentífricos blanqueadores y regulares sobre la remineralización del esmalte en bovinos después de desmineralizarlos con ácido láctico (pH=5), concluyendo que a no ser que se demuestre la eficacia remineralizadora, los dentífricos blanqueadores deben recomendarse en pacientes propensos a la caries dental. Borges y Cols.(84) analizando la influencia de la remineralización sobre la microdureza del esmalte blanqueado en incisivos bovinos, utilizaron un grupo control sin blanquear, mientras que el blanqueador utilizado fue el Peróxido de Hidrógeno al 35% y concluyeron que el gel ácido blanqueador reduce significativamente la microdureza del esmalte y que el uso de los geles remineralizantes después del blanqueamiento mejora la microdureza del esmalte blanqueado. 55 Borges y Cols.(85) usaron terceros molares humanos para estudiar la influencia del potencial de remineralización sobre la microdureza del esmalte blanqueado. Los tratamientos consistieron en el blanqueamiento con Peróxido de Hidrógeno al 35%, PH al 35% con Fluoruro de Calcio y Fluoruro de Sodio y sin blanqueamiento, concluyeron que el Peróxido de Hidrógeno reduce significativamente la micro dureza superficial y sub superficial del esmalte y que la adición de flúor y calcio en el agente blanqueador incrementa la dureza del esmalte aclarado. Li y Cols.(86) evaluaron la regresión del color de dientes blanqueados y relacionaron el cambio de color y el volumen de minerales perdidos, utilizaron incisivos humanos, que fueron tratados con Peróxido de Carbamida al 38% y colocados en 4 diferentes ambientes; agua purificada, saliva artificial, un gel de remineralización comercial y un desecador, obteniendo resultados de una regresión del color con el incremento de minerales, la regresión de la luz esta correlacionada con cambio de la densidad del diente duro, concluyendo que en estos sistemas de blanqueamiento en el consultorio, la regresión del color es el resultado principalmente del regreso de la luz el cual está correlacionado con la presencia del proceso de remineralización del tejido dental. Do Amaral y Cols.(87)tratando dejustificar la necesidad de clarificar in vivo los efectos del blanqueamiento en el esmalte realizaron un estudio para determinar las concentraciones de fósforo y calcio después de diferentes tratamientos de blanqueamiento y aplicaron 10 y 20% de Peróxido de Carbamida y 35 y 38% de Peróxido de Hidrógeno, en 80 pacientes, 56 posteriormente se recolectaron micro biopsias del esmalte en incisivosdurante 7,14 y 21 días y después del blanqueamiento a los 7 y 14 días, el análisis se realizó con un espectrofotómetro, concluyendo que el uso de geles blanqueadores no alteran las concentraciones de fósforo y calcio in vivo en la superficie del esmalte. En la evaluación de los efectos sobre el esmalte humano después del blanqueamiento colocando Peróxido de Hidrógeno al 35% y fluoruro tópico 1.23% y Peróxido de Hidrógeno al 38% con fluoruro en su composición, Domínguez y Cols.(88) concretaron que con la aplicación tópica de flúor y usando el agente de blanqueamiento sin flúor se incrementan los valores de rugosidad y erosión en el esmalte, los resultados fueron obtenidos por tres metodologías; nanoindentación (dureza y modulo elástico), microscopia de fuerza atómica (rugosidad superficial) y microscopio electrónico de barrido (efecto en la superficie del esmalte). Martin y Cols.(89) evaluando el efecto de las terapias con flúor sobre la rugosidad superficial del esmalte humano después del blanqueamiento, utilizaron Peróxido de Carbamida al 16% y Peróxido de Hidrógeno al 35%, además de aplicaciones de Fluoruro de Sodio al 0.05%, Fluoruro de Sodioal 0.2%, Fluoruro tópico al 2%, encontrando que ambos blanqueamientos incrementaron la rugosidad y que ambas terapias fueron efectivas al reducir la rugosidad superficial después del blanqueamiento. 57 Berger y Cols. (90) evaluaron las alteraciones sobre la morfología superficial y la disminución mineral del esmalte humano con Peróxido de Hidrógeno al 35%, durante el blanqueamiento. Los agentes blanqueadores fueron irradiados con luz halógena o con láser diodo LED, los resultados revelan un decremento de los valores de dureza Knoop y cambios en la morfología del esmalte, también presentaron disminución del porcentaje por volumen del mineral de 40 micrómetros para la superficie del esmalte y desmineralización en áreas localizadas en la región subsuperficial del esmalte. Baldion y Cols. (91) mencionan que existen cambios en la composición del esmalte después de la aplicación del Peróxido de Hidrógeno al 38%, los elementos como el calcio y fósforo disminuyen en peso mientras que el porcentaje de oxígeno aumentó posterior al blanqueamiento. Tras aplicar flúor, independientemente de su presentación, existe recuperación del porcentaje de calcio. Ferreira y Cols. (92)evaluaron la morfología superficial del esmalte blanqueado con 35% de Peróxido de Hidrógeno seguido de aplicaciones con flúor, como el fluoruro acidulado al 1.23% y el fluoruro neutro al 2%, los grupos que recibieron blanqueamiento fueron expuestos en tres ocasiones y después fueron pulidos repitiendo esto después de 7 y 14 días y durante los intervalos fueron almacenados en saliva artificial a 37°C, resultando en que el Peróxido de Hidrógeno al 35% afecta la superficie del esmalte, presentando poros, depresiones e irregularidades en la superficie y los cambios más importantes ocurrieron después de la aplicación del gel de fluoruro acidulado al 1.23%. 64 cualquier tipo de material sin necesidad de preparación previa, en condiciones remotas, en campo o en línea de producción, realizando el análisis de composición por capas a tiempo real. Cuando la luz emitida por un láser pulsado incide sobre la superficie de un material se producen diversos fenómenos, como reflexión, transmisión, dispersión y absorción. La energía absorbida por el material puede a su vez dar lugar a la emisión de luz (Fluorescencia, fosforescencia), calentar el material, fundirlo, producir vaporización, desencadenar reacciones químicas, generar plasma. La presencia y eficiencia de uno u otro fenómeno dependerá de las propiedades del material, de la irradiancia del láser que se define como la potencia por unidad de área, medida en W/cm2y de su longitud de onda en nanómetros. En general, existen láseres de pulsos largos cuya duración es del orden de los microsegundos o superiores y los láseres de pulsos cortos que son del orden de los nanosegundos y los láseres de pulsos ultracortos del orden de los picosegundos o femtosegundos. La manipulación de láseres que por su potencia pueden causar daños importantes de carácter permanente, principalmente en los ojos, una medida de seguridad imprescindible es el uso obligatorio de lentes de seguridad que bloqueen totalmente la longitud de onda a la que emite el láser.(106) Los aspectos que se deben considerar para realizar la identificación cualitativa de la composición del material son; a) Contar con una base de datos de las líneas de emisión de los elementos, una base muy completa es la del Instituto Nacional de Tecnología y Estandarización en Estados Unidos (NIST), b) Identificar múltiples líneas de emisión de un elemento, cuanto mayor sea el 65 número de emisión que se asigne a un mismo elemento, mayor será la certeza que se tenga sobre su identificación y c) El grado de ionización del elemento.(106) La espectroscopia de plasmas inducida por láser (LIBS) ha tenido aplicación limitada en Odontología confinándose a la discriminación de caries en cavidades dentarias y a la acumulación de trazas metálicas en el diente (107- 109) y no existen reportes que utilicen este método como medio de identificación de los elementos químicos contenidos en el esmalte tratado con Peróxido de Hidrógeno al 38%. Singh y Cols. (110)mencionaron que los láseres se introdujeron en el campo de la odontología clínica con la esperanza de superar a algunos inconvenientes planteados por los métodos convencionales de procedimientos dentales. En algunas aplicaciones de la odontología las investigaciones han sido muy acertadas. Sin embargo, muchos estudios clínicos y extensos esfuerzos siguen haciéndose con el fin de obtener resultados satisfactorios. Singh y Cols. (111) usaron la técnica LIBS para cuantificar los principales elementos en muestras de dientes con y sin caries. Los elementos detectados fueron Ca, Mg, Cu, Zn, Sr, Ti, C, P, H, O, Na y K, ellos documentaron que en los dientes afectados por caries disminuyen el Ca y P, pero hay mayores cantidades de Mg, Cu, Zn, Sr, C, Na, K, H y O. También explican la presencia de los elementos metálicos presentes en la formación de caries dental. Por 66 último, los autores exploran la posibilidad del uso de LIBS por parte de los dentistas en la identificación de los dientes afectados por caries. El metabolismo del Sr y Ba es similar al del Ca. Generalmente las proporciones de Sr/Ca y Ba/Ca son indicadores de la nutrición (112-115) especialmente en la dieta de origen animal y vegetal. Estas proporciones pueden diferenciar las regiones geométricas con diferentes contenidos de Sr, Ba, y Ca en el medio ambiente. La proporción de Sr/Ba en tejidos calcificados refleja la proporción Sr/Ba en el ambiente y algunas modificaciones en las proporciones pueden indicar la movilidad demográfica. (116) Marcondes y Cols. (117)confirmaron el uso de láser Nd: YAG (LIBS) para analizar dentina humana con y sin caries, empleando el láser con una duración del pulso de 10 nanosegundos y 1064nanómetros en la ablación de los especímenes, para identificar los elementos atómicos ocuparon las siguientes líneas espectrales; para el Calcio (362.6,373.9,393.4,396.7 y 585.5nm), Mg (517.4 y 553.9nm), F (422.5 y 470.4nm), Na (444.6nm), Mn (383.1nm) y P (534.4nm). Encontraron la composición de los dientes extraídos, en la posibilidad de cuantificación absoluta, detectaron Ca, F, Mg, Na, y Sr entre otros. Concluyendo que aprovechando los cambios en la concentración de las relaciones entre los elementos de la matriz (Ca y P) y no de la matriz (Mg y Zn), representada por los cambios relativos en la línea las intensidades de espectros (LIBS), se puede lograr la discriminación de los diferentes tipos de tejidos. 67 Moncayo y Cols.(118) en su experimento con LIBS, estudiaron veinte dientes de diferentes individuos, mostrando espectros típicos de dientes y huesos humanos. Las líneas de emisión de los principales elementos en sus longitudes de onda particulares (nanómetros), se basan en la identificación del espectro atómico de la base de datos del Instituto Nacional de Tecnología y Estandarización (NIST(119): Cloro (247.85),Mg I (285.21; 518.36), Mg II (280.27), Ca I (422.67; 445.48; 551.30; 560.13), Ca II (393.37; 396.85), Sr I (407.77), Na I (588.99; 589.59), O I (777.42; 844.62) y N I (746.83; 821.63; 868.34).La línea de emisión más intensa que se observó en ambas muestras fue para el Ca II, debido a su alto contenido de Fosfato de Calcio y Hidroxiapatita (Ca10(PO4)6(OH)2.(120, 121) Las cantidades relativas de estos elementos pueden variar entre distintos individuos e incluso dentro del mismo individuo.(12) Concluyendo que a pesar de los diferentes elementos que se observan en los espectros (LIBS) y la matriz compleja de las muestras de huesos y dientes, la única selección del calcio, magnesio y estroncio permiten discriminar a las personas con alta precisión. Dentro de los progresos recientes para las aplicaciones biomédicas de LIBS en la odontología y en donde se analizan elementos como Ca, Mg, P, Zn, Cr, Co y I, están relacionados con los temas de microfiltración entre la infraestructura y el cubrimiento de dentaduras parciales fijas con diferentes materiales y la microfiltración en Odontología.(123, 124) 68 II. PLANTEAMIENTODEL PROBLEMA 69 Aunque el color del diente es determinado genéticamente, a lo largo de la vida, los dientes tienden a oscurecerse debido a los cambios de la dentina debido a la edad y a la absorción de los pigmentos de los alimentos, bebidas, por tinciones patológicas. El blanqueamiento es uno de los métodos actualmente más utilizados para aclarar el color dental, sin embargo, las alteraciones causadas por el uso de agentes químicos como el Peróxido de Hidrógeno y Peróxido de Carbamida, parecen estar relacionadas con una desmineralización de la estructura dentaria. Diferentes estudios han evaluado éstos efectos encontrando, una gran pérdida de minerales como calcio y fósforo por un proceso de oxidación, ocasionado por el uso de éstas sustancias ácidas sobre la superficie del esmalte, teniendo como consecuencia un aumento en la rugosidad superficial y la disminución de las propiedades del mismo. Esto conduce a un aspecto clínico importante en donde el paciente manifiesta sensibilidad dental por un corto tiempo sin embargo, se ha reportado que esta misma sensibilidad es transitoria o temporal cuando ocurre una remineralización por precipitado de los minerales perdidos con el blanqueamiento dental, además de que clínicamente el uso de sustancias ácidas en la superficie del esmalte puede causar un aumento en la rugosidad superficial, que a su vez causa una acumulación de placa dentobacteriana la cual puede influir en volver a pigmentar los dientes tratados. Por otro lado, la determinación de la estabilidad del color, la modificación de la estructura dental, la desmineralización y remineralización del esmalte, son parámetros importantes para evaluar nuevos agentes aclaradores, 70 considerando que éste método seguirá siendo de los más populares para satisfacción del paciente en busca de una sonrisa más estética. Por lo anteriormente planteado, nosotros nos formulamos la siguiente pregunta de investigación: ¿La aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% favorecerá la recuperación del contenido mineral del esmalte dental humano tratado con Peróxido de Hidrógeno al 38%? 71 III. HIPÓTESIS 72 A) HIPÓTESIS DEL ESTUDIO La recuperación del contenido mineral es significativa después de aplicar Fluoruro de Sodio al 2% en el esmalte dental humano expuesto al Peróxido de Hidrógeno al 38%. B) HIPÓTESIS NULA La recuperación del contenido mineral no es significativa después de aplicar Fluoruro de Sodio al 2% en el esmalte dental humano expuesto al Peróxido de Hidrógeno al 38%. 73 IV. JUSTIFICACIÓN 80 A) DISEÑO DEL ESTUDIO El presente estudio esin vitro, de tipo autocontrol, donde se analizó el contenido mineral del esmalte por medio espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS) antes, inmediato, 24 horas, 7 días y 14 días después del blanqueamiento dental con Peróxido de Hidrógeno al 38%, sin y con la aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%,almacenados en agua desionizada. 1. POBLACIÓN DEL ESTUDIO Dientes extraídos durante el período de Agosto y Septiembre de 2014, en la clínica de Odontología de la Universidad Autónoma de Tamaulipas, Centro Universitario Tampico-Madero, Tamaulipas, México. B) MUESTRA Premolares extraídos por razones ortodóncicas que cumplan con los criterios de inclusión. 1. TIPO DE MUESTREO No probabilístico por conveniencia. 81 2. TAMAÑO DE LA MUESTRA El estudio constó de una muestra de 30premolares que al seccionarlos se obtuvieron60 especímenes (n=60), dividiéndolos en dos grupos; Grupo A (Control) y Grupo B (Experimental) cada uno de30 especímenes.  GRUPO A(Control):30 especímenes de esmalte (lado izquierdo) tratados con Peróxido de Hidrógeno al 38 % (Opalescence Boost Ultradent), sin aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% yalmacenados en agua desionizada a 37°C.  GRUPO B (Experimental): 30 especímenes de esmalte (lado derecho) tratados con Peróxido de Hidrógeno al 38% (Opalescence Boost, Ultradent), con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% (Fluofar, Laboratorios Eufar, Bogotá, Colombia) durante 4 minutos cada 24 horas y almacenados en agua desionizada a 37°C. 2. CRITERIOS DE SELECCIÓN a) Criterios de inclusión  Dientes premolares humanos sanos, indicados para extracción por motivos ortodóncicos. 82  Superiores e inferiores de pacientes con rango de edad entre 18 a 25 años.  Premolares de pacientes de ambos sexos.  Extraídos en un periodo no mayor de 3 meses al momento del experimento.  Ausencia de historia de trauma dentario.  Sin historia de sensibilidad dental previa. b) Criterios de exclusión  Premolares con restauraciones metálicas y/o con resina por vestibular.  Que presenten malformaciones en la estructura del esmalte (congénita o adquirida).  Con abrasiones, abfracciones, erosiones y fracturas de tejido adamantino.  Dientes con tratamiento previo de aclaramiento dental.  Dientes con tratamiento de conducto radicular. c) Criterios de eliminación  Especímenes que sufran deterioro durante la investigación.  Extraviados durante el experimento. 83 C) VARIABLES DEL ESTUDIO 1. VARIABLES INDEPENDIENTES a) Blanqueamiento dental  Definición Conceptual: proceso para tratar los dientes y eliminar pigmentaciones de origen extrínseco o intrínseco con fines estéticos.  Definición Operacional: aplicación o no de una sustancia química sobre la superficie dental siguiendo las instrucciones del fabricante.  Escala de Medición:Nominal.  Categoría de Escala. o Esmalte sin Blanqueamiento Dental. o Esmalte tratado con Peróxido de Hidrógeno al 38% (Opalescence Boost, Ultradent), conteniendo Nitrato de Potasio al 3%, Fluoruro de Sodio al 1.1% e Hidróxido de Potasio al 2.5%. b) Soluciones promotoras de remineralización  Definición Conceptual: sustancias utilizadas para inducir la remineralización del esmalte dental humano sometido a blanqueamiento dental.  Definición Operacional: aplicación de diferentes soluciones en especímenes de esmalte dental que han sido tratados para su 84 blanqueamiento con Peróxido de Hidrógeno al 38% durante 24 horas, 7 días y 14 días.  Escala de Medición:Nominal.  Categoría de Escala: o Agua desionizada (pH 7.0 (Fermont, Productos Químicos Monterrey, México). o Fluoruro de Sodio al 2%. (pH 7.0) (Fluofar Laboratorios Eufar, Bogotá, Colombia). 2. VARIABLE DEPENDIENTE a) Contenido mineral  Definición Conceptual: cantidad de elementos químicos presentes sobre un organismo o unidad.  Definición Operacional: medición de minerales sobre los especímenes de esmalte sometidos o no a blanqueamiento dental con Peróxido de Hidrógeno 38% y tratados sin y con Fluoruro de Sodio al 2% medidos con espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS), en diferentes tiempos, antes, inmediato, 24 horas, 7 días y 14 días.  Escala de Medición: Numérica.  Categoría de Escala: o Intensidad Relativa (Unidad relativa) 85 D) LÍMITES DEL ESTUDIO Dentro de las limitantes del estudio podemos mencionar, que es un modelo in vitro, en donde se pierde el control de tener una similitud de pH, cambios térmicos, temperatura y saliva natural sin embargo, se tratara de simular lo más cercano posible a las condiciones presentes en la cavidad oral. E) PROCEDIMIENTO 1. ETAPA 1. SECCIONADO DE DIENTES Se seleccionaron treinta premolares intactos en su superficie vestibular y libres de caries, fracturas o restauraciones, extraídos por razones ortodóncicas en un período no mayor de 3 meses al momento del estudio, los cuales se almacenaron en recipientes de plástico con agua desionizada (Fermont, Productos Químicos Monterrey, México) (Fig.1) a 37°C en una cámara ambientadora (Shel-Lab, Modelo 1500E), (Fig.2) cambiándola cada 2 días para conservarlos siempre húmedos durante la investigación. 86 Fig. 1. Especímenes almacenados en agua desionizada. Fig. 2. Especímenes almacenados en cámara ambientadora. Una vez incluidos los treinta premolares, se procedió al retiro de cualquier resto orgánico con un escariador BioSonic US100R, (Fig.3), para posteriormente ser nuevamente colocados en el recipiente de plástico con agua desionizada a 37°C en la cámara ambientadora. 87 Fig. 3. Limpieza de los especímenes usando un escariador. Se cortaron reglas milimétricas (Baco) en fragmentos de 7cm con la ayuda de un micromotor (Marathon III, Tpc Advancetech) y un mandril con disco de carburo (KeyStone), (Fig.4). Estas reglas sirvieron para montar los especímenes en acrílico transparente. Fig. 4. Corte de fragmentos de reglas milimétricas donde se montaron los especímenes. Posteriormente los dientes fueron marcados para su corte en sentido longitudinal con un lápiz de cera (sds Belle) y se enumeraron del 1 al 30 con un marcador permanente (Sharpie) para lograr un control al momento del corte (Fig. 5). 88 Fig. 5. Marcaje de los dientes antes de su corte longitudinal. Los dientes se colocaron en el centro en las reglas fijándolos con plastilina. Se realizó una mezcla de polímero transparente y monómero (Nic- Tone, Manufacturera Dental Continental, Jalisco, México) que fue situada sobre la raíz de cada diente usando una espátula para cemento dental. (Fig. 6) Inmediatamente después se colocaron en un recipiente de plástico con agua desionizada para evitar que la reacción exotérmica del acrílico dañara la muestra. Fig. 6. Fijación de los dientes con resina acrílica. Se realizaron surcos guías al extremo de las reglas milimétricas, (Fig. 7) con la finalidad de colocarlos sobre la base sujetadora de la máquina 89 recortadora de precisión lineal (Buelher, IsoMet 5000), (Fig. 8) dando así firmeza al momento del corte. Fig. 7. Surcos guías en la regla milimétrica. Fig. 8. Recortadora de precisión lineal. El disco con el cual se realizaron los cortes es de 10.2cm x 0.3mm (Diamond Wafering Blade, Buehler), (Fig. 9) los dientes fueron seccionados en sentido bucolingual o bucopalatino con abundante irrigación hasta 4mm después de la corona clínica. (Fig. 10) 96 Los especímenes de ambos grupos fueron llevados a limpieza usando el ultrasonido (BioSonic UC50D, Whaladent) (Fig. 23) durante 15 minutos, para proceder a la medición inicial del contenido mineral del esmalte por medio de espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS) (Fig. 24) antes de la aplicación del agente blanqueador obteniendo así el registro basal. Fig. 23. Especímenes en Ultrasonido (BioSonic). Fig. 24. Especímenes en la medición inicial con espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS). 97 Para la medición de los contenidos minerales del esmalte por medio de espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS), se consideraron los espectros de los elementos químicos reportados por Moncayo y Cols. (118)(Fig. 25), basados en la identificación del espectro atómico de la base de datos del Instituto Nacional de Tecnología y Estandarización (NIST)(Tabla 1). (119) Fig. 25. Representación de los elementos químicos reportados por Moncayo et al en 2014. TABLA 1. IDENTIFICACION DEL ESPECTRO ATOMICO DE LA BASE DE DATOS DEL INSTITUTO NACIONAL DE TECNOLOGIA Y ESTANDARIZACION (NIST). Identificación de elementos Longitud de Onda Elemento Calcio II (Ca) 393.37, 396.85 Elemento Calcio I (Ca) 422.67, 445.48, 551.30, 560.13) Elemento Sodio I (Na) 588.99, 589.59 Elemento Magnesio I (Mg) 285.21, 518.36 Elemento Carbono (C ) 373.42 Elemento Estroncio (Sr) 407.77 Elemento Cloro I (Cl ) 247.85 Elemento Oxigeno (O) 777.42, 844.62 Elemento Nitrógeno (N) 746.83, 821.63, 868.34 98 Se consideró durante las mediciones que siempre existiera la misma distancia entre los especímenes y los componentes del LIBS, (Fig. 26, 27, 28) estandarizando los disparos de láser a la estructura dental y respetándola en todas las mediciones posteriores durante el experimento. Fig. 26. Medición de 23.14mm de la base de la lupa a parte inferior del cilindro. Fig. 27. Medición de 26.32mm del espécimen a la punta de la fibra óptica. Fig. 28. Medición de la parte inferior del vástago de la lupa a la superficie vestibular del espécimen de 34.48mm. 99 En todos los especímenes del esmalte se realizó una medición inicial con espectroscopia de plasmas inducida por láser (LIBS) previa a la aplicación del agente blanqueador. 3. ETAPA 3: APLICACIÓN DEL AGENTE BLANQUEADOR La manipulación y aplicación de Peróxido de Hidrógeno al 38% la realizo un solo operador, iniciando con la mezcla del producto, conectando la jeringa (color blanco) que contiene el activador con la jeringa (color rojo) que contiene la base blanqueadora, presionando el émbolo de 15 a 20 veces en cada dirección hasta obtener una mezcla homogénea, dejando el producto dentro de la jeringa roja como lo indica el fabricante. (Fig. 29) Fig. 29. Mezcla del agente blanqueador. Con la ayuda de una punta dispensadora desechable se aplicó el producto con un grosor de 0.5 a 1mm aproximadamente sobre la superficie vestibular del esmalte. (Fig. 30) 100 Fig. 30. Aplicación del agente blanqueador. Cada 5 minutos, el gel se agitó con movimientos circulares en la superficie vestibular con un micro-aplicador desechable liberando las burbujas de aire y renovando el contacto del gel con los especímenes, dejándose actuar por 15 minutos. (Fig. 31) Fig. 31. Movimientos circulares del gel cada 5 minutos. Después de completado el primer período, el gel fue eliminado con la ayuda de algodón y agua desionizada. (Fig. 32) 101 Fig. 32. Limpieza del espécimen con un rollo de algodón y agua. Nuevamente se realizó la aplicación del Peróxido de Hidrógeno al 38% por 15 minutos más y agitándolo cada 5 minutos de ésta manera se completó el procedimiento de blanqueamiento durante 30 minutos, por ultimo fueron lavados con agua desionizada (Fig. 33) de acuerdo a las recomendaciones del fabricante, después fueron llevados nuevamente al láser (LIBS) para la medición inmediata del contenido mineral, (Fig. 34) siempre verificando las distancias entre las superficies vestibulares y las partes del LIBS que se consideraron en la medición previa al blanqueamiento descrito anteriormente. Fig. 33. Lavado con agua después del blanqueamiento. 102 Fig. 34. Medición inmediata a la aplicación del Peróxido de Hidrógeno al 38%. Los especímenes fueron distribuidos a sus respectivos grupos, Grupo A; (lado izquierdo) sin el tratamiento de la aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% (Fig. 35) y Grupo B; (lado derecho) con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% (Fluofar Laboratorios Eufar, Bogotá Colombia) (Fig. 36) almacenados en agua desionizada a 37°C, después del blanqueamiento el Grupo B, se sometió a la aplicación tópica del Fluoruro de Sodio al 2% (Fluofar), usando un micro aplicador por 4 minutos, cada 24 horas durante el experimento, también manipulado por el mismo operador. (Fig. 37) 103 Fig. 35. Especímenes del Grupo A en agua desionizada. Fig. 36. Especímenes del Grupo B en agua desionizada. Fig. 37. Aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. 104 Después de cada aplicación con Fluoruro de Sodio al 2% se lavaron con abundante agua desionizada (Fig. 38) y fueron colocados nuevamente en un recipiente de plástico con agua desionizada cambiándola cada dos días durante el estudio, a ambos grupos se les hizo una medición del contenido mineral a las 24 horas, a los 7 días y 14 días (Fig. 39) en el LIBS. Fig. 38. Lavado de los especímenes después de la aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. Fig. 39.Mediciones de todos los especímenes a las 24 horas, 7 días y 14 días pos blanqueamiento. 105 Los datos obtenidos fueron recopilados, archivados, (Fig. 40) y comparados entre los grupos estudiados en el plan de análisis estadístico del estudio. Fig. 40. Datos almacenados de los espectros del contenido mineral. F) PLAN DE ANÁLISIS ESTADÍSTICO Se inició obteniendo los estadísticos descriptivos (media, mediana, desviación estándar, valor mínimo y máximo e intervalo de confianza para la media al 95%), para cada elemento en los diferentes períodos y aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. Posteriormente se comprobó la distribución normal de los datos, el supuesto de esfericidad y la igualdad de varianzas (prueba Kolmogorov- Smirnov, Prueba de Mauchly y la prueba de Levene). Al cumplir estos supuestos y tener un factor intersujetos y otro intrasujetos se optó por la prueba de Anova de dos factores con medidas repetidas en uno. Además, para los efectos simples se realizaron Anova de una vía y comparaciones por pares independientes y relacionados con el ajuste de Bonferroni. En la situación 112 B) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL INMEDIATAMENTE DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO En la Fig.42 se representa el Espectro de los especímenes inmediatamente después del blanqueamiento con Peróxido de Hidrógeno al 38%. Los resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 3 y 4. Fig. 42. Espectro (LIBS) de especímenes del esmalte inmediatamente después del blanqueamiento. Reportamos que tanto el grupo A como elgrupo B existe una desmineralización con diferencia estadísticamente significativa en el contenido mineral, disminuyendo inmediatamente después del blanqueamiento con Peróxido de Hidrogeno al 38% el porcentaje de Calcio un 20.3%, el Sodio (69.9%), el Magnesio (93.5%), el Carbono (52.6%) y el Fluoruro de Calcio (76%)(Fig. 43). Losvalores p y se muestran en la Tabla 5, existiendo una diferencia estadísticamente significativa. 113 Fig. 43. Comparación de la Intensidad Relativa en los especímenes antes e inmediatamente después del blanqueamiento. TABLA 5. VALORES DE DESMINERALIZACIÓN ESTADÍSTICAMENTE SIGNIFICATIVOS ANTES E INMEDIATO AL BLANQUEAMIENTO Calcio Sodio Magnesio CaF Carbono Valor p <.00001 <.00001 <.00001 <.00001 <.00001 0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 Intensidad Intensidad Relativa antes e inmediatamente después del blanqueamiento Antes Inmediato 20.3% 69.9% 93.5% 76% 52.6% 114 C) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 24 HORAS DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO En la Fig. 44se recoge el espectro de los especímenes del Grupo A sin aplicación de Fluoruro de Sodio 2%, 24 horas después del blanqueamiento, cuyos resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 3. Fig.44. Espectro (LIBS) del esmalte dental 24 horas después del blanqueamiento sin aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. Los elementos Sodio, Magnesio y Fluoruro de Calcio disminuyeron porcentualmente de inmediato a 24 horas 55.6%, 46.6% y 42.7% respectivamente. El elemento Sodio tuvo un cambio estadísticamente al disminuir de Inmediato a 24 horas (valor p = .007). Mientras que el Calcio y el Carbono aumentaron sin presentar diferencias estadísticamente significativas. 115 En la Fig. 45se presenta el espectro de los especímenes del Grupo B con aplicación de Fluoruro de Sodio 2%, 24 horas después del blanqueamiento, cuyos resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 4. Fig. 45. Espectro (LIBS) del esmalte dental 24 horas después del blanqueamiento con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. Al aplicar Fluoruro de Sodio al 2% a los especímenes, observamos una recuperación de los elementos Calcio, Magnesio y Carbono disminuyendo el Sodio y Fluoruro de Calcio. 116 D) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 7 DÍAS DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO En la Fig. 46 se muestra el espectro de especímenes del Grupo A sin aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%, 7 días después del blanqueamiento, cuyos elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 3. Fig. 46. Espectro (LIBS) del esmalte dental 7 dias después del blanqueamiento sin aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. La intensidad relativa de los elementos químicos mantuvo una estabilidad en relación a la intensidad reportada a las 24 horas después del blanqueamiento. En donde existió un aumento de Sodio a un 16.2%, el Magnesio con un 25% y Fluoruro de Calcio 36.4% probablemente por las sustancias químicas de Nitrato de Potasio al 3% y Fluoruro de Sodio al 1.1% e Hidróxido de Potasio al 2.5% que se encuentran en el gel del blanqueador, con respecto al Calcio disminuyo 9.8%,así como también el Carbono a un 11.6%. 117 En la Fig. 47 se presenta el espectro de los especímenes del Grupo B con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%, 7 días después del blanqueamiento, cuyos resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos se identifican en la Tabla 4. Fig. 47. Espectro (LIBS) del esmalte dental 7 dias después del blanqueamiento con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. La intensidad relativacontinúo con una disminución de todos los elementos químicos estudiados durante la investigación. E) MEDICIÓN DEL CONTENIDO MINERAL 14 DÍAS DESPUÉS DEL BLANQUEAMIENTO En la Fig. 48 se reporta el espectro de especímenes del Grupo A sin aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%, 14 días después del blanqueamiento los resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 3. 118 Fig. 48. Espectro (LIBS) del esmalte dental 14 días después del blanqueamiento dental sin la aplicación de fluoruro de sódio al 2%. La intensidad relativa de los elementos químicos mantuvo una estabilidad en relación a la intensidad reportada a las 24 horas después del blanqueamiento. En relación al Sodio tuvo su intensidad relativa que se aproximó a la reportada inmediatamente del blanqueamiento, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas. En la Fig. 49 observamos el espectro de especímenes del Grupo B con aplicación de Fluoruro de Sodio al 2% 14 días después del blanqueamiento cuyos resultados de la intensidad relativa de los elementos químicos identificados se reportan en la Tabla 4. 119 Fig.49. Espectro (LIBS) del esmalte dental 14 días después del blanqueamiento dental con la aplicación de Fluoruro de Sodio al 2%. La intensidad relativa de los elementos químicos mantuvieron una estabilidad en relación a la intensidad reportada a las 24 horas después del blanqueamiento con una disminución porcentual sin existir diferencias significativas del Calcio a 14.6%, del Sodio 27.3%, del Carbono 39.9% y el Magnesio bajo un 54.95% con diferencia significativa.Por otro lado el Fluoruro de Calcio aumento su porcentaje en un 19.9% sin diferencia estadísticamente significativa. F) ANÁLISIS COMPARATIVO DE LOS DIFERENTES ELEMENTOS SEGÚN LOS DIFERENTES GRUPOS DE INVESTIGACIÓN Se realizó el análisis comparativo de los diferentes elementos según los de grupos de investigación. 120 1. Antes del blanqueamiento Fig. 50. Intensidad relativa de ambos grupos antes del blanqueamiento. En la Fig. 50 no se reportaron diferencia estadísticamente significativas en la intensidad relativa de los elementos entre el grupo A y B antes del blanqueamiento. 2. Inmediatamente después del blanqueamiento Para la intensidad relativa inmediatamente después del blanqueamiento se muestra en la Fig. 51. 0 20000 40000 60000 Calcio Sodio Magnesio CaF Carbono Intensidad Relativa Antes del blanqueamiento  Grupo B  Grupo A a 121 Fig. 51. Intensidad Relativa de ambos grupos inmediatamente después del blanqueamiento. En el Fig. 51 se reportó una diferencia estadísticamente significativa con un valor p = 0.04 en la intensidad relativa del elemento Sodio entre el grupo A y B inmediatamente después al blanqueamiento. 3. 24 horas después del blanqueamiento Los resultados de la Intensidad relativa a las 24 horas después del blanqueamiento se reportan en la Fig. 52. 0 20000 40000 60000 Calcio Sodio Magnesio CaF Carbono Intensidad Relativa Inmediatamente después del blanqueamiento  Grupo B  Grupo A a 128 Por otro lado, no se debe olvidar que, tambiénla saliva tiene un efecto remineralizante después de la aplicación de los agentes blanqueadores,(72,74- 76.81.86) y queademás también influye en la composición del diente la cual está en relación con la nutrición (112-115) y la movilidad demográfica (116). B) EVALUACIÓN DEL CONTENIDO MINERAL (LIBS) La medición del contenido mineral después de la aplicación de los diferentes agentes blanqueadores se ha investigado mediante el uso de diferentes equipos,entrelos que podemos mencionar a la tomografía microcomputarizada, (103) el espectrofotómetro de absorción atómica (100,104, 105) y la espectrofotometría de energía dispersa por medio de microscopio electrónico de barrido, (101) desde 1964 se ha usadoen Odontología la espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS), que es una técnica que se basa en la generación de plasmas por ablación láser de Neodimio: Granate- Aluminio-Itrio, ( Nd: YAG). La demanda en la investigación está relacionada con la identificación de composición de superficies y sustratos. (106) La espectroscopia de plasmas inducidos por láser (LIBS) ha tenido una aplicación limitada en Odontología confinándose a la discriminación de caries y a la acumulación de trazas metálicas en el diente, (107-109) no existiendoestudios que usen éste método como medio de identificación de los elementos químicos 129 contenidos en el esmalte tratado con Peróxido de Hidrógeno al 38%, por tal motivo, nos hemos interesado ampliamente en éste campo de la investigación, en donde usando el LIBSpudimos encontrar alCalcio, Sodio,Magnesio, Carbono y Fluoruro de Calcio en el esmalte dental antes y después dela aplicación del Peróxido de Hidrógeno al 38%, demostrando que es una excelente alternativa como equipo de medición, teniendo bajo costo, esde fácil manejoy no se dañan las muestras sometidas al análisis tal como lo han confirmado Alvira y Cols.(106) Es conocido que los láseres se introdujeron en el campo de la Odontología clínica (110)con la esperanza de superar a algunos inconvenientes planteados por los métodos convencionales de procedimientos dentales,ampliándose así la posibilidad del uso de LIBS por parte de los dentistas en la identificación de los dientes afectados por caries, considerandoesto muy atractivo para ampliar la investigación con estudios clínicos controlados después de la aplicación de los agentes blanqueadores. Moncayo y Cols. (118) en su experimento con LIBS, sebasaron en la identificación del espectro atómico en la base de datos del Instituto Nacional de Tecnología y Estandarización (NIST).(119)La línea de emisión más intensa fue para el Ca II, debido al alto contenido en el diente de Fosfato de Calcio e Hidroxiapatita (Ca10 (PO4)6(OH)2. (120, 121) Las cantidades relativas de los elementos pueden variar entre distintos individuos e incluso dentro del mismo individuo, (121) las líneas espectrales que encontramos en el presente estudiotanto del (Ca 392.78nm) como del Mg (518.39nm) son muy semejantes 130 y cercanas al NIST, confirmando la eficacia del LIBS usado en este experimento. C) AGENTES BLANQUEADORES CON DESENSIBILIZANTES En el presente estudio se usó Peróxido de Hidrógeno al 38% que contiene adicionalmente Nitrato de Potasio al 3%,Fluoruro de Sodio al 1.1% e Hidróxido de Potasio al 2.5% los cuales habitualmente se promocionan como agentes desensibilizantes, que refuerzan la composición del esmalte y son preventivos de la caries y con nuestra metodología empleada en esta investigación no encontramos efecto alguno de remineralización. En nuestro estudio obtuvimos resultados que coincidieron con Tschoppe y Cols. (82) donde hubo una pérdida de minerales en diferentes períodos de tiempo y la diferencia entre nuestros trabajos fue que ellos lo realizaron en bovinos y usaron Peróxido de Carbamida al 10% con Fluoruro de Sodio, mientras que Domínguez y Cols. (88) y Ferreira y Cols. (92) encontraron incrementos de erosión y rugosidad, pero no hubo remineralización, Gladwell y Cols. (99) quienes usandoPeróxido de Carbamida al 10% mencionaron que es posible que la adición de flúor a un gel blanqueador pueda recuperar el contenido mineral y más que una mayor deposición de mineral reduce los espacios inter-cristalinos del esmalte, reduciendo así el potencial para la reintroducción de las proteínas que 131 cambian las propiedades ópticas del esmalte. Es por ello, que sugerimos que las futuras investigaciones deberían centrarse en la influencia de la concentración de fluoruro en los agentes químicos para el blanqueamiento dental. Además, otros estudios han reportado que cuando usan el flúor dentro del agente blanqueadorencuentran efectos leves, (59)incrementándose lamicrodureza, (84,85) reduciendola rugosidad y la pérdida de minerales. (93) Pedreira y Cols. (95)mencionan que cuando se realizan aplicaciones de Fluoruro de Sodio al 2% neutro y nano hidroxiapatita con la pasta dental,no se altera la rugosidad superficial o el brillo del esmalte dental después de la aplicación de Peróxido de Hidrógeno al 38%. Chen y Cols. (96) reportaron que se debe considerar el uso constante de fluoruros así como la adopción de una buena higiene bucal, para lograr un incremento de la microdureza del esmalte durante y después del blanqueamiento y que las características de la estructura dental se debe a la deposición de los cristales de fluoruro de calcio, manteniendo y adicionando el balance entre los fenómenos de desmineralización y remineralización, lo que fue consideradofuertemente en esta investigación al aplicar el Fluoruro de Sodio al 2% después del blanqueamiento dental (24 horas, 7 días y 14 días),sin embargo, no encontramos algún efecto remineralizante. Se ha reportado en el presente estudio que el Peróxido de Hidrógeno provoca una disminución de Calcio coincidiendo con varios autores.(8, 97, 98, 100, 132 101) Por el contrario, Do Amaral y Cols. (87) demostraron que el uso de geles blanqueadores no alteran las concentraciones de Fósforo y Calcio en la superficie del esmalte al realizar su estudio, el cual a diferencia del nuestro fue in-vivo. En la pérdida de elementos químicos, (101) la reducción del elemento Calcio puede atribuirse a la disolución de este elemento por los agentes blanqueadores y la disminución del Mg puede ser porque es el primer elemento disuelto durante un proceso de desmineralización(101), hecho que también se obtuvo en nuestro estudio,inmediato a la aplicación del Peróxido de Hidrógeno al 38%. 133 IX. CONCLUSIONES 134 1. Después de la aplicación de Peróxido de Hidrógeno al 38%, con un pH neutro, se produce una disminución estadísticamente significativa del contenido mineral de Calcio, Sodio, Magnesio, Carbono y Fluoruro Cálcico, inmediatamente, a las 24 horas, a los 7 y 14 días. 2. La desmineralización que se produce tras la aplicación de Peróxido de Hidrógeno al 38% con un pH neutro, demuestra que no es por la acción de un pH ácido. 3. No hay diferencia en el contenido mineral del Calcio, Sodio, Magnesio, Carbono y Fluoruro de Calcio, tras la aplicación de Peróxido de Hidrógeno al 38%, sin y con la aplicación tópica de Fluoruro de Sodio al 2%, 4. No existe una remineralización del esmalte dental al aplicar Fluoruro de Sodio al 2% después del blanqueamiento con Peróxido de Hidrógeno al 38% que contiene adicionalmente Nitrato de Potasio al 3%, Fluoruro de Sodio al 1.1% e Hidróxido de Potasio al 2.5% (sustancias desensibilizantes). 5. La espectroscopia de plasmas inducido por láser (LIBS) es un método eficaz y no destructivo para medir el contenido mineral del esmalte del diente humano antes y después de aplicar un tratamiento de blanqueamiento con Peróxido de Hidrógeno al 38%. 135 X. BIBLIOGRAFÍA 136 1. CARPENA G, BONISSONI L, BARATIERI LN, VIERA LC, MONTEIRO S. Effect of bleaching agents on the hardness and morphology of enamel. J Esthetic Restor Dent 2002; 14: 24-30. 2. MORLEY J.The role of cosmetic dentistry in restoring a youth full appearanceJ Am Dent Assoc 1999; 130:1166-72. 3. GOLDSTEIN RE. In-office bleaching: where we came from, where we aretoday. J Am Dent Assoc 1997; 128: 11-5. 4. LAMBERT DL.Motivación estética y blanqueamiento dental vital. Signature Inter 2000; 5: 5-10. 5. ERNST CP, MARROQUÍN BB, WILLERSHAUSEN-ZONNCHEN B. Effects of hydrogen peroxide-containing bleaching agents on the morphology of human enamel. Quintessence Int. 1996; 27:53-6. 6. MURCHISON DF, CHARLTON DG, MOORE BK. 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