Importancia de la calibración en los laboratorios de química analítica

1 UNVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA IMPORTANCIA DE LA CALIBRACIÓN EN LOS LABORATORIOS DE QUÍMICA ANALÍTICA MANUEL ESPEJO CUADRADO 2 UNVERSIDAD DE SEVILLA FACULTAD DE FARMACIA TRABAJO FIN DE GRADO GRADO EN FARMACIA IMPORTANCIA DE LA CALIBRACIÓN EN LOS LABORATORIOS DE QUÍMICA ANALÍTICA MANUEL ESPEJO CUADRADO DICIEMBRE 2016 DEPARTAMENTO DE QUÍMICA ANALÍTICA TUTORES: MARÍA DOLORES HERNANZ VILA, MARÍA ANGELES HERRADOR MORILLO TRABAJO DE REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 3 INDICE 1. RESUMEN 4 2. INTRODUCCIÓN 5 2.1. Concep o de calidad 5 2.2. Validación del mé odo analí ico 6 2.2.1. In oducción 6 2.2.2. P opiedades analí icas 7 2.2.3. P opiedades sup emas 8 2.3. T azabilidad 9 2.4. Es ánda es analí icos. Ma e iales de e e encia 10 3. OBJETIVOS 12 4. METODOLOGÍA 13 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 13 5.1. Calib ación. Concep o y ipos 13 5.2. Calib ación ins umen al 14 5.2.1. Calib ación de una balanza analí ica 16 5.2.2. Calib ación de ma e ial olumé ico 18 5.2.3. Calib ación de un pH-me o 19 5.2.4. Calib ación de un espec o o óme o UV-Visible 20 5.3. Calib ación me odológica 21 5.3.1. Mé odo simple, di ec o o del es ánda ex e no 24 5.3.2. Mé odo del pa ón in e no 25 5.3.3. Mé odo de la adición es ánda o adición pa ón 27 6. CONCLUSIONES 29 7. BIBLIOGRAFÍA 30 4 1. RESUMEN La química analí ica iene como inalidad el es udio de la composición química de una mues a, median e mé odos de labo a o io analí icos. En cualquie labo a o io de química analí ica, el obje i o p incipal es ob ene esul ados iables y consis en es, es deci , esul ados de calidad. Pa a ello es undamen al cons a a que el mé odo que se a a usa se adecua al p oblema analí ico que se p esen a. Es o se consigue median e la alidación del mé odo analí ico. La alidación se ealiza median e una se ie de p uebas o p ocesos que pe mi en asegu a que se ob end án esul ados de calidad. Median e es os p ocedimien os de alidación, se ob end án unas p opiedades analí icas del mé odo que indica an si el mé odo es álido o no pa a la inalidad con la que se u iliza. La de e minación de dichas p opiedades o pa áme os se consigue en e o os, con el p ocedimien o de calib ación del mé odo de análisis. Den o de química analí ica exis en p incipalmen e dos ipos de mé odos, los ins umen ales y los no ins umen ales como los olumé icos. Pa a cualquie a que sea el mé odo se equie e una calib ación del equipo a u iliza , que es el paso inicial en cualquie p oceso analí ico. Pos e io men e los mé odos ins umen ales equie en además de una calib ación me odológica, que asegu a que el p ocedimien o es álido pa a el p oblema conc e o que se p esen a y el anali o que se es udia. Se puede calib a po es écnicas, siendo la más simple y ápida la calib ación simple o po es ánda ex e no, pe o ambién la que equie e de menos p oblemas elacionados con el mé odo. La calib ación po adición es ánda es ú il pa a compensa el e ec o que pueden p oduci o as sus ancias a la señal que mide el equipo. Po úl imo, se puede u iliza el mé odo del pa ón in e no, pa a aquellos p ocesos analí icos en los que se p oduzcan muchas a iaciones en e cada ope ación y eso cause esul ados analí icos di e en es. En es e abajo se desc iben los p incipales concep os elacionados con la calidad de los esul ados analí icos, se explican, en de alle, y se ilus an con ejemplos, los concep os de calib ación ins umen al y me odológica y su implicación decisi a en la ob ención de esul ados de calidad. Palab as cla es: calib ación ins umen al y me odológica, ma e iales de e e encia, azabilidad, calidad, alidación. 5 2. INTRODUCCIÓN El p incipal obje i o de los labo a o ios analí icos es ob ene in o mación analí ica signi ica i a, es deci , de calidad, que pe mi a adop a decisiones écnicamen e co ec as pa a la esolución de p oblemas cien í icos, écnicos o sociales. La Química Analí ica es una ciencia me ología, se basa, po an o, en la medición de dis in os pa áme os pa a ob ene esul ados analí icos. Pa a que es os esul ados sean de calidad deben se azables a e e encias o es ánda es adecuados y pa a consegui es e e o los analis as deben: segui una es a egia analí ica adecuada, oma mues as ep esen a i as, aplica mé odos de medidas alidados, u iliza equipos ap opiados que uncionen co ec amen e, es deci , calib ados y e i icados, y u iliza pa ones o ma e iales de e e encia adecuados pa a alida , calib a y e i ica . 2.1. Concep o de calidad La calidad en el ámbi o analí ico, iene dos e ien es o dos pun os de is a cla os. La calidad como concep o básico, puede de ini se como un conjun o de ca ac e ís icas, p opiedades, a ibu os o capacidades de una en idad que la hacen mejo , peo , o igual que o as en idades del mismo ipo. La calidad ambién puede de ini se desde un pun o de is a más aplicado como la o alidad de ca ac e ís icas de una en idad que la capaci an pa a sa is ace las necesidades especí icas o implíci as impues as po el clien e o la legislación (Valcá cel y Ríos, 1992). En la p ime a de inición se habla de p opiedades o ca ac e ís icas que si en pa a e alua la calidad analí ica, que engloba la calidad de los esul ados, del p oceso analí ico y de los ma e iales y equipos u ilizados. Básicamen e exis en cua o acciones pa a el asegu amien o de la calidad analí ica: calib ación del ins umen al a usa , alidación del mé odo, e i icación de los ins umen os, y ealiza con oles de calidad, de los esul ados (He nández, 2013). Desde un pun o de is a aplicado, la calidad es á ep esen ada po la cohe encia que debe exis i en e la in o mación que el clien e solici a y la que se p opo ciona en los esul ados. Es o se conoce como “ i - o -pu pose”. La ep esen i idad y cohe encia en e la in o mación de ambas pa es es un ac o decisi o pa a la calidad de un p oceso analí ico (Compaño y Ríos, 2002). 6 Además, odos los labo a o ios de química analí ica, debe án asegu a su calidad y compe encia median e el cumplimien o de los sis emas de calidad igen es, siendo la no ma ISO 9001/2008 y la no ma ISO 17025/2005 necesa ias implan ación y cumplimien o en el ámbi o analí ico. La guía Eu achem (Eu olab, 2016) engloba odos es os aspec os en seis p incipios de las buenas p ác icas analí icas. En ellos, se desc ibe que es necesa io medidas analí icas pa a sa is ace los equisi os aco dados “ i - o -pu pose”, la necesidad de la u ilización de mé odos y equipos p obados ( alidación, calib ación y e i icación), de la e aluación del desempeño écnico del labo a o io median e con oles de calidad, y de la obligación de la de inición de p ocedimien os adecuados de con ol y po úl imo, del asegu amien o de calidad. 2.2. Validación del mé odo analí ico 2.2.1. In oducción Valida un mé odo analí ico, es e i ica y documen a su calidad y su adecuación a unos de e minados equisi os es ablecidos, es deci que se e i ica si es adecuado siemp e pa a su inalidad, pa a el p oblema analí ico que se p esen a (Rius y cols., 2000). La alidación de la me odología analí ica es cla e pa a asegu a la calidad del análisis químico. El obje i o de la alidación es ob ene esul ados p ecisos, ep oducibles y con iables. Es o se puede consegui con una calib ación an o ins umen al, del equipo, como del mé odo a alida . También es necesa io un co ec o uso de es ánda es de e e encia, la p esencia de pe sonal analí ico cuali icado, y ene odo el p oceso bien desc i o y documen ado. (OMS, 2002). Po an o el obje i o de esul ados p ecisos y con iables, solo se puede consegui con p ocedimien os de análisis alidados. Según el ipo de mé odo u ilizado la ac uación espec o a la alidación se á dis in a. Los mé odos analí icos se pueden ag upa p incipalmen e en dos g andes g upos, los mé odos no malizados y los mé odos no no malizados. Se conside an mé odos no malizados aquellos que es án desa ollados po un o ganismo econocido y son gene almen e acep ados po el sec o écnico co espondien e. Los mé odos no no malizados son desa ollados po un e ce o o que han sido adap ados po el labo a o io a pa i de un mé odo no malizado (IAAC, 2010). Los mé odos no malizados no necesi an se alidados, a no se que se le hayan inco po ado mejo as, que sea usado pa a una especi icación pa a la que no es aba alidado, o que se u ilice di e en e ins umen al. Si se debe án alida (Eu olab, 2016): 7  Mé odos no no malizados  Mé odos cuyo con ol de calidad indica que han su ido modi icaciones con el iempo  Mé odos nue os con los que se quie a demos a la equi alencia con uno an e io , de e e encia. Pa a alida un mé odo, exis en una se ie de p opiedades que ienen como inalidad demos a que cumple con los equisi os analí icos pa a los que se ha desa ollado. Es os se conocen como p opiedades analí icas. 2.2.2. P opiedades analí icas Son las p opiedades o c i e ios que de inen los equisi os analí icos y que un mé odo debe ene pa a pode esol e el p oblema analí ico (Eu olab, 2016). Según Valcá cel (1999) son indicado es de calidad que pe mi en e alua , compa a y alida di e sas ace as de la química analí ica de o ma undamen al y e icaz. Den o de las p opiedades analí icas, no odas ienen el mismo ni el de impo ancia. Exis en clasi icaciones de je a quía según la ascendencia que enga pa a ga an iza la calidad del mé odo al como se ap ecia en la Figu a 1. Figu a 1. Clasi icación je á quica de las p opiedades analí icas (Valca cel, 1999). 8 Se suelen clasi ica en es g upos, des acando las p opiedades sup emas como aquellas que ienen una mayo impo ancia en la calidad de los esul ados. Los o os dos g upos je á quicos engloban una se ie de p opiedades que a ibu os del p oceso analí ico (Compaño y Ríos, 2002). P opiedades sup emas:  Exac i ud: es la di e encia en e una medida y el alo e dade o, y se exp esa en o ma de e o .  Rep esen a i idad: es la cohe encia en e el esul ado y las necesidades del clien e. P opiedades básicas:  P ecisión: mide la conco dancia que se iene, de esul ados, sob e una misma mues a du an e un pe iodo de epe iciones.  Sensibilidad: capacidad de un mé odo pa a di e encia dos anali os de simila concen ación o de e mina pequeñas concen aciones de un anali o en la mues a.  Selec i idad: capacidad de que un mé odo sea especí ico pa a el anali o p oblema, pa a su iden i icación o cuan i icación.  Robus ez: capacidad de esis encia al cambio de la espues a de un mé odo cuando se la cambian las condiciones expe imen ales. P opiedades complemen a ias  Rapidez y cos e: mayo p oduc i idad posible, es deci , núme o de mues as p ocesadas po unidad de iempo y alo económico po cada análisis.  Fac o es pe sonales: p o esionales cuali icados y abajo en condiciones de segu idad y comodidad. 2.2.3. P opiedades Sup emas La elección de p opiedades adecuadas, es cla e en la alidación del mé odo, po que esul a p ác icamen e imposible consegui alo es de calidad pa a cada p opiedad, con lo cual se ha de log a un equilib io en e los pa áme os o p io iza según los equisi os analí icos (Ma o o y cols., 2007). Las p opiedades sup emas, exac i ud y ep esen a i idad, son las que esul an más imp escindibles pa a alcanza calidad de esul ados. Así, po ejemplo, un esul ado que enga una g an alo de exac i ud, pe o que no cumple con la ep esen a i idad del p oblema, no se á un esul ado de calidad (Valcá cel, 1999). 9 La ep esen a i idad es un pa áme o que se e ie e a un mues eo co ec o y se consigue encon ando una conco dancia en e los esul ados y la mues a, el obje o, el p oblema analí ico y o os ac o es socioeconómicos. La exac i ud como concep o eó ico, iene ca ac e izado po el e o sis emá ico. Los e o es en los p ocedimien os analí icos incluyen dos componen es, uno alea o io y o o sis emá ico. Los e o es sis emá icos son o iginados po allos en el diseño o de los equipos empleados, y segui á siendo el mismo aunque se epi a el expe imen o. El e o sis emá ico puede se es imado y debe se co egido (Ha is, 2006). Los o os e o es, los alea o ios, es án elacionados p incipalmen e con una p opiedad de calidad básica, la p ecisión. Es os ipos de e o es su gen du an e el p oceso de medición y son e o es imp edecibles e inco egibles. Como son imp edecibles y no se pueden es ima , se in oduce el concep o de la ince idumb e. La ince idumb e de medida es o o pa áme o muy usado en la química analí ica, que es ablece un in e alo de alo es den o del cual se es ima que se encuen a el alo eal de la medición (Gella, 2012). 2.3. T azabilidad En un con ex o de globalización de me cados como es el ac ual, consegui esul ados azables, esul ados que puedan se compa ables con los de o os labo a o ios y que sean conside ados exac os, esul a undamen al. La azabilidad se de ine según el Vocabula io In e nacional de Me ología (VIM, 2012) como “p opiedad del esul ado de una medición (o el alo de un es ánda ) que consis e en que se pueda es ablece el esul ado p e isible de su compa ación di ec a con los pa ones ap opiados, gene almen e nacionales o in e nacionales, median e una cadena inin e umpida de compa aciones eales, odas con ince idumb es conocidas”. A endiendo a su de inición, se puede conside a que el concep o de azabilidad cons a de seis elemen os p incipales (Bení ez, 2004): - Cadena inin e umpida de compa aciones: se inicia en los pa ones nacionales o in e nacionales y e mina con el alo del esul ado de una medición. Se a a de una cadena documen ada de calib aciones has a una e e encia, median e unos p ocesos de medición, que pe mi en elaciona los esul ados de medida, en gene al a las unidades del Sis ema In e nacional, con su ince idumb e de medida conocida (Ri e a, 2015). 16 Resul ados (Riu y cols., 2001):  Es imación de los e o es del ins umen o de medida, del sis ema de medida o de la medida ma e ializada.  De e minación de o as p opiedades me ológicas: ince idumb e o di e en es alo es de p ecisión.  El esul ado debe se ecogido en un documen o denominado ce i icado de calib ación. In o mación: se ob iene in o mación sob e la capacidad de medida del equipo, y se ga an iza la compa abilidad median e (Riu y cols., 2001):  Valo de elación en e el alo del equipo y el p opo cionado po el pa ón, concep o que en química analí ica se conoce como co ección. Es un alo que se u iliza pa a ob ene alo es eales de la medición.  Ince idumb e: el alo numé ico de la co ección o la unción de la espues a ob enida, end á una ince idumb e asociada debida al mé odo y a los pa ones u ilizados. Se puede calcula con la in o mación gene ada en la calib ación, aunque que la ince idumb e no solo p o iene de ahí, sino ambién del uso que se dé a dia io al ins umen o de medida.  T azabilidad: la ope ación de calib ación iene como obje i o demos a que los esul ados sean compa ables con el es o de labo a o ios y el ce i icado de calib ación ga an iza la azabilidad de los esul ados a pa ones ap opiados.  E aluación de los esul ados de la calib ación. El equipo enca gado de hace lo analiza los esul ados y decide que se debe hace con el equipo. Con el in de desa olla con más p o undidad la calib ación ins umen al en un labo a o io de química analí ica, se an a de alla los p ocedimien os de calib ación del ins umen al de mayo uso dia io en cualquie labo a o io. 5.2.1. Calib ación de una balanza analí ica Cualquie ins umen o de pesada se a a calib a po compa ación di ec a (Figu a 3). Cabe apun a que la calib ación queda in alidada si se cambiase de ubicación de la balanza, sal o que se haya demos ado que el ins umen o no es sensible a es os cambios (CEM, 2004). Pa ones: pesas no malmen e de ace o inoxidable pulido, la ón o aluminio. Según la O ganización In e nacional de Me ología Legal, las pesas son de sie e ipos di e en es:  Clase E: E1 y E2, exac i ud g ande. Usado po labo a o ios de calib ación. 17  Clase F: F1 y F2, g an exac i ud, pa ones de e e encia po los o ganismos de me ología.  Clase M: M1, M2 y M3, pesas con meno exac i ud, pe o mayo ole ancia. Usadas como pa ones de abajo. (OILML R 111-1, 2004). P ocedimien o de calib ación: gene almen e, un p oceso de calib ación de una balanza analí ica, o de o o ins umen o de pesaje, cons a de cinco e apas que se esquema izan en la Figu a 4. 1. Repe ibilidad de las lec u as: es una medida de como la balanza se á capaz de medi de o ma epe i i a una masa, en la que se de e mina el alo de la des iación es ánda . Se Figu a 3. Calib ación de una balanza analí ica usando pesas ce i icadas. Figu a 4. E apas del p ocedimien o de calib ación de una balanza analí ica. 18 ealiza una se ie de lec u as epe idas. El alo de des iación es ánda ob enido nunca debe á se mayo que es eces la esolución de la balanza. El p ocedimien o es simple, p ime o se ajus a a ce o la balanza, se coloca la pesa pa ón un núme o de eces aco de a lo dicho an e io men e (CEM, 2004). 2. E ec o del descen amien o de ca ga: es a p ueba de e mina las posibles a iaciones pa a un mismo alo de masa p oducidas al pone la ca ga en dis in os pun os de la balanza. Se deben coloca las ca gas den o de los lími es es ablecidos po el ab ican e colocando siemp e en p ime a posición la pesa en el cen o del pla illo, ya que el alo ob enido, es el esul ado de la di e encia del alo en medio del pla illo, con espec o a las o as posiciones (K eme y Pu ele, 2016). 3. P ueba de des ió de ajus e: en es a p ueba se calcula el des ío, como la di e encia en e la lec u a del alo del pesaje y el alo de la pesa. 4. P ueba de linealidad: se e i ica, en odo el in e alo de pesada que la indicación de ins umen o sea aco de con la ca ga aplicada den o de los lími es especi icados po el ab ican e. 5. Mo ilidad: consis e en deposi a sin choque, una ca ga en la balanza o se e i a sua emen e del ins umen o en equilib io. Se debe p oduci una a iación en la indicación de la balanza, si no es así, se aumen a a la sob eca ga has a que se p oduzca la a iación del alo (INTI, 2012). 5.2.2. Calib ación de ma e ial olumé ico. En la calib ación de ma e ial olumé ico (Figu a 5), se ealiza una calib ación di ec a pe o po el mé odo de ep oducción de la de inición de la magni ud. Se calib a el ma e ial olumé ico median e pesada y se calculan los alo es de la magni ud deseada a pa i de la densidad (Riu y cols., 2002). Figu a 5. Ma e ial olumé ico de uso ecuen e en los labo a o ios. 19 Pa ones: no se u ilizan pa ones azables al sis ema in e nacional de unidades, pe o el ins umen al que mide la pesada debe es a calib ado. P ocedimien o de calib ación: se selecciona un olumen máximo, mínimo e in e medio del ins umen o a calib a , y se ealizan las siguien es ope aciones pa a cada uno de los olúmenes: Se coloca el ecipien e pa a la pesada y se apun a el alo , que se end á en cuen a pa a el cálculo de la ince idumb e y se ajus a a ce o. Pa a inaliza el p oceso, se añade el agua des ilada al ma e ial olumé ico y se ano a la pesada. Con los alo es ob enidos se pod á calcula , median e ope aciones ma emá icas, el olumen de cada una de las calib aciones, u ilizando pa áme os como la densidad del agua, empuje del ai e, empe a u a y coe icien e de dila ación del id io. La elación que exis e en e el olumen calculado y el olumen nominal, que es el co espondien e al ma e ial olumé ico, es el da o pa a calcula la co ección y la ince idumb e de los esul ados. 5.2.3. Calib ación de un pH-me o Se lle a a cabo una calib ación po compa ación di ec a. Pa ones: se u ilizan disoluciones egulado as de e e encia con dis in os alo es de pH, 4, 7 y 10 gene almen e (Figu a 6). P ocedimien o de calib ación (CEM, 2007): 1. Lec u a inicial: se p ocede a la lec u a, de o ma o denada, de odo el campo de medida del pH-me o, u ilizando disoluciones egulado as que aba quen dicho in e alo. Se inicia con el pa ón de meno pH. Figu a 6. Disoluciones de e e encia pa a calib ación pH-me o. 20 2. Ajus e: si la lec u a de la disolución egulado a no coincide con la ce i icada, se p ocede a su ajus e manual o au omá ico según el pH-me o u ilizado. 3. Lec u a as ajus e: se uel en a lee sucesi amen e odas las disoluciones y se comp ueba que el ajus e ha sido co ec o. 5.2.4. Calib ación de un espec o o óme o UV-Visible. Un espec o o óme o mide la can idad de ene gía adian e abso bida po las moléculas de una mues a en unción de las longi udes de onda especí icas. La ene gía abso bida o abso bancia (A) y la longi ud de onda () son los pa áme os que in e ienen y los que hay que conside a a la ho a de calib a el equipo cuyos componen es se esquema izan en la Figu a 7. Pa a asegu a la azabilidad de las mediciones ealizadas con un espec o o óme o se calib a el ins umen o median e una se ie de p uebas. Cada p ueba usa un pa ón dis in o. Pa ones: disoluciones de: oxido de holmio en acido pe cló ico, sul a o de cob e en ácido sul ú ico, dic oma o po ásico en ácido sul ú ico y ni i o de sodio. P ocedimien o de calib ación: se ealizan las siguien es p uebas pa a de e mina (Azca a e y cols., 2016; Ma ínez y de los Ángeles, 2009): 1. Exac i ud de la longi ud de onda: es e pa áme o se e i ica midiendo el es ánda de óxido de holmio (III) en acido pe cló ico, con sus picos bien de inidos, compa ándolo con la longi ud de onda de dichos picos ob enidos al medi con el espec o o óme o A Figu a 7. Esquema de los componen es básicos de un espec o o óme o.  21 2. Exac i ud o omé ica: se ob iene compa ando la abso bancia de las disoluciones de e e encia (sul a o de cob e en ácido sul ú ico, dic oma o po ásico en ácido sul ú ico) con la ob enida en el ins umen o, a las mismas longi udes de onda. Es ecomendable compa a a dis in as longi udes de onda 3. Luz di usa o pa asi a: es la adiación elec omagné ica de longi ud de onda dis in a a la seleccionada que se de ec a. Es a luz di usa causa disminución de la abso bancia y educe el ango lineal del ins umen o. Se u iliza una disolución de ni i o de sodio medida a es longi udes de onda. 4. Linealidad o omé ica: el análisis de la linealidad o omé ica si e pa a es ablece el ango de abso bancia en el que el espec o o óme o iene espues a lineal. Como pa ones se u ilizan disoluciones de dic oma o po ásico a dis in as concen aciones, u ilizando una disolución de ácido sul ú ico pa a el ajus e del equipo. 5.3. Calib ación me odológica. La calib ación me odológica o analí ica, es una ope ación necesa ia pa a algunos mé odos de análisis en los cuales no bas a con una calib ación ins umen al. Los mé odos u ilizados en un labo a o io analí ico se pueden clasi ica en dos g andes g upos: Mé odos clásicos: son los mé odos más an iguos u ilizados pa a medi la can idad de sus ancia en una mues a. La g a ime ía y olume ía son ejemplos de ellos. Se ca ac e izan po se mé odos de al a p ecisión, mayo que la de los análisis ins umen ales. Son conside ados mé odos absolu os po que es posible encon a una elación di ec a en e la medida analí ica y la concen ación analí ica sin necesi a de es ánda es o pa ones que con engan el anali o en cues ión, an solo u ilizan eacciones químicas y coe icien es es equiomé icos pa a calcula la concen ación inal de anali o (Valcá cel y Ríos, 1992). Mé odos ins umen ales: son mé odos que u ilizan écnicas más mode nas, como son las écnicas óp icas, é micas, adioquímicas, másicas, e c. Suelen ene g an sensibilidad y g an capacidad de analiza , de o ma ápida, muchas mues as. Además, al usa ins umen os y écnicas más a anzadas, los esul ados de los análisis es án compu a izados y au oma izados. Aun así, los mé odos ins umen ales p esen an una des en aja en e a los clásicos, son menos p ecisos y es o es debido al e o de calib ación. Las écnicas ins umen ales son écnicas ela i as, la señal ob enida de la medición de la mues a a analiza se compa a con o as 22 medidas pa a de e mina la concen ación analí ica. Los pa ones u ilizados ya con ienen un e o de medida, y es e e o se a as a y se añade al es o de e o es, an o alea o ios como sis emá icos, que apa ecen en el p oceso de calib ación, inc emen ando el posible e o de la de e minación de la concen ación (Valcá cel, 1999). A di e encia de lo que ocu e con los mé odos clásicos, los mé odos ins umen ales equie en el uso de es ánda es químico-analí icos adecuados que con engan el anali o a es udia . Y la o ma más común de de e mina la concen ación de una mues a usando es ánda es pasa po la elabo ación de g á icas de calib ado con la co espondien e ec a de calib ación. El p ocedimien o pa a elabo a las g á icas de calib ado es el siguien e: se oman una se ie de pa ones de calib ación de los que se conoce la concen ación del anali o. Es os pa ones se miden en el ins umen o analí ico, y se ep esen a g á icamen e la concen ación de cada uno de los pa ones en e a las espues as de medición. Una ez elabo ada la g á ica de calib ado, se puede ob ene median e in e polación (menos en algún caso que se hace po ex apolación) la concen ación de la mues a a de e mina midiendo és a con el ins umen al analí ico en las mismas condiciones en las que se hizo la medida de los pa ones (Mille y Mille , 2002). Pa a ello, es necesa io encon a la o ma de ob ene una cu a de calib ación lo más ec a posible, ajus ándose a una se ie de pun os expe imen ales, donde cada pun o se encuen a de inido po una a iable X ( a iable independien e, concen ación del anali o) y una a iable Y ( a iable dependien e, espues a ins umen al) (Riu y Boqué, 2003). Los pun os de calib ación ienen un e o alea o io causado po la espues a ins umen al, en el alo de Y. Hay que busca la mejo ec a que pase po los pun os de calib ación y calcula la o denada en el o igen y la pendien e de la misma. El mé odo usado pa a consegui una ec a que pase po los pun os de calib ación, se conoce como eg esión lineal simple o mé odo de los mínimos cuad ados (Coello y Maspoch, 2007). Además de las p opiedades analí icas desa olladas en la in oducción, exis en una se ie de pa áme os o p opiedades que se de e minan a pa i de la cu a de calib ación, que ambién an a se impo an es pa a alo a la calidad de un mé odo (Figu a 8). Son los siguien es (PAHO, 2008): - Linealidad se de ine como la capacidad del mé odo pa a p opo ciona esul ados que son di ec amen e p opo cionales a la concen ación del anali o en la mues a den o del in e alo de abajo. A pa i de la cu a de calib ación, se puede ob ene la ecuación de la ec a de la que se ob iene un coe icien e de co elación 2. Pa a una buena ga an ía de linealidad, se á con enien e medi en cinco ni eles de concen ación, que aba quen el in e alo de abajo, y 23 epe i es e p oceso es eces. Se conside a que un alo de 2 ep esen a un buen ajus e lineal, cuan o más p óximo a 1 se encuen e. - Lími e de de ección se de ine como la can idad mínima de anali o en la mues a que se puede de ec a aunque no necesa iamen e cuan i ica bajo unas condiciones es ablecidas. Exis en di e en es p ocedimien os pa a de e mina es e lími e, uno de ellos es usando la cu a de calib ación median e la elación en e es eces la des iación es ánda de la espues a lineal Sb, y la sensibilidad que en la ecuación de la ec a co esponde a la pendien e b. Se calcula midiendo una señal de un blanco más es eces su des iación es ánda . - Lími e de cuan i icación es la mínima can idad de anali o p esen e en la mues a que se puede cuan i ica , bajo unas condiciones es ablecidas pa a dicho mé odo, con una exac i ud y p ecisión adecuada. El mé odo de de e mina lo es casi idén ico al del lími e de de ección, se dis ingue en que es e equie e una elación de diez eces la des iación es ánda en e a la pendien e. Se calcula midiendo una señal de un blanco más diez eces su des iación es ánda . - Rango o in e alo lineal se de ine como el in e alo de concen ación en que el anali o puede se de e minado median e la cu a de calib ación. Es a comp endido en e el lími e de cuan i icación y el pun o en el que la cu a deja de se lineal. Figu a 8. Pa áme os elacionados con la calib ación me odológica 24 5.3.1. Mé odo simple, di ec o o del es ánda ex e no Un es ánda o pa ón ex e no, es aquel que se p epa a ue a de la mues a p oblema. Se aplica es e mé odo cuando se desea de e mina la concen ación de un anali o en la que, ni los componen es de la ma iz de la mues a ni los eac i os usados en el p ocedimien o in e ie en en el análisis. También se puede usa en el caso en que las in e e encias se conozcan y se man engan siemp e cons an es en las medidas, con lo cual se pod án co egi es as pos e io men e (Sánchez, 2016). P ocedimien o: se p epa an una se ie de es ánda es ex e nos de concen ación conocida. La can idad óp ima de es ánda es debe se como mínimo de es a cinco, aunque en análisis u ina ios se pod á con ia en calib aciones con dos pa ones. Se mide las señales y se ep esen an en e a la concen ación de los pa ones ob eniendo una línea ec a. P e ia a las medidas de los es ánda es, se u iliza un blanco, que es una mues a idén ica a la p oblema pe o sin el anali o. El blanco co ige la espues a analí ica o iginal (Figu a 9) (Skogg y cols., 2005). Ven ajas: mé odo simple y ápido. Usando un núme o necesa io de pa ones se puede analiza múl iples mues as. Incon enien es: es e mé odo se basa en la suposición de que la espues a ins umen al del anali o en la mues a se á la misma que la espues a del anali o en la mues a pa ón. Aunque se co ige con blanco, hay muchos ac o es que pueden hace que es a suposición no se cumpla. Los más comunes son: los e ec os de la ma iz, la con aminación de mues as du an e la p epa ación y la inco ec a elabo ación de blancos o pa ones. Aplicación: la calib ación po el mé odo de es ánda ex e no se ha aplicado en la de e minación de no isop enoides en u as y e du as. Así, en el es udio lle ado a cabo po Figu a 9. Esquema del p ocedimien o de una calib ación di ec a. Señal analí ica concen ación 25 S inco y cols. (2014) se desa olla y alida un mé odo c oma og á ico que pe mi e de e mina nue e ca o enoides, cua o oco e oles y cua o clo o ilas. Las cu as de calib ado p esen an una buena linealidad en un amplio ango de concen ación (Figu a 10). A pa i de la ecuación de la ec a de calib ado se calculan las concen aciones de las mues as p oblemas po in e polación en la misma. 5.3.2. Mé odo del pa ón in e no Mé odo u ilizado pa a compensa e o es debidos a luc uaciones debidas a la écnica analí ica. Los pa ones in e nos, además, se conside an muy ú iles, cuando la concen ación de la mues a o la espues a ins umen al a ia cada ez que se u iliza, po azones desconocidas y di íciles de con ola . También es un mé odo de u ilidad cuando se p oducen pe didas del anali o du an e el p oceso. Se u iliza como es ánda in e no, una sus ancia di e en e al anali o pe o que engan p opiedades ísico-químicas simila es, p o ocando que se ean a ec adas de o ma simila du an e el análisis. Añadiendo un pa ón de p opiedades pa ecidas al anali o, la elación de concen ación pe dida de ambas se man iene cons an e (Sánchez, 2016). P ocedimien o: se empieza po la adición de la sus ancia pu a a la mues a y a los pa ones en concen ación ija (Figu a 11). P ime o se de e mina la espues a del equipo a las disoluciones Figu a 10. G á ica de de e minación de isop enoides po calib ación simple. 32 Nacional, Ins i u o Nacional de Tecnología Ag opecua ia. A gen ina. [Consul ado en Ab il 2016]. 16. Lei a-Guzmán MA. Ma e iales de Re e encia y Compa aciones In e labo a o io. He amien as pa a el con ol de la calidad en labo a o ios de ensayo. Chile: Cen o Nacional del Medio Ambien e; 2006. 17. Ma ínez Oso io FS, de los Ángeles Pé ez Espinoza I. 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