Evaluación de la actividad anti-adenovirus de diferentes librerías químicas de pequeñas moléculas y caracterización de su mecanismo de acción
Gómez Marín, Isabel; Martínez Aguado, Pablo; Marrugal Lorenzo, Jose Antonio; Serna Gallego, Ana; Vega Holm, Margarita; Iglesias Guerra, Fernando; Vega Pérez, José Manuel; Pachón Díaz, Jerónimo; Sánchez Céspedes, Javier
- Published
- 2015
- Publisher
- Universidad Pablo de Olavide
- Language
- es
Abstract
Motivación: El adenovirus humano (HAdV) es un virus que causa infecciones autolimitadas y leves en individuos inmunocompetentes, en cambio, en pacientes inmunodeprimidos las infecciones suelen ser de caracter grave, presentando elevada morbilidad y mortalidad. En la actualidad no existe un antiviral específico para tratar este tipo de infecciones y los antivirales de amplio espectro disponibles en la práctica clínica habitual no presentan una actividad satisfactoria(1). El objetivo de este proyecto es obtener, partir de diferentes librerías químicas de pequeñas moléculas, compuestos líderes capaces de bloquear la infección por HAdV como primer paso para el desarrollo de un antiviral específico frente HAdV. Métodos: Partimos de una librería de 50 moléculas de una quimioteca de derivados di- y trisustituidos de piperazina. Primero se realizaron ensayos en placa para evaluar su actividad anti-HAdV a una concentración de 10 µM utilizando células 293β5 y el HAdV-GFP no replicativo. Se seleccionaron aquellas moléculas que presentaron actividad inhibidora de la infección superior al 50% y un concentración citotóxica 50 (CC50) superior a 100 µM. Luego, se realizaron diferentes ensayos funcionales para poder identificar en qué punto del ciclo replicativo del virus actuaban dichos compuestos: Ensayo de entrada con el HAdV-GFP y células A549 para evaluar su actividad (50 µM) en etapas tempranas de la entrada del virus en la célula huésped, hasta la liberación de su ADN en el núcleo, y PCR a tiempo real cuantitativa (50 µM) para determinar si aquellos compuesto que no presentaron actividad en fases tempranas presentaban como diana el proceso de replicación del ADN del virus o si por el contrario estaban afectando pasos posteriores de su ciclo infectivo(2). Resultados: Se seleccionaron las moléculas 11, 12, 18 y 19 en base a los resultados del ensayo en placa (inhibición 81%- 96%). Las moléculas 11 y 12 presentaron así mismo inhibición en los ensayos de entrada. La molécula 19 mostró además actividad nhibitoria de la replicación del ADN viral. Conclusiones: Las moléculas 11, 12, 18 y 19 inhiben significativamente la infección por HAdV a bajas concentraciones sin presentar efectos citotóxicos. Además las moléculas 11 y 12 actuarían en fases tempranas del ciclo viral, la molécula 18 ejercería su actividad antiviral durante las fases tardías del ciclo viral y la molécula 19 tendría su diana de acción, al menos en parte, en el proceso de replicación del ADN viral.
Full text
B h R M i e a d b M s e s f c h c v R 9 a C p e p B 2 B iosaia (revista d h ttp://www.bioinfo Póster Evalua c diferen t molécu l Isabel G ó Serna G Palabras cla v RESUMEN M otivación: i nmunocomp e e levada morb a ntivirales de d e este proy e b loquear la in f M étodos: Pa r s e realizaron e e l HAdV-GF P s uperior al 5 0 f uncionales p a c on el HAdV- G h uésped, has t c ompuesto q u v irus o si por e R esultados: S 9 6%). Las m o a ctividad nhib C onclusione s p resentar efe c e jercería su a c p arte, en el p r BIBLIOGR A 1. Sanchez-Cesp e 2 . Lion T. 2014. A d e los másteres de B i cabd.upo.es/bios a c ión de l t es libre r l as y ca r ó mez Mar í G allego(1), Vega Pé r (1)Grupo de (2)Dep a v e: adenovirus ; El adenoviru s e tentes, en ca ilidad y mort a amplio espec t e cto es obten e f ección por H A r timos de una e nsayos en pl P no replicati v 0 % y un co n a ra poder ide n G FP y célula s t a la liberació u e no present a e l contrario es S e seleccion a o léculas 11 y itoria de la re p s : Las moléc u c tos citotóxic o c tividad antivi r r oceso de repl A FIA e des,J. et al. Inhi b A denovirus infec t i otecnología Sanitari a a ia/ a activi d r ías quí m r acteriz a í n(1), Pabl o Mª , Marg a r ez(2), Jer ó Investigación a rtamento de Q ; inmunodepri m s humano ( H mbio, en pac i a lidad. En la a t ro disponible s e r, partir de di f A dV como pri m librería de 50 l aca para eval v o. Se selec n centración ci t n tificar en qué s A549 para e v n de su ADN a ron actividad taban afectan a ron las molé c 12 presentar o p licación del A u las 11, 12, 1 8 o s. Además l a r al durante la s icación del A D b ition of adenovir u t ions in immuno c a y Biotecnología A m d ad anti - m icas d e a ción d e o Martínez a rita Vega ó nimo Pac h n en Enfermed a Q uímica Org á m idos; antivir a H AdV) es un i entes inmun o a ctualidad no s en la práctic a f erentes libre r m er paso para moléculas d e uar su activid a cionaron aqu e t otóxica 50 ( C punto del cicl v aluar su acti v en el núcleo, en fases tem do pasos pos t c ulas 11, 12, 1 o n así mismo A DN viral. 8 y 19 inhibe n a s moléculas s fases tardía s D N viral. u s replication by c ompetent and im m biental, Industrial y A @Biosaia -adeno v e pequ e e su me c Aguado(1 Holm(2), F h ón Díaz(1 ) a des Infeccio s á nica, Faculta d a les. virus que c o deprimidos l a existe un anti a clínica habit u r ías químicas el desarrollo d e una quimiot e a d anti-HAdV e llas molécul a C C50) superi o o replicativo d v idad (50 µM) y PCR a tie m pranas prese n t eriores de su 1 8 y 19 en b a inhibición en n significativa m 11 y 12 actu a s del ciclo viral a trisubstituted p i munocompromis e A limentaria de la UP O v irus de e ñas c anism o ), José An t F ernando I ) y Javier S s as, H. Unive r d de Farmacia c ausa infecci o a s infecciones viral específi c ual no presen t de pequeñas d e un antivira l e ca de derivad a una conce n a s que pres e o r a 100 µM d el virus actua en etapas te m m po real cuan n taban como d ciclo infectivo a se a los resu l los ensayos d m ente la infec a rían en fase s y la molécul a i perazin-2-one d e e d patients. Clin M O ) o de acc i t onio Marr u I glesias G u S ánchez C é r sitario Virge n , Universidad o nes autolimi suelen ser d e c o para tratar t an una activi d moléculas, c o l específico fr e os di- y trisus t n tración de 10 e ntaron activi d . Luego, se r ban dichos c o m pranas de l a titativa (50 µ M d iana el proc e (2). l tados del en s d e entrada. L a ción por HAd V s tempranas a 19 tendría s u e rivative. Antivir a M icrobiol Rev 2 7 n º i ón u gal Lore n u erra(2), Jo s é spedes(1* n del Rocío/IB de Sevilla tadas y leve e caracter gr a este tipo de i d ad satisfacto r o mpuestos líd e e nte HAdV. t ituidos de pi p µM utilizand o d ad inhibidor a r ealizaron dif e o mpuestos: E n a entrada del v M ) para deter m e so de replica c s ayo en placa a molécula 1 9 V a bajas co n del ciclo viral u diana de ac c a l research, vol. 1 7 :441-462. º 4 (marzo de 20 n zo(1), An a s é Manuel ) iS s en individ u a ve, presenta n nfecciones y r ia(1). El obje t e res capaces p erazina. Prim e o células 293β a de la infecc e rentes ensa y n sayo de entr a v irus en la cél m inar si aque l c ión del ADN (inhibición 81 9 mostró ade m n centraciones , la molécula c ión, al menos 1 08, p. 65-73 15) 1 a u os n do los t ivo de e ro 5 y c ión y os a da ula l los del %- m ás sin 18 en
