Procedimiento para la preparación de ésteres de hidroxitirosol, ésteres obtenidos y utilización

19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Núme o de publicación: 2 246 603 21 Núme o de solici ud: 200201554 51 In . Cl.: C07C 69/007 (2006.01) C07C 69/025 (2006.01) C07C 69/16 (2006.01) A61K 31/222 (2006.01) A61Q 19/00 (2006.01) A61P 3/02 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01) 12 PATENTE DE INVENCIÓN B1 22 Fecha de p esen ación: 03.07.2002 43 Fecha de publicación de la solici ud: 16.02.2006 Fecha de la concesión: 18.04.2007 45 Fecha de anuncio de la concesión: 16.06.2007 45 Fecha de publicación del olle o de la pa en e: 16.06.2007 73 Ti ula /es: Consejo Supe io de In es igaciones Cien í icas c/ Se ano, 117 28006 Mad id, ES Uni e sidad de Se illa 72 In en o /es: Alcudia González, Felipe; Ce Ven ulá, A u o; Espa e o Sánchez, José Luis; Ma eo B iz, Raquel y T ujillo Pé ez-Lanzac, Ma iana 74 Agen e: No cons a 54 Tí ulo: P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol, és e es ob enidos y u ilización. 57 Resumen: P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi- i osol, és e es ob enidos y u ilización. El obje o de la p esen e in ención es un p ocedimien o pa a la p epa ación de una amplia gama de és e es de hi- d oxi i osol. La sín esis de los compues os se lle a a cabo po eacción de hid oxi i osol sin é ico o de los compues- os na u ales hid oxi i osol, oleu opeína o aglucones de la oleu opeína (que se encuen an en el acei e de oli a, alpechín, o ujo de oli a u hojas de oli o) con un agen e acilan e que es un compues o que con iene al menos un g upo acílico de es o R, donde R es H, un adical alquilo de en e 1 y 21 á omos de ca bono, sea lineal ó ami ica- do, un adical alquenilo de has a 21 á omos de ca bono ó un g upo a ilo. Los és e es p epa ados median e el p o- cedimien o de la in ención pueden u iliza se como adi i o en p oduc os alimen icios y cosmé icos, así como en p e- pa aciones a maceú icas. A iso: Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP. ES 2 246 603 B1 Ven a de ascículos: O icina Española de Pa en es y Ma cas. Pº de la Cas ellana, 75 – 28071 Mad id 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 DESCRIPCIÓN P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol, és e es ob enidos y u ilización. Obje o de la in ención El p ocedimien o obje o de la p esen e in ención p opo ciona un p ocedimien o simple y e icaz pa a la p epa ación de una amplia gama de és e es de hid oxi i osol de ó mula gene al: La sín esis de los compues os se lle a a cabo po eacción de hid oxi i osol sin é ico o de los compues os na u ales hid oxi i osol, oleu opeína o aglucones de la oleu opeína (que se encuen an en el acei e de oli a, alpechín, o ujo de oli a u hojas de oli o) con un agen e acilan e que es un ácido o gánico o un és e que con iene al menos un g upo acílico de es o R, donde R es H, un adical alquilo de en e 1 y 21 á omos de ca bono, sea lineal ó ami icado, un adical alquenilo de has a 21 á omos de ca bono ó un g upo a ilo. Los és e es p epa ados median e el p ocedimien o de la in ención pueden u iliza se como adi i o en p oduc os alimen icios y cosmé icos, así como en p epa aciones a maceú icas. Es ado de la écnica Los an ioxidan es se añaden a acei es y g asas, así como a los alimen os, pa a p e eni la o mación de colo es y la o es no deseables y de o os compues os que se o iginan en la oxidación de los lípidos [“Food An ioxidan s”, B.J.F. HUDSON ed., Else ie , Lond es, 1990; G. PASCAL en “Adi i os y auxilia es de ab icación en las indus ias ag oalimen a ias”, L.J. Mul on ed., Ed. Ac ibia, Za agoza (España), 1988, pag. 157 y ss.]. Se es ima que la ida ú il de muchos p oduc os alimen icios aumen a en e un 15 y un 200% po el empleo de an ioxidan es [R. MAESTRO DURÁN Y R. BORJA PADILLA, G asas y Acei es,44 (1993) 101]. Ac ualmen e, se u iliza una amplia gama de adi i os an ioxidan es en la elabo ación de p oduc os alimen icios [R.D. 145/1997, BOE de 22/3/97, pag. 9378 y ss.] y cosmé icos [“In en a io de Ing edien es Cosmé icos”, Cen o de Publicaciones del Minis e io de Sanidad y Consumo, Mad id, 1996], an o de o igen na u al como sin é ico, depen- diendo de la na u aleza, más o menos lipídica, del p oduc o que se p e ende p o ege de la oxidación. En e los an ioxidan es na u ales des acan po su ele ada ac i idad los compues os poli enólicos, sob e odo los o o ypa aca ecoles. El hid oxi i osol (II) es uno de ales o-ca ecoles, y se encuen a en di e sas uen es na u ales, siendo especialmen e impo an e su p esencia en el oli o [A. VÁZQUEZ RONCERO, Re . F . Co ps G as,25 (1978) 21], ya sea lib e o en o ma de de i ados ( undamen almen e oleu opeina, III, [L.M. PANIZZI e al, Gazz. Chim. I al., 90 (1960) 1449]). El hid oxi i osol p esen a una capacidad p o ec o a en e a la oxidación mucho mayo que los adi i os an ioxidan es no malmen e u ilizados en la conse ación de p oduc os alimen icios g asos: los oco e oles (an ioxidan es de o igen na u al) y el bu il hid oxi oluol (BHT, an ioxidan e de o igen sin é ico) [M. SERVILI e al, Re . I al. Sos anze G asse,73 (1996) 55]. No obs an e, al se p ác icamen e insoluble en un medio lipo ílico no puede se usado pa a es e ipo de alimen os. Sin emba go, se sabe que el acei e de oli a i gen (AOV) man iene cie os ni eles de aglucones de la oleu opeína (IV y V), que poseen sabo ama go, el cual comunican al acei e [G.F. MONTEDORO e al, J. Ag ic. Food Chem., 41 (1993) 2228; A. VÁZQUEZ RONCERO e al, G asas y Acei es,25 (1974) 269]. Es os de i ados (IV y V) poseen una ac i idad an ioxidan e simila a la que p esen a el hid oxi i osol lib e [M. SERVILI e al, Re . I al. Sos anze G asse, 73 (1996) 55], lo cual indica que la p esencia de un enlace és e en la molécula no a ec a al pode an ioxidan e. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 Recien emen e, se ha de ec ado en el AOV la p esencia de o o és e de hid oxi i osol: el ace a o de hid oxi i osol (VI) [M. BREVES e al, J. Ag ic. Food Chem., 47 (1999) 3535; J.L. ESPARTERO e al., Lib o de Resúmenes de la XXVII Reunión Bienal de la Real Sociedad Española de Química, Tene i e, 1999, Re . S6-C-10, pag. 165; R. MATEOS e al., J. Ag ic. Food Chem., 49 (2001) 2185]. Es e compues o se ha some ido a es udios pa a comp oba su capacidad an ioxidan e, habiendo esul ado ene la misma ac i idad en e a la oxidación que el p opio hid oxi i osol lib e. Además, es liposoluble y no es ama go, ca ac e ís icas que lo hacen especialmen e a ac i o pa a su posible uso como adi i o alimen a io. Po o a pa e, desde hace iempo se sospecha que los enoles con enidos en el acei e de oli a ienen e ec os bene iciosos sob e la salud humana [F. VISIOLI y C. GALLI, J. Ag ic. Food Chem.46 (1998) 4292]. Se ha is o que el hid oxi i osol p e iene el daño oxida i o del DNA y la oxidación de las lipop o eínas de baja densidad [o. I. ARUOMA e al., J. Ag ic. Food Chem.46 (1998) 5181], inhibe la ag egación plaque a ia [A. PETRONI e al., Th omb. Res.78 (1995) 151], inhibe la ac i idad de cie as lipoxigenasas [N. KOHYAMA e al., Biosci., Bio echnol., Biochem. 61 (1997) 347; R. De la PUERTA e al., Biochem. Pha macol.57 (1999) 445], y se abso be po el o ganismo humano en la inges ión del acei e de oli a [F. VISIOLI e al., FEBS Le .468 (2000) 159]. Todos es os es udios sugie en que el hid oxi i osol y sus de i ados pueden ene un uso a macológico. Una e e encia sob e la p epa ación de un és e de hid oxi i osol ue publicada po Ba aldi en 1983 [P. G. BARAL- DI e al, Liebigs Ann. Chem., 83 (1983) 684]. En es e caso se ob enía el ace a o de hid oxi i osol median e una u a sin é ica, in es igada p e iamen e po Schöp [c. SCHÖPF e al, Liebigs Ann. Chem., 563 (1949) 86], que implicaba cinco e apas a pa i de 2-(3,4-dime oxi enil)e anol (VII), al como se mues a en el siguien e esquema: Recien emen e se ha desc i o [M. H. GORDON e al., J. Ag ic. Food Chem., 49 (2001) 2480] una nue a sín esis a pa i del hid oxi i osol que cons a de es pasos: a amien o con b omu o de bencilo pa a da 2-(3,4-dibenciloxi enil) e anol, ace ilación con ácido acé ico en pi idina pa a ob ene el ace a o del p oduc o an e io y, po úl imo, eliminación de los g upos bencílicos po hid ogenación con ca alizado de paladio. Ambos p ocedimien os son la gos, alguna de las e apas equie en condiciones especiales y/o manipulación espe- cialmen e cuidadosa pa a e i a pé didas innecesa ias de p oduc o y los endimien os o ales son bajos. Median e es os p ocedimien os además, sólo se puede accede al mencionado ace a o de hid oxi i osol (VI). 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 Explicación de la in ención El obje o de la p esen e in ención es un p ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol de ó mula gene al: El p ocedimien o es una eacción de es e i icación egioselec i a que cons a de las siguien es e apas: a) con ac o en e hid oxi i osol o és e es na u ales del hid oxi i osol (oleu opeína, aglucones de la oleu o- peína), y un agen e acilan e en una elación de concen aciones comp endida en e 10:1 y 1:1000 (hid o- xi i osol/agen e acilan e), a una empe a u a comp endida en e 0 y 150ºC du an e un pe iodo de iempo comp endido en e 30 minu os y 1 mes, en p esencia de un ca alizado . b) aislamien o y pu i icación de los és e es de hid oxi i osol ob enidos en la e apa an e io . El agen e acilan e es un ácido o gánico o un és e que con iene al menos un g upo achico de es o R. El adical R de la ó mula gene al puede se H, un adical alquilo, un adical alquenilo ó un g upo a ilo. El adical alquilo puede se cualquie adical p oceden e de un alcano de cadena lineal o ami icada de has a 21 á omos de ca bono inclusi e. El adical alquenilo puede se cualquie adical p oceden e de un alqueno de cadena lineal o ami icada de has a 21 á omos de ca bono inclusi e que enga uno o más g ados de insa u ación en cualquie posición de la cadena. El adical a ilo es un g upo enilo o un de i ado del mismo sus i uido. Pa icula men e, pueden u iliza se como agen es acilan es los iglicé idos con enidos en el acei e de oli a. Se emplea un ca alizado ácido si el agen e acilan e es un ácido o gánico, y un ca alizado ácido o enzimá ico si el agen e acilan e es un és e . En el caso de que el agen e acilan e sea un és e , la eacción es egioselec i a al menos en un 95%. La eacción se ealiza en p esencia de un disol en e ine e. El disol en e se selecciona de en e algunos de los siguien es: és e es, é e es o hid oca bu os halogenados. El ca alizado ácido puede se un ácido mine al, ácido os ó ico ó un ácido o ganilsul ónico y el ca alizado en- zimá ico p e e en emen e una lipasa. En p esencia de ácido sul ú ico, la eacción anscu e a empe a u a ambien e du an e un pe iodo de iempo comp endido en e 30 minu os y 24 ho as. El p ocedimien o obje o de la in ención puede inclui as la e apa de con ac o el aislamien o y pu i icación de los és e es de hid oxi i osol ob enidos. Los és e es de hid oxi i osol, ob enidos median e el p ocedimien o de la in ención, ienen un es o achico cons i- uido po una cadena que con iene en e 3 y 21 á omos de ca bono y pueden u iliza se como adi i os en o mulaciones alimen a ias, en p oduc os cosmé icos y en p epa aciones a maceú icas. Asimismo pueden u iliza se los p oduc os de la eacción ob enidos, sin pos e io aislamien o de los és e es, como adi i os en las aplicaciones mencionadas p e ia pu i icación. En pa icula , pa a la u ilización en o mulaciones alimen a ias, los és e es se pueden adiciona solos o jun o con o os an ioxidan es na u ales de ipo o odi enólico o di e pénico, en una can idad al que su concen ación o al en la ase apola del alimen o no exceda de 200 ppm. Cons i uye asimismo obje o de la p esen e in ención una o mulación alimen a ia que con iene como adi i o és e- es de hid oxi i osol ob enidos median e el p ocedimien o de la in ención solos o jun o con o os oxidan es na u ales de ipo o odi enólico o di e pénico en una can idad al que su concen ación o al en la ase apola del alimen o no exceda de 200 ppm. 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 Po úl imo cons i uyen asimismo obje o de la p esen e in ención un p oduc o cosmé ico y una p epa ación a ma- céu ica que con ienen és e es de hid oxi i osol ob enidos median e el p ocedimien o de la in ención. Desc ipción de la in ención Es a in ención desc ibe un nue o p ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol [2-(3,4-dihid oxi- enil)e anol] de ó mula gene al (I) donde Res H, un adical alquilo de en e 1 y 21 á omos de ca bono, sea lineal ó ami icado, un adical alquenilo de has a 21 á omos ca bono o un g upo a ilo a pa i de hid oxi i osol o és e es na u ales de hid oxi i osol (oleu opeína, aglucones de la oleu opeína) y un agen e acilan e que es un ácido o gánico o un és e que con iene al menos un g upo acílico de es o R. El hid oxi i osol puede se de p ocedencia sin é ica [R. CAPASSO e al, J. Ag ic. Food Chem., 47 (1999)1745; c. BAI e al, J. Ag ic. Food Chem.,46 (1998) 3998; R. VERHE e al, Bull. Liaison G oupe Polyphenols,15 (1992) 237; A. BIANCO e al, Syn h. Comun.18 (1988) 1765; P. G. BARALDI e al, Liebigs Ann. Chem., 83 (1983) 684; J. C. SPIN e al., J. Ag ic. Food Chem.49 (2001) 1187] o na u al. La oleu opeína y aglucones de la oleu opeína son de p ocedencia na u al. Tan o el hid oxi i osol como la oleu opeína y sus aglucones pueden es a con enidos en la acei una, el acei e de oli a, las hojas de oli o y en los p oduc os de desecho de la elabo ación del acei e de oli a o de las acei unas de mesa, undamen almen e, en el alpechín, el o ujo de oli a y las aguas de la ado que se ob ienen en la p epa ación de acei unas e des de es ilo español. [ M. J. AMIOT, e al., J. Ag ic. Food Chem.34 (1986) 823; R. BRIANTE e al., J. o Bio echnol. 93 (2002) 109; M. BRENES e al., J. Ag ic Food Chem.43 (1995) 2702; R. MATEOS e al., J. Ag ic. Food Chem.49 (2001) 2185; R. CAPASSO e al, J. Ag ic. Food Chem., 47 (1999) 1745; R. CAPASSO e al, Ag ochimica,38 (1994) 165; R. CAPASSO e al,. Phy ochemis y,12 (1992) 4125; E. RAGAIII e al, Ann. Chim., 57 (1967) 1476] y R. CAPASSO e al, Appl. Biochem. Bio echnol., 60 (1996) 365; L.M. PANIZZI e al, Gazz. Chim. I al., 90 (1960) 1449]. Po el é mino “ adical alquilo de en e 1 y 21 á omos de ca bono” se debe en ende , en el sen ido u ilizado en es a desc ipción, cualquie adical p oceden e de un alcano de cadena lineal o ami icada de has a 21 á omos de ca bono inclusi e. Análogamen e, po el el é mino “ adical alquenilo de en e 1 y 21 á omos de ca bono” debe en ende se cualquie adical p oceden e de un alqueno de cadena lineal o ami icada de has a 21 á omos de ca bono inclusi e que enga uno o más g ados de insa u ación en cualquie posición de la cadena. De mane a simila , po el é mino “a ilo” se debe en ende un g upo enilo o un de i ado bencénico sus i uido con uno o más g upos de cualquie na u aleza. La sín esis de los compues os (I), obje o de la p esen e in ención, se lle a a cabo po eacción de hid oxi i osol (II) sin é ico (ob enido po cualquie a de los mé odos desc i os an e io men e) o de los p oduc os na u ales: hid oxi i osol (II), oleu opeína (III), y aglucones de la oleu opeína (IV y V) (p oceden es de cualquie a de las uen es mencionadas an e io men e), con un ácido o gánico o un és e , donde R iene el signi icado an es mencionado. Es a eacción se puede lle a a cabo bien calen ando o bien a empe a u a ambien e, y en p esencia de un ca alizado ácido si el agen e acilan e es un ácido o gánico, y de un ca alizado ácido o enzimá ico si el agen e acilan e es un és e , de acue do con el siguien e esquema: 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 Como ca alizado ácido se puede u iliza cualquie sus ancia de na u aleza ácida, con p e e encia: ácido sul ú ico (H2SO4), clo u o de hid ógeno (HCl), ácido os ó ico, ácido i luo oacé ico (CF3COOH), ácido acé ico (CH3COOH), ácido p- oluenosul ónico (CH3C6H4SO3H), o ácido can o sul ónico (C10H16O4S). Como ca alizado enzimá ico se puede u iliza cualquie enzima con ac i idad de es e asa o lipasa, c uda o pu i i- cada, con p e e encia: lipasa panc eá ica po cina (PPL), papaina, es e asa de hígado de caballo, de ce do, de aca, de conejo, o de o eja. La eacción se puede ealiza en ausencia o en p esencia de disol en es que sean ine es. Los és e es de hid oxi i osol ob enidos median e el p ocedimien o de la in ención han sido some idos a es udios pa a comp oba su capacidad an ioxidan e, habiendo esul ado ene la misma ac i idad en e a la oxidación que el p opio hid oxi i osol lib e. La en aja que p esen an con espec o a és e es la de se mucho más solubles en ambien es lipidicos (acei es, man ecas, g asas, ...). Po ello, es os compues os de ó mula (I) son ú iles pa a la indus ia alimen a- ia y cosmé ica como adi i os an ioxidan es. Po o a pa e los es e es de hid oxi i osol poseen e ec os a macológicos simila es a los obse ados con el hid oxi i osol, que pueden se mayo es debido al mayo ca ác e liposoluble de es as moléculas. Respec o al es ado de la écnica an e io , el p ocedimien o de la in ención p esen a las siguien es en ajas: 1) Es la p ime a ez que se desc ibe la p epa ación de és e es del hid oxi i osol hid oxi i osol median e una eacción de anses e i icación. 2) Se u ilizan ca alizado es que pueden se ácilmen e eliminados, e i ando así la necesidad de un p oceso de pu i icación pos e io . 3) Median e el p ocedimien o de la in ención se puede accede en p incipio a cualquie és e del hid oxi i osol, con sólo cambia la na u aleza del eac i o RCOX. 4) La eacción anscu e con al os endimien os químicos. 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 5) Es un mé odo más simple y e icaz que el desc i o en el es ado de la écnica pa a la sín esis del ace a o de hid oxi i osol. 6) Los és e es de hid oxi i osol ob enidos median e el p ocedimien o de la in ención son muy solubles en lípidos y no p esen an sabo ama go. 7) Su ac i idad an ioxidan e es mayo que la de o os adi i os u ilizados en la ac ualidad ( oco e oles y BHT). 8) Se p epa an a pa i de hid oxi i osol o de los de i ados na u ales del hid oxi i osol an es mencionados, que se encuen a en abundan e can idad en las aguas esiduales de la ob ención del acei e de oli a (alpechín), en el esiduo sólido (o ujo) y en las hojas del oli o, de donde se puede ex ae po p ocedimien os conocidos. Ello pe mi i ía el ap o echamien o de los p oduc os de desecho de las almaza as. 9) Se pueden p epa a ácilmen e los és e es de hid oxi i osol cuyo es o R sea el de un ácido g aso p esen e de o ma na u al en las g asas animales y/o acei es ege ales (palmí ico, es eá ico, oleico, linoleico, ...), lo cual los hace candida os pa a se usados como adi i os an ioxidan es en alimen ación humana y en aplicaciones a macológicas. Modo de ealización de la in ención La in ención se ilus a en los siguien es ejemplos, que en modo alguno p e enden limi a el alcance de la p esen e in ención. Ejemplo 1 P epa ación de ace a o de 2-(3,4-dihid oxi enil)e ilo Ace a o de hid oxi i osol Mé odo A A pa i de hid oxi i osol A una disolución de 50 mg de hid oxi i osol (II) en 2 mL de ace a o de e ilo se adicionan 50 mg de lipasa pan- c eá ica po cina c uda (Ald ich) y la mezcla esul an e se agi a du an e 48 ho as. La suspensión esul an e se il a a a és de celi a y se e apo a el disol en e a acío, ob eniéndose el ace a o de hid oxi i osol pu o, con un endimien o del 86%. Mé odo B A pa i de oleu opeína A una disolución de 50 mg de oleu opeína (III) en 4 mL de ace a o de e ilo se adicionan 0,4 mL de ácido clo híd ico 12 N y la mezcla esul an e se agi a du an e 16 ho as a empe a u a de 40ºC. La solución esul an e se la a con disolución sa u ada de bica bona o sódico, se seca sob e sul a o sódico anhid o, se il a y se e apo a has a esiduo. El p oduc o se pu i ica po c oma og a ía en columna ob eniéndose el ace a o de hid oxi i osol pu o con un endimien o del 72%. Espec oscopia de Resonancia Magné ica Nuclea (RMN) 1H RMN (DMSO-d6)δ:6.63 (d, 1H), 6.60 (d, 1H), 6.46 (dd, 1H), 4.10 ( , 2H), 2.68 ( , 2H), 1.97 (s, 3H) ppm. 13C (DMSO-d6)δ:170.2, 145.0, 143.7, 128.5, 119.4, 116.1, 115.5, 64.6, 33.5, 20.6 ppm. Espec ome ía de Masas (MS) Calculado pa a C10H13O4[M+H]+: 197.081384. De e minado po HRMS (Cl): 197.080136 (6.3 ppm). Análisis elemen al Calculado pa a C10H12O4: C, 76.59; H, 10.64. Encon ado: C, 76.32; H, 10.91. 7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 Ejemplo 2 P epa ación de olea o de 2-(3,4-dihid oxi enil)e ilo Olea o de hid oxi i osol Mé odo A A pa i de olea o de e ilo A una disolución de 50 mg de hid oxi i osol (II) en 1.0 mL de olea o de e ilo se adicionan 5 mg de ácido p- oluenosul ónico (Ald ich) y la mezcla esul an e se calien a a 60ºC du an e 24 ho as. Después de deja en ia , se la a con disolución sa u ada de NaHCO3, se ecoge la acción o gánica, se seca sob e sul a o sódico y se in oduce la mezcla en una columna de c oma og a ía pa a su pu i icación, ob eniéndose el olea o de hid oxi i osol pu o, con un endimien o del 76%. Espec oscopia de Resonancia Magné ica Nuclea (RMN) 1H RMN (DMSO-d6)δ:6.62 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.44 (dd, 1H), 5.31 (m, 2H), 4.10 ( , 2H), 2.67 ( , 2H), 2.23 ( , 2H), 1.97 (q, 4H), 1.47 (m, 2H), 1.25 (m, 20H), 0.84 ( , 3H) ppm. 13C (DMSO-d6)δ:172.7, 145.0, 143.7, 129.6, 128.5, 119.3, 116.1, 115.4, 64.5, 33.7, 33.4, 31.2, 29.0, 28.9, 28.7, 28.6, 28.5, 28.4, 28.3, 26.5, 24.3, 22.0, 13.8 ppm. Espec ome ía de Masas (MS) Calculado pa a C26H43O4[M+H]+: 419.316135. De e minado po HRMS (Cl): 419.315427 (1.7 ppm). Análisis elemen al Calculado pa a C26H42O4x1/2H2O: C, 73.07; H, 10.07. Encon ado: C, 73.58; H, 10.48. Mé odo B A pa i de acei e de oli a A una disolución de 50 mg de hid oxi i osol (II) en 0,5 mL de acei e de oli a se adiciona 1 go a de ácido sul ú ico y la mezcla esul an e se agi a du an e 24 ho as. Se la a la mezcla con disolución sa u ada de NaHCO3, se ecoge la acción o gánica, se seca sob e sul a o sódico y se e apo a el disol en e. La mezcla de és e es g asos de hid oxi i- osol ( undamen almen e olea o de hid oxi i osol), diluida en el acei e de oli a es an e, se puede usa sin necesidad de pu i icación. Si se quie e pu i ica se puede ealiza median e columna c oma og á ica, ob eniéndose una mezcla líquida de olea o de hid oxi i osol (83%), palmi a o de hid oxi i osol (11%) y linolea o de hid oxi i osol (6%). 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 246 603 B1 REIVINDICACIONES 1. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol de ó mula gene al median e una eacción de es e i icación egioselec i a que se lle a a cabo po con ac o en e alguno de los siguien es compues os - hid oxi i osol - oleu opeína - aglucones de la oleu opeína y un agen e acilan e, ca ac e izado po que dicho agen e acilan e es un ácido o gánico o un és e que con iene al menos un g upo acílico de es o R y se emplea en una elación de concen aciones comp endida en e 10:1 y 1:1000 (hid oxi i osol o compues o asimilado/agen e acilan e), a una empe a u a comp endida en e 0 y 150ºC, du an e un pe iodo de iempo comp endido en e 30 minu os y 1 mes, en p esencia de un ca alizado ca alizado ácido si el agen e acilan e es un ácido o gánico, y de un ca alizado ácido o enzimá ico si el agen e acilan e es un és e . 2. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según la ei indicación 1, ca ac e izado po que la es e i icación lle ada a cabo con un és e como agen e acilan e es egioselec i a al menos en un 95%. 3. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-2 ca ac e izado po que el adical R es un H, un adical alquilo, un adical alquenilo o un g upo a ilo. 4. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-3, ca ac e izado po que el adical alquilo puede se cualquie adical con es uc u a de cadena ca bonada lineal, ami icada ó cíclica, sus i uida ó no, de has a 21 á omos de ca bono inclusi e. 5. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-3, ca ac e izado po que el adical alquenilo puede se cualquie adical con es uc u a de cadena ca bonada lineal, ami icada ó cíclica, sus i uida ó no, de has a 21 á omos de ca bono inclusi e y que enga uno o más g ados de insa u ación en cualquie posición de la cadena. 6. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-3, ca ac e izado po que el adical a ilo es un g upo enilo o un de i ado del mismo sus i uido. 7. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-6, ca ac e izado po que el agen e acilan e u ilizado son iglicé idos con enidos en el acei e de oli a. 8. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-7, ca ac e izado po que opcionalmen e la eacción se ealiza en p esencia de un disol en e seleccionado de en e algunos de los si- guien es: és e es, é e es o hid oca bu os halogenados. 9. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según las ei indicaciones 1-8 , ca ac e izado po que el ca alizado es un ácido mine al. 10. P ocedimien o pa a la p epa ación de és e es de hid oxi i osol según la ei indicación 9, ca ac e izado po que el ca alizado es ácido os ó ico. 9