Utilización de nanopartículas de metales nobles como inmunomoduladores y composición inmunomoduladora

19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 Núme o de publicación: 2 335 852 21 Núme o de solici ud: 200802831 51 In . Cl.: A61K 47/48 (2006.01) A61K 9/51 (2006.01) A61P 37/02 (2006.01) 12 PATENTE DE INVENCIÓN B1 22 Fecha de p esen ación: 02.10.2008 43 Fecha de publicación de la solici ud: 05.04.2010 Fecha de la concesión: 16.02.2011 45 Fecha de anuncio de la concesión: 28.02.2011 45 Fecha de publicación del olle o de la pa en e: 28.02.2011 73 Ti ula /es: Uni e sidad de Se illa OTRI-Pabellón de B asil Paseo de las Delicias, s/n 41013 Se illa, ES Uni e sidad Pablo de Ola ide y Fundación Reina Me cedes pa a la In es igación Sani a ia 72 In en o /es: Cas illo He nández, Paula Ma ga i a; Mejías Rome o, José An onio; Fe nández Mon esinos, Ra ael; Pe ei a Cunill, José Luis; Pozo Pé ez, Da id; He e a Cabello, Juan Luis; Ga cía Luna, Ped o Pablo y Zade enko Ga cía, Ana Paula 74 Agen e: No cons a 54 Tí ulo: U ilización de nanopa ículas de me ales nobles como inmunomodulado es y composición inmu- nomodulado a. 57 Resumen: U ilización de nanopa ículas de me ales nobles como in- munomodulado es y composición inmunomodulado a. La p esen e in ención iene po obje o la u ilización de los e ec os inmunomodulado es de nanopa ículas me álicas de pla a uncionalizadas con iop onina [N-(2-me cap o- p opionil)glicina]. Un segundo aspec o obje o de la in en- ción es una composición inmunomodulado a que incluye nanopa ículas de pla a uncionalizadas con iop onina. A iso: Se puede ealiza consul a p e is a po el a . 37.3.8 LP. ES 2 335 852 B1 Ven a de ascículos: O icina Española de Pa en es y Ma cas. Pº de la Cas ellana, 75 – 28071 Mad id 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 DESCRIPCIÓN U ilización de nanopa ículas de me ales nobles como inmunomodulado es y composición inmunomodulado a. Sec o y obje o de la in ención Sec o químico, bioquímico, inmunológico. P oduc o pa a aplicaciones biomédicas. Inmuno e apia. Un aspec o de la p esen e in ención lo cons i uye la u ilización de los e ec os inmunomodulado es de nanopa í- culas me álicas de pla a uncionalizadas con iop onina [N-(2-me cap op opionil)glicina]. Un segundo aspec o es una composición inmunomodulado a que incluye nanopa ículas de pla a uncionalizadas con iop onina. Es ado de la écnica Du an e los úl imos años se ha ido inc emen ando el in e és po la sín esis y ca ac e ización de di e en es ipos de nanopa ículas me álicas, en especial aquellas que pueden se acopladas a biomoléculas. Es e in e és ha sido po en- ciado po las expec a i as de i adas de es os nano-bioconjugados en un amplio ango de aplicaciones en el diseño de nue os medicamen os, bioma cado es, cons ucción de nanodisposi i os, o pa a el empleo como elemen os analí icos de especial sensibilidad [Blow, N. Nano echnology in biology: big collabo a ions o a small wo ld. Na Me hods 5, 569-74 (2008) y Kogan, M.J. e al. Pep ides and me allic nanopa icles o biomedical applica ions. Nanomed 2, 287- 306 (2007)]. En e los di e en es ipos de nanopa ículas, aquellas que poseen un núcleo o mado po un me al noble son es- pecialmen e in e esan es, debido, undamen almen e a sus p opiedades plasmónicas, que le pe mi en ac ua como ma cado es molecula es [Gong, J.L. e al. Ag/SiO2co e-shell nanopa icle-based su ace-enhanced Raman p obes o immunoassay o cánce ma ke using silica-coa ed magne ic nanopa icles as sepa a ion ools. Biosens Bioelec on 22, 1501-7 (2007)], jun o a sus e ec os de ampli icación de señales en espec oscopia RAMAN y SEIR. También se usan como elemen os de con as e en mic oscopía elec ónica [Mu phy, C.J. e al. Aniso opic me al nanopa icles: Syn hesis, assembly, and op ical applica ions. J Phys Chem B 109, 13857-70 (2005)]. Hay po o a pa e un c e- cien e in e és en su uso como “nanoca ie s” de agen es quimio e apeú icos o como nanopa ículas desnudas como po enciales agen es ci os á icos o an i-angiogénicos [Jain, K.K. Nanomedicine: applica ion o nanobio echnology in medical p ac ice. Med P inc P ac 17, 89-101 (2008)]. Exis e ambién una p eocupación debido al desconocimien o sis emá ico de sus po enciales e ec os óxicos o aquellos elacionados con p oblemas medioambien ales [Linko , I., Sa e s om, F.K. & Co ey, L.M. Nano oxicology and nanomedicine: making ha d decisions. Nanomedicine 4, 167- 171 (2008)]. Recien emen e es án cob ando un auge impo an e aquellos abajos que explo an los e ec os biológicos de las nanopa ículas, no ya aquellas que han sido uncionalizadas pa a un p opósi o conc e o, sino de aquellas denominadas “naked” o desnudas. Un ejemplo de uncionalización básica, usada como pla a o ma de uncionalizaciones más com- plejas son las nanopa ículas de pla a uncionalizadas con iop onina (Figu a 1). La uncionalización con iop onina es una écnica es anda izada ya que la misma si e de pla a o ma a u u as uncionalizaciones debido al g upo ca boxilo lib e y a que solubiliza las nanopa ículas de pla a que p e iamen e se han educido de Ag+a Ag en p esencia de NaBH4. La unión de la iop onina a la pla a se p oduce po su g upo -SH, es ando su sín esis y ca ac e ización muy es anda izada [Song, Y., Huang, T. & Mu ay, R.W. He e ophase ligand exchange and me al ans e be ween mono- laye p o ec ed clus e s. J Am Chem Soc 125, 11694-701 y Huang, L.W. & Mu ay, R.W. Luminescence o iop onin monolaye -p o ec ed sil e clus e s changes o ha o gold clus e s upon gal anic co e me al exchange. J. Phys. Chem. B107, 7434-7440 (2003)]. En es e con ex o se plan ea el es udio de los e ec os de es as nanopa ículas uncionalizadas con iop onina (Ag@) en el sis ema inmune. En pa icula , los e ec os de las mismas sob e el p incipal sis ema de de ección de pa ógenos, aquel cons i uido po los ecep o es Toll (TLR). Los ecep o es Toll econocen lo que se conoce como pa ones aso- ciados a pa ógenos o PAMPs (de pa hogen-associa ed molecula pa e ns [Aki a, S., Uema su, S. & Takeuchi, O. Pa hogen ecogni ion and inna e immuni y. Cell 124, 783-801 (2006)]. Es os TLRs o man pues el p incipal sis ema de de ección de lo que se conoce como inmunidad inna a y en es e sen ido son undamen ales pa a econoce lo p opio de lo ajeno en el o ganismo humano. Po es a azón, la modulación de las espues as inducidas po la ac i ación de los TLRs se sugie e como una diana e apéu ica en en e medades in ecciosas, sepsis, en e medades in lama o ias y/o au oinmuni a ias o en el desa ollo de acunas [Romagne, F. Cu en and u u e d ugs a ge ing one class o inna e immuni y ecep o s: he Toll-like ecep o s. D ug Disco Today 12, 80-7 (2007)]. En cualquie caso, la ca ac e ización de los e ec os sob e espues as c í icas en el sis ema inmune es undamen al en ma e iales que an a o ma pa e de aplicaciones biomédicas. Den o de los componen es celula es esponsables de la inmunidad inna a, el mac ó ago es un ipo celula un- damen al y po ello es el ipo celula de elección en nume osos es udios conducen es a la iden i icación de nue as moléculas inmunomodulado as [T inchie i, G. & She , A. Coope a ion o Toll-like ecep o signáis in inna e immune de ence. Na Re Immunol 7,179-90 (2007)]. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 Teniendo en cuen a es os an eceden es, se es udia on los e ec os que ienen las Ag@ sob e la señalización mediada po los TLRs en la línea celula mac o ágica Raw 264.7 con el obje i o de iden i ica po enciales ac i idades inmu- nodulado as. Has a la echa, an sólo hay un es udio p e io sob e los e ec os de las nanopa ículas en la señalización mediada po la es imulación de TLRs [Luca elli, M. e al. Inna e de ence unc ions o mac ophages can be biased by nano-sized ce amic and me allic pa icles. Eu Cy okine Ne w 15, 339-46 (2004)]. Sin emba go es os es udios es án ealizados con nanopa ículas de ce ámica (silica, SiO2; i anio, TiO2; zi conio, Z O2), o nanopa ículas de cobal o. El incon enien e que p esen an es as nanopa ículas me álicas o ce ámicas es que p oducen un inc emen o en la sec eción de ci ocinas p o-in lama o ias. Po o a pa e, es as nanopa ículas poseen un amaño ela i amen e he e ogéneo. En la p esen e in ención se ha omado especial cuidado en ca ac e iza los e ec os inmunomodulado es con un ma e ial de ele ada homogeneidad de amaño (ap oximadamen e 5 nm). Como esul ado se ha iden i icado un po encial e ec o inmunomodulado de las nanopa ículas de Ag@, especí ico y di e encial sob e de e minados TLRs. Explicación de la in ención Cons i uye un p ime aspec o de la p esen e in ención la u ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a. Dichas nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de amaño comp endido en e 1 y 100 nm ecubie o con una monocapa de iop onina. P e e en emen e, las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de amaño comp endido en e 2 y 10 nm y aún más p e e en emen e las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de 5 nm. La composición inmunomodulado a ac úa sob e los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9 y se emplea pa a el a amien o de pa ologías in lama o ias p oducidas po : - in ecciones bac e ianas, pa icula men e la meningi is. - una sob ep oducción de pa ículas í icas. La composición inmunomodulado a puede u iliza se ex i o en e apias celula es de ca ác e inmune donde se p oduce una ans e encia de células y ambién como coadyu an es en p o ocolos de acunación. Cons i uye o o aspec o de la p esen e in ención una composición inmunomodulado a pa a el a amien o de pa o- logías mediadas po los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9. Dicha composición comp ende nanopa ículas con núcleo de pla a de amaño comp endido en e 1 y 100 nm ecubie as con una monocapa de iop onina. P e e en emen- e, las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de amaño comp endido en e 2 y 10 nm y aún más p e e en emen e las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de 5 nm. B e e desc ipción de las igu as Figu a 1: A. Imágenes de mic oscopía elec ónica de las nanopa ículas Ag@ ob enidas con el mic oscopio CM200 Philips-FEI. B. Esquema de una molécula de iop onina adso bida a una nanopa ícula de Ag (no a escala) indicando los á omos de la molécula de iop onina u ilizados en la in e p e ación de los espec os de NMR. Figu a 2: E ec o de las Ag@ sob e la iabilidad de las Raw 256.7 medida como libe ación de LDH (in eg idad de memb ana) o unción mi ocond ial ( educción de MTT) as 24 ho as de cul i o a las condiciones indicadas. El MG- 32 es un inhibido del p o easoma de ele ada oxicidad que u ilizamos como con ol posi i o. Figu a 3: Regulación di e encial de la p oducción de IL-6 es imulada po di e en es ligandos de TLRs en Raw 264.7 en ausencia o en p esencia de Ag@. A. Mues a los TLRs de localización en la supe icie de la célula. B. Mues a los TLRs localizados en el compa imen o endocí ico. Figu a 4: La exposición p e ia de Ag@ modula la espues a pos e io de p oducción de IL-6 as es imulación con ligandos de TLRs en Raw 264.7 A. Mues a los TLRs de localización en la supe icie de la célula. B. Mues a los TLRs localizados en el compa imen o endocí ico. Desc ipción de allada y modo de ealización de la in ención Los TLRs se pueden di idi en dos g upos de acue do a su localización celula : TLRs 1, 2, 4, 5, 6 se localizan p incipalmen e sob e la supe icie celula y econocen p ima iamen e componen es de la pa ed bac e iana, po el con a io los TLRs 3, 7, 8, y 9 se encuen an en compa imen os endocí icos y econocen p incipalmen e p oduc os í icos. Hay 13 pa álogos iden i icados has a la echa en los genomas de a ón y humanos, sin emba go los ligandos de algunos de ellos no son conocidos po aho a. La unión del ligando a TLR p oduce una sec eción de ci ocinas p o- in lama o ias como la IL-6 elegida en la p esen a in ención [Aki a, S., Uema su, S. & Takeuchi, O. Pa hogen ecogni ion and inna e immuni y. Cell 124, 783-801 (2006)]. 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 Se han ealizado dos ipos de ap oximaciones: 1) Es udios donde se a a a las células con Ag@ en p esencia y/o ausencia de los di e en es ligandos de TLRs, y se moni o iza la sec eción de IL-6 median e ELISA en los sob enadan es ob enidos as 24 ho as. 2) Es udios en los que se a an las células en p esencia o ausencia de Ag@ du an e 24 h, se la an las mismas, y pos e io men e se a an las mismas con di e en es TLRs po o as 24 ho as. Al inal de es e pe iodo se moni- o iza la sec eción de IL-6 median e ELISA en los sob enadan es ob enidos. Es a ap oximación es in e esan e po que p opo ciona in o mación ace ca del es ado de hipo- o hipe - sensibilidad en la que queda ían las células cuando se les some e a una exposición de Ag@ y pos e io men e a un es ímulo inmunológico. Reac i os Ni a o de pla a (AgNO3, 99.8%, Pan eac, Lyon, F ancia), N-(2-me cap op opionyl)glycina ( iop onin, >98%) y NaBFL, 98% p oceden de Sigma-Ald ich, S . Louis, MO, USA. Agua g ado Milli-Q, Millipo e, Bille ica, MA, USA. Sín esis de Ag@ Ag@ iop onina (Ag@) se p epa an po educción de AgNO3u ilizando NaBH4como agen e educ o , en una di- solución acuosa que con iene iop onina ( elación mola iop onina/Ag de 3:1), de acue do a p ocedimien os desc i os an e io men e [Song, Y., Huang, T. & Mu ay, R.W. He e ophase ligand exchange and me al ans e be ween mono- laye p o ec ed clus e s. J Am Chem Soc 125, 11694-701 (2003) y Huang, L.W. & Mu ay, R.W. Luminescence o iop onin monolaye -p o ec ed sil e clus e s changes o ha o gold clus e s upon gal anic co e me al exchange. J. Phys. Chem. B 107, 7434-7440 (2003)]. Ca ac e ización espec oscópica Los espec os de NMR se ob ienen a 500 MHz en un espec óme o B uke AMX-500 a empe a u a ambien e en agua deu e ada. Los es udios de HMBC (He e onuclea Múl iple Bond Cohe ence) se op imizan pa a un JH,C= 8 Hz y los es udios TOCSY (To al Co ela ion Spec oscopy) se lle an a cabo con una secuencia DPFGSE, pulsos selec i os de 50 ms y un iempo de mezcla de 120 ms. Mic oscopía elec ónica de ansmisión (TEM) Se u ilizó un mic oscopio de al a esolución CM200 Philips-FEI (Hillsbo o, OR, USA). Espec oscopía in a oja (FTIR) Se u ilizó un espec óme o B uke IFS 66/s con de ec o DTGS (Bille ica, MA, USA. Se adqui ie on 150 ba idos con una ecuencia de 2.5 Hz y esolución de 1 cm−1. Todos los espec os se ob ienen en pas illas de KB con 10 mg de nanopa ículas. Espec oscopia UV- isible Se u ilizó un espec o o óme o Ocean op ics (Dunedin, FL, USA) con de ec o HR4000. La ca ac e ización de las Ag@ se esume en las dos ablas siguien es: 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 TABLA 1 Asignación de posiciones as los espec os de 1H-NMR y compa ación en e iop onina lib e y uncionalizada a Ag y a Au [Kohlmann, O., S einme z, WE., Mao, XA e al. NMR Di usion, Relaxa ion, and Spec oscopic S udies o Wa e Soluble, Monolaye -P o ec ed Gold Nanoclus e s. J. Phys. Chem. B. 105, 8801-8809 (2001). La designación de los p o ones como 1, 2, 3 co esponde a lo mos ado en la Figu a 1 TABLA 2 Compa ación de los picos más in ensas de FTIR (cm−1) pa a Ag@ con Au@ [De la Fuen e, J.M., Be y, C.C., Riehle, M.O., Cu ís, S.G. Nanopa icle Ta ge ing a Cells. Langmui . 22, 3286-3293 (2006)] demos ando una adso ción simila de la iop onina Es imulación de los ecep o s Toll-like (TLR) en la línea celula Raw 264.7 y cuan i icación de IL-6 La línea celula p ocede de la Eu opean Collec ion (ECACC, Po on Down, Wil shi e, UK). Las condiciones de cul i o son las es ánda es y u ilizadas p e iamen e. Los cul i os se lle an a cabo en placas de 12 pocillos en un olumen inal de 2 mL. Los mac ó agos se a an du an e 24 ho as con los ligandos especí icos de TLRs a la concen ación p e iamen e op imizada en ausencia o en p esencia de 10 ppm de Ag@. La lis a de ligandos y concen aciones inales u ilizadas se indican a con inuación: Lipopolisacá ido (1 µg/mL LPS. E. coli se o ype 0127:B8, Sigma, S . Louis, MO, USA), Oligodeoxinucleó idos con mo i os CpG no me ilados (1 µg/mL CpG+. CpG-DNA 1668: 5’-TCCAT GACGTTCCTGATGCT-3TIB MolBiol, Be lin, Ge many), ácido poliinosínico:polici idílico (50 µg/mL poly I:C), ácido lipo eicoico (10 µg/mL LTA), lipopép ido sin é ico bac e iano Pam3CSK4 (300 ng/mL), ADN bac e iano (10 µg/mL DNA), lipop o eína sin é ica de micoplasma (1 µg/mL FSL-1), pep idoglicano (10 µg/mL PGN), imiquimod (10 µg/mL IMQ) y ssRNA40 (0.25 µg/mL) se ob u ie on de In i oGen, San Diego, CA, USA. Los sob enadan es se gua dan as 24 ho as de a amien o y se mide la p oducción de IL-6 median e ELISA con encional según las ins ucciones del ab ican e (Op EIA Mouse IL-6 se , BD Pha mingen, San Diego, CA, USA). Es udios de ci o oxicidad Se ha usado el sis ema de de ección de la enzima lac a e deshid ogenasa (LDH) denominado Cy o oxici y De ec- ion ki (Roche Basel, Swi ze land). La p oli e ación se mide median e la cuan i icación de la educción del 3-[4,5- dime hyl hiazol-2-yl]-2,5-diphenyl e azolium b omide (MTT) median e el sis ema p o is o po Roche Basel, Suiza. Resul ados ela i os a los e ec os ci o óxicos Se ca ac e iza on los e ec os ci o óxicos median e la cuan i icación de la libe ación de LDH en el medio y la cuan i icación de la capacidad educ o a de MTT. Ambos pa áme os miden, espec i amen e, la in eg idad de la memb ana celula y la capacidad me abólica de las células y se en comp ome idos cuando la iabilidad celula se educe. La Figu a 2 mues a que las Ag@ (1-100 ppm) no ienen e ec os ci o óxicos sob e las células Raw 264.7, po an o los e ec os obse ados po las Ag@ no se deben a un comp omiso de la iabilidad de las células Raw 264.7, sino a una al e ación especí ica de las mismas en el sis ema de señalización de los TLRs. 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 Resul ados de los es udios de co a amien o Cuando se ealizan es udios de co- a amien o, se obse a que las Ag@ no son agen es p o-in lama o ios ya que los ni eles basales de p oducción de IL-6 no se ie on a ec ados (Figu a 3). Es in e esan es insis i en que las Ag@ son una mejo opción compa ada con o as nanopa ículas me álicas o ce ámicas que sí p oducen un inc emen o en la sec eción de ci ocinas p o-in lama o ias [Luca elli, M. e al. Inna e de ence unc ions o mac ophages can be biased by nano-sized ce amic and me allic pa icles. Eu Cy okine Ne w 15, 339-46 (2004)]. Sin emba go, las Ag@ inhiben de o ma di e en e la sec eción de IL-6 mediada po los TLRs localizados en la supe icie celula (Figu a 3A) o en los compa imen os endocí icos (Figu a 3B). La p esencia de Ag@ (10 ppm = 20 µg/106 cells) inhibió signi ica i amen e la sec eción de IL-6 mediada po TLR2 (pep idoglicano) en un 55% o de TLR2/6 (ácido lipo eicoico) en un 77% si se compa a con los alo es ob enidos en p esencia de los ligandos especí icos de TLRs en ausencia de Ag@. El e ec o inhibido es pa en e en el caso de los TLRs si uados en el compa imen o endocí ico, aunque de una o ma menos acen uada (Figu a 3B). La inhibición ue de un 22.5% en el caso del ligando de TLR3 (ácido poli[I:C]) o de un 31% en el caso de ligando pa a TLR9. Resul ados de los es udios de p e a amien o Cuando los mac ó agos se exponen, en un caso a Ag@ du an e 24 h (10 ppm = 20 µg/106 cells) o en ausencia de las mismas como con ol, y pos e io men e se es imulan con los di e en es ligandos de TLRs, el p e a amien o con Ag@ inc emen ó la p oducción de IL-6 en espues a al ligando Pam3CSK4 (es imulación de TLR2/1) y al ligando FSL- 1 (TLR2/6), en un 40% y un 31%, espec i amen e (Figu a 4A). Es deci , que el p e a amien o con nanopa ículas p oduce un es ado de suscep ibilidad aumen ada an e el mismo es ímulo inmunológico. Asimismo, la es imulación con ligandos de TLR2 p oduce as el p e a amien o con Ag@ una disminución del 37% en compa ación con los con oles no a ados (Figu a 4A). Es de des aca que los p e a amien os p oducen una espues a disminuida en el caso de ligandos de TLR3 o TLR9 (Figu a 4B). 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ES 2 335 852 B1 REIVINDICACIONES 1. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a, ca ac e izada po que las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de amaño comp endido en e 1 y 100 nm ecubie o con una monocapa de iop onina. 2. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según la ei indicación 1, ca ac e izada po que las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de amaño comp endido en e 2 y 10 nm. 3. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según la ei indicación 2, ca ac e izada po que las nanopa ículas ienen un núcleo de pla a de 5 nm. 4. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según las ei indicaciones 1 a 3, ca ac e izada po que la composición inmunomodulado a ac úa sob e los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9. 5. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según la ei indicación 4, pa a el a amien o de pa ologías in lama o ias p oducidas po in ecciones bac e ianas, pa icula - men e la meningi is. 6. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según la ei indicación 4, pa a el a amien o de pa ologías in lama o ias p oducidas po una sob ep oducción de pa ículas í icas. 7. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según las ei indicaciones 1 a 3 como modulado as ex i o en e apias celula es de ca ác e inmune donde se p oduce una ans e encia de células. 8. U ilización de nanopa ículas de me ales nobles en la p epa ación de una composición inmunomodulado a según las ei indicaciones 1 a 3 como coadyu an es en p o ocolos de acunación. 9. Composición inmunomodulado a pa a el a amien o de pa ologías mediadas po los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9, ca ac e izado po que dicha composición comp ende nanopa ículas con núcleo de pla a de amaño comp endido en e 1 y 100 nm ecubie as con una monocapa de iop onina. 10. Composición inmunomodulado a pa a el a amien o de pa ologías mediadas po los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9 según la ei indicación 9, ca ac e izado po que las nanopa ículas con núcleo de pla a ecubie as con una monocapa de iop onina ienen un amaño comp endido en e 2 y 10 nm. 11. Composición inmunomodulado a pa a el a amien o de pa ologías mediadas po los ecep o es TLR2, TLR2/6, TLR3 y TLR9 según la ei indicación 9, ca ac e izado po que las nanopa ículas con núcleo de pla a ecubie as con una monocapa de iop onina ienen un amaño de 5 nm. 7 ES 2 335 852 B1 8 ES 2 335 852 B1 9