Tolerancia a la salinidad de plantas de mandioca (Manihot esculenta Cranz): influencia de la micorriza

INSTITUTO DE RECURSOS UNIVERSIDAD DE SEVILLA NATURALES Y AGROBIOLOGIA DEPARTAMENTO DE CRISTALOGRAFIA, DE SEVILLA MINERALOGIA Y QUIMICA AGRICOLA TESIS DOCTORAL CARLOS LUIS CARRETERO MONTERO TOLERANCIA A LA SALINIDAD DE PLANTAS DE MANDIOCA (Maniho esculen a C anz): INFLUENCIA DE LA MICORRIZA. 2 TOLERANCIA A LA SALINIDAD DE PLANTAS DE MANDIOCA (Maniho esculen a C anz): INFLUENCIA DE LA MICORRIZA. Memo ia p esen ada po el licenciado D. Ca los Luis Ca e e o Mon e o pa a op a al g ado de Doc o en Biología. Se illa, Oc ub e de 2002 DIRECTORES DR. ANTONIO TRONCOSO DE ARCE DR. MANUEL CANTOS BARRAGAN P o eso de In es igación del CSIC Ti ulado Supe io del CSIC TUTORA D a. CELIA ESPINO GONZALO 3 ANTONIO TRONCOSO DE ARCE y MANUEL CANTOS BARRAGAN, como Di ec o es de la Tesis Doc o al p esen ada po Ca los Luis Ca e e o Mon e o y i ulada “Tole ancia a la salinidad de plan as de mandioca (Maniho esculen a C anz): in luencia de la mico iza”, pa a aspi a al G ado de Doc o , INFORMAN: que la ci ada Tesis Doc o al se ha ealizado u ilizando la me odología adecuada y haciendo uso de las écnicas idóneas pa a cumpli los obje i os p e is os. Y pa a que cons e a los e ec os de ami ación pa a la ob ención del ci ado G ado de Doc o , se i ma el p esen e in o me. Se illa, Oc ub e de 2002 Fdo. A. T oncoso de A ce Fdo. M. Can os Ba agán 4 AGRADECIMIENTOS El p esen e abajo ha sido ealizado en el Ins i u o de Recu sos Na u ales y Ag obiología de Se illa (CSIC), po lo que ag adezco en p ime luga a la Di ección del Ins i u o y a odo su pe sonal, y en especial a D. Jesús P ie o po su con ianza. En segundo luga a los doc o es D An onio T oncoso de A ce y D. Manuel Can os Ba agán, di ec o es de es e abajo po el iempo que me han dedicado, colabo ación y eno me paciencia demos ada du an e su desa ollo. A los doc o es D. José Aijón Nogue a y D. Juan Manuel La a P adas y a Mai e Sánchez, del Dep. de Biología Celula de la Uni e sidad de Salamanca po su aliosa e ines imable colabo ación en el es udio his ológico lle ado a cabo en es e abajo. A la D a. Ca men Mazuelos así como a Ca men G ande y Asunción Cas o po su colabo ación en la ealización de los análisis químicos lle ados a acabo en es e abajo. A las D as. Rosa io Azcón y Concepción Azcón, de la Es ación Expe imen al del Zaidín de G anada (CSIC) po su ines imable ayuda en los aspec os bibliog á icos así como po sus c í icas y consejos en odo lo elacionado con las mico izas. A Juana Liñán, Bea iz Cube o, Ca men Villalón, Jose Luis Ga cía, Ra ael Zá a e, Ra ael Sa mien o y a odos los compañe os del depa amen o po su amis ad y colabo ación. Muy especialmen e a Isa, Ra a e Isabel po habe me animado y aguan ado du an e la ealización de es e abajo y po el iempo que no les pude dedica . 5 A mi amilia 1 INDICE Pag. INDICE DE FIGURAS......................................................................................................I INDICE DE TABLAS.....................................................................................................IV ABREVIATURAS EMPLEADAS..............................................................................VIII I. ANTECEDENTES .............................................................................................4 II. INTRODUCCIÓN GENERAL .........................................................................5 III. OBJETIVOS.....................................................................................25 IV. PROPAGACIÓN IN VITRO IV.1. INTRODUCCIÓN......................................................................................26 IV.2. MATERIALES Y MÉTODOS...................................................................29 IV.3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN................................................................31 IV.3.1. In luencia de la p esencia de auxina (ANA) en el medio sob e la adicación y el desa ollo del explan o de mandioca in i o................................................................................................................31 IV.3.1.1. Tan o po cien o de adicación......................................................31 IV.3.1.2. Núme o de aíces po plan a..........................................................31 IV.3.1.3. Longi ud media de aíces...............................................................32 IV.3.1.4 Longi ud del allo...........................................................................32 IV.3.1.5. Núme o de yemas..........................................................................32 IV.3.2. In luencia de la ci oquinina en el desa ollo in i o del explan o de mandioca....................................................................................33 IV.3.3. P ueba de adap ación a condiciones "in i o".............................35 V. INFLUENCIA DE LA SALINIDAD (NaCl) EN EL DESARROLLO DE PLANTAS DE MANDIOCA (Maniho esculen a C anz) IN VITRO. V.1. INTRODUCCIÓN.......................................................................................38 V.2. MATERIALES Y MÉTODOS....................................................................41 V.2.1. De e minaciones analí icas............................................................42 V.3. RESULTADOS............................................................................................44 V.3.1. In luencia de la salinidad sob e la supe i encia del explan o....................................................................................................44 V.3.2. Desa ollo de los explan os supe i ien es...................................46 V.3.3. In luencia de la concen ación de NaCl sob e el con enido de nu ien es en plan as de mandioca cul i adas in i o.........................54 V.3.3.1. Ni ógeno .................................................................................54 2 V.3.3.2. Fós o o ....................................................................................56 V.3.3.3. Po asio .....................................................................................56 V.3.3.4. Calcio ......................................................................................59 V.3.3.5. Magnesio .................................................................................59 V.3.3.6. Sodio .......................................................................................59 V.3.3.7. Clo o ........................................................................................61 V.3.3.8. Cob e........................................................................................61 V.3.3.9. Hie o ......................................................................................61 V.3.3.10. Manganeso ..............................................................................61 V.3.3.11. Cinc .........................................................................................63 V.4. DISCUSIÓN................................................................................................63 VI. TOLERANCIA A LA SALINIDAD EN CONDICIONES DE INVERNADERO. VI.1. INTRODUCCIÓN......................................................................................65 VI.2. MATERIALES Y MÉTODOS...................................................................67 VI.3. RESULTADOS...........................................................................................69 VI.3.1. E ec os sob e el sus a o..............................................................69 VI.3.1.1.Ca ac e ísicas de las soluciones nu i i as empleadas en los a amien os......................................................69 VI.3.1.2. In luencia de los a amien os salinos sob e el sus a o....................................................................................70 VI.3. 2. Tole ancia de las plan as de mandioca a la salinidad del medio..................................................................................................72 VI.3.2.1. Supe i encia..........................................................72 VI.3.2.2. Desa ollo de plan as supe i ien es.......................75 VI.3.2.3. P oducción ela i a.................................................79 VI.3.2.4. In luencia de la concen ación de NaCl sob e el con enido de nu ien es en plan as de mandioca cul i adas ex i o.............................................81 VI.3.2.4.1. Ni ógeno ......................................................81 VI.3.2.4.2. Fós o o ..........................................................81 VI.3.2.4.3. Po asio ...........................................................81 VI.3.2.4.4. Calcio ............................................................81 VI.3.2.4.5. Magnesio .......................................................84 3 VI.3.2.4.6. Sodio .............................................................84 VI.3.2.4.7. Clo o ..............................................................84 VI.3.2.4.8. Mic onu ien es .............................................84 VI.4. DISCUSIÓN...............................................................................................88 VII. EFECTO DE LA MICORRIZA VII.1. INTRODUCCIÓN....................................................................................90 VII.2. MATERIALES Y MÉTODOS.................................................................91 VII.3. RESULTADOS.........................................................................................93 VII.3.1. E ec o de la mico iza en la adap ación y aclima ación de los es clones de mandioca.................................................................93 VII.3.2. In luencia de la mico iza Glomus ascicula um sob e la supe i encia de plan as de mandioca some idas a a amien os salinos..................................................................................95 VII.3.3. In luencia de la mico iza Glomus ascicula um sob e el desa ollo de plan as de mandioca some idas a a amien os salinos.......................................................................................................97 VII.4 DISCUSIÓN...................................................................................99 VIII. DESARROLLO IN VITRO Y EX VITRO DE EXPLANTOS-PLANTAS DEL CLON SOM-1 DE MANDIOCA, PROCEDENTES DE PLANTAS MICORRIZADAS Y NO MICORRIZADAS. VIII.1. INTRODUCCIÓN......................................................................... .......107 VIII.2. MATERIALES Y MÉTODOS..............................................................108 VIII.3. RESULTADOS......................................................................................112 VIII.4. DISCUSIÓN..........................................................................................126 IX. DISCUSIÓN GENERAL…............................................................130 X.CONCLUSIONES.................................................................................135 XI. BIBLIOGRAFIA.............................................................................................137 I ÍNDICE DE FIGURAS Pag. ig. 1. Dis ibución mundial de los suelos a ec ados po sales .......................................6 ig. 2. Clasi icación de las Glomales .............................................................................11 ig. 3. Plan a de mandioca con ubé culos.......................................................................15 ig. 4. Tendencia de la p oducción de mandioca en el mundo........................................17 ig. 5. Dis ibución geog á ica de la mandioca en el mundo...........................................17 ig. 6. Biomasa ela i a (% con ol) en peso esco y seco de plan as de mandioca as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado .............................................51 ig 7. Ajus e de la biomasa ela i a del peso esco y seco median e unciones exponenciales..........................................................................................................51 ig. 8. Longi ud media del allo as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl...............................................................................................................52 ig. 9. Núme o de aíces desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl...............................................................................................52 ig. 10. Núme o de yemas desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl.............................................................................................52 ig. 11. Núme o de hojas desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl.............................................................................................53 ig. 12. Tempe a u as máximas, mínimas y medias egis adas en el in e nade o du an e el desa ollo de la p ueba.......................................................................73 ig 13. Longi ud del allo, núme o de hojas y núme o de yemas obse adas en las plan as du an e el desa ollo de la p ueba...........................................................79 ig 14. Peso esco ela i o en % omando como e e encia el ob enido en el a amien o con ol en plan as de los clones SOM, 05 y 50 (en el clon SOM-1 la medida ue omada a los 45 días y en los clones 05 y 50 a los 35 días pa a el a amien o de 8 gl -1 ..........................................................................80 ig 15. Peso seco ela i o en % omando como e e encia el ob enido en el a amien o con ol en plan as de los clones SOM, 05 y 50 (en el clon SOM-1 la medida ue omada a los 45 días y en los clones 05 y 50 a los 35 días pa a el a amien o de 8 gl -1 ..........................................................................80 VIII ABREVIATURAS EMPLEADAS EPS = exchangeable sodium pe cen age SAR = sodium adso p ion a io MVA = mico iza esículo a buscula cm = cen íme o ºC = g ados Celsius a m = a mós e a µ = mic a l = li o ANA = Acido α-Naph alen acé ico BA = 6- benzilaminopu ina GA = ácido gibe élico µM = mic oMola GA 3 = ácido gibe élico mgl -1 =milig amo po li o 2iP = 6-(γ,γ-dime hylallylamino) pu ina TDZ = (N-phenyl-N’-1,2,3- hidiazol-5-ylu ea) M = Mola 2,4-D = ácido 2,4- diclo o enoxiacé ico AAB = ácido abcísico gl -1 = g amos po li o ml = milili o µE m -2 s -1 = mic o Eins ein po me o cuad ado segundo w = a io L.S.D = mínima di e encia signi ica i a MS = medio de Mu ashige y Skoog. mm = milíme o dS m -1 =deciSiemens po me o nm = nanóme o χ 2 = Chi cuad ado ppm = pa es po millón CE = Conduc i idad Eléc ica. g = g amo U.S.S.L. = Uni ed S a es Salini y Labo a o y cm 3 = cen íme o cúbico Kg -1 = kilog amo X = aumen o en mic oscopía h = ho a G. . = Glomus ascicula um ∅ = diáme o min = minu o s = segundo C 50 = Concen ación 50% 4 I. ANTECEDENTES El p esen e es udio iene su o igen en el p oyec o i ulado “Amélio a ion des cul i a s a icains de manioc” inanciado po la CEE con el núme o de con a o TS2A- 0239-M (CD). Es e p oyec o es u o coo dinado po Joseph Mabanza del Labo a oi e d´Amélio a ion des plan es e de Cul u e in i o (LAP-CV)/DGRST de Congo B azza ille. En el p oyec o pa icipa on las siguien es ins i uciones: Gabón : P oje -FAO-CIAM F ancia: ORSTON Géné ique Mon pellie . Uni e si é Pa is Sud (Labo a oi e de Mo phogénèse Végé ale Expé imen ale). I alia: Is i u o sulla P opagazione delle Specie Legnose di Fi ense (CNR). España: - Ins i u o de Recu sos Na u ales y Ag obiología de Se illa (CSIC). - Es ación Expe imen al del Zaidín de G anada (CSIC). 5 II. INTRODUCCIÓN GENERAL La necesidad de p oduci mayo can idad de alimen os y de mane a más cons an e, obliga a pensa en la u ilización de ie as ma ginales que se ca ac e izan, a eces, po p esen a suelos y aguas con al o g ado de salinidad. La salinidad en el suelo o en el agua ep esen a una de las si uaciones de es és pa a las plan as, cuya impo ancia en la ag icul u a a en aumen o. Po ello, esul a muy in e esan e dispone de plan as cul i adas ole an es a la salinidad y así man ene su po encial p oduc i o. En gene al, un suelo salino se o ma cuando la en ada de sales es mayo que su salida, lo que depende del clima, geomo ología, elie e e hid ología (Ponnampe uma, 1984). El exceso de sales en un suelo puede obedece a la p esencia de ocas salinas, como ocu e en las egiones semiá idas y á idas del mundo (G eenway y Munns, 1980; Tanji, 1990), o como se p oduce en á eas cos e as an o á idas como húmedas, po la in usión en supe icie o en el subsuelo del agua del ma . O a uen e de salinización puede se el p opio iego. A es e p oceso se le denomina salinización secunda ia y se p oduce al ega con agua salina en condiciones de d enaje de icien e. Un e cio de los egadíos en el mundo se en a ec ados po sales. En gene al, las hec á eas a ec adas po la salinidad en el mundo ( ig. 1) se es iman en mil millones (Dudal y Pu nell, 1986). El p incipal e ec o de la salinidad sob e los cul i os es el descenso de su endimien o y calidad, que se aduce en pé didas económicas a la ez que con ie e las ie as en imp oduc i as, con su consiguien e abandono y pos e io dese ización (Royo y A agües, 1989). Las acciones de la salinidad eje ce sob e las plan as pueden se es udiadas desde es aspec os undamen ales (Pas e nak, 1987): - Acciones sob e las elaciones ene gé icas - Acciones sob e las elaciones híd icas. - Acciones sob e las elaciones nu icionales. La adap ación de las plan as a la salinidad puede da o igen a una disminución de las ese as ene gé icas necesa ias pa a el c ecimien o. Es as pé didas ene gé icas pueden debe se a la des iación de los o osin a os necesa ios pa a el c ecimien o hacia 6 unciones osmo egulado as o a la ene gía consumida en el anspo e iónico (Pas e nak, 1987). ig. 1. Dis ibución mundial de los suelos a ec ados po sales (según Szabolcs 1985). El inc emen o de la salinidad en el e eno p o oca un descenso del po encial híd ico de la solución del suelo. Es e descenso puede induci una educción de po encial híd ico en la hoja, que a su ez o igina una educción de la u gencia y expansión celula y po an o una disminución del c ecimien o de la plan a. Es a disminución del c ecimien o puede minimiza se o al o pa cialmen e po medio del denominado ajus e osmó ico (Gale e al., 1967; Te maa e al., 1985) que pe mi e compensa en mayo o meno medida la educción del po encial osmó ico de la solución del suelo. T as es e pe iodo de ajus e osmó ico, la u gencia y expansión celula pueden e o na a alo es iniciales siemp e que las p opiedades de ansmisión de agua en la plan a no hayan sido a ec adas. Las acciones que la salinidad del medio eje ce sob e las elaciones nu icionales en las plan as, ienen de e minadas po dos aspec os elacionados. Po un lado, la acumulación excesi a de iones dominan es en la solución del suelo, como Cl - o Na + , pudiendo alcanza ni eles óxicos (Be ns ein y Haywa d, 1958; Iyenga e al.,1977; G eenway y Munns, 1980; Ash a e al., 1986). Po o o, los desequilib ios nu icionales 7 que ocasiona la acumulación p e e en e de unos de e minados iones en e al es o (G a an y G ie e, 1992). Así, el descenso en la concen ación de ni ógeno con la salinidad del suelo (C am, 1973; Deane-D ummond y Glass, 1982) pa ece es a elacionado con el hecho de que el aumen o de la cap ación y acumulación de Cl - en la plan a educe la concen ación de NO 3 – (Aslam e al., 1984; Wa d e al., 1986; Klobus e al., 1988). Si bien se ha desc i o que el aumen o de NO 3 – en el medio disminuye la cap ación y acumulación de Cl - (Be s ein e al., 1974; Ka ka i e al., 1982; Feigin e al., 1987; Ma ínez y Ce dá, 1989). La disponibilidad de ós o o pa a la plan a disminuye en un suelo salino, ya que la concen ación de P en el suelo es á es echamen e con olada po p ocesos de deso pción y po la solubilidad de los mine ales de Ca-P (G a an y G ie e 1992), la cual desciende con o me aumen a la salinidad (Sha pley e al., 1992). Si bien la salinidad puede aumen a las necesidades de P pa a cie as plan as (Awa d e al., 1990), se ha podido comp oba que la adición de ós o o al suelo iene e ec os di e sos sob e la plan a que an desde el aumen o, no a ec ación o incluso la disminución de la ole ancia a la salinidad (Champagnol, 1979). Los iones K + y Ca ++ es án ín imamen e elacionados con la ole ancia a la salinidad en las plan as y con la p esencia de iones Na + en el medio. La concen ación de K + en la solución del suelo suele se baja debido a que es e elemen o es ápidamen e adso bido po la acción mine al de és e. Sin emba go, la al a a inidad de las células de la aíz po el po asio en e al sodio, pe mi en a la plan a sa is ace sus necesidades. Es e g ado de a inidad po el ión K + en e al ión Na + en suelos salinos a ía con la especie y el cul i a . El es a us de po asio de la plan a es á elacionado con la elación Na + /K + en el ex ac o de pas a sa u ada disminuyendo cuando la EPS de la ase cambiable aumen a. Así, la elación K + /Na + en la plan a ha sido u ilizada en algunos cul i os como indicado de su ole ancia (Ra he , 1982; Ka ka i, 1984). Po o a pa e, exis en e idencias de que algunas especies pueden sus i ui pa e del po asio po sodio, como en algunas glico i as, sin que se obse e me ma en su c ecimien o. En es e sen ido, Ma schne (1986), clasi ica algunas especies cul i adas en a ios g upos donde se incluyen desde especies como zanaho ia (Daucus ca o a L.) o nabo (B assica apa L.), que pueden sus i ui una al a p opo ción de po asio po sodio, has a especies como lechuga (Lac uca sa i a L.) o maíz (Zea mays L.) donde no se ha obse ado sus i ución alguna sin que se ea a ec ado su c ecimien o. 8 El Na + ambién in e ie e con los iones Ca ++ de la solución del suelo, pudiendo impedi su en ada en la plan a (Lynch y Laüchli, 1985), y desplazando al Ca ++ asociado a la memb ana, dando luga a un aumen o de la pe meabilidad y po an o, disminuyendo la selec i idad K + /Na + (C ame e al., 1987). Las in e acciones en e los iones Na + y Ca ++ desembocan en una se ie de desó denes isiológicos que a ec an al c ecimien o y uncionamien o de la aíz y que gua dan una es echa elación con la p opo ción Na + /Ca ++ (Ken y Laüchli 1985; Mass y G ie e 1987; C ame e al., 1987; G ie e y Mass, 1988). Es as a iaciones desc i as pa a el ión Ca ++ , a ec an al ión Mg ++ dado su ca ác e an agonis a. Po úl imo, la solubilidad de los mic onu ien es en el sus a o se e a o ecida po la salinidad (Sha pley e al., 1992). Sin emba go, su concen ación en la plan a a a depende del ipo de plan a, ejido, salinidad, concen ación de mic onu ien es y de las condiciones ambien ales en las que se desa olle. Po ello, la capacidad de espues a de las plan as a las acciones de la salinidad sob e los aspec os de ene gía, hid a ación y nu ición conduce al concep o de ole ancia. La ole ancia a la salinidad ue de inida po Be ns ein (1963) como el g ado con el que la plan a ajus a su po encial osmó ico, con un sac i icio mínimo de su c ecimien o o, po Shannon (1979), como la capacidad de una plan a pa a sopo a los e ec os de una solución salina concen ada en la zona adicula . G ado y capacidad son pues dos é minos que implican una cuan i icación o medida de la ole ancia, además del es ablecimien o de un c i e io pa a ealiza la. Mass (1986), conside a es c i e ios pa a analiza la ole ancia de las plan as a la salinidad: supe i encia, p oducción o biomasa absolu a y p oducción o biomasa ela i a. Los c i e ios de supe i encia y de p oducción absolu a, si bien ienen in e és ag onómico y el de p oducción absolu a un in e és económico añadido, limi a la posibilidad de compa ación de di e en es cul i os. El c i e io de la p oducción ela i a esul a más adecuado a la ho a de ealiza compa aciones an o en e cul i os como en e cul i a es (Nieman y Shannon, 1977). En es e c i e io, se ela i izan las p oducciones ob enidas po los cul i os al compa a en di e en es a amien os de salinidad con las p oducciones ob enidas po los mismos en ausencia de sal en el sus a o. La elación en e los alo es ela i os de p oducción así ob enidos y la conduc i idad eléc ica espec i a del sus a o queda ep esen ada po el ajus e de una unción ma emá ica (Mass y Ho man, 1977; an Genuch en, 1983) cuyo es udio pe mi e es ablece el g ado de ole ancia de los cul i os en conside ación. 9 Los mé odos que se siguen pa a es udia la ole ancia se pueden clasi ica en dos g upos: ensayos de campo y ensayos de labo a o io. Los ensayos de campo se ealizan, bien en pa celas salinas na u ales o en pa celas salinizadas a i icialmen e (Royo e al., 1987). En ambos casos, se p esen an di icul ades como son la pe sis encia de la a iabilidad espacio- empo al de la salinidad, en el p ime caso (Shannon, 1984) y el educido núme o de ni eles salinos e ensaya en el segundo, dado el cos e que supond ía aumen a los. Los ensayos de labo a o io aba can desde los p ac icados en in e nade o en una g an di e sidad de sus a os y con enedo es, has a écnicas más so is icadas como el cul i o in i o de ó ganos o ejidos en medio salinizado (Dudeck e al., 1986; C oughan e al., 1978). Las plan as se clasi ican, según su compo amien o an e la sal en haló i as y glicó i as. La a iación de compo amien o es muy amplia: desde las glicó i as más sensibles, que no c ecen no malmen e ni en con enidos muy bajos de clo u o sódico, has a las haló i as más esis en es como Rhizopho a mangle, que sólo sob e i e en salinidades p óximas a la del agua del ma . Los mecanismos disponibles po las plan as median e los cuales llegan a p esen a di e en es g ados de ole ancia pe siguen dos obje i os undamen ales: la p o ección con a la pé dida de agua y la p o ección con a el e ec o óxico de los iones (Pas e nak, 1987). Pa a disminui la pé dida de agua, algunas plan as disminuyen el núme o de es omas po unidad de supe icie, acili an el cie e de los es omas, aumen an el espeso de la cu ícula o disminuyen la elación pa e aé ea/ aíz (Papadopoulus y Rendig, 1983). O as plan as ecu en al denominado ajus e osmó ico, que en algunas haló i as consis e en acumula NaCl en hojas y el aislamien o en acuolas. (Läuchli y Eps ein, 1984) mien as que en glicó i as es á mas elacionado con la sísn esis de sus ancias o gánicas como p olina o glicinebe aina (G eenway y Muns, 1980). Es e ajus e osmó ico iene como inalidad disminui su po encial osmó ico pa a pode man ene el lujo de agua del suelo a la aíz. Los mecanismos de p o ección con a la oxicidad iónica se basan en la abso ción y anspo e selec i o de iones, compa imen alización de elec oli os, aslocación y exc eción (C am, 1983). También, en la concen ación de iones salinos en ó ganos no especializados como aíces, hojas iejas, aqueidas o peciólos con el in de e asa el daño a o as pa es más sensibles en c ecimien o.(Royo y A agües, 1989). 10 Es as ca ac e ís icas son desa olladas po di e en es ipos de plan as que p esen an una cie a ole ancia a la salinidad del medio. Sin emba go, pa a palia el e ec o de la salinidad en los cul i os exis en o os p ocedimien os. Dichos p ocedimien os siguen dos caminos: el manejo ag onómico y la mejo a gené ica. El manejo ag onómico es á di igido p incipalmen e al con ol de la salinidad en la zona adicula median e la dosi icación y espaciamien o de los iegos; a minimiza los daños en las plan as median e el empleo de abonos (Mass y Ho man, 1977) y al empleo de pa ones ole an es (Pas e nak, 1987), muy elacionado con los p ocesos de mejo a gené ica. La mejo a gené ica de la ole ancia a la salinidad puede se abo dada po cualquie a de los p ocedimien os de selección empleados en mejo a clásica, aunque pe sis e el p oblema de la escasez de conocimien os sob e ma cado es isiológicos o bioquímicos (Jana, 1987). A es e p oblema hay que añadi la complejidad que en aña la búsqueda, debido a la ya mencionada a iabilidad espacio- empo al de la salinidad y a la al a de conocimien os p o undos de los mecanismos de ole ancia, además del cos e que supone las ope aciones de c ibado a lo la go del ciclo de cul i o (Eps ein y Rains, 1987). El hecho de que la ole ancia de un cul i a a íe con el ciclo de cul i o y con las condiciones ambien ales impide además el desa ollo de un p o ocolo uni e salmen e acep ado pa a es e ipo de ensayos (Royo y A agües, 1989). No obs an e, la selección y mejo a de plan as po su ole ancia a la sal es de máximo in e és. Jun o a las es a egias an es mencionadas y desa olladas po el homb e pa a palia el e ec o de la salinidad en los cul i os, exis e o a, más an igua y ex endida en e los se es i os y desa ollada po la p opia na u aleza, que consis e en el es ablecimien o de asociaciones en e indi iduos pa a mejo a su adap ación al medio, es la denominada simbiosis. En el eino ege al, además de las simbiosis alga-hongo (líquenes) o plan a ascula -bac e ia (Leguminosas-Rhizobium) exis en o as asociaciones en e plan as ascula es y hongos denominadas mico izas. Las mico izas son simbiosis de ipo mu ualis a en e cie os hongos del suelo y las aíces de algunas plan as supe io es. En es a simbiosis la plan a suminis a al hongo los sus a os ca bonados p oceden es de la o osín esis, mien as que el hongo acili a la adquisición de los elemen os mine ales del suelo (Ha ley y Smi h, 1983). El o igen de las mico izas pa ece an an iguo como el de las p opias plan as. La p esencia de es uc u as úngicas en los p ime os egis os ósiles de ege ales 11 conocidos, que i ie on hace 370 millones de años (Nicolson, 1975; S ubble ield e al., 1987), apoya ía la hipó esis de que las plan as llega on a coloniza la supe icie e es e, a pa i de un medio acuoso, g acias a que sus an eceso es se asocia on con cie os hongos que les ayuda on a supe a los p oblemas de desecación y cap ación de nu ien es que implicaban el paso de un ambien e acuá ico a uno e es e (Pi ozinsky y Malloch, 1975). Los hongos que o man las mico izas, son los hongos in e io es pe enecien es a la clase Zigomico ina, o den Endogonales, amilia Endogonaceae. Ac ualmen e se dis inguen sie e ipos de mico izas (B und e , 2002) de los cuales las mico izas esículo-a buscula es (MVA) son las más ex endidas en e las plan as, mien as que las ec omico izas sólo se p oducen en cie as amilias de gimnospe mas y dico iledóneas. Los o os ipos son especí icos de alguna amilia de plan as. Las MVA es án muy gene alizadas encon ándose en al ededo del 80% de las especies ege ales. Todos los hongos MVA es án clasi icados en los Zigomice es, o den Glomales y en los géne os: Glomus, Acaulospo a, Scu ellospo a, Gigaspo a, Pa aglomus y A chaeospo a. (Mo on y Redecke , 2001). ig. 2. Clasi icación de las Glomales (IVAM’s, 2002). 12 Es os hongos son conside ados como los más p imi i os debido a su espo as simples, ausencia de ep oducción sexual y po que exis en muy pocas especies asociadas a una g an di e sidad de plan as (Mo on, 1990). Es e ipo de hongos son incapaces de c ece en ausencia de plan a y ampoco ha sido posible cul i a los en condiciones axénicas. La asociación mico ícica juega un papel esencial en los ciclos de ma e ia y ene gía de ecosis emas con suelos gene almen e pob es en agua y elemen os mine ales nu i i os, p incipalmen e ni ógeno y ós o o (Read, 1991). La o mación de mico izas MVA, p o oca no malmen e una conside able es imulación del i mo de c ecimien o de la plan a (Ha ley y Smi h, 1983), que se aduce en un un inc emen o en la p oducción de biomasa. Es e e ec o es mas impo an e en suelos de baja e ilidad o desequilib ados nu i i amen e, especialmen e cuando el con enido en ós o o asimilable es bajo (Abbo y Robson, 1984). Una mayo elación pa e aé ea - aíz en é minos de peso seco es ca ac e ís ico en plan as mico izadas (Be a e al., 1990). En gene al el c ecimien o de las plan as mico izadas a a depende del balance en e el e ec o p omo o debido al apo e de nu ien es y el e ec o dep eso eje cido po el d enaje de compues os ca bonados. Las plan as mico izadas des ían en e un 10 y un 20 % de la o osín esis ne a, que es eque ida pa a la o mación, man enimien o y uncionamien o de las es uc u as mico ícicas (Jakobsen y Rosendahl, 1990). El p incipal e ec o de la in ección de la aíz con mico iza es á causado po el inc emen o en la abso ción de ós o o (Bolan e al., 1987). Típicamen e en plan as mico izadas la concen ación de P po unidad de peso seco es mayo que en las plan as no mico izadas y po an o una meno e iciencia en la u ilización de P (Koide, 1991). Aunque puede deci se que las MVA mejo an las elaciones híd icas en plan as, induciendo un aumen o de la conduc i idad hid áulica, no pa ece se un e ec o di ec o de la in ección con es os hongos sino más bien una consecuencia de un mejo es ado nu icional y especialmen e en ós o o (Ba ea, 1991). En di e sos expe imen os se han pues o de mani ies o inc emen os en la concen ación de ni ógeno en plan as como consecuencia de la o mación de MVA. Los hongos MVA son capaces de u iliza NH 4+ y NO 3- (Bu le , 1987) y de me aboliza NH 4+ ía glu amino sin e asa (Smi h e al., 1985). Con espec o a o os nu ien es, se ha podido cons a a una meno concen ación de K + , Ca ++ y Mg ++ . Con espec o a los mic onu ien es, se ha pues o de mani ies o que en plan as mico izadas la concen ación de cinc y cob e son supe io es a la de las plan as no mico izadas (Lambe y Weidensaul, 1991). El descenso en la concen ación 19 axila es. La écnica de cul i o ejidos ege ales “in i o” consis e en el cul i o sob e un medio nu i i o, en condiciones es é iles y aisladas (den o de un con enedo no malmen e de id io) de pa e o la o alidad de una plan a. Se basa en los p incipios de au onomía y o ipo encia celula de la célula ege al. Se sabe que una de las u as donde las células ege ales en cul i o pueden mani es a su o ipo encia es la o ganogénesis, que conduce a la di e enciación de me is emos caulina es y/o adicula es (que o iginan allos o aíces ad en icias, espec i amen e) a pa i de ó ganos de la plan a como las yemas apicales o axila es . La o ganogénesis implica la o mación de es uc u as monopola es que es ablecen conexión ascula con el ejido del que de i an. La p ime a condición pa a el éxi o de un cul i o "in i o" es la asepsia, ya que los medios en que se desa olla el ejido ege al son muy a o ables pa a la p oli e ación de bac e ias, hongos y o os con aminan es. Se c ea, po consiguien e, la necesidad de la eliminación o al de mic oo ganismos, an o en el ins umen al de abajo como en el ma e ial ege al. Los p incipales mé odos de eliminación de las uen es de in ección son: - Uso de p oduc os químicos, como hipoclo i o de sodio (lejía come cial), hipoclo i o de calcio, me cu obu ol, biclo u o de me cu io, p oduc os bac e icidas y ungicidas, e anol a 70-80°C y agua oxigenada, que des uyen mic oo ganismos. - El calo , an o p oducido po la llama de un meche o Bunsen como el calo húmedo a p esión en au ocla e (120°C y 1 a m.) du an e de e minados iempos de es e ilización que dependen del olumen de ma e ial a es e iliza . - U ilización de sis emas de il ación de ai e o zado ales como il os especiales que no dejan pasa pa ículas cuyo diáme o sea supe io a 0.22 µ (cáma a de lujo lamina ). El lujo de es e ai e o igina una p esión que impide el acceso de ai e con aminado desde el ex e io al in e io de la cabina. La es e ilización del ma e ial ege al debe ealiza se de al o ma que los p oduc os empleados no dañen los ejidos. Consecuen emen e, hay que espe a odo lo posible los iempos de es e ilización. Las di icul ades apa ecen cuando hay p esencia de he idas, ce as, ejido de na u aleza ugosa, p esencia de pelos ( icomas), e c. 20 Los ac o es ísicos ambien ales de e minan es en el cul i o de ejidos "in i o" son las necesidades de luz, la empe a u a y el medio de cul i o. Las p ime as se pueden descompone en es pa áme os: la in ensidad, la du ación de la iluminación y la calidad de la luz. La in ensidad (po encia luminosa po unidad de supe icie) iene exp esada en W/m 2 , y habi ualmen e, en las salas de cul i o de ejido, a ía de 23.25 a116.27 µE m -2 s -1 (1000 a 5000 lux) con una u ilización muy co ien e de 46.51 a 69.76 µE m -2 s -1 . Se sabe que una baja in ensidad a o ece la o mación de callo, mien as que una in ensidad al a o i ica y desa olla los allos. En cuan o a la du ación de la iluminación, en la p ác ica la mayo pa e de los cul i os "in i o" se desa ollan con un o ope íodo de 16 a 18 ho as/día. Sin emba go, según algunos au o es, pa ece que en la mayo ía de los casos el ac o más impo an e es la can idad de ene gía luminosa ecibida (in ensidad po o ope íodo). La calidad de la luz ue es udiada po Seibe e al., (1975) sob e allo de abaco; la luz azul (banda espec al cen ada al ededo de 419 nm) induce la o mación de yemas y la luz oja (660 nm) induce la izogénesis. La empe a u a de las cáma as de cul i o de ejidos ege ales es á habi ualmen e egulada de o ma cons an e a 24 –26 °C. La empe a u a eal del ejido en el in e io de los ecipien es puede se supe io de 2 a 3 °C a la de la cáma a, debido a la adiación lumínica. Se emplea una empe a u a baja pa a la o mación de yemas lo ales, up u a de do mancia y ge minación de semillas, una empe a u a muy baja pa a de ene el c ecimien o del cul i o (almacenamien o en ío), y una empe a u a muy ele ada, 37-38 °C, pa a a amien os de e mo e apia cuyo in es la eliminación de i us en plan as a ec adas. También se aplica en ocasiones una al e nancia de empe a u a, (26 °C/día y 15 °C/noche). Un medio de cul i o es una solución acuosa que con iene una pa e mine al, que apo a a la misma N, P, K, Ca, S y Mg, Fe, Zn, B, Mn, Cu, I, Co, Ni, Al y Mo. Además, se inco po a una pa e o gánica (azúca es, i aminas, aminoácidos, i oho monas o egulado es de c ecimien o). Es a solución acuosa es á solidi icada en la mayo pa e de los casos po aga -aga . Los mine ales p esen es en el medio de cul i o pueden usa se po los ejidos y células de las plan as como lad illos pa a la sín esis de moléculas o gánicas o como 21 ca alizado es en eacciones enzimá icas. Los iones de las sales disuel as juegan un impo an e papel en el anspo e de moléculas po la plan a, en la egulación osmó ica y en el man enimien o del po encial elec oquímico de la plan a. Las composiciones mine ales más usadas se conocen con el nomb e de sus au o es, así, de las p ime as empleadas ue on Knop (1865) y Whi e (1943). Pa a el cul i o de callo las más usadas son Gambo g (1968), Gau he e (1959), Helle (1953). Pa a cul i o de aíces Whi e (1963). Pa a cul i o de ó ganos Gambo g (1968) y Mo el (1975). No obs an e, el de uso más gene alizado es el Mu ashige y Skoog (1962), ico en amonio, ós o o y azu e. Aunque las plán ulas cul i adas "in i o" son e des y poseen clo o ila, su unción o osin é ica es á muy educida, ya que aún no se han o mado los enzimas necesa ios. Po ello, como uen e de ca bono se usa hid a os de ca bono, gene almen e saca osa (1-3%). T abajos ealizados desde 1987 (Thompson and Tho pe, 1987) demues an que la uen e hid oca bonada del medio de cul i o no sólo desempeña una unción nu i i a, sino que ambién eje ce un e ec o impo an e sob e la mo ogénesis a a és de sus p opiedades osmó icas. Los azúca es secunda ios (mio-inosi ol) mejo an la di isión celula y pa icipan en la o mación de la pa ed celula . Aunque el ni a o da luga a aminas en las células, en algunos casos se deben adiciona aminoacidos, glicina o cis eína, como ni ógeno educido. Son undamen ales las i aminas del g upo B. Así la B1 ( iamina), man iene los ápices caulina es y la B6 o pi idoxina, es impo an e en el me abolismo de los aminoácidos. La bio ina es un co ac o de la ac i idad auxínica. El pan o ena o de Ca es undamen al en la espi ación. La i amina C ó ácido ascó bico es un an ioxidan e. También se incluyen, a eces, el ácido nico ínico o i amina PP y el ácido ólico. Los egulado es de c ecimien o son los compues os o gánicos que, en pequeñas can idades, inhiben, p omue en o modi ican algún p oceso isiológico que a su ez o igina la inhibición o es ímulo del c ecimien o y la o ganogénesis. Has a el momen o, la hipó esis mas acep ada pa a explica el modo de acción de los egulado es del c ecimien o en la o ganogénesis pos ula que dicho p oceso es á egulado po cambios en los ni eles ho monales endógenos de auxinas y ci oquininas, Es a hipó esis es á basada en los abajos de Skoog y Mille en 1957 que demues an que la concen ación ela i a de auxinas y ci oquininas exógenas egula la o mación de ó ganos en cul i os de callo 22 de médula de abaco. De acue do con es e modelo, la di e enciación de yemas ege a i as (caulogénesis) es p omo ida po balances auxina/ci oquinina a o ables a las ci oquininas, mien as que los balances a o ables a las auxinas inducen la o mación de aíces ( izogénesis). La manipulación de las concen aciones de auxinas y ci oquininas en los medios de cul i o pe mi e con ola la o ganogénesis in i o de muchas especies ege ales, cons i uyendo además la base de g an pa e de los p o ocolos de p opagación ege a i a in i o (mic op opagación) exis en es en la ac ualidad. La mic op opagación es una de las aplicaciones de la écnica de cul i o de ege ales "in i o" de mayo in e és, ía o ganogénesis, ya que o ece las siguien es posibilidades: - P opo ciona un al o ac o de mul iplicación po lo que pe mi e una g an apidez de p opagación de plan as idén icas a la de pa ida (mad e). Es e aspec o es muy álido, en pa icula , pa a la selección clonal. - Ayuda a la p opagación de a iedades con di icul ades de adap ación o p oblemá icas pa a p opaga se po o os sis emas mas adicionales. -Facili a la cons i ución de colecciones de plan as mad es, al pe mi i el almacenamien o de g andes can idades de miniplan as (que se u iliza án como pies mad es) sob e pequeñas supe icies. Asimismo, acili a el in e cambio de es e ge moplasma en e países. - Con ibuye a sal a especies en ías de desapa ición. -Pe mi e la p opagación du an e odo el año, sin es a condicionado po la es ación clima ológica. La mic op opagación consis e en oma de la plan a mad e un ó gano o un ozo de és e, lo que se denomina "explan o", y bajo condiciones asép icas, some e lo a sucesi os cul i os "in i o" has a ob ene nue as plan as semejan es a la inicial. Es os cul i os 23 sucesi os cons i uyen las di e en es ases de la mic op opagacion que se pueden conc e a como sigue: Fase 0.- P epa ación del ma e ial mad e. La plan a o iginal, que condiciona odo el cul i o ul e io , debe p esen a las mejo es ca ac e ís icas ag onómicas y sani a ias, pa a con a con un ma e ial de pa ida en las mejo es condiciones posibles. En gene al, se compo an mejo los explan os si p oceden de plan as mad es cul i adas en in e nade o. Fase 1.- Es ablecimien o del cul i o asép ico. El obje i o de es a ase es ob ene un cul i o lib e de odo mic oo ganismo (hongos, bac e ias, e c.) p oceden e de la especie que se quie e mul iplica . Po ello, es a e apa se conside a sa is ac o ia si un núme o adecuado de explan os sob e i e sin con aminación y se man iene un c ecimien o ápido. Fase 2.- Mul iplicación p opiamen e dicha. El in de es a e apa es lle a a cabo la mul iplicación de ó ganos y es uc u as que son capaces de da luga a nue as plan as comple as e in ac as. Los b o es p oducidos en es a e apa pueden conside a se como p opágulos en el sen ido de su uso pa a p opaga una nue a plan a o cul i a se de nue o con el in de inc emen a su núme o. La mayo ía de las in es igaciones ealizadas en es a ase de la mic op opagación, han cen ado la a ención en es ablece el ni el óp imo de sales o gánicas, i aminas, egulado es de c ecimien o y de o os aspec os químicos pa a el desa ollo óp imo de una de e minada especie o a iedad en una ase especí ica del p oceso. También, ecien emen e se ha demos ado que en cul i os en medios sólidos o semisólidos la concen ación de aga en el medio in luye en el ni el de p oli e ación cie as especies. O o pa áme o ísico que in luye en la p oli e ación es el amaño del con enedo del medio. Fase 3.- P epa ación de los p opágulos o plán ulas pa a su ans e encia a ie a. Un mé odo de mic op opagación e icaz debe man ene un al o po cen aje de plán ulas i as después de la salida del ecipien e de cul i o. La ase 3 iene po obje o p epa a las plán ulas pa a es e in, ya que concluida la ase 2, las plan as, po lo gene al, son pequeñas e incapaces de sopo a las condiciones en suelo. Po ello, se puede subdi i es a e ce a e apa en: 3.a) elongación de las plán ulas o madas en la ase 2 y 3.b) en aizamien o "in 24 i o" o "ex a i um" de las plán ulas c ecidas en 3.a. En es a ase hay que ene en cuen a el balance auxinas-ci oquininas. Fase 4.- T ans e encia al ambien e na u al. Si es a ase no se ealiza cuidadosamen e pueden p oduci se muchas pé didas debido, po un lado, a que las jó enes aíces o madas en ubo ienen una epide mis no sube i icada, po o o a que las plan as cul i adas asép icamen e, que c ecen en al a humedad ela i a (HR), a menudo su en es és híd ico cuando se exponen a baja HR. Es e es és híd ico es la causa más g a e de pé didas en el p oceso de adap ación de plan as cul i adas "in i o" a condiciones de in e nade o. Las hojas de las plan as cul i adas en un medio con olado "in i o" di ie en ana ómicamen e de las de in e nade o, ya que ienen menos ce as epicu icula es, células en empalizada más pequeñas y más ai e in e celula en las células del mesó ilo. Algunos au o es sugie en que la baja espues a del es oma ambién con ibuye a es e es és. Po ello, en es a ase se deben si ua las plan as en una a mós e a con una humedad ela i a máxima du an e un pe íodo de una a es semanas a 15-25°C cuidando que en es as condiciones, no se desa ollen en e medades de ipo úngico. Un mé odo poco cos oso y p ác ico (Can os e al., 1993) puede lle a se a cabo cuando las plan as hayan alcanzado el desa ollo adecuado, aslada las a asos de plás ico de 330 cc de capacidad con subs a o de u ba. El conjun o aso-plan a, se cub e con una bolsa de polie ileno anspa en e y se pul e iza con agua pa a c ea un ambien e de ele ada humedad in e na. A in e alos de dos días du an e 10 días, se pe o a paula inamen e la cubie a plás ica y bajo ecuen es con oles, a in de comp oba que la plan a no su a deshid a ación, se e i a la bolsa pa a llega al con ac o o al en e la plan a y el ambien e ex e no. Una ez asegu ada la supe i encia de la plan a, se aslada és a a mace a de mayo olumen (2 l.) y se lle a a in e nade o asép ico. 25 III. OBJETIVOS El obje i o p incipal de es e abajo es la e aluación de la ole ancia a la salinidad an o in i o como en condiciones de in e nade o, de es clones a icanos de mandioca (Maniho esculen a C anz), pa a en su caso pode se cul i adas en á eas á ido-salinas. Pa a la ob ención de es e obje i o p incipal se conside a an los siguien es obje i os pa ciales: a. De e minación de las condiciones óp imas pa a la p opagación in i o de explan os de mandioca y compo amien o de es e ma e ial ege al an e la p esencia de concen aciones c ecien es de NaCl en el medio de cul i o. Clasi icación del ma e ial conside ado po su ole ancia a la salinidad. b. De inición del compo amien o an e la sal de plan as de los es clones de mandioca cul i adas en in e nade o. Clasi icación po su ole ancia y compa ación con la clasi icación ob enida in i o. c. De e minación de la in luencia del a amien o con mico izas esículo a buscula es (MVA) sob e el desa ollo de plan as de los es clones de mandioca al se asplan adas desde in i o a condiciones ex e nas y sob e su ole ancia a la p esencia de sal en la solución nu i i a. d. Ca ac e ización del compo amien o in i o y as el asplan e a condiciones ex e nas, de ma e ial p oceden e de plan as de mandioca mico izadas en in e nade o. 26 IV. PROPAGACION IN VITRO IV.1. INTRODUCCION Como se ha indicado, la mandioca es una especie monoica y al amen e he e ocigó ica. Debido a es a he e ocigosis, cuando se p e enden conse a unos ca ac e es gené icos de e minados, se p opaga ege a i amen e median e es aquillado (Kamalam e al., 1977; Wholey y Cock, 1978). Como en o os an os cul i os, las asas de p opagación alcanzadas median e cul i o in i o de yemas apicales son conside ablemen e mayo es que las conseguidas po los mé odos adicionales (S amp y Henshaw, 1986). Ello, unido a o as en ajas impo an es del cul i o en medio con olado, como la independencia de la época es acional, de g an impo ancia en plan as opicales, el almacenamien o en espacios educidos, y en especial su uso como mé odo de selección de a iedades mas ole an es a es és, an o de ipo abió ico como bió ico, hace que el uso de la écnica de mic op opagación pa a es a especie sea de g an in e és. Además, el cul i o “in i o” es un mé odo ap opiado pa a pode aplica me odologías an o bio ecnológicas, como de ingenie ía gené ica. Son bien conocidos los p o ocolos pa a el cul i o in i o de me is emos y explan os nodales de mandioca, an o pa a p opagación (P o uguez y Mogilne , 1967; Konan e al., 1994, 1997; Li e al., 1998) como pa a ob ene plan as sanas y lib es de i us (Fe eol, 1978; Ka ha y Gambo g, 1978; Kaise y Teemba, 1979; Roca y cols, 1980; Adapa e y Cou s, 1981) en algunos casos asociando el cul i o de me is emos apicales a la e mo e apia. En 1974, Ka ha e al., op imiza on un medio pa a el cul i o de me is emos caulina es, empleando la solución mine al MS (Mu ashige y Skoog, 1962), con adición de las i aminas del medio B5 (Gambo g e al., 1968) y suplemen ado además con ANA, BA y GA a 1,0, 0,.5 y 0,1 µM espec i amen e. Más a de, se es ableció que la adición de BA (0,5 µM) en p esencia de ANA y GA, mejo aba la egene ación y que el GA 3 enía e ec os es imulan es en el c ecimien o de la mandioca (Nai y cols., 1979). Así pues, es os úl imos au o es p es a on a ención especial a la in luencia de los egulado es de c ecimien o encon ando que la BA ue la mejo ci oquinina en e a zea ina, kine ina ó 2iP, en conjunción con 0,18 ó 0,018 mgl -1 de ANA y 0,035 mgl -1 de GA3. Roca (1986), encon ó 27 que ni eles de 0,11 mgl -1 de BA p omo ie on iniciación de allo y c ecimien o y que concen aciones ele adas de BA (2 mgl -1 ) e a da on el c ecimien o del allo, inhibie on la o mación de aíces y es imula on la o mación de callo. La adición de ANA al mismo medio, indujo una o mación excesi a de callo y aíces. Zok e al. (1992), p opusie on como adecuado pa a el desa ollo ege a i o de mandioca in i o, el medio MS con BA a 0,05 mgl -1 y ANA a 0,01 mgl -1 de concen ación. Mas ecién emen e, Bhagwa e al. (1996), ensaya on el uso del TDZ (N-phenyl-N’-1,2,3- hidiazol-5-ylu ea) compues o elacionado con la enilu ea con e ec o an o auxínico como ci oquinínico (Mok e al., 1982 ; Visse e al., 1992). El TDZ posee una pode osa capacidad de es imulación de o ganogénesis de b o es de algunas especies leñosas ( an Nieuwke k e al., 1986; Chalupa e al., 1988; Yusni a e al., 1990; Hue eman y P eece, 1993; Lu 1993). Bhagwa e al., (1996) indica on que después de man ene explan os nodales en un medio MS líquido con 0,11 y 0,22 µM de TDZ du an e 6 a 8 días, se asplan a on a un medio sólido con 2,2 µM de BA y 1,6 µM de GA 3 , encon ando que el desa ollo iniciado en la ase de a amien o inducido po TDZ se man u o en el medio sólido, ob eniéndose una media de 31,5 b o es po explan o a las 10 semanas de cul i o. Es as espues as posi i as se gene aliza on pa a ocho geno ipos di e en es. Resul ados ob enidos po el Cen o In e nacional de Ag icul u a T opical (CIAT) en 1980, mos a on que el aumen o en la concen ación de saca osa desde 0,03 a 0,06 M po enció el e ec o de bajas concen aciones de BA sob e la elongación del allo a pa i de me is emos. En es as mismas condiciones, se obse ó un inc emen o del desa ollo adicula . Al aumen a la concen ación de BA man eniendo la concen ación de saca osa en los ni eles más al os ci ados, se inc emen ó ambién la o mación de callo. Inc emen os mayo es de la concen ación de saca osa causa on oscu ecimien os de la aíz y de e io o en los ejidos aé eos, p obablemen e como consecuencia del es és osmó ico. Noe hadi y Widiyan o (1982) demos a on que es posible la ob ención de callos y aíces a pa i de agmen os de hojas y peciolos. Mabanza (1981) ob u o la neo o mación de plan as a pa i de me is emos caulina es, e igualmen e a pa i de co iledones ex aídos de semilla (Mabanza y Jona d, 1984). Meda d en 1985, hizo un es udio de allado sob e las e apas de la mo ogénesis olia de mandioca. A pesa de las di icul ades impues as inicialmen e po el compo amien o i egula de las plan as de mandioca ob enidas con los di e en es sis emas de p opagación in i o, (Tilquin, 1979), en las dos úl imas décadas se han desa ollado me odologías, como la emb iogénesis (Liu y Chen, 1977) o el uso de b o es ad en icios, con is as a la 28 modi icación gené ica. Ello ha enido una amplia epe cusión en la bio ecnología de dicha especie. Los in en os mas ecien es de desa olla sis emas de egene ación in i o pa a in es igaciones desde el pun o de is a molecula o celula se han cen ado p incipalmen e en la emb iogénesis somá ica. S amp y Henshaw (1982 y 1987) ealiza on di e sos abajos sob e emb iones somá icos p ima ios y secunda ios y emb iones cigó icos. Choi e al., (1987) es udia on las ca ac e ís icas bioquímicas de emb iones somá icos y So ia i e al., (1997) compa a on la acción de ANA y 2,4-D sob e la inducción de emb iones somá icos a pa i de discos de hoja de sie e cul i a es de mandioca, encon ando que el 2,4-D es el único que induce emb iones p ima ios y que ambos egulado es inducen emb iones secunda ios. Ma, (1998) indicó que las ci oquininas benciladenina y TDZ es imulan la o ganogénesis de b o es mas que la kine ina y N-isopen iladenina, mien as que las auxinas inducen de o ma e ec i a la emb iogénesis somá ica. Apa e de su e iden e aplicación pa a p opagación, se han u ilizado los callos de emb iones somá icos pa a aisla p o oplas os (So ia i e al., 1998) o pa a es udia e ec os elacionados con la cianogénesis (Joseph e al., 1999) . En elación a la emb iogénesis cigó ica, F egene e al., (1998), ob u ie on un al o po cen aje de plan as esca adas p ecozmen e de semillas usando emb iones cigó icos inmadu os. A pesa de los úl imos adelan os en es e sis ema, la aplicación e icien e de es a écnica pa a la ans o mación gené ica de la mandioca no es aun sencilla debido, en e o as causas a la dependencia del geno ipo (Bhagwa e al., 1996) Den o de las ases de la mic op opagación de inidas po Mu ashige (1974) una de las mas p oblemá icas es la ans e encia al ambien e na u al. Si es a ase no se ealiza cuidadosamen e pueden p oduci se muchas pé didas debido, po un lado a que las jó enes aíces o madas in i o ienen una epide mis no sube i icada y su en daños en el p oceso de asplan e (G ibaudo e al., 1995), y po o o, a que las plan as cul i adas asép icamen e, c ecen en al a humedad ela i a (HR), en el in e io del asco de cul i o y al pasa al ex e io con meno HR su en a menudo pé didas ele adas de agua. Las hojas de las plan as cul i adas "in i o" di ie en ana ómicamen e de las de in e nade o, ya que ienen menos ce as epicu icula es (Zaid y Hughes, 1995), células en empalizada más pequeñas y más ai e in e celula en las células del mesó ilo. Po ello, el es és híd ico que su e la plan a ans e ida de al a a baja HR se a ibuye a es as pa icula idades ana ómicas (Su e y Langhans, 1979; Zacchini y Mo ini, 1998). Es os úl imos au o es sugi ie on que la baja espues a del es oma ambién con ibuye a es e es és. Zi e al., (1987) indica on que los es omas en la epide mis de hojas cul i adas "in i o" de cla el no se cie an como espues a a la oscu idad, plasmolisis, AAB o Ca++, ac o es que mo i an el cie e de los 35 IV.3.3. P ueba de adap ación a condiciones "in i o". Se conside ó de in e és con ola si los dis in os ipos de sis emas adicales p o ocados, en especial, po la p esencia de ANA en el medio u ie on alguna in luencia sob e la supe i encia y el desa ollo de la plan a de mandioca al se asplan ada a condiciones ex e nas. En la abla 3 se indica la e olución, du an e los p ime os 100 días, del po cen aje de plan as de mandioca adap adas a condiciones no males de c ecimien o. En dicha abla se especi ica el compo amien o de los es clones en es udio, dependiendo de que las plan as adap adas hubiesen sido p e iamen e ob enidas in i o en p esencia o ausencia de ANA. Tabla 3. E olución del an o po cien o de plan as supe i ien es al asplan e en la ase de adap ación. Clon Días desde el asplan e con ANA 100 a 93,8 a 55,1 b 55,1 b 55,1 b sin ANA 100 a 87,5 ab 60,0 b 57,5 b 57,5 b con ANA 100 a 80,0 b 62,2 b 62,2 b 62,2 b sin ANA 100 a 78,2 b 65,2 b 65,2 b 65,2 b con ANA 100 a 78,2 b 65,2 b 65,2 b 65,2 b sin ANA 100 a 84,4 b 82,2 b 82,2 b 82,2 b 100 % plan as supe i ien es SOM-1 05 50 0 25 50 75 Le as di e en es leídas en ila indican di e encias signi ica i as (P< 0,05) espec o a a amien os con ANA. Tes LSD. En odos los casos, la mayo pa e de las pé didas se p oduje on du an e los p ime os 50 días como sucede en la mayo ía de las plan as, an o de mandioca (Roca 1984; Guoha M. , 1998) como de o as especies como id (Can os e al., 1993), oli o (Pé ez, 1997), P unus (Zacchini y Mo ini, 1998) ó ga denia (Se e e al., 1997). Ese iempo comp ende un p ime pe íodo de adap ación in i o-ex i o en el que ni el sis ema adicula , ni la egulación es omá ica olia (Choudhu y y Mon ei h, 1986; Zacchini y Mo ini, 1998) es án bien egulados con las necesidades de la plan a, lo que puede p oduci pé didas i e e sibles de agua en los ejidos. También se p oduje on nue as pé didas en los p ime os días de habe pasado las plan as de la cáma a de cul i o a in e nade o. 36 No se obse a on di e encias de adap ación en e las plan as con aíces o madas en medio sin ANA (la gas aunque menos nume osas) o con ANA (meno es y mas nume osas) como lo con i ma los coe icien es de co elación en e plan as adap adas y iempo ( =-0,887 pa a plan as con aíz inducida y =-0,876 pa a las de aíz espon ánea), y la compa ación en e las medias de plan as con enien emen e aclima adas p oceden es de ambas si uaciones . Tampoco se obse a on di e encias signi ica i as en e los po cen ajes de plan as adap adas al ex e io de los clones en es udio. En la abla 4 se indican los alo es medios de longi ud del allo y del núme o de b o es de las plan as adap adas en la p ueba desc i a, pa a cada uno de los es clones en es udio, a los 50 días desde su asplan e al ex e io . En dicha abla, se obse a que no exis ie on di e encias signi ica i as en e la longi ud del allo de las plan as de los clones SOM-1 y 05, con aíz inducida o espon ánea. Sólo las plan as del clon 50, que c ecie on más que las de los o os dos clones, u ie on allos algo mayo es cuando su sis ema adicula se había o mado en medio con ANA. Tampoco exis ie on di e encias en e el núme o de b o es de las plan as con aíces inducidas y espon áneas y que las plan as del clon 50 p esen a on un mayo núme o de b o es que de los o os dos clones, en e los que no exis ie on di e encias signi ica i as. Po o a pa e, ampoco se encon a on di e encias en la supe i encia al asplan e in i o-ex i o (74%), ni en e el desa ollo du an e la ase de aclima ación de las plan as de la p ueba de adición de ci oquininas (kine ina o BA) al medio de cul i o in i o. Del conjun o de los esul ados se puede des aca que con el mé odo de cul i o in i o u ilizado se log ó de un solo cul i o, el desa ollo con empo áneo de la pa e aé ea ( allo, hojas) y del sis ema adicula , del explan o de mandioca cul i ado in i o. Tabla 4. Longi ud media y núme o medio de b o es de plan as de mandioca adap adas a condiciones “ex i o” en elación al ipo de aíz. CLON SOM-1 50,0 b 48,6 c ns 4,0 b 4,0 a ns 05 60,2 a 66,2 b ns 3,7 b 3,9 a ns 50 72,6 a 94,7 a * 4,3 a 4,6 a ns sin ANA con ANA sin ANA con ANA Tallo Longi ud (mm) Núme o de yemas Los as e iscos indican di e encias signi ica i as (P< 0,05), espec o a a amien os con y sin ANA. Le as di e en es leídas en columna indican di e encias signi ica i as en e clones (P< 0,05). Tes LSD. 37 Es e hecho se conside a de in e és, ya que p oduce un no able aho o de iempo y dine o, pues o que el cul i o in i o de ma e ial de mandioca, se ealiza adicionalmen e en dos ases (un p ime subcul i o pa a a o ece el c ecimien o aé eo y un segundo pa a la adicación). No se encon ó ningún e ec o signi ica i o posi i o sob e el desa ollo in i o del explan o de mandioca, po la adición al medio de cul i o de ANA a las concen aciones de 0,13 mgl -1 , o de BA o kine ina a las concen aciones 0.5, 1.0, 1.5 y 2.0 mgl -1 . Solamen e la p esencia de ANA en el medio, p o ocó un mayo núme o de aíces po plan a, pe o es as ue on de meno amaño que las menos nume osas ob enidas en el medio sin la auxina. No obs an e, es e mayo núme o de aíces no in luyó en el desa ollo de la plan a in i o. Cuando se u ilizó la écnica p opues a po Can os e al., (1993), se alcanzó ap oximadamen e un 70% de plan as supe i ien es as el asplan e in i o-ex i o y un c ecimien o no mal de las mismas. Tampoco en es e caso, las plan as que se habían cul i ado in i o en medio con egulado es de c ecimien o (auxina o ci oquinina), mos a on un compo amien o dis in o a las que no u ie on dichas subs ancias en el medio. Es deci , que pa a las condiciones de los expe imen os que aquí se indican no ue aconsejable el uso de egulado es de c ecimien o en la p opagación in i o de los explan os de mandioca. En consecuencia, a pa i del escaso ma e ial inicial (1-2 explan os in i o de cada clon) u ilizando la écnica de p opagación in i o sob e medio de Mu ashige Skoog con 30 gl -1 de saca osa y 100 mgl -1 de inosi ol, sin egulado es de c ecimien o se log ó un ele ado coe icien e de mul iplicación y plan as comple as en un solo cul i o. Pos e io men e, u ilizando la écnica desc i a po Can os e al., (1993), se ob u ie on esul ados excepcionales en el asplan e in i o-ex i o, log ándose plan as de g an calidad en condiciones de in e nade o, que pe mi ie on la ealización de los expe imen os que se discu en a con inuación. 38 V. INFLUENCIA DE LA SALINIDAD (NaCl) EN EL DESARROLLO DE PLANTAS DE MANDIOCA (Maniho esculen a C anz) IN VITRO. V.1. INTRODUCCIÓN El cul i o in i o de ejidos y células ege ales es una he amien a ú il pa a es udios elacionados con la salinidad, en especial pa a la ca ac e ización de líneas ole an es, ya sean mu an es espon áneos o inducidos (Suma ya i e al., 1992; Kuo e al., 1994; Mo abi o e al., 1994; Ha izu -Rahman e al., 1995; Zhang y Donnelly, 1997; Cano e al., 1998; Ki dmanee e al., 1998; Kh ais e al., 1998; Liua y Baob, 1998; Ocha e al., 1999). Sin emba go, a di e encia de los nume osos abajos sob e la ole ancia de plan as a la salinidad ealizados en condiciones de campo o de in e nade o, hay muy pocos es udios en los que se aplica el cul i o de ejidos in i o a la selección de plan as ole an es a la sal. Debido a la impo ancia que p esen a la salinización, jun o a la di icul ad de alcanza esul ados p ác icos en la selección con encional, y a la acilidad de aplicación de es és salino a cualquie sis ema in i o, es in e esan e po encia es os es udios (Cano, 1991). No obs an e, de acue do con Skene y Ba lass (1988) y T oncoso e al., (1999a), los esul ados ob enidos in i o deben se con as ados en expe imen os ealizados en condiciones ex e nas. Una de las p ime as in es igaciones sob e el e ec o de la sal en ma e ial ege al cul i ado in i o, ue ealizado po Babae a e al., (1968) u ilizando callos de aíz de zanaho ia (Daucus ca o a L.), cul i ados en concen aciones c ecien es de NaCl. De es e modo, se obse a on di e en es ni eles de ole ancia a la salinidad según el ma e ial ob enido. Melche s (1972), discu ió las en ajas de la écnica de cul i o de ejidos in i o pa a selecciona mu an es esis en es a la sal. Es a ap oximación, la aplicó pos e io men e con éxi o Zenk (1974), que seleccionó una línea celula aislada de haploides de Nico iana syl es is L., capaz de c ece sob e medio con eniendo 0,17 mM de NaCl, esis encia que se man u o es able después de a ios subcul i os en medio salino. 39 O o a ance ué el conseguido po Dix y S ee (1975), que selecciona on un núme o de líneas celula es de Nico iana syl es is L. y Capsicum annuum L., capaces de desa olla se en medio líquido con 0,34 M de NaCl. Algunas de es as líneas e u ie on la ole ancia a la sal después de a ios subcul i os en medio sin NaCl. Nabo s e al., (1980), desc ibie on la he edabilidad de la ole ancia a la sal en plan as seleccionadas de Nico iana abacum L. egene adas a pa i de células de NaCl- ole an es, encon ando que el ni el de esis encia de la p ogenie de las plan as egene adas ue mayo que el de las plan as o iginales. Goldne e al., (1977), clasi ica on las posibles mu aciones seleccionadas pa a la ole ancia a es és salino median e cul i o de ejidos in i o, en es g andes g upos : 1) mu aciones esis en es a es és osmó ico; 2) mu aciones esis en es a es és causados po al as concen aciones de sales o ales y 3) mu aciones esis en es a es és causado po iones especí icos. Además, ecomenda on p ocedimien os especí icos pa a cada uno de es os g upos y sugi ie on que la écnica de selección usada po Zenk (1974), Dix y S ee (1975) y Nabo s e al., (1975) pa a cul i os de células en suspensión en NaCl, es aplicable a la selección de mu an es en el p ime g upo. Así mismo, llega on a emplea el cul i o de ejidos in i o pa a es ima las con ibuciones ela i as de los di e en es e ec os de los daños causados po la sal. Pa a ello, compa a on los e ec os del agua de ma , soluciones de di e en es sales ino gánicas y mani ol sob e el c ecimien o y la colo ación de callos diploides, o iginados a pa i de aíces de zanaho ia (Daucus ca o a L). De los esul ados ob enidos, concluye on que la inhibición del c ecimien o se debía undamen almen e al inc emen o de p esión osmó ica, mien as que la decolo ación y la nec osis e an a ibuibles a la oxicidad de la sal. Chen e al., (1980), abajando con callos de Nico iana abacum L. en medio con eniendo a ias concen aciones de agua de ma o NaCl, encon a on que una solución de un solo ipo de sal (NaCl) esul ó se más óxica pa a los ejidos que el agua de ma a la misma concen ación. S ogono (1973), es udió la espues a a NaCl de callos ob enidos a pa i de cua o especies glicó i as y una haló i a. Mien as la espues a de callos o iginados a pa i de especies glicó i as es u o elacionada con la espues a de la plan a comple a a la salinidad, es a co elación no exis ió en la haló i a siendo el callo o iginado a pa i de es a úl ima mucho más sensible que los de la más sensible a la sal de las glicó i as. Es os esul ados ue on con i mados en dos glico i as (Phaseolus ulga is L. y Be a ulga is L.) po Smi h y McComb (1981), no siguiendo es e pa ón las halo i as A iplex undula a L. y Suaeda aus alis L. Po an o, los in es igado es ci ados 40 concluye on que, en con as e con las glicó i as, la esis encia a la sal en las especies haló i as depende de la in eg idad ana ómica y isiológica de la plan a comple a y no de las p opiedades celula es. En consecuencia, las células de es as plan as no son capaces de esis i la sal cuando se encuen an en o ma de callo. Po el con a io, o os au o es encon a on una co elación en e la espues a de la plan a comple a y el callo de i ado de la misma, an o en glico i as como en halo i as. Así, Von Edes ön y B eckle (1974), descub ie on es a co elación en Suaeda ma i ima L., incluso el callo c eció mejo en medio con sal que en el ca en e de ella. Tal e al., (1978), es ablecie on que las células que se o igina on de hojas, allos y aíces de oma e cul i ado y de dos especies sal ajes ole an es a la sal (Lycope sicon pe u ianum L. y Solanum pennellii Co .) mejo aban en p opo ción simila cuando la plan a comple a se cul i ó en salinidad. Concluye on que el mejo ajus e osmó ico, que ca ac e izaba a las especies sil es es bajo al a salinidad, es ope a i o a ni el celula y no depende de la o ganización de esas células en la plan a comple a. Un compo amien o simila obse ó O on (1980) pa a callos p oceden es de plan as sensibles y esis en es de cebada (Ho deum ulga e L.). Un in en o de uso de líneas celula es esis en es a NaCl de Nico iana syl es is L. pa a conoce la base de la esis encia a al a salinidad, ue publicado po Dix (1980), usando mic oanálisis con ayos X. Sugi ió que la acumulación o secues o de iones Na + y Cl - en un compa imen o subcelula no puede se el mecanismo esponsable de la ole ancia a la sal en es os cul i os celula es. Po o o lado, uno de los p incipales p oblemas del uso del cul i o in i o como he amien a de selección de plan as ole an es a la sal es que la plan a egene ada a pa i de células ege ales no implica ga an ía absolu a de que sea una copia exac a de la línea pa en al u ilizada, de modo que no siemp e la ole ancia en el ámbi o celula ha sido exp esada en la plan a egene ada. (Tal, 1985; Flowe s e al., 1985). Es o es debido a la a iación somaclonal (Scowc o y La kin, 1982) que es una mane a de aumen a la a iabilidad gené ica, dando luga a un cambio gené ico (ca ac e ís icas cuali a i as y cuan i a i as) que se puede man ene en las plan as egene adas (Cano, 1991). El alo de la a iación somaclonal en ag icul u a ha sido desc i o adecuadamen e po Ahloowalia (1978) La kin y Scowc o (1981) y E ans e al., (1982). Po ello, du an e las p ime as e apas de selección in i o pa a ole ancia a la salinidad, el in e és se cen a en comp oba si la a iación es á exp esada ielmen e en los cul i os de células y de ejidos. Es o se ha comp obado en callos de Ho deum juba um L. (O on, 1980); Lycope sicon pe u ianum y L. pennellii Co . (Tal e al., 1978). L. esculen um, L 41 pennellii y su híb ido in e especí ico (Pé ez-Al ocea, 1991), Be a ulga is (Smi h y Mc Comb, 1981a) y Medicago sa i a (Smi h y McComb, 1981b) y en suspensiones celula es de las plan as haló i as Salico nia y Suaeda ma i ima (Von Edes ön y B eckle, 1974), Dis ichlis spicala (Wa en y Gould, 1982) y Spa ina peclinala (Wa en e al., 1985). Los es udios sob e cul i o in i o de ejidos usando ma e ial más di e enciado y, en consecuencia menos suscep ible a se modi icado gené icamen e que las células o callos, pa a la selección de clones ole an es a la sal son oda ía más escasos. Uno de los p ime os abajos, e ec uado con yemas, ue ealizado po Ba lass y Skene en 1981 con id (Vi is ini e a L.), encon ando que la ole ancia in i o al NaCl es dependien e de la a iedad y es á elacionada con la acumulación de Cl - en los ejidos del explan o. Aunque cons a a on que la me odología e a aplicable a la selección, en abajos pos e io es Skene y Ba lass, (1988) obse a on que la selección in i o de ma e ial de id po su ole ancia a la salinidad necesi aba se con as ada con ensayos ealizados en condiciones ex e nas. Pos e io men e, (T oncoso e al., 1999a), es udia on la espues a de once po ainje os de id a concen aciones c ecien es de NaCl en el medio de cul i o, an o in i o usando yemas apicales y axila es como en cáma a de c ecimien o. Los esul ados ob enidos pe mi ie on clasi ica las a iedades es udiadas de acue do con su ole ancia a la salinidad en medio con olado y con i ma dicho compo amien o en condiciones ex e nas. Alhagdow e al., (1999) conside a on las in e accioens de la sal con el es ado nu i i o de plan as de pa a a ob enidas po mic op opagación y Cano e al., (1998) e alua on la ole ancia a sal de di e en es especies de oma e sil es e, esal ando que los pa áme os de en aizamien o de las plán ulas desa olladas a pa i de los ápices pueden se buenos indicado es pa a una e aluación ápida de la ole ancia a la sal. El obje i o del p esen e capí ulo es es udia la ole ancia a la sal cul i ando in i o yemas subapicales en medio con concen aciones c ecien es de NaCl de los es clones de mandioca desc i os. V.2. MATERIALES Y MÉTODOS En odos los casos, como ma e ial ege al se emplea on explan os de ap oximadamen e un cen íme o de longi ud, con una yema axila , ob enidos de plan as man enidas in i o, de los clones SOM-1, 05 y 50 usados en las p uebas an e io es. 42 Dado que los explan os p o enían de plan as conse adas in i o y en su p epa ación se abajó en condiciones de asepsia, no ue necesa io desin ec a los. Como medio de cul i o se u ilizó el de Mu ashige y Skoog (1962) con 30 g l -1 de saca osa y 100 mg l -1 de mioinosi ol. El pH se ajus ó a 5,7 con NaOH y HCl 1N y se añadió aga -aga (Cul imed) al 0,5%. Los dis in os medios salinizados se p epa a on po adición al medio an e io (con ol) de soluciones de NaCl espec i amen e de 0, 2, 4, 6, 8 y 10 g l -1 que die on una conduc i idad eléc ica de 4.6, 7.5, 10.63, 13.5, 16.4 y 19.2 dS m -1 en la p ime a p ueba, y de 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 g l -1 de NaCl en las que se midió una conduc i idad eléc ica de 4.6, 5.3, 6.1, 6.8, 7.5, 8.3 y 9.1 dS m -1 en la segunda p ueba. La es e ilización de es os medios y del ma e ial de labo a o io, se ealizó en au ocla e a 121 ºC y 1 a m de p esión du an e 20 minu os. En el p ime y segundo expe imen o, se emplea on 48 explan os po clon (3 clones) y a amien o salino (6 concen aciones salinas) lo que dio un o al de 864 explan os en cada p ueba. En odos los casos, los explan os se semb a on indi idualmen e en ubos de ensayo de 150 x 25 mm, con 8 ml de medio. Cada ubo se apó con un capuchón de polip opileno cuyo bo de se selló con pa a ilm y se puso en una cáma a de cul i o a 25±2 ºC, 16 ho as de o ope iodo y 30 µE m -2 s -1 de in ensidad luminosa. T anscu idos 80 días se analizó la supe i encia de las plan as. En la segunda p ueba se conside ó además la p oducción de biomasa (peso esco y peso seco), el g ado de hid a ación de los ejidos según la o mula; {(P -Ps)/P }.100; la longi ud del allo, el núme o de yemas, el núme o de hojas y la supe icie olia , el núme o de aíces y la composición mine al de aíz, allo y hojas de las plan as supe i ien es. La p oducción de biomasa se de e minó sepa ando las plan as ex aídas de cada ubo en aíz, allo y hojas, y pesando cada una de es as pa es. Pa a la de e minación del peso seco se puso cada ó gano en es u a de ai e o zado a 70ºC has a peso cons an e. La supe icie olia se de e minó median e digi alización de imagen (Lea A ea Me e Skye). V.2.1. De e minaciones analí icas. Cada mues a se la ó con agua y de e gen e y se enjuagó cuidadosamen e con agua des ilada. Pa a su desecación, se en ol ió en un papel de il o y se in odujo en 43 una es u a con ci culación de ai e a 60 ºC, du an e 2 ó 3 días. Una ez seca se molió en un molinillo y el pol o se in odujo en un sob e de papel debidamen e e ique ado. Pa a la de e minación de los elemen os sodio, po asio, calcio, magnesio, hie o, cob e, manganeso y cinc se u iliza on écnicas de espec o o ome ía de abso ción a ómica, po medio de un espec óme o Pe kin-Elme mod. 300 (C.I.I.T.D.F., 1960). El p ocedimien o consis ió en pesa 0.5 g amos (si no hubo su icien e mues a se pesa on 0.25 g amos) de cada mues a de pol o ege al que se pusie on en cápsulas de pla ino, y se in oduje on en un ho no ío, ele ando la empe a u a paula inamen e has a 500 ºC, en 2 ó 3 ho as. Una ez calcinadas, se humedecie on con 2-3 ml de agua desionizada más 1ml de HCl concen ado, añadidos len amen e. A con inuación, se calen a on sob e unas placas has a la apa ición de los p ime os apo es. Cada mues a esul an e se il ó a as ando el pol o de la cápsula con agua desionizada, ecogiendo el il ado sob e un ma az a o ado de 50 ml (si se pesa on 0.5 g) o de 25 ml (si se pesa on 0.25 g), y se en asó con agua desionizada. Luego, as agi ación, se midie on median e abso ción a ómica. El p ocedimien o pa a la de e minación de ni ógeno consis ió en pesa 0.2 g de cada mues a ege al e in oduci los en ubos de id io Kjeldahl. Se les añadie on 0.5 g de K 2 SO 4 desecado y selenio (ca alizado es de diges ión), y 5 ml de H 2 SO 4 . Los ubos se coloca on en un bloque diges o y se some ie on a una diges ión ele ando la empe a u a has a 380 ºC. Después del a aque se les añadió agua des ilada y cuando se en ia on se pasa on a ma aces de 25 ml y se en asa on. Así, las mues as queda on p epa adas pa a lee las en el au oanalizado en e a una cu a pa ón. El ós o o se de e minó po colo ime ía, as la o mación del complejo os a o- anada o-molíbda o. El análisis de clo o se ealizó po medio de una calcinación en medio básico pa a e i a pé didas de clo u os. La mues a de cenizas se ex ajo con agua calien e y el clo o del ex ac o se de e minó colo imé icamen e con el mé odo del iociana o de me cu io en un espec o o óme o Pe kin Elme Lambda EZ210. El p ocedimien o consis ió en pesa 1g de mues a de pol o ege al en cápsula de po celana. Se mezcló la mues a con la cua a pa e de su peso de óxido de calcio y su icien e agua sob e placa calien e. Se calcinó en ho no a 500 ºC du an e 90 minu os y se dejó en ia . Se añadie on unos 10 ml de agua calien e y se colocó unos minu os sob e placa calien e. Se agi ó cuidadosamen e 44 con a illa de id io y se il ó sob e ma az de 100 ml. El esiduo se la ó unas cinco eces con 10 ml de agua calien e, se en ió y lle ó a olumen. La colo ime ía se ealizó pipe eando una alícuo a que con enía menos de 50 mg de clo u o a un ma az a o ado de 25 ml. Se añadie on 2 ml de eac i o ni a o é ico y 2 ml de iociana o de me cu io, se agi ó y lle ó a olumen. Se midió la abso bancia en e al pun o 0 de la cu a de calib ado a 460 nm, después de 5 minu os. Se p epa ó una cu a de calib ado pipe eando en ma az de 25 ml que desa olló el colo como se desc ibe an e io men e. Los da os es u ie on some idos a un análisis de la a ianza mul i ac o ial (MANOVA) siendo los ac o es, clon y salinidad, y se empleó el es de ango mul iple de Duncan pa a la sepa ación de medias. En es e análisis de da os se u ilizó el p og ama SPSS bajo Windows 10.0. En el es udio de supe i encia se empleó el es -T pa a di e encias de p opo ciones median e un p og ama ealizado en BASIC po es e depa amen o. La elación en e las a iables peso esco y peso seco de las plan as y la salinidad se ealizó median e el ajus e po mínimos cuad ados a la unción de ipo exponencial p opues a po Van Genuch en (1983) siguien e: Y = e C (α - βC) donde Y es la biomasa ela i a ( 1 / 1 ), C es la concen ación salina y α y β son cons an es. Con los esul ados se ealizó una p ueba χ 2 de bondad de ajus e y de e minación del coe icien e de co elación lineal ( ) de Pea son. V.3. RESULTADOS V.3.1. In luencia de la salinidad sob e la supe i encia del explan o. En la abla 5 se indica el núme o y el an o po cien o de plan as ob enidas a pa i de explan os en el ensayo donde se aplica on al medio de cul i o concen aciones de sal, de 0, 2, 4, 6, 8 y 10 g l -1 . Se obse a, que cuando no se añadió sal al medio, i ie on odos los explan os y llega on a o ma plan as. Es e compo amien o indicó, de nue o, la buena disposición del explan o de mandioca pa a se p opagado in i o y dio ga an ías de que las bajas 51 ig. 6. Biomasa ela i a (% con ol) en peso esco y seco de plan as de mandioca as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. 0 25 50 75 100 125 150 175 0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 gl -1 NaCl % Peso esco Peso seco ig 7. Ajus e de la biomasa ela i a del peso esco y seco median e unciones exponenciales. 0 0,5 1 1,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 gl -1 NaCl 1/1 Peso esco Peso seco SOM-1 05 50 (Peso esco) 0,993 0,921 0,879 (Peso seco) 0,981 0,954 0,869 En cuan o al c ecimien o del allo de la plan a de mandioca, la longi ud media del explan o en el momen o de la siemb a ue de 10 mm. T as 60 días de cul i o en el medio con ol sin adición de NaCl, los clones 05 y 50 alcanza on ce ca de 100 mm de al u a, mien as que el clon SOM-1 sólo llegó a los 60 mm. Es deci , los clones 05 y 50 52 ig. 8. Longi ud media del allo as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 Tiempo (días) Longi ud (mm) 0 g/l 0,5 g/l 1 g/l 1,5 g/l 2 g/l 2,5 g/l SOM-1 05 50 ig. 9. Núme o de aíces desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 Tiempo (días) Nº de aíces 0 g/l 0,5 g/l 1 g/l 1,5 g/l 2 g/l 2,5 g/l SOM-1 05 50 ig. 10. Núme o de yemas desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 Tiempo (días) nº de yemas 0 g/l 0,5 g/l 1 g/l 2 g/l 2,5 g/l1,5 g/l SOM-1 05 50 53 ig. 11. Núme o de hojas desa olladas as 60 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. 0 2 4 6 8 10 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 0 20 40 60 Tiempo (días) Nº de hojas 0 g/l 0,5 g/l 1 g/l 1,5 g/l 2 g/l 2,5 g/l SOM-1 05 50 Los as e íscos indican di e encias signi ica i as en e clones (P<0,05) según el es de ango Mul iple de Duncan Tabla 10. Longi ud, núme o de hojas y supe icie olia a los 80 días de cul i o in i o de cada clon, en los di e en es medios salinizados con NaCl. O gano Clon (mm) SOM 113,0 b A 80,8 c BC 86,4 b B 74,3 a C 49,9 c D 35,1 a E 05 123,3 b B 193,2 a A 119,5 a B 79,1 a C 67,9 b C 44,6 a D 50 184,9 a A 138,0 b BC 128,5 a B 88,4 a C 92,8 a C 43,5 a D Media 141,0 A 134,3 A 112,2 B 80,5 C 70,1 C 39,7 D SOM 6,3 a A 6,3 b A 4,9 a B 3,5 a C 2,1 b D 1,5 b E 05 5,5 b B 6,8 a A 4,3 b C 2,4 b D 2,4 b D 1,4 b E 50 5,7 b A 6,1 b A 4,3 b B 2,7 b C 2,9 a C 2,1 a D Media 5,8 B 6,4 A 4,5 C 2,9 D 2,5 E 1,7 F (mm 2 )SOM 1022 a AB 1042 b A 895 b B 627 a C 262 b D 148 ab D 05 1154 a AB 1088 b A 1147 a A 372 b B 353 b B 57 b C 50 1001 a B 1260 a A 1001 ab B 574 a C 468 a C 207 a D Media 1058 AB 1125 A 1014 B 526 C 361 D 155 E A ea olia Nº hojas Al u a 2,5 Salinidad ( gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan.Los alo es medios se co esponden con el núme o de indi iduos que apa ecen en la abla 6 . c ecie on más que el clon SOM-1, lo que se debe ene en cuen a a la ho a de conside a la acción de la sal. Como en los casos an e io es, los a amien os con bajas concen aciones de NaCl en el medio de cul i o (0.5 y 1 gl -1 ) man u ie on o incluso mejo a on los c ecimien os indicados pa a el medio con ol. Los aumen os en el g ado 54 de salinidad del medio p o oca on descensos en el c ecimien o del allo de los es clones siendo es os descensos ela i amen e meno es en el clon SOM-1. Del mismo modo las concen aciones bajas de NaCl (0.5 y 1 gl -1 ) no pe judica on e incluso a o ecie on el desa ollo de aíces, yemas y hojas, pe o concen aciones mayo es de sal ac ua on nega i amen e. Aunque no exis ie on g andes di e encias en el compo amien o de los es clones en conside ación, el clon SOM-1 u o una lige a mayo ole ancia. V.3.3. In luencia de la concen ación de NaCl sob e el con enido de nu ien es en plan as de mandioca cul i adas in i o. En las ablas 11, 12, 13, 14, 15 y 16 se indican los con enidos de nu ien es, espec i amen e de las aíces, allos, hojas y plan a comple a en cada clon y la media de los es clones pa a cada a amien o salino has a 2 g l -1 de NaCl. Las plan as a adas con más can idad de sal no pudie on se analizadas ya que la ele ada mo andad y el bajo desa ollo no pe mi ió dispone de ma e ial su icien e. V.3.3.1. Ni ógeno. Los a amien os salinos no pa ecie on in lui sob e los con enidos de ni ógeno de los es ó ganos en conside ación y en consecuencia de la plan a comple a ( abla 11). No obs an e, se obse a on a iaciones pun uales en e los clones y a amien os salinos que no pudie on elaciona se con la p esencia de sal en el medio al no exis i una elación cla a en e las a iaciones de la concen ación de ni ógeno en los ó ganos de la plan a y los inc emen os de salinidad del medio. Tallos y hojas mos a on ni eles algo supe io es a los de la aíz lo que puede elaciona se con la ele ada mo ilidad de es e elemen o en la plan a (S ee y Öpik, 1984). Es os con enidos de ni ógeno, ue on supe io es a los de e minados po T oncoso e al., (1999a) pa a plan as de id in i o. En es e abajo ambién se indicó que la p esencia de la sal (NaCl) en el medio de cul i o no al e ó los con enidos de ni ógeno. Po el con a io, en abajos ealizados en o as especies ege ales en condiciones de in e nade o (C am, 1973; Deane-D ummond y Glass, 1982) se obse ó que la salinización educía el con enido de ni ógeno de los ejidos de la plan a. 55 Tabla 11. Concen ación de ni ógeno y ós o o (%) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los clones SOM-1, 05 y 50 as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. Ni ógeno O gano Clon Raíz SOM 4,82 a AB 5,25 a A 4,47 a BC 4,03 b C 5,28 a A 05 4,62 a AB 4,74 a AB 4,02 a B 4,57 ab AB 5,00 a A 50 4,94 a A 4,55 a A 4,06 a A 4,88 a A 4,90 a A Media 4,79 AB 4,85 AB 4,18 C 4,49 BC 5,06 A Tallo SOM 5,81 b A 4,70 b B 4,52 b B 4,66 b B 5,93 b A 05 6,51 ab A 6,37 a A 5,08 ab B 6,88 a A 6,98 a A 50 7,33 a A 5,59 ab B 5,62 a B 7,04 a A 7,15 a A Media 6,55 A 5,55 BC 5,07 C 6,19 AB 6,68 A Hojas SOM 6,31 a A 5,59 a A 5,89 a A 6,04 ab A 5,60 a A 05 6,01 a A 6,35 a A 5,54 a B 6,34 a A 4,98 a C 50 6,56 a A 5,98 a A 6,40 a A 5,83 b A 5,66 a A Media 6,29 A 5,97 A 5,94 A 6,07 A 5,41 B Plan a SOM 5,64 a A 5,18 a AB 4,96 a AB 4,91 b B 5,60 a AB 05 5,71 a AB 5,82 a A 4,88 a B 5,93 a A 5,65 a AB 50 6,28 a A 5,37 a A 5,36 a A 5,92 a A 5,90 a A Media 5,88 A 5,46 AB 5,07 B 5,58 A 5,72 A Fós o o O gano Clon Raíz SOM 0,493 b AB 0,372 b B 0,412 b AB 0,427 b AB 0,567 b A 05 0,489 b B 0,667 a AB 0,555 ab B 0,834 a A 1,096 a A 50 0,780 a AB 0,535 a B 0,643 a B 0,902 a AB 1,097 a A Media 0,587 B 0,525 B 0,537 B 0,721 AB 0,920 A Tallo SOM 0,793 a A 0,638 a AB 0,672 a AB 0,532 a B 0,832 a A 05 0,265 c C 0,421 b B 0,290 b C 0,505 a AB 0,621 b A 50 0,502 b A 0,364 b B 0,374 b B 0,546 a A 0,549 b A Media 0,520 AB 0,474 B 0,445 B 0,528 AB 0,667 A Hojas SOM 0,498 a B 0,659 a AB 0,467 a B 0,448 a B 0,469 a B 05 0,349 b AB 0,525 b AB 0,320 c C 0,389 b B 0,391 a B 50 0,459 a AB 0,483 b A 0,405 b B 0,436 a AB 0,413 a A Media 0,435 B 0,556 A 0,397 B 0,425 B 0,424 B Plan a SOM 0,594 a AB 0,556 a AB 0,517 a AB 0,469 a B 0,623 a A 05 0,368 b C 0,538 a AB 0,388 a BC 0,576 a AB 0,702 a A 50 0,580 a AB 0,461 a A 0,474 a AB 0,628 a AB 0,686 a B Media 0,514 B 0,518 B 0,460 BC 0,558 B 0,670 A Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan. (n=6). 56 Es e compo amien o di e en e pudo es a elacionado con que en el medio de cul i o de condiciones in i o exis ió bas an e ni ógeno en o ma amoniacal, mien as que en el o o, usa on N-ní ico y la disminución de ni ógeno en plan as se conside a p incipalmen e debida a que la p esencia de Cl - en el medio inhibe la adso ción de NO 3- (Aslam e al. 1984; Go ham e al 1986). V.3.3.2. Fós o o. En los es ó ganos se obse a on con enidos de ós o o más ele ados que los no malmen e ob enidos en plan as in i o de o as especies ( abla 11). Así T oncoso e al (1999a) de e mina on ni eles de P p óximos al 0,4% pa a dis in os po ainje os de id in i o y T oncoso e al (1999b) ni eles de 0,1% en plan ulas de oli o. Se obse ó ambién que los con enidos de P en aíz y en allo ue on más ele ados que los de hojas lo que pudo es a elacionado con la baja mo ilidad de es e nu ien e en la plan a. En los dos p ime os ó ganos exis ió una cie a acumulación de P en los a amien os con mayo concen ación salina, lo que concue da con las indicaciones de G a an y G ie e (1992) pa a plán ulas cul i adas en condiciones ex e nas. También es e hecho pudo es a elacionado con la baja mo ilidad del nu ien e indicada an es y con el meno i mo de c ecimien o de las plan as some idas a salinidad. En plan as comple as, el ós o o aumen ó signi ica i amen e en el a amien o de 2 gl -1 obse ándose di e encias en e clones sólo en el a amien o con ol. V.3.3.3. Po asio. Como en el caso del ós o o, ambién los con enidos mayo es de po asio se encon a on en la aíz, seguidos de los del allo y siendo la hoja el ó gano con meno ni el ( abla 12). Como se obse a en dicha abla, no hubo una elación cla a en e el con enido de po asio en los ejidos de la plan a y la salinidad del medio. Sólo en el caso del allo se encon ó una elación in e sa en e es os pa áme os. Es a al a de co elación a ni el gene al no coincide con lo indicado po T oncoso e al., (1999) pa a ma e ial de id in i o así como po o os au o es (Li e al., 1989; Khan e al., 1999; Pa dossi e al., 1999; Sho y Colme , 1999) pa a plan as en condiciones ex e nas, quienes encuen an disminuciones de po asio muy cla as al 57 Tabla 12. Concen ación de po asio y calcio (%)en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los clones SOM-1, 05 y 50 as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. Po asio O gano Clon Raíz SOM 4,98 a A 4,31 b B 4,71 a AB 4,50 a AB 4,50 a AB 05 4,74 ab A 4,86 a A 4,58 ab AB 4,57 a AB 4,41 a AB 50 4,43 b AB 4,91 a A 4,23 b B 4,30 a B 4,30 a B Media 4,72 A 4,69 A 4,50 A 4,46 A 4,40 A Tallo SOM 3,85 a A 2,69 b B 2,56 a B 2,50 a B 2,75 a B 05 2,79 b B 3,42 a A 2,22 b BC 2,47 a BC 2,06 b C 50 3,47 a A 3,72 a A 2,78 a B 2,52 a B 2,32 b B Media 3,37 A 3,28 A 2,52 B 2,50 B 2,38 B Hojas SOM 1,98 a C 2,88 ab A 2,22 b BC 2,25 ab B 1,97 a C 05 1,76 b C 2,75 b A 1,93 c BC 2,10 b B 1,77 b C 50 1,86 ab C 2,96 a A 2,41 a B 2,35 a B 1,90 ab C Media 1,87 C 2,87 A 2,19 B 2,23 B 1,88 C Plan a SOM 3,60 a A 3,29 a A 3,16 a A 3,08 a A 3,07 a A 05 3,09 a A 3,68 a A 2,91 a A 3,05 a A 2,75 a A 50 3,26 a AB 3,86 a A 3,14 a AB 3,06 a AB 2,84 a B Media 3,32 AB 3,61 A 3,07 AB 3,06 AB 2,89 B Calcio O gano Clon Raíz SOM 0,415 a A 0,267 b C 0,338 a B 0,397 a AB 0,356 a AB 05 0,317 b A 0,303 b A 0,311 a A 0,296 b A 0,257 b A 50 0,290 b AB 0,341 a A 0,261 b B 0,272 b AB 0,302 b AB Media 0,341 A 0,304 A 0,303 A 0,322 A 0,305 A Tallo SOM 0,943 a A 0,559 b C 0,678 a BC 0,631 a BC 0,761 a B 05 0,639 b A 0,605 ab A 0,393 b B 0,431 b B 0,441 b B 50 0,537 c B 0,650 a A 0,428 b C 0,399 b C 0,361 b C Media 0,706 A 0,605 AB 0,500 B 0,487 B 0,521 B Hojas SOM 0,589 a A 0,653 a A 0,484 a B 0,447 a B 0,292 b C 05 0,629 a A 0,582 b A 0,376 b B 0,389 a B 0,333 ab B 50 0,500 b A 0,553 b A 0,410 b B 0,390 a B 0,378 a B Media 0,573 A 0,596 A 0,423 B 0,409 B 0,335 C Plan a SOM 0,649 a A 0,493 a A 0,500 a A 0,492 a A 0,470 a A 05 0,528 ab A 0,497 a A 0,360 b B 0,372 b B 0,344 a B 50 0,442 b AB 0,515 a A 0,366 b BC 0,354 b BC 0,347 a C Media 0,540 A 0,501 A 0,409 B 0,406 B 0,387 B Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan. (n=6) 58 Tabla 13. Concen ación de magnesio y sodio (%)en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los clones SOM-1, 05 y 50 as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. Magnesio O gano Clon Raíz SOM 0,168 b AB 0,155 b BC 0,137 b C 0,168 b AB 0,182 c A 05 0,200 ab A 0,238 a A 0,236 a A 0,251 a A 0,231 b A 50 0,233 a A 0,228 a A 0,217 a A 0,244 a A 0,288 a A Media 0,200 A 0,207 A 0,197 A 0,221 A 0,234 A Tallo SOM 0,113 b A 0,082 b B 0,093 ab B 0,091 b B 0,115 a A 05 0,132 a A 0,131 a A 0,088 b B 0,146 a A 0,132 a A 50 0,144 a A 0,122 a AB 0,112 a B 0,144 a A 0,133 a AB Media 0,130 A 0,112 AB 0,098 B 0,127 A 0,126 A Hojas SOM 0,223 a A 0,214 a A 0,174 a B 0,171 a B 0,135 b C 05 0,195 b A 0,185 b A 0,132 c B 0,127 c B 0,120 c B 50 0,202 b A 0,192 b A 0,164 b B 0,159 b BC 0,148 a C Media 0,207 A 0,197 A 0,157 B 0,152 B 0,134 C Plan a SOM 0,168 a A 0,150 a A 0,135 a A 0,143 a A 0,144 a A 05 0,176 a A 0,185 a A 0,152 a A 0,174 a A 0,161 a A 50 0,193 a A 0,181 a A 0,164 a A 0,182 a A 0,190 a A Media 0,179 A 0,172 A 0,150 A 0,167 A 0,165 A Sodio O gano Clon Raíz SOM 0,202 a C 0,331 a B 0,387 a B 0,563 a A 0,629 a A 05 0,087 b D 0,198 b C 0,242 b C 0,303 b B 0,507 b A 50 0,179 a C 0,205 b C 0,262 b BC 0,324 b B 0,476 b A Media 0,156 D 0,245 C 0,297 C 0,396 B 0,537 A Tallo SOM 0,570 a C 1,827 b B 2,512 a A 2,582 a A 2,790 a A 05 0,470 b C 1,823 b B 2,098 b B 2,603 a A 2,837 a A 50 0,412 b C 2,257 a B 2,465 a AB 2,755 a A 2,707 a A Media 0,484 D 1,969 C 2,358 B 2,647 A 2,778 A Hojas SOM 0,025 b E 0,289 b D 0,358 a C 0,712 a B 0,946 a A 05 0,086 a C 0,475 a B 0,443 a B 0,827 a A 0,729 a A 50 0,079 a C 0,291 b B 0,450 a B 0,728 a A 0,836 a A Media 0,063 C 0,352 B 0,417 B 0,756 A 0,837 A Plan a SOM 0,266 a B 0,816 a AB 1,086 a A 1,285 a A 1,455 a A 05 0,214 a B 0,832 a AB 0,928 a AB 1,245 a A 1,358 a A 50 0,223 a B 0,917 a AB 1,059 a AB 1,269 a A 1,339 a A Media 0,234 C 0,855 B 1,024 AB 1,266 AB 1,384 A Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan. (n=6). 59 aumen a la salinidad. P obablemen e, el compo amien o an especial del ma e ial de mandioca in i o que sopo a ela i amen e bien concen aciones de has a 2 gl -1 de NaCl en el medio pe o que cae ápidamen e a ni eles más al os de sal, pueda se una explicacón a la al a de co elación nega i a K-Na en algunos ó ganos. V.3.3.4. Calcio. En cuan o al calcio ( abla 12), al con a io de lo indicado pa a el po asio, los ni eles del allo y de la hoja ue on supe io es a los de la aíz. Los con enidos de calcio en la aíz no ue on al e ados po la p esencia de sal en el medio, mien as que los de allo y hojas mos a on un lige o descenso al aumen a la salinidad del medio. Descensos simila es de calcio con la sal ue on indicados po T oncoso e al (1999) pa a plan as de id in i o. Así mismo, Somal y Yapa (1998), Esechie y Rod íguez (1998) y Yahya, (1998), encon a on un cie o an agonismo en e calcio y NaCl en plan as cul i adas en condiciones ex e nas. V.3.3.5. Magnesio. Los ni eles medios más al os de magnesio ( abla 13) se encon a on en las aíces donde no ue on al e ados po la p esencia de NaCl en el medio. El allo mos ó con enidos más bajos sin que ampoco la sal los modi ica a. Po el con a io, la hoja p esen ó can idades de magnesio simila es a los de la aíz en plan as con ol (0 gl -1 ) y a adas con 0,5 gl -1 de sal, y más bajas (pa ecidas a las del allo) en las some idas a concen aciones salinas supe io es. V.3.3.6. Sodio. Los con enidos de sodio ( abla 13) de odos los ó ganos y en consecuencia de la plan a comple a aumen a on al c ece la concen ación de sal en el medio. No obs an e, dicho aumen o ue más signi ica i o al pasa desde el a amien o con ol, sin sal, a las p ime as aplicaciones de NaCl. Después, los inc emen os de Na + en los ejidos ue on 60 Tabla 14. Concen ación de clo o (%) y cob e (ppm) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los clones SOM-1, 05 y 50 as 80 días de cul i o in i o en medio salinizado con NaCl. Clo o O gano Clon Raíz SOM 1,172 a D 1,672 a C 2,123 b B 2,885 a A 2,950 a A 05 1,403 a C 1,848 a C 2,470 a B 3,068 a A 3,065 a A 50 1,352 a B 1,775 a B 2,300 ab A 2,497 b A 2,373 b A Media 1,309 D 1,765 C 2,298 B 2,817 A 2,796 A Tallo SOM 0,775 a C 1,920 a B 2,852 a A 2,957 b A 2,923 b A 05 0,658 a D 1,502 b C 2,738 a B 3,650 a A 3,302 ab A 50 0,700 a D 1,713 ab C 2,915 a B 3,638 a A 3,687 a A Media 0,711 D 1,712 C 2,835 B 3,415 A 3,304 A Hojas SOM 0,301 a CD 0,083 b D 0,446 a BC 0,805 a A 0,682 a AB 05 0,319 a CD 0,145 a D 0,509 a BC 0,967 a A 0,715 a B 50 0,139 b C 0,193 a C 0,568 a B 0,757 a B 1,265 a A Media 0,253 C 0,141 C 0,508 B 0,843 A 0,887 A Plan a SOM 0,749 a B 1,225 a AB 1,807 a A 2,216 a A 2,185 a A 05 0,793 a B 1,165 a AB 1,906 a AB 2,562 a A 2,360 a A 50 0,730 a B 1,227 a AB 1,928 a AB 2,297 a A 2,442 a A Media 0,758 B 1,206 B 1,880 AB 2,358 A 2,329 A Cob e O gano Clon Raíz SOM 23 a A 14 a B 16 a B 17 a B 24 b A 05 21 a B 14 a B 17 a B 18 a B 31 a A 50 17 a A 15 a A 8 b B 12 a AB 13 c AB Media 20 A 14 B 14 B 15 B 23 A Tallo SOM 23 a A 8 b B 22 a A 12 a A 15 a A 05 10 b A 10 b A 11 b A 10 a A 16 a A 50 11 b B 14 a AB 8 b B 19 a A 19 a A Media 15 A 10 A 14 A 14 A 17 A Hojas SOM 16 b A 12 a A 11 b A 13 a A 15 a A 05 5 c B 12 a AB 6 c B 17 a A 19 a A 50 24 a A 8 a C 18 a AB 14 a BC 21 a AB Media 15 AB 11 B 11 B 15 AB 19 A Plan a SOM 36 a A 11 a B 29 a A 24 a AB 31 a A 05 12 b B 12 a B 11 b B 15 b B 22 ab A 50 17 b AB 12 a BC 11 b C 15 b AB 18 b A Media 22 AB 12 C 17 BC 18 BC 24 A Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Salinidad (gl -1 NaCl) 0 0,5 1 1,5 2 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. (n=6). 67 de las plan as de acue do con su c ecimien o y pueden usa se ambién pa a de e mina si un suelo con iene su icien es sales solubles o sodio in e cambiable, que a ec e el desa ollo ege al en o ma ad e sa. (Royo y A agües, 1989) VI.2. MATERIALES Y MÉTODOS. Plan as de mandioca (Maniho esculen a C anz) de los clones SOM-1, 05 y 50, p oceden es de cul i o in i o, se asplan a on siguiendo la écnica de Can os e al., (1993), a con enedo es de plás ico de 1,5 li os de capacidad usando como sus a o 900g del ho izon e Ap de un suelo ag ícola, cuyas ca ac e ís icas p incipales se indican en la abla 18. Es e suelo se es e ilizó median e au ocla ado a 121 ºC y apo luyen e en es sesiones de 1 ho a dia ia. Cada con enedo se egó has a sa u ación con solución Hoagland al 20 % y se cub ió con una bolsa de plás ico anspa en e en cuyo in e io se pul e izó agua des ilada pa a da mayo humedad. Los con enedo es con las plán ulas se coloca on en una cáma a de cul i o a 22 ± 2ºC, con un o ope iodo de 16 ho as, e in ensidad lumínosa de 111 µE m -2 s -1 , pe maneciendo en es as condiciones du an e 8 días. Finalizado es e pe iodo de adap ación, las plan as se lle a on a un in e nade o pa a su aclima ación, donde las bolsas de plás ico se ue on ab iendo g adualmen e, co ando p ime o una de sus esquinas y más a de la o a. T anscu idos 10 días, se comenza on a elimina o almen e las bolsas de plás ico de aquellos con enedo es en los que no se obse aba la o mación de go as de agua. Du an e los 15 días que du ó es e pe iodo de aclima ación, se egó con solución Hoagland al 20 % a in e alos de 5 días. A con inuación, las plan as supe i ien es de cada clon se epa ie on alea o iamen e en es g upos co espondien es a los es a amien os salinos en es udio: solución Hoagland al 20 % ( a amien o con ol), solución Hoagland al 20% a la que se añadie on 4 gl -1 de NaCl y solución Hoagland al 20 % a la que se añadie on 8 gl -1 de NaCl ( abla 17). La adición de NaCl ue p og esi a, p olongándose es e pe iodo de salinización du an e 10 días con iegos cada 2 días, e inc emen ando la concen ación salina en 2 gl -1 de NaCl po iego, has a alcanza la concen ación p e is a en cada g upo de plan as. En ese momen o, se ealizó un nue o con eo de plan as de cada clon y se conside ó como comienzo de la p ueba. Después, las plan as pe enecien es a cada a amien o salino 68 siguie on ecibiendo las can idades de NaCl que le co espondían has a los 50 días de du ación del ensayo. Al inaliza és e, se de e minó el peso esco y seco de un núme o signi ica i o ( e abla 20) de las plan as supe i ien es. La de e minación del peso seco se ealizó secando el ma e ial en es u a de ai e o zado a 70ºC has a peso cons an e. El ma e ial ege al seco, se molió en mo e o pa a su análisis químico, en el que se emplea on los mé odos en uso en el IRNAS-CSIC. La de e minación de Na, Ca, Mg, K, Fe, Cu, Mn y Zn, se ealizó median e emisión de plasma. El con enido de ni ógeno se analizó median e diges ión Kjedhal, y el de ós o o po colo ime ía, as la o mación del complejo os a o- anada o-molíbda o. La de e minación de clo o se ealizó po medio de una calcinación en medio básico pa a e i a pé didas de clo u os. La mues a de cenizas se ex ajo con agua calien e y el clo o del ex ac o se de e minó colo imé icamen e con el mé odo del iociana o de me cu io en un espec o o óme o Pe kin Elme Lambda EZ210. El sus a o a emplea en la p ueba ue analizado p e iamen e siguiendo los mé odos de análisis de suelo en uso en el IRNAS-CSIC. Fue secado al ai e, molido y amizado po 2 mm y se le de e mina on los siguien es pa áme os: ex u a (mé odo del densíme o de Bouyoucos), pH (en ex ac o de pas a sa u ada), ca bona os (calcíme o de Be na d), ma e ia o gánica (mé odo de Walkley y Black), ni ógeno (mé odo Kjeldahl), ós o o disponible (mé odo Olsen), po asio asimilable ( o ome ía de llama), calcio y magnesio asimilables (abso ción a ómica), manganeso, hie o, cob e y cinc (abso ción a ómica), densidad apa en e (mé odo del cilínd o), densidad eal (picnóme o) y po encial capila (mé odo de Richa ds). Al inaliza el ensayo se oma on es mues as de sus a o de cada a amien o salino pa a su análisis. El sus a o ue secado al ai e du an e 7 días y amizado a 2 mm. Se oma on 250 g amos y se ealizó un ex ac o de pas a sa u ada en donde se de e minó la conduc i idad eléc ica y el pH median e conduc íme o y pH-me o (C ison). En es e ex ac o se de e mina on los iones solubles: Na + , K + , Ca 2+ y Mg 2+ . Los ca iones cambiables, así como la capacidad de in e cambio ca iónico, se de e mina on median e ex acciones con ace a o amónico 1N y pH 7. El po cen aje de sa u ación se calculó midiendo la can idad de agua necesa ia pa a lle a los 250 g de sus a o a sa u ación. La empe a u a y humedad en el in e io del in e nade o ue egis ada du an e odo el ensayo median e un e mohid óg a o. 69 El ensayo consis ió en un diseño comple amen e al aza con dos ac o es; el ac o clon, con es ni eles cons i uidos po los clones SOM-1, 05 y 50, y el ac o salinidad ambién cons i uido po es ni eles; 0 gl -1 , 4 gl -1 y 8 gl -1 de NaCl en el agua de iego y 16 epe iciones po cada combinación de ac o es, con un o al de 144 con enedo es. Los da os es u ie on some idos a un análisis de la a ianza mul i ac o ial (MANOVA) siendo los ac o es, clon y salinidad, y se empleó el es de ango mul iple de Duncan pa a la sepa ación de medias. En es e análisis de da os se u ilizó el p og ama SPSS bajo Windows 10.0. En el es udio de supe i encia se empleó el es -T pa a di e encias de p opo ciones median e un p og ama ealizado en BASIC po es e depa amen o . VI. 3. RESULTADOS VI. 3. 1. E ec os sob e el sus a o. VI.3.1.1.Ca ac e ísicas de las soluciones nu i i as empleadas en los a amien os. Como disol en e de las sales nu i i as se usó agua de la ed de Se illa capi al, con una conduc i idad eléc ica (CE) de 0,2 dS m -1 , lo que signi ica que es un agua de muy bajo con enido en sales, pe ec amen e u ilizable pa a bebe y pa a ega . Tabla 17. Composición de las dis in as soluciones empleadas pa a iego . T a amien o Con ol Solución Nº1 Solución Nº2 KNO 3 gl -1 20,2 20,2 20,2 NH 4 H 2 PO 4 gl -1 23 23 23 MgSO 4 . 7H 2 O gl -1 49,3 49,3 49,3 Ca(NO 3 ) 2 . 4H 2 O gl -1 34,8 34,8 34,8 Quela o de hie o % 0,5 0,5 0,5 H 3 BO 3 mg l -1 0,572 0,572 0,572 MnCl 2 . 4 H 2 O mg l -1 0,362 0,362 0,362 ZnSO 4 . 7 H 2 O mg l -1 0,044 0,044 0,044 CuSO 4 . 5 H 2 O mg l -1 0,016 0,016 0,016 H 3 MoO 4 H 2 O mg l -1 0,004 0,004 0,004 NaCl gl -1 0 4 8 mM 0,0 68,4 136,8 C.E. dS m -1 0,46 7,51 14,4 SAR 0 62 124 70 En la abla 17 se indica la composición química de cada uno de los a amien os . Dado que odas las plan as ecibie on el mismo núme o y can idad de iegos, se les apo ó la misma can idad de nu ien es excep o Na + y Cl - . El a amien o con ol u o una conduc i idad eléc ica de 0,46 dS m -1 lo que signi ica un ni el pequeño de salinidad que no a ec a al desa ollo no mal de una plan a. La U.S.S.L. (Uni ed S a es Salini y Labo a o y, 1969) clasi ica es a agua como C.2. S.1. y se le calculó una p esión osmó ica de –0,17 ba es. En el p ime a amien o se añadie on a la solución con ol 4 gl -1 (68,4 mM) de NaCl, lo que ele ó la conduc i idad eléc ica a 7,54 dS m -1 y el SAR a 62. En es e caso, el agua se clasi ica como C.4.S.4 . y se le calculó una p esión osmó ica de –2,75 ba es. Según los da os indicados la solución se puede conside a como bas an e salina no u ilizable pa a iegos sal o en casos excepcionales. En el segundo a amien o se añadie on a la solución base 8 gl -1 (136,8 mM) de NaCl, lo que p o ocó un inc emen o de la conduc i idad eléc ica a 14,4 dS m -1 y del SAR a 124,1, alo es que se salen comple amen e de la abla de clasi icación del U.S.S.L. La p esión osmó ica calculada ue de –5, 25 ba es. Una solución nu i i a de es as ca ac e ís icas no debe se u ilizada pa a el cul i o de plan as en condiciones no males y se usó en el p esen e abajo pa a p o oca una si uación de exceso de sal. VI.3.1.2. In luencia de los a amien os salinos sob e el sus a o. En la abla 18 se indican las ca ac e ís icas ísicas y químicas del suelo usado como sus a o. Se a a de un suelo anco a enoso, con una densidad apa en e adecuada y una can idad de agua ú il de 0,05 cm 3 de agua po cm 3 . Lige amen e alcalino y con una conduc i idad eléc ica de 2,29 dS m -1 medidos en ex ac o de pas a sa u ada. Los con enidos de ma e ia o gánica y de ni ógeno son bajos es ableciéndose una elación C/N de 7,8. Es e alo es muy bajo y p opio de suelos e osionados, ago ados y excesi amen e lab ados, donde el p oceso de ni i icación ha sido muy in enso, obse ándose un con enido en ni ógeno en o ma ní ica de 54 mg Kg -1 , que es conside ado no mal. Es e suelo iene un ni el al o en ós o o asimilable, no mal en po asio y bajo en calcio y magnesio. Los con enidos de mic onu ien es son adecuados. En é minos de e ilidad ac ual, los con enidos encon ados en la solución del suelo son bajos pa a odos los elemen os analizados, mien as que los obse ados en el 71 complejo de in e cambio ca iónico ( e ilidad po encial) son adecuados pa a calcio y ele ados pa a magnesio, sodio y po asio. Tabla 18. Ca ac e ís icas ísicas y químicas del subs a o. A ena % 75,8 Tex u a Limo " 8 A cilla " 16,2 Densidad apa en e. g/cc 1,37 Densidad eal " 2,62 Po encial capila 1/3 a m 13,8 15 " 10,1 Po osidad o al % 47,9 pH 7,45 ca bona os % <1 Ma e ia o gánica " 0,8 N( o al) " 0,03 C/N 7,8 N-NO 3 mg Kg -1 de suelo 54 Fós o o " 16 Po asio " 199 Calcio " 161 Magnesio " 113 Manganeso " 23 Hie o " 20 Cob e " 9 Cinc " 50 La adición de las di e en es soluciones salinas a es e subs a o modi icó la C.E. el SAR , PSI y p esión osmó ica de la solución del suelo (ex ac o de pas a sa u ada) (Tabla 19). La aplicación de iegos con las can idades de NaCl an es mencionadas dio luga a un aumen o de la conduc i idad eléc ica del ex ac o de pas a sa u ada del suelo a 10,53 y 17,5 dS m -1 pa a los a amien os de 4 y 8 g l -1 espec i amen e. Es e aumen o de la salinidad p odujo un aumen o de las concen aciones de calcio, magnesio, sodio y po asio en la solución del suelo, aunque es e aumen o ue más impo an e en el ión sodio. Asímismo, la mayo p opo ción del ión sodio en la solución del suelo u o como consecuencia una mayo adso ción de és e en el complejo de in e cambio ca iónico y consiguien e salida de los ca iones calcio y magnesio. 72 Tabla 19. In luencia de los a amien os sob e la salinización del subs a o. T a amien o Ex ac o de pas a 0 gl -1 NaCl 4 gl -1 NaCl 8 gl -1 NaCl CE (ex ac o) dSm -1 2,3 10,5 17,5 SAR 1,3 12,1 16,4 PSI 0,68 14,2 18,6 P. Osmó ica a m -0,83 -3,8 -6,4 Cambiables meq/100 g CIC " 7,5 7,3 7 (Ca + Mg) " 6,82 4,76 1,98 K " 0,49 0,42 0,43 Na " 0,19 2,12 4,6 Solubles meql -1 Ca " 16,5 35,6 54,3 Mg " 5,1 11,2 15,4 K " 0,98 1,3 1,6 Na " 4,4 58,8 96,9 To al " 26,98 106,9 168,2 Los iegos en el a amien o de 4 gl -1 de NaCl p oduje on un PSI de 14,3 y una conduc i idad eléc ica de 10,5 dS m -1 pudiendo clasi ica es e suelo de salino. En el a amien o de 8 gl -1 de NaCl se alcanzó un PSI de 18,7 y una conduc i idad eléc ica de 17,5 dS m -1 siendo es e suelo simila a un suelo salino- sódico. VI. 3. 2. Tole ancia de las plan as de mandioca a la salinidad del medio. VI.3.2.1. Supe i encia. Una ez anscu ido el pe iodo de adap ación de 23 días as el asplan e de in i o a ex i o, en el que se p oduje on pé didas del 23, 11 y 29 % espec i amen e pa a los clones SOM-1, 05 y 50, los dis in os g upos de plan as se some ie on a los a amien os salinos co espondien es ( abla 20). Du an e los 50 días de du ación de la p ueba, no se p oduje on bajas (plan as mue as) en ninguno de los es clones, con el a amien o con ol sin NaCl ( abla 21). Es e hecho es impo an e pa a alo a los esul ados de la p ueba, ya que indicó unas adecuadas condiciones de expe imen ación y buena ap i ud de las plan as, lo que pe mi ió elaciona las pé didas p oducidas en los o os a amien os con la acción de la sal. 73 ig. 12. Tempe a u as máximas, mínimas y medias egis adas en el in e nade o du an e el desa ollo de la p ueba. 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 Días ºC Aclima ación Salinización Desa ollo de la p ueba Tabla 20. Núme o de plan as i as egis adas en cada una de las e apas del p oceso desde el asplan e a suelo has a la inalización del p oceso de salinización. Clon SOM 05 50 48 ( 100) aA 48 ( 100) aA 48 ( 100) aA 40 (83,3) aB 44 (91,6) aB 44 (91,6) aB 37 (77,0) aB 43 (89,6) aB 34 (71,0) aC 0 g/l 12 ( 100) 14 ( 100) 11 ( 100) 4 g/l 12 ( 100) 14 ( 100) 11 ( 100) 8 g/l 13 ( 100) 14 ( 100) 12 ( 100) T asplan e: (0 días) Adap ación: (8 días) Aclima ación: (15 días) Salinización: (10 días) Tes T-s uden pa a di e encias de p opo ciones. Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en e clones (minúsculas) y/o en e e apas (mayúsculas). Al se la mandioca un cul i o de clima opical, las bajas empe a u as in luyen mucho sob e su desa ollo y supe i encia. Así, empe a u as po debajo de 20ºC enan su c ecimien o y 10ºC o iginan una ele ada mo andad en e plan as de mandioca simila es a las u ilizadas en el expe imen o. Las empe a u as habidas en el in e nade o du an e es a p ueba ( ig. 12) indican que no pudo exis i acción nega i a impo an e po pa e de es e ac o climá ico, lo que ambién a aló la elación di ec a en e las bajas p oducidas y la salinidad. La adición al medio con ol de 4 gl -1 de sal p odujo pé didas signi ica i as de plan as en los clones SOM-1 y 50 a los 35 días del comienzo de la p ueba y en el clon 05 a los 40, pa a después man ene se con alo es simila es has a el inal del 74 expe imen o ( abla 21). En ningún caso, se encon a on di e encias signi ica i as en e clones. Cuando a la solución nu i i a del agua de iego se añadie on 8 gl -1 de NaCl, la acción de la sal ue mucho más mani ies a. Como en el caso an e io , no se obse a on bajas signi ica i as du an e los p ime os 30 días de iniciado el expe imen o. A los 35 días se p oduje on pé didas en odos los clones que ue on pequeñas y no signi ica i as en el clon SOM-1, e impo an es y signi ica i as en los o os dos clones. A pa i de esa echa, descendió signi ica i amen e el núme o de plan as i as del clon SOM-1, aunque queda on i as algunas de ellas y mu ie on odas las plan as de los clones 05 y 50. Es deci , se pudo dis ingui en e el compo amien o de 05 y de 50 con pé didas mayo es y más p ecoces y el clon SOM-1 que sopo ó mejo la sal. Tabla 21. Plan as i as egis adas a los 0, 30, 35, 40, 45 y 50 días después de alcanzado el ni el de sal en el agua de iego ijado pa a el ensayo. 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 SOM-1 12 ( 100) aA 12 ( 100) aA 13 ( 100) aA 0 días 05 14 ( 100) aA 14 ( 100) aA 14 ( 100) aA 50 11 ( 100) aA 11 ( 100) aA 12 ( 100) aA SOM-1 12 ( 100) aA 12 ( 100) aA 13 ( 100) aA 30 días 05 14 ( 100) aA 14 ( 100) aA 12 (85,7) aA 50 11 ( 100) aA 11 ( 100) aA 12 ( 100) aA SOM-1 12 ( 100) aA 8 (66,6) aB 10 (76,9) aA 35 días 05 14 ( 100) aA 12 (85,7) aA 3 (21,4) bB 50 11 ( 100) aA 7 (63,6) aB 3 (25,0) bB SOM-1 12 ( 100) aA 7 (58,3) bB 6 (46,1) bB 40 días 05 14 ( 100) aA 12 (85,7) bB 50 11 ( 100) aA 7 (63,6) bB SOM-1 12 ( 100) aA 7 (58,3) bB 4 (30,7) bB 45 días 05 14 ( 100) aA 10 (71,4) bB 50 11 ( 100) aA 7 (63,6) bB SOM-1 12 ( 100) aA 7 (58,3) bB 50 días 05 14 ( 100) aA 10 (71,4) bB 50 11 ( 100) aA 7 (63,6) bB Concen ación de NaCl en el medio Tes T-s uden pa a di e encias de p opo ciones. Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,05) en e clones (minúsculas) y/o en e e apas (mayúsculas). En consecuencia, bajo el pun o de is a de la supe i encia de las plan as, los es clones de mandioca u ilizados, sopo a on acep ablemen e el a amien o de 4 gl -1 75 de NaCl en el agua de iego, sin que se pudie an es ablece di e encias signi ica i as en e ellos. Es e a amien o, como se indicó an es, u o una CE de 7,5 dS/m en el agua de iego y SAR de 62, p oduciendo en el suelo una CE de 10,5 en ex ac o de pas a sa u ada, lo que indica una salinidad ele ada. La solución de 8 gl -1 de sal con una CE de 14,4 dS/m en el agua de iego y de 17,5 dS/m en ex ac o de pas a sa u ada ue excesi a pa a el ni el de ole ancia de los es clones de mandioca en conside ación, sin emba go pe mi ió dis ingui en e ellos de iniendo un mejo compo amien o an e la sal y mejo ole ancia del clon SOM.-1. VI. 3. 2. 2. Desa ollo de plan as supe i ien es. Como medida del desa ollo de las plan as supe i ien es de cada a amien o y clon, se eligió el peso esco y seco de ellas, ep esen ado po el de la media en cada caso. A pa i de es as magni udes se calculó además el an o po cien o de agua en los ejidos. ({(P -Ps)/P }.100). Tabla 22. In luencia de la salinidad sob e el peso esco (en mg) de aíz, allo, hojas y plan a comple a en los es clones de mandioca (en el clon SOM-1 la medida ue omada a los 45 días y en los clones 05 y 50 a los 35 días pa a el a amien o de 8 gl -1 ). O gano Clon Raíz SOM-1 100,0 a B 196,0 a B 380,0 A 05 84,5 a B 188,9 a A 176,0 AB 50 56,4 a B 195,6 a A 172,0 A Media 80,3 B193,5 A Tallo SOM-1 983,8 a A 738,0 a A 773,0 A 05 648,8 b A 425,0 b A 359,0 A 50 440,8 b A 485,6 b A 333,0 A Media 691,1 A549,5 A Hojas SOM-1 1229,2 a A 605,0 a B 438,0 B 05 987,6 a A 341,7 a B 166,0 B 50 726,9 a A 444,4 a AB 121,0 B Media 981,2 A463,7 B Plan a SOM-1 2313,1 a A 1538,8 a A 1591,0 A 05 1720,9 ab A 955,6 a B 701,0 B 50 1204,0 b A 1125,6 a A 626,0 A Media 1746,0 A1206,6 B 048 Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan. 76 La p esencia de NaCl en el sus a o in luyó nega i amen e sob e el peso esco de los ó ganos aé eos y en el o al de las plan as, aunque con di e encias en e clones. El clon 05 ue el más cla amen e a ec ado ya que ue el de más biomasa en el a amien o con ol y el de menos en cada uno de los a amien os salinos. Después el clon 50 el de meno peso esco en el a amien o con ol, esis ió bien el a amien o con la concen ación meno de NaCl pe o se a ec ó ue emen e cuando se añadie on al medio nu i i o 8 gl -1 de la sal ( abla 22). Tabla 23. In luencia de la salinidad sob e el peso seco (en mg) de aíz, allo, hojas y plan a comple a en los es clones de mandioca (en el clon SOM-1 la medida ue omada a los 45 días y en los clones 05 y 50 a los 35 días pa a el a amien o de 8 gl -1 ). O gano Clon Raíz SOM-1 50,3 a A 42,1 a A 69,4 A 05 33,3 a A 44,4 a A 20,8 B 50 24,0 a B 36,5 a A 28,5 AB Media 35,8 A41,0 A Tallo SOM-1 208,7 a A 126,1 a A 150,6 A 05 103,1 b A 79,0 a A 58,7 A 50 59,5 b A 77,1 a A 61,2 A Media 123,8 A94,1 A Hojas SOM-1 205,0 a A 132,2 a A 229,9 A 05 164,6 ab A 85,4 a B 107,5 B 50 107,5 b A 94,6 a A 85,7 A Media 159,0 A104,1 B Plan a SOM-1 464,0 a A 314,2 a A 436,3 A 05 301,0 ab A 208,9 a A 152,6 A 50 181,3 b A 208,1 a A 191,0 A Media 315,4 A243,7 A 048 Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. es de ango múl iple de Duncan Al igual que ocu ió con la supe i encia de las plan as, el clon de mandioca SOM-1 ue el menos a ec ado en su desa ollo po la p esencia de sal en el medio. El peso esco de las plan as some idas a la salinidad, en especial las que ecibie on mayo es concen aciones de NaCl ue ne amen e supe io al de los o os clones. Po el con a io, las aíces de las plan as a adas con NaCl u ie on mayo peso esco que las del con ol. 83 Tabla 27. Concen ación de po asio y calcio (%) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los es clones, c eciendo en in e nade o y some idos a dis in os a amien os salinos con NaCl (en el a amien o de 8 gl - 1 los da os co esponden a plan as c eciendo du an e 45 días, pa a el clon SOM-1 y 35 dias en los clones 05 y 50). Po asio O gano Clon Raíz SOM 0,494 a B 0,385 a B 1,304 A 05 0,270 a A 0,355 a A 0,931 A 50 0,457 a A 1,234 a A 1,505 A Media 0,407 A0,658 A Tallo SOM 1,672 b A 1,104 a A 1,876 A 05 2,297 ab A 1,208 a B 1,420 B 50 2,414 a A 1,143 a B 1,320 B Media 2,128 A1,152 B Hojas SOM 2,058 a A 2,100 a A 2,230 A 05 1,792 a B 1,888 a AB 2,293 A 50 1,820 a A 1,967 a A 2,140 A Media 1,890 A1,985 A Plan a SOM 1,408 a A 1,196 a A 1,803 A 05 1,453 a A 1,150 a A 1,548 A 50 1,564 a A 1,448 a A 1,655 A Media 1,475 A1,265 A Calcio O gano Clon Raíz SOM 2,350 a AB 2,522 a A 1,625 B 05 2,043 a A 2,088 a A 1,858 A 50 2,277 a A 2,318 a A 1,485 B Media 2,223 A2,309 A Tallo SOM 1,175 b B 2,483 a A 2,698 A 05 1,712 a A 2,265 ab A 2,355 A 50 1,443 ab A 1,404 b A 1,903 A Media 1,443 B2,051 A Hojas SOM 2,048 a B 2,750 a A 3,112 A 05 2,347 a C 2,945 a B 3,512 A 50 1,808 a C 3,285 a B 3,667 A Media 2,068 B2,993 A Plan a SOM 1,858 a B 2,585 a A 2,478 A 05 2,034 a A 2,433 a A 2,575 A 50 1,843 a A 2,336 a A 2,352 A Media 1,911 B2,451 A 0 4 8 Salinidad (gl -1 NaCl) Salinidad (gl -1 NaCl) 0 4 8 Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. 84 bas an e pa ecidos. En la media de ellos, se p odujo una acumulación en el allo, hoja y po ello en el o al de la plan a an e la p esencia de sal, mien as que en la aíz descendió ( abla 27). VI.3.2.4.5. Magnesio. Los ni eles de es e nu ien e ue on ambién simila es en e clones y expe imen a on un aumen o con la salinidad del medio ( abla 28). VI.3.2.4.6. Sodio. La concen ación de sodio en las plan as de mandioca aumen ó en el a amien o de 4 gl -1 y se man u o en alo es simila es en el a amien o de 8 gl -1 , siendo el allo el p incipal acumulado de es e elemen o. La concen ación de sodio en la aíz aumen ó p og esi amen e con el aumen o de la salinidad ( abla 28) sin que se obse a an di e encias en e los clones. VI.3.2.4.7. Clo o. La concen ación de clo o en la plan a aumen ó con la salinidad en los es ó ganos analizados y p incipalmen e en allo y hojas. En la aíz la concen ación de clo o aumen ó bas an e en e el es igo y el a amien o de 4 gl -1 y algo menos en e es e y el a amien o de 8 gl -1 ( abla 29). VI.3.2.4.8. Mic onu ien es . En los mic onu ien es conside ados ampoco se encon a on di e encias en e los clones, ni modi icaciones an e la p esencia de sal (NaCl) en el sus a o que pe mi ie an de ini algún ipo cla o de in luencia de la concen ación si uación de és a sob e el ni el de los oligoelemen os ( ablas 29, 30 y 31). En consecuencia, como en o as si uaciones a adas an es, la mayo in luencia sob e el con enido de nu ien es de la plan a de mandioca alimen ada con solución nu i i a con NaCl, ue la ue e acumulación de es os elemen os (Na + y Cl - ). Se obse ó po ello una al e ación impo an e del equilib io nu i i o de la plan a. 85 Tabla 28. Concen ación de magnesio y sodio (%) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los es clones, c eciendo en in e nade o y some idos a dis in os a amien os salinos con NaCl (en el a amien o de 8 gl - 1 los da os co esponden a plan as c eciendo du an e 45 días, pa a el clon SOM-1 y 35 dias en los clones 05 y 50). Magnesio O gano Clon Raíz SOM 0,431 a B 0,504 a B 0,685 A 05 0,345 a A 0,453 a A 0,623 A 50 0,411 a B 0,525 a A 0,530 A Media 0,396 A0,494 A Tallo SOM 0,127 b B 0,520 a A 0,500 A 05 0,185 ab B 0,407 ab A 0,401 A 50 0,220 a A 0,223 b A 0,297 A Media 0,177 B0,383 A0,399 Hojas SOM 0,403 a B 0,464 ab A 0,519 A 05 0,400 a B 0,517 a A 0,526 A 50 0,327 a B 0,442 b AB 0,482 A Media 0,377 B0,474 A Plan a SOM 0,320 a B 0,496 a A 0,568 A 05 0,310 a B 0,459 a A 0,517 A 50 0,319 a A 0,396 a A 0,436 A Media 0,317 B0,450 A Sodio O gano Clon Raíz SOM 0,300 a C 1,420 a B 2,536 A 05 0,254 a B 1,346 a A 1,668 A 50 0,478 a B 1,559 a A 1,688 A Media 0,344 B1,442 A Tallo SOM 0,129 a B 5,650 a A 5,752 A 05 0,292 a C 2,878 ab B 4,085 A 50 0,314 a B 2,375 b A 3,097 A Media 0,245 B3,634 A Hojas SOM 0,226 a B 0,403 a A 1,112 A 05 0,274 a B 0,435 a A 1,370 A 50 0,187 a B 0,683 a A 1,407 A Media 0,229 B0,507 A Plan a SOM 0,218 a B 2,491 a A 3,133 A 05 0,273 a B 1,553 a A 2,374 A 50 0,326 a B 1,539 a A 2,064 A Media 0,272 B1,861 A 0 4 8 0 4 8 Salinidad (gl -1 NaCl) Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. 86 Tabla 29. Concen ación de clo o (%) y cob e (ppm) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los es clones, c eciendo en in e nade o y some idos a dis in os a amien os salinos con NaCl (en el a amien o de 8 gl - 1 los da os co esponden a plan as c eciendo du an e 45 días, pa a el clon SOM-1 y 35 dias en los clones 05 y 50). Clo o O gano Clon Raíz SOM 0,297 b C 1,718 b B 4,052 A 05 0,353 b B 2,353 ab A 1,598 AB 50 0,768 a B 3,438 a A 2,945 A Media 0,473 B2,503 A Tallo SOM 0,402 b C 3,355 a B 6,153 A 05 0,686 a C 4,237 a B 5,887 A 50 0,789 a B 3,897 a A 4,713 A Media 0,626 B3,829 A Hojas SOM 0,363 a C 3,040 a B 4,945 A 05 0,202 a C 3,118 a B 4,293 A 50 0,317 a C 3,246 a B 4,463 A Media 0,294 B3,135 A Plan a SOM 0,354 b C 2,704 a B 5,050 A 05 0,414 b B 3,236 a A 3,926 A 50 0,625 a B 3,527 a A 4,041 A Media 0,464 B3,156 A Cob e O gano Clon Raíz SOM 33 b B 60 a A 74 A 05 36 b B 52 a AB 67 A 50 67 a A 55 a A 62 A Media 45 B55 A Tallo SOM 18 a A 22 a A 24 A 05 13 a A 14 a A 13 A 50 16 a A 18 a A 14 A Media 16 A18 A Hojas SOM 18 a A 14 a B 16 AB 05 16 a A 13 a A 14 A 50 13 a A 16 a A 15 A Media 16 A14 A Plan a SOM 23 a A 32 a A 25 A 05 22 a A 26 a A 31 A 50 32 a A 30 a A 30 A Media 26 A29 A 0 4 8 0 4 8 Salinidad (gl -1 NaCl) Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. 87 Tabla 30. Concen ación de hie o y manganeso (ppm) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los es clones, c eciendo en in e nade o y some idos a dis in os a amien os salinos con NaCl (en el a amien o de 8 gl - 1 los da os co esponden a plan as c eciendo du an e 45 días, pa a el clon SOM-1 y 35 dias en los clones 05 y 50). Hie o O gano Clon Raíz SOM 4132 b AB 5338 a A 3860 B 05 4315 ab A 5233 a A 5368 A 50 6221 a A 4494 a AB 4001 B Media 4889 A5022 A Tallo SOM 86 b B 194 a AB 277 A 05 185 a B 215 a B 330 A 50 166 a A 181 a A 419 A Media 146 A197 A Hojas SOM 303 a A 289 a A 349 A 05 257 a B 276 a B 347 A 50 234 a A 321 a A 344 A Media 265 A295 A Plan a SOM 1507 a A 1940 a A 1495 A 05 1586 a A 1908 a A 2015 A 50 2207 a A 1666 a A 1588 A Media 1766 A1838 A Manganeso O gano Clon Raíz SOM 436 a A 708 a A 901 A 05 526 a A 563 a A 668 A 50 544 a A 545 a A 654 A Media 502 A605 A Tallo SOM 73 a B 121 a AB 181 A 05 81 a B 101 a AB 129 A 50 89 a A 74 a A 104 A Media 81 A99 A Hojas SOM 143 a A 187 a A 247 A 05 145 a B 239 a A 284 A 50 174 a B 248 a AB 289 A Media 154 B225 A Plan a SOM 218 a A 339 a A 443 A 05 251 a A 301 a A 360 A 50 269 a A 289 a A 349 A Media 246 A310 A 0 4 8 0 4 8 Salinidad (gl -1 NaCl) Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. 88 Tabla 31. Concen ación de cinc (ppm) en aíz, allo, hojas y plan a comple a de los es clones, c eciendo en in e nade o y some idos a dis in os a amien os salinos con NaCl (en el a amien o de 8 gl - 1 los da os co esponden a plan as c eciendo du an e 45 días, pa a el clon SOM-1 y 35 dias en los clones 05 y 50). Cinc O gano Clon Raíz SOM 141 a A 213 a A 225 A 05 133 a B 157 a AB 275 A 50 252 a A 240 a A 163 A Media 176 A203 A Tallo SOM 99 a A 102 a A 193 A 05 48 a A 101 a A 98 A 50 92 a A 122 a A 181 A Media 80 A108 A Hojas SOM 77 a A 82 b A 88 A 05 80 a AB 63 b B 127 A 50 55 a B 137 a A 143 A Media 71 A94 A Plan a SOM 106 a A 132 a A 168 A 05 87 a B 107 a AB 166 A 50 133 a A 166 a A 162 A Media 109 A135 A 0 4 8 Salinidad (gl -1 NaCl) Le as di e en es indican di e encias signi ica i as (P<0,01) en mayúscula y en ila pa a los a amien os salinos y en minúscula y en columna pa a los clones. Tes de ango múl iple de Duncan. VI.4. DISCUSIÓN Se debe des aca la ole ancia an dis in a an e la sal de la plan a de mandioca en condiciones de cul i o in i o o de in e nade o. Como se indicó an es, las plan as cul i adas in i o sólo sopo a on concen aciones salinas in e io es a 2,5 gl -1 de NaCl, lo que demos ó cie a sensibilidad a la sal, mayo que la de inida pa a ma e ial simila de id (T oncoso e al, 1999a) o de oli o (T oncoso e al., 1999b). Po el con a io, las plan as de mandioca, mayo es, más desa olladas, en condiciones de in e nade o llega on a sopo a du an e un cie o iempo concen aciones de 8 gl -1 de NaCl. No obs an e las di e encias indicadas, exis ió una co espondencia en e el compo amien o ela i o de cada clon in i o y ex i o. Así, SOM-1 ue el que demos ó mayo ole ancia a la sal en ambas si uaciones como co esponde a una especie ecogida en el desie o á ido-salino de Somalia. Po el con a io, 05 ue el clon que demos ó mayo sensibilidad de acue do ambién con su o igen de la zona opical 89 llu iosa de las an iguas colonias ancesas de A ica Occiden al. Además, an o in i o como en el in e nade o, cada uno en su ni el, la sal eje ció los mismos e ec os sob e la plan a de mandioca. Cuando la concen ación ue su icien emen e ele ada p o ocó la mue e de algunas plan as y disminuyó el desa ollo (peso esco, peso seco, c ecimien o, o mación de yemas y de hojas) de las supe i ien es. También en ambos casos (in i o y ex i o), la p esencia de sal en el medio disminuyó el con enido de agua de las hojas en aquellos clones ole an es, y p o ocó una ue e acumulación de Na + y Cl - en los ejidos de la plan a. El p ime e ec o, concue da con lo indicado en la bibliog a ía sob e la acción de la sal sob e la p esión osmó ica medio-plan a, que se conside a como la acción más inmedia a de la sal sob e la plan a (Munns, 1993). El hecho de que la al a de agua apa ezca p ime o en la hoja coincide con lo indicado po Newman (1997) sob e que la acumulación de sal se mani ies a con un p oceso de senescencia olia que impide nue os c ecimien os de la plan a. Munns e al., (1995), ambién indica on que la a ec ación olia ué de e minan e pa a medi la ole ancia de la plan a a la salinidad y F anco e al., (1997), elaciona on la a iación del á ea olia con la ole ancia a la sal. El o o asgo ca ac e ís ico de la p esencia de NaCl en el medio, es la modi icación de la composición mine al de la plan a, en especial la acumulación de Na + y Cl - . Es e p oceso que, como se ha indicado an es, es o a mani es ación del e ec o óxico de la sal, que se acep a ac úa a más la go plazo que la deshid a ación (He y C ame , 1993), se p odujo an o en las plan as cul i adas in i o, como en las man enidas en in e nade o. Exis ió, en consecuencia, un pa alelismo en e el compo amien o an e la sal de la plan a de mandioca in i o y ex i o, aunque a los ni eles espec i os de ole ancia indicados an es. Es a elación in i o-ex i o de compo amien o an e la sal de la plan a de mandioca, ha sido demos ada po p ime a ez en es e abajo y se conside a de g an impo ancia. En e ec o, el uso del cul i o in i o pa a la selección de plan as de mandioca ole an es a la salinidad ep esen a una g an en aja debido al aho o de abajo y iempo de es os es udios. 90 VII. EFECTO DE LA MICORRIZA. VII.1. INTRODUCCIÓN. Los hongos mico ícicos a buscula es bene ician a las plan as, pe mi iéndoles c ece y p oduci mejo en suelos de baja e ilidad química. La asociación mico ícica, juega un papel esencial en los ciclos de ma e ia y ene gía de ecosis emas con suelos gene almen e pob es en agua y nu ien es, en especial ni ógeno y ós o o (Read, 1991). Exis en a ias azones que jus i ican es e compo amien o en e las que des aca el aumen o del olumen de e eno colonizado po la plan a, con mayo can idad de nu ien es disponibles (Cla k y Ze o, 2000). También, la mayo cap ación de nu ien es depende del inc emen o de la supe icie abso ben e de la aíz, mo ilización de uen es de nu ien es y exc eción de compues os quelan es o ec oenzimas. Au o es como Gilmo e (1971), Rhodes y Ge demann (1975), Tinke (1978) y Tinne y Leyde (1978) con i man que la mico iza aumen a el c ecimien o de la plan a po el aumen o de la abso ción de nu ien es en especial P, Cu y Zn. Po egla gene al, las mico izas esículo-a buscula es (MVA) no sólo p o ocan un inc emen o en la o mación de biomasa, sino que a ec an igualmen e a la dis ibución de és a en e pa e aé ea y aíz con bene icio ela i o del componen e au o ó ico (Smi h 1980). La compe encia en e el hongo y la aíz po los o osin a os pa ece se la p incipal causa de la mayo elación en peso seco de la pa e aé ea sob e la aíz que se da en plan as mico izadas.(Be a e al., 1990; Ma schne y Dell, 1994). La o mación man enimien o y unción de las mico izas equie e en o no al 20% de los o osin a os p oducidos po la plan a (Jacobsen y Rosendahl, 1990). Algunos in es igado es (Allen y Allen, 1986) conside an que la espues a mico ícica sólo iene luga du an e pe iodos de es és. Va ios abajos lle ados a cabo en campo (Da ies e al., 1992) demues an un e ec o p o ec o de las mico izas en e si uaciones de es és an o bió ico como abió ico, que se a gumen a en g an pa e median e la es imulación del c ecimien o p o ocado po la mico iza. Exis en es udios que conside an la impo ancia de la simbiosis MVA en el c ecimien o y nu ición de plan as desa olladas en hábi a s salinizados. (Hi el and Ge demann, 1980; Pond e al., 1984). 91 El mecanismo po el que se consigue es a educción del es és puede es a elacionado con la mejo a en la nu ición os o ada (Hi el y Ge demann, 1980; Ojala e al., 1983). También se ha encon ado un descenso en la concen ación de clo o en plan as de Pa henicum a gen a um mico izadas cuando c ecen en ambien es salinos en compa ación con plan as no mico izadas (P ei e y Bloss, 1988) El inc emen o de p olina como consecuencia de la salinidad en lechuga (Lac uca sa i a L.) ue conside ablemen e meno en plan as colonizadas po Glomus ascicula um y Glomus dese icola que en plan as no inoculadas o inoculadas con Glomus mosseae, lo que indicó que las plan as mico izadas con es os dos hongos es u ie on menos a ec adas po la salinidad (Ruíz-Lozano e al., 1996). Es os au o es no encon a on di e encias en el con enido de ós o o en e plan as mico izadas y plan as no mico izadas con apo es de es e nu ien e, po lo que sugie en que los mecanismos po los cuales es os hongos ali ian el es és salino pueden es a basados en p ocesos isiológicos con un inc emen o en la asa de in e cambio de CO 2 , anspi ación, conduc ancia es óma ica y e iciencia en la u ilización de agua. Po o a pa e, se obse ó un descenso en la concen ación de calcio y magnesio en plan as de al al a (Medicago sa i a L) mico izadas. Sin emba go, no odas las MVA aumen an el c ecimien o en suelos salinos. (Azcón e al., 1976; Hi el and Ge demann, 1980; Rosendahl and Rosendahl, 1991). La mandioca, como muchas especies opicales que se cul i an sob e suelos pob es, p esen a hábi os mico ó icos y un conside able g ado de dependencia de la simbiosis plan a-mico iza pa a un desa ollo adecuado (Sie e ding, 1991). Po o a pa e, las mico izas a buscula es juegan un papel decisi o en la aclima ación de plan as mic op opagadas (Hooke e al., 1994) en e ellas la mandioca (Azcón-Aguila e al., 1997). VII.2. MATERIALES Y METODOS. En un p ime ensayo se es udió el compo amien o de los es clones de mandioca en e a la mico iza du an e el p oceso de adap ación y aclima ación desde in i o a condiciones ex e nas o ex i o. Pa a ello, se asplan a on 12 plan as de mandioca (Maniho esculen a C anz) de cada uno de los clones SOM-1, 05 y 50 p oceden es de cul i o in i o a con enedo es con un sus a o es e ilizado en au ocla e a 92 121ºC y apo luyen e du an e es días en sesiones de una ho a dia ia. La mi ad de los con enedo es ue on in ec ados con 5 g de inóculo de Glomus dese icola (II Ag 8903), acili ado po la E.E. el Zaidín del CSIC. Después del asplan e, las plán ulas se cub ie on con una bolsa de plás ico anspa en e en cuyo in e io se pul e izó agua des ilada mien as que el sus a o de los con enedo es se humedeció con solución Hoagland al 20%. Seguidamen e, las plan as se lle a on a una cáma a de ambien e con olado pa a su adap ación a 22±2 ºC de empe a u a, o ope íodo de 16 ho as po dia e in ensidad luminosa de 111 µEm -2 s -1 , pe maneciendo en es as condiciones du an e 8 días. Finalizado es e pe iodo de adap ación, las plan as se lle a on a un in e nade o pa a su aclima ación, donde las bolsas de plás ico se ue on ab iendo g adualmen e, co ando p ime o una de las esquinas y más a de la o a. Las plan as se ega on cada 3 días con 100 cc de agua de la ed. Cada 7 días se midió la longi ud del allo, el núme o de yemas y el núme o de hojas de cada plan a. A los 42 días, las plan as ue on e i adas de los con enedo es y sepa adas en aíz, allo y hojas, pesadas pa a de e mina su peso esco. La de e minación del peso seco se ealizó secando el ma e ial en es u a de ai e o zado a 70ºC has a peso cons an e. En un segundo ensayo, se es udió el e ec o de la mico iza sob e la ole ancia a la salinidad en plan as de mandioca. Como plan as con ol, sin mico iza , se u iliza on las mismas es udiadas en el capí ulo an e io dado que ambos expe imen os ue on con empo áneos y hechos en el mismo luga . Pa a la mico ización de las plan as se siguió el mismo p ocedimien o de asplan e y adap ación indicado an es, pe o inoculando los con enedo es espec i os con Glomus ascicula um. La aplicación de la sal se hizo del modo indicado en el capí ulo an e io . Una ez inalizado el ensayo, se omó una mues a de aíces de cada clon y a amien o salino, que ue on eñidas con azul ypan pa a obse a su es ado de mico ización. Pa a ello, las aíces se deposi a on en ubos de ensayo con agua des ilada du an e 24 ho as pa a su hid a ación. A con inuación, se la a on en agua des ilada pa a elimina los es os de suelo que habían quedado adhe idos a ellas. Las aíces la adas se coloca on de nue o en ubos de ensayo a los que se les añadió KOH al 10% pe maneciendo du an e 24 ho as en es a solución. Seguidamen e, los ubos con las aíces se au ocla a on du an e 20 minu os a 121 ºC y 1 a m de p esión. Después, se eliminó el KOH y se ealiza on 3 la ados con agua des ilada dejando inalmen e las aíces inme sas en HCl al 5 % du an e cinco minu os. A con inuación, se eliminó el ácido y se llena on los ubos con azul ypan al 0,05% en ácido lác ico, glice ina y agua (1:1:1) au ocla ando nue amen e las mues as 99 Con el peso seco ocu ió algo pa ecido, aunque en es e caso, no exis ie on modi icaciones impo an es en la biomasa adical y los descensos de la pa e aé ea ue on ela i amen e más pequeños ( abla 36) que en el peso esco. Como con las plan as no mico izadas, la salinidad del medio hizo disminui el g ado de hid a ación de los ejidos de la hoja ( abla 36) de las plan as mico izadas. No obs an e en es as úl imas, el descenso ue meno , en especial en el a amien o de 4 gl -1 de NaCl y en el clon SOM-1. En consecuencia, la mico iza mejo ó la ole ancia a la sal en los es clones lo que se e lejó en una mayo p oducción de biomasa y en una mejo conse ación de la humedad de los ejidos de la hoja an e una misma concen ación de NaCl en el medio. En lo e e en e al es ado nu i i o, el compo amien o de las plan as mico izadas an e la sal ( ablas 37, 38, 39 y 40) ue muy pa ecido al indicado an es pa a las plan as no mico izadas ( ablas 26 a 31), sal o en un mayo ni el de ni ógeno en la aíz de las p ime as. Es deci , que ambién en es e caso se p odujo una ue e acumulación de Na + y Cl - en odos los ejidos de la plan a po la p esencia de sal en el medio. En consecuencia, el mejo compo amien o an e la salinidad de las plan as colonizadas po el hongo no pudo elaciona se con una meno abso ción de los iones salinos. La no exis encia de di e encias impo an es en e el es ado de nu ición de las plan as mico izadas pudo debe se a la aplicación de la solución nu i i a Hoagland (20%) en ambas si uaciones que p ocu ó un medio nu i i o su icien e. Las obse aciones ealizadas sob e las p epa aciones de aíces eñidas con azul ypan e ela on la p esencia de o mas ca ac e ís icas de es e ipo de mico ización en aquellas plan as mico izadas con Glomus ascicula um mien as que en las plan as no mico izadas no se ap ecia on es uc u as eñidas con dicho colo an e. Po ello los e ec os di e enciado es desc i os se han a ibuido a la p esencia de hongos MVA en las aíces de las plan as de mandioca mico izadas ( ig.16). VII.4. DISCUSION De acue do con los esul ados indicados an es, la mico iza mandioca-Glomus p odujo unos e ec os in e esan es an o en el pe iodo de aclima ación desde el cul i o in i o al de condiciones de in e nade o, como en la espues a a la salinidad del medio en el úl imo ipo de cul i o. 100 Tabla 37. Es ado de nu ición de la aíz en plan as de mandioca mico izadas y no mico izadas de cada clon c eciendo en es concen aciones salinas as 50 días de cul o en in e nade o. Clon Sal Tipo N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Mn Zn Con ol 0,902 0,156 0,494 2,350 0,431 0,300 0,297 33 4132 436 141 mico iza 2,688 0,176 0,332 2,437 0,444 0,174 0,088 42 1645 356 64 ** ** * ** ** ** Con ol 1,191 0,136 0,385 2,522 0,504 1,420 1,718 60 5338 708 213 mico iza 2,788 0,154 0,341 2,328 0,376 1,360 1,285 47 2626 330 98 ** * ** ** ** Con ol 2,145 0,335 1,304 1,625 0,685 2,536 4,052 37 3860 901 225 mico iza 4,595 0,117 1,493 1,353 0,852 2,240 2,888 28 1639 567 98 ** * * ** ** Con ol 0,838 0,174 0,270 2,043 0,345 0,254 0,353 36 4315 526 133 mico iza 1,283 0,157 0,339 2,028 0,377 0,198 0,343 43 1544 241 56 ** ** ** Con ol 1,418 0,189 0,355 2,088 0,453 1,346 2,353 52 5233 563 157 mico iza 2,898 0,175 0,699 2,308 0,496 1,823 1,790 49 2667 363 118 ** ** ** Con ol 0,911 0,182 0,931 1,858 0,623 1,668 1,598 67 5368 668 275 mico iza 3,722 0,179 1,373 1,883 0,736 3,326 3,930 36 2299 709 103 * ** ** ** Con ol 1,034 0,202 0,457 2,277 0,411 0,478 0,768 67 6221 544 252 mico iza 1,875 0,147 0,292 1,920 0,422 0,263 0,388 73 1797 357 100 * ** ** ** Con ol 1,960 0,174 1,234 2,318 0,525 1,559 3,438 55 4494 545 240 mico iza 2,443 0,195 0,791 2,217 0,537 1,910 2,343 39 2677 240 97 ** ** ** ** Con ol 2,117 0,192 1,505 1,485 0,530 1,688 2,945 62 4001 654 163 mico iza 2,331 0,184 1,921 1,895 0,355 4,556 6,105 40 2354 425 131 ** * * * Con ol 0,925 0,177 0,407 2,223 0,396 0,344 0,473 45 4889 502 176 mico iza 2,054 0,162 0,322 2,172 0,419 0,206 0,246 51 1660 323 72 ** ** ** ** ** ** Con ol 1,523 0,166 0,658 2,309 0,494 1,442 2,503 55 5022 605 203 mico iza 2,700 0,177 0,644 2,279 0,481 1,740 1,871 45 2661 308 105 ** * ** ** ** Con ol 1,724 0,236 1,246 1,656 0,612 1,964 2,865 55 4410 741 221 mico iza 3,793 0,155 1,531 1,674 0,706 3,138 3,948 34 2046 595 106 ** ** ** ** ** 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 0 gl -1 4 gl -1 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 8 gl -1 SOM 05 50 Media % ppm La p esencia del símbolo * indica di e encias signi ica i as P<0.05 y el símbolo ** indica di e encias signi ica i as a P<0,01. Tes –T pa a mues as independien es. 101 Tabla 38. Es ado de nu ición del allo en plan as de mandioca mico izadas y no mico izadas de cada clon c eciendo en es concen aciones salinas as 50 días de cul i o en in e nade o. Clon Sal Tipo N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Mn Zn Con ol 1,960 0,073 1,672 1,175 0,127 0,129 0,402 18 86 73 99 mico iza 1,125 0,082 1,712 1,463 0,150 0,121 0,407 19 107 43 23 ** * Con ol 2,428 0,174 1,104 2,483 0,520 5,650 3,355 22 194 121 102 mico iza 1,680 0,099 1,015 1,873 0,241 2,675 3,947 16 84 45 23 * ** ** * ** Con ol 2,175 0,192 1,876 2,698 0,500 5,752 6,153 24 277 181 193 mico iza 4,080 0,136 1,278 2,193 0,341 4,265 5,187 17 177 53 59 * ** Con ol 1,788 0,082 2,297 1,712 0,185 0,292 0,686 13 185 81 48 mico iza 1,723 0,072 1,840 1,324 0,195 0,208 0,627 10 96 59 35 * ** ** Con ol 2,718 0,111 1,208 2,265 0,407 2,878 4,237 14 215 101 101 mico iza 1,735 0,097 1,320 1,747 0,238 2,235 4,052 12 124 73 39 ** * * * * Con ol 2,495 0,134 1,420 2,355 0,401 4,085 5,887 13 330 129 98 mico iza 3,097 0,146 1,642 2,333 0,777 3,802 5,698 14 289 87 47 ** ** Con ol 1,844 0,092 2,414 1,443 0,220 0,314 0,789 16 166 89 92 mico iza 2,425 0,101 2,158 1,468 0,284 0,315 0,963 13 192 74 58 Con ol 1,663 0,095 1,143 1,404 0,223 2,375 3,897 18 181 74 122 mico iza 2,870 0,128 1,708 1,947 0,294 2,892 4,270 18 179 79 54 * * Con ol 2,173 0,145 1,320 1,903 0,297 3,097 4,713 14 419 104 181 mico iza 2,740 0,138 1,380 3,700 0,456 5,560 8,667 11 169 86 70 ** * ** ** * Con ol 1,864 0,082 2,128 1,443 0,177 0,245 0,626 16 146 81 80 mico iza 1,758 0,085 1,903 1,419 0,210 0,215 0,666 14 131 59 39 ** ** Con ol 2,270 0,127 1,152 2,051 0,383 3,634 3,829 18 197 99 108 mico iza 2,095 0,108 1,348 1,856 0,257 2,601 4,089 15 129 66 39 ** ** ** ** Con ol 2,281 0,157 1,539 2,319 0,399 4,311 5,584 17 342 138 157 mico iza 3,419 0,140 1,444 2,551 0,538 4,339 6,087 15 220 73 56 ** ** SOM 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 05 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 50 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 Media 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 % ppm La p esencia del símbolo * indica di e encias signi ica i as P<0.05 y el símbolo ** indica di e encias signi ica i as a P<0,01. Tes –T pa a mues as independien es. 102 Tabla 39. Es ado de nu ición de las hojas en plan as de mandioca mico izadas y no mico izadas de cada clon c eciendo en es concen aciones salinas as 50 días de cul i o en in e nade o. Clon Sal Tipo N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Mn Zn Con ol 4,433 0,135 2,058 2,048 0,403 0,226 0,363 18 303 143 77 mico iza 3,492 0,226 2,480 2,845 0,423 0,247 0,265 35 290 111 61 * ** ** ** Con ol 5,003 0,118 2,100 2,750 0,464 0,403 3,040 14 289 187 82 mico iza 3,210 0,172 2,152 3,258 0,492 0,566 3,505 24 253 217 70 ** ** Con ol 5,032 0,138 2,230 3,112 0,519 1,112 4,945 16 349 247 88 mico iza 2,693 0,153 2,963 3,413 0,485 1,196 4,465 29 274 218 98 ** ** * Con ol 4,123 0,149 1,792 2,347 0,400 0,274 0,202 16 257 145 80 mico iza 3,462 0,184 1,850 2,825 0,390 0,218 0,130 21 260 130 59 * * Con ol 3,897 0,160 1,888 2,945 0,517 0,435 3,118 13 276 239 63 mico iza 3,440 0,169 1,850 3,145 0,445 0,420 2,770 24 271 186 67 * Con ol 3,875 0,142 2,293 3,512 0,526 1,370 4,293 14 347 284 127 mico iza 3,498 0,165 2,667 3,737 0,496 1,358 5,083 30 273 240 80 * * * ** Con ol 4,097 0,146 1,820 1,808 0,327 0,187 0,317 13 234 174 55 mico iza 3,458 0,180 1,852 2,810 0,386 0,188 0,245 19 237 164 70 * * Con ol 3,720 0,155 1,967 3,285 0,442 0,683 3,246 16 321 248 137 mico iza 4,398 0,173 1,893 3,627 0,485 0,643 3,858 18 268 203 69 ** Con ol 3,803 0,205 2,140 3,667 0,482 1,407 4,463 15 344 289 143 mico iza 5,213 0,174 2,507 3,943 0,505 1,487 6,000 15 255 215 69 * Con ol 4,218 0,143 1,890 2,068 0,377 0,229 0,294 16 265 154 71 mico iza 3,471 0,197 2,061 2,827 0,400 0,218 0,213 25 262 135 63 ** ** ** * Con ol 4,207 0,144 1,985 2,993 0,474 0,507 3,135 14 295 225 94 mico iza 3,683 0,171 1,965 3,343 0,474 0,543 3,378 22 264 202 69 * * ** * Con ol 4,237 0,162 2,221 3,430 0,509 1,296 4,567 15 346 273 119 mico iza 3,519 0,162 2,753 3,649 0,493 1,319 5,019 26 270 226 85 * ** ** ** ** ** SOM 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 05 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 50 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 Media 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 % ppm La p esencia del símbolo * indica di e encias signi ica i as P<0.05 y el símbolo ** indica di e encias signi ica i as a P<0,01. Tes –T pa a mues as independien es. 103 Tabla 40. Es ado de nu ición de plan as de mandioca mico izadas y no mico izadas de cada clon c eciendo en es concen aciones salinas as 50 días de cul i o en in e nade o. Clon Sal Tipo N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Mn Zn Con ol 2,432 0,122 1,408 1,858 0,320 0,218 0,354 23 1507 218 106 mico iza 2,435 0,161 1,508 2,248 0,339 0,181 0,253 32 681 170 49 ** Con ol 2,874 0,143 1,196 2,585 0,496 2,491 2,704 32 1940 339 132 mico iza 2,531 0,140 1,273 2,506 0,369 1,556 3,116 27 783 181 59 ** ** Con ol 3,117 0,222 1,803 2,478 0,568 3,133 5,050 25 1495 443 168 mico iza 3,789 0,135 1,912 2,320 0,559 2,567 4,180 25 696 279 85 ** Con ol 2,250 0,135 1,453 2,034 0,310 0,273 0,414 22 1586 251 87 mico iza 2,265 0,135 1,469 2,063 0,314 0,209 0,369 22 520 131 49 ** Con ol 2,678 0,153 1,150 2,433 0,459 1,553 3,236 26 1908 301 107 mico iza 2,691 0,147 1,290 2,400 0,393 1,493 2,871 28 1021 207 75 Con ol 2,427 0,153 1,548 2,575 0,517 2,374 3,926 31 2015 360 166 mico iza 3,439 0,163 1,894 2,651 0,669 2,829 4,904 27 954 345 77 * ** Con ol 2,325 0,147 1,564 1,843 0,319 0,326 0,625 32 2207 269 133 mico iza 2,675 0,142 1,577 2,084 0,357 0,255 0,550 30 610 178 73 * * Con ol 2,448 0,141 1,448 2,336 0,396 1,539 3,527 30 1666 289 166 mico iza 3,237 0,165 1,464 2,597 0,439 1,815 3,491 25 1041 174 73 ** Con ol 2,698 0,181 1,655 2,352 0,436 2,064 4,041 30 1588 349 162 mico iza 3,428 0,165 1,936 3,180 0,439 3,867 6,924 22 926 242 90 ** ** ** Con ol 2,336 0,134 1,475 1,911 0,317 0,272 0,464 26 1766 246 109 mico iza 2,457 0,147 1,517 2,137 0,337 0,214 0,385 28 606 160 57 ** ** ** ** Con ol 2,667 0,146 1,265 2,451 0,450 1,861 3,156 29 1838 310 135 mico iza 2,831 0,151 1,345 2,501 0,401 1,623 3,161 27 955 188 70 ** ** ** Con ol 2,747 0,185 1,669 2,468 0,507 2,524 4,339 29 1699 384 166 mico iza 3,577 0,152 1,909 2,624 0,579 2,932 5,018 25 845 298 83 * ** ** SOM 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 05 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 50 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 Media 0 gl -1 4 gl -1 8 gl -1 % ppm La p esencia del símbolo * indica di e encias signi ica i as P<0.05 y el símbolo ** indica di e encias signi ica i as a P<0,01. Tes –T pa a mues as independien es. 104 ig. 16. Raíz de mandioca sin mico iza (a) (x40) y mico iza (b) con Glomus ascicula um (x100). a b Como se indicó en el capí ulo an e io , no se encon ó una in luencia de la mico iza sob e el núme o de plan as supe i ien es de los es clones de mandioca as el asplan e desde cul i o in i o a condiciones ex e nas (in e nade o), lo que se debió al bajo núme o de pé didas habido en ambos g upos de plan as (con o sin mico iza). No obs an e, exis en en la bibliog a ía abajos que demues an que cuando el ni el global de supe i encia es más bajo, la mico iza disminuye el núme o de pé didas (Hooke e al., 1994). Po el con a io, la simbiosis mandioca-MVA p odujo un inc emen o muy ele ado del peso esco (13 eces) y seco (10 eces) de la plan a de mandioca, du an e el pe iodo de adap ación a condiciones ex e nas, como co esponde a una especie de inida como mico iza obligada. Inc emen os simila es de biomasa de mandioca como consecuencia de la mico iza ue on encon ados po noso os en expe imen os p e ios (Ca e e o e al., 1996; Aguila -Azcón e al., 1997;). En o as plan as ambién se ha is o un e ec o bene icioso de la mico iza sob e el desa ollo (Gianinazzi e al., 1990; Lo a o e al., 1996; Azcón-Aguila y Ba ea, 1997; T oncoso e al., 2001). 105 Al con a io de lo indicado a eces en la bibliog a ía (Be a e al., 1990; Ma schne y Dell, 1994) en las plan as de mandioca conside adas no se obse ó un mayo desa ollo ela i o de la pa e aé ea sob e la aíz. Es e hecho pudo es a elacionado con las buenas condiciones de nu ición a las que las plan as es u ie on some idas y al mayo g ado de hid a ación, en especial en la aíz, que o igina la mico iza. Las plan as colonizadas po MVA sopo a on mejo la salinidad del medio que las no colonizadas, an o en la supe i encia como en el mayo desa ollo de las supe i ien es. Es a mayo ole ancia a la sal se elaciona con el hecho de que la mico iza p oduce plan as más ue es y con un mayo g ado de hid a ación en especial en las aices. Po el con a io, no se encon a on di e encias impo an es en el es ado de nu ición de es os dos ipos de plan as, sal o una mayo acumulación de ni ógeno en la aíz y de ós o o en las hojas aíz de las mico izadas. Es deci , an o la mandioca colonizada como la no colonizada po MVA mos a on en sus ejidos can idades simila es de Na y Cl, lo que indicó que el hongo no ue un il o pa a la abso ción de dichos nu ien es y que las plan as mico izadas sopo a on mejo los excesos de es os elemen os. Ruíz-Lozano y Azcón (2000), encuen an que el e ec o p o ec o ealizado po de Glomus sp., aislado en ambien es salinos, sob e plan as de lechuga some idas a es és salino es á basado en la es imulación del desa ollo adicula , mien as que el e ec o p o ec o de G. dese icola es u o basado en un mejo es ado nu icional de la plan a. Nume osos au o es han es udiado los bene icios de la mico iza en plan as en si uación de es és abió ico (Howele e al., 1982; Ba ea y Je ies, 1995). Así, Duin e al., (1991) es udia on las elaciones en e mico izas, an o ec omico izas como MVA, y di e en es plan as bajo di e en es ipos de es és como el exceso de me ales pesados en el suelo o suelos salinos. Copeman e al., (1996) encon a on que plan as de oma e c eciendo bajo condiciones de es és salino y mico izadas con MVA p esen a on mejo desa ollo que las no mico izadas. En los capí ulos an e io es, se des acó la mayo ole ancia a la sal del clon SOM- 1 de mandioca en e a los o os dos clones es udiados (05 y 50), an o en condiciones de cul i o in i o como de in e nade o. En es e capí ulo se ha indicado la in luencia posi i a de la mico iza al aumen a la ole ancia a la sal de los es clones. En consecuencia, la combinación SOM-1-hongo MVA esul ó muy in e esan e en es e abajo ya que pe mi e dispone de un ma e ial de mandioca de un ni el de ole ancia a 106 la sal bas an e ele ado. Es e hecho puede se de g an u ilidad pa a el cul i o de mandioca en zonas á ido-salinas donde habi an poblaciones de ex ema pob eza y hamb una. 10 7 VIII. DESARROLLO IN VITRO Y EX VITRO DE EXPLANTOS- PLANTAS DEL CLON SOM-1 DE MANDIOCA, PROCEDENTES DE PLANTAS MICORRIZADAS Y NO MICORRIZADAS. VIII.1. INTRODUCCIÓN La espues a del ma e ial ege al al cul i o in i o, depende en g an medida de las condiciones de la cáma a (luz, an o en in ensidad como o ope iodo, y empe a u a) y de las ca ac e ís icas del medio nu i i o. La insu iciencia de mecanismos egulado es, p esen es en la plan a comple a, hace a los ejidos cul i ados in i o muy sensibles a las condiciones nu i i as del medio (Ma ga a, 1988). Además de es os ac o es ex e nos, ambién son impo an es en el cul i o in i o las condiciones isiológicas del ma e ial ege al de pa ida pa a la p opagación (Ma ga a, 1988; Pie ik, 1990). La di e sidad de medios nu i i os exis en es pa a el cul i o in i o de plan as se explica po la p io idad de a ende las necesidades especí icas de di e en es ejidos y especies a cul i a y p opicia así su mejo desa ollo. Po ello, jun o al uso del medio de cul i o adecuado, es de g an in e és la mejo a del es ado isiológico del ma e ial inicial a p opaga . En es e sen ido Debe gh (1986) p opone pul e izaciones, baños o inyecciones con egulado es de c ecimien o o inme siones de la plan a mad e de la que se an a ob ene los explan os en soluciones con azuca es, sales mine ales o, egulado es. Dado que la mico iza modi ica el es ado nu i i o (Bolan e al., 1987; Ba ea, 1991), híd ico (Allen y Cunningham, 1983) y p oduce cambios en los ni eles de egulado es de c ecimien o (C a s y Mille , 1974; Allen e al, 1980; Ba ea y Azcón- Aguila , 1982; Bass y Kuipe , 1989; Dannebe g e al, 1992) de los ejidos de la plan a huésped, se conside a de in e és es udia el compo amien o de plan as ya mico izadas y uel as a es ablece in i o. Pa a ello se eligió el clon SOM-1 debido a su compo amien o an e el es és salino, buena espues a a la mico ización y al cul i o in i o que iene p esen ando a lo la go del p esen e abajo. 108 VII.2. MATERIALES Y METODOS Los pasos sucesi os del p oceso seguido en los ensayos ealizados, se indican en el esquema de la ig. 17. En p ime luga se p epa a on 24 explan os nodales de 1 cm de longi ud, de plan as del clon SOM-1 no mico izadas y mico izadas con Glomus dese icola (II Ag 8903), p oceden es de la p ueba de adap ación e e ida en el capí ulo VII. Es os explan os ue on desin ec ados median e inme sión en e anol 70% du an e 15 segundos y en hipoclo i o sódico al 12% (50 gl -1 de clo o ac i o) du an e 15 o 16 segundos, seguido de es la ados con agua es é il. A con inuación se semb a on indi idualmen e en ubos de 2l x 150 mm con 8 cc de medio MS (Mu ashige y Skoog, 1962) con 100 mgl -1 de inosi ol, sin egulado es de c ecimien o, en aga 0.6% a pH 5.7. Los ubos, una ez apados con apones de polip opileno y sellados con pa a ilm, se coloca on en una cáma a de cul i o a 25 ºC, 30 µEm -2 s -1 de iluminación y 16h. de o ope íodo, dis inguiendo en e aquéllos p oceden es de plan as no mico izadas que se señala on con la le a A y aquellos p oceden es de plan as mico izadas con Glomus dese icola (II Ag 8903) que se ma ca on con la le a B . T as 5 ciclos de epicado de 56 dias cada uno, se ob u ie on su icien es plan as A y B in i o pa a ealiza los expe imen os que se indican a con inuación. A pa i de es as plan as se oma on 24 yemas al aza de cada g upo (A y B) y se semb a on en medio MS igual al indicado an e io men e. T anscu idos 80 días, se ex aje on las plan as de los ubos y se de e minó su peso esco, peso seco, g ado de hid a ación de los ejidos según la o mula; {(P -Ps)/P }.100 y la composición mine al de sus aíces, allos y hojas como se indicó en el capí ulo V (pag. 42). O as 32 plan as de cada g upo se asplan a on a con enedo es de 1,5 l de capacidad con suelo, es e ilizado como se desc ibe en el capí ulo VI (pag. 67). La mi ad de los con enedo es de las plan as A y B se mico iza on con Glomus ascicula um o mándose en consecuencia cua o g upos de plan as del clon SOM-1: A (sin mico iza y de o igen no mico izado), A+G. . (con mico iza y de o igen no mico izado), B (sin mico iza y de o igen mico izado) y B+G. . (con mico iza y de o igen mico izado). Todos los con enedo es se coloca on en un in e nade o pa a su aclima ación como se desc ibió en el capí ulo VI (pag. 67) egándose con solución Hoagland al 20% cada 3 días. 115 Tabla 41. Biomasa exp esada como peso esco, peso seco e hid a ación de plan as de los ipos “A”(no mico izadas p e iamen e) y “B”(mico izadas p e iamen e con G. dese icola (II Ag 8903) del clon SOM-1 de mandioca as 56 días de cul i o in o. Clon O gano Tipo Peso esco Peso seco Hid a ación mg mg % A138,3 13,7 90,2 B117,8 12,2 89,4 A91,0 9,3 89,2 B123,0 13,2 89,3 ** ** A129,7 23,0 82,2 B161,3 26,8 83,6 ** ** A358,9 46,0 87,2 B402,2 52,2 87,1 SOM-1 Raíz Tallo Hoja Plan a Tes T pa a mues as independien es. Los as e íscos indican di e encias signi ica i as: * (P<0,05); ** (P<0,01) Tabla 42. Es ado nu i i o de la aiz, allo hojas y plan a comple a de los ipos “A”(no mico izadas p e iamen e) y “B”(mico izadas p e iamen e con G. dese icola (II Ag 8903) del clon SOM-1 de mandioca as 56 días de cul i o in o. Clon O gano Tipo N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Mn Zn A5,227 1,137 4,213 0,437 0,145 0,231 0,951 32 1364 372 320 B4,757 0,879 5,197 0,418 0,138 0,190 1,200 33 1370 376 144 * A6,567 1,103 3,730 0,903 0,110 0,899 0,983 28 138 93 174 B6,900 1,012 3,437 0,739 0,093 0,596 0,900 23 234 109 97 * * * A5,337 0,870 2,810 0,818 0,161 0,142 0,147 11 202 292 130 B6,097 0,780 2,890 0,725 0,165 0,080 0,206 23 182 288 126 ** A5,710 1,037 3,584 0,719 0,139 0,424 0,694 24 568 252 208 B5,918 0,890 3,841 0,627 0,132 0,289 0,769 27 595 258 123 * * SOM Raíz Tallo Hoja Plan a Composición mine al % ppm Tes -T. Los as e iscos indican di e encias signi ica i as ; * (P<0,05) y ** (P<0,01) en e plan as de ipo A y B. En consecuencia, exis ió una dis ibución de biomasa dis in a en e las plan as A y B con una p opo ción de peso esco pa e aé ea/peso esco aíz de 1,59 en las A y de 2,41 en las B, y de 2,35 y 3,28 espec i amen e pa a la misma co elación de peso seco. No obs an e, no hubo di e encias signi ica i as en la biomasa o al de ambas plan as, aunque las B pesa on algo más. En consecuencia, no se pudo asegu a que las plan as p e iamen e mico izadas (B) u iesen un mejo compo amien o in i o ya que la 116 simili ud en el desa ollo y la composición mine al de los g upos de plan as, pudo debe se a la g an in luencia del medio nu i i o sob e las ca ac e ís icas del ma e ial cul i ado. Como se indicó en el apa ado de ma e iales y mé odos, las plan as A y B ob enidas in i o se asplan a on a condiciones ex e nas sob e suelo es é il y sob e el mismo suelo con Glomus ascicula um. Se es ablecie on en consecuencia cua o g upos de plan as: A, A+G. ., B y B+G. . En la igu a 21 se p esen a un aspec o de un g upo de plan as de cada uno de es os g upos as 80 días de cul i o en in e nade o. En la abla 43 se indica, así mismo, el peso esco, peso seco y g ado de hid a ación de las aíces, allos, hojas y o al de las plan as de cada g upo. El peso esco y seco de las aíces, allos, hojas y en consecuencia del o al de las plan as A (sin mico iza y de o igen no mico izado) ue on signi ica i amen e meno es que los espec i os de las plan as A+G. .. Es deci , que al igual que se había indicado an e en es e capí ulo y en el capí ulo IV, la mico iza p odujo un e ec o al amen e posi i o en el desa ollo de la plan a del clon SOM-1. ig. 21. Plan as de los ipos “A” (no mico izadas p é iamen e) y “B” (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) del clon SOM-1 de mandioca, c eciendo du an e de 80 días en suelo sin mico iza (A y B) y mico izado con Glomus ascicula um (A+G. . y B + G. .). 117 En las plan as del g upo B (sin mico iza y de o igen mico izado) se p odujo una si uación simila al compa a su peso esco y seco con las del g upo B+G. . Sólo que en es os casos en un ni el de biomasa supe io . Es deci , el peso esco y seco de las aíces, allos y hojas de las plan as B ue on supe io es a los de plan as A, y los de las plan as B+G. . ambién supe io es a las de A+G. . En consecuencia, los explan os ob enidos de plan as mico izadas del clon SOM-1, as se cul i ados in i o y o ma nue as plan as (con una pa e aé ea más desa ollada que las de o igen no mico izado) y se asplan adas a condiciones de in e nade o, p oduje on mayo can idad de biomasa, que cuando las plan as asplan adas p ocedían de explan os omados de plan as no mico izadas del mismo clon SOM-1. Tabla 43. Peso esco, peso seco y g ado de hid a ación de plan as del ipo “A” (no mico izadas p é iamen e) y “B” (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) del clon SOM-1 de mandioca, c eciendo en in e nade o du an e 80 días en suelo no mico izado (sin G. .) y mico izado con Glomus ascicula um (con G. .). Clon O gano Tipo Mico iza Peso esco Peso seco Hid a ación mg mg % sin G. . 69 c 25 c 61 a con G. . 95 b 45 bc 53 ab sin G. . 113 b 54 b 52 ab con G. . 166 a 83 a 50 b ** ** * sin G. . 638 c 96 b 85 a con G. . 1133 ab 206 ab 83 ab sin G. . 951 b 202 ab 80 b con G. . 1688 a 317 a 82 ab ** ** * sin G. . 833 c 131 c 81 a con G. . 1964 ab 322 ab 83 a sin G. . 1293 bc 221 bc 82 a con G. . 2746 a 426 a 85 a ** ** sin G. . 1540 c 252 c 83 a con G. . 3192 ab 572 ab 82 a sin G. . 2357 bc 477 bc 80 a con G. . 4599 a 826 a 82 a ** ** SOM-1 Raíz Tallo Hojas Plan a A B A B A B A B Los as e íscos indican di e encias signi ica i as (* P<0,05 y ** P<0,01) en e plan as de los ipos A y B sin inocula con G. ascicula um según el es -T pa a mues as independien es. Le as di e en es en columna indican di e encias signi ica i as (P<0,01) según el es de Rango múl iple de Duncan. Exis ió, po consiguien e un mayo desa ollo de la plan a ob enida in i o y asplan ada a condiciones ex e nas cuando p o enían de ma e ial mico izado, que se demos ó an o cuando el asplan e se hizo a un sus a o ine e, y , más aún, cuando el sus a o es u o mico izado po Glomus ascicula um. 118 Es e hecho posi i o y del que no enemos cons ancia de habe sido indicado p e iamen e en la bibliog a ía, pudo es a elacionado con ca ac e ís icas del ma e ial inicial mico izado con Glomus dese icola (II Ag 8903). Tabla 44. Es ado nu i i o de aíz, allo, hoja y plan a de los ipos “A” (no mico izadas p é iamen e) y “B” (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) del clon SOM-1 de mandioca, c eciendo en in e nade o du an e 80 días, no mico izadas (sin G. .) y mico izadas con Glomus ascicula um (con G. .) Clon O gano Tipo Mico iza sin G. . 0,623 b 0,193 a 0,437 a 1,968 a 0,352 a 0,317 a 0,497 a con G. . 3,330 a 0,140 a 0,322 a 2,184 a 0,439 a 0,275 ab 0,080 b sin G. . 1,118 b 0,137 a 0,327 a 2,425 a 0,424 a 0,236 ab 0,153 b con G. . 1,365 b 0,177 a 0,359 a 2,220 a 0,406 a 0,159 b 0,263 ab ** * * * ** sin G. . 1,965 a 0,091 a 2,028 a 1,485 a 0,157 a 0,148 a 0,505 a con G. . 1,635 a 0,083 a 1,977 a 1,565 a 0,198 a 0,191 a 0,583 a sin G. . 1,783 a 0,065 a 1,940 a 1,402 a 0,155 a 0,273 a 0,583 a con G. . 1,213 a 0,071 a 1,575 a 1,223 a 0,147 a 0,139 a 0,450 a sin G. . 3,898 b 0,163 ab 1,987 a 2,285 ab 0,413 a 0,262 a 0,318 a con G. . 3,607 b 0,208 a 2,260 a 3,082 a 0,426 a 0,239 a 0,227 a sin G. . 4,658 a 0,121 b 1,863 a 2,110 c 0,390 a 0,237 a 0,248 a con G. . 3,347 b 0,203 a 2,070 a 2,588 b 0,387 a 0,226 a 0,168 a * sin G. . 2,162 a 0,149 a 1,484 a 1,913 a 0,307 a 0,242 a 0,440 a con G. . 2,829 a 0,144 a 1,590 a 2,282 a 0,349 a 0,232 a 0,309 a sin G. . 2,520 a 0,108 a 1,377 a 1,979 a 0,323 a 0,249 a 0,328 a con G. . 1,975 a 0,150 a 1,335 a 2,010 a 0,313 a 0,175 a 0,294 a * Clon O gano Tipo Mico iza sin G. . 36 a 3870 a 364 b 158 a con G. . 62 a 2195 b 404 b 71 b sin G. . 33 a 4577 a 598 a 116 ab con G. . 41 a 1440 b 257 b 54 b * sin G. . 17 ab 118 a 77 a 87 a con G. . 22 a 115 a 60 ab 36 a sin G. . 14 ab 153 a 78 a 60 a con G. . 8 b 87 a 42 b 22 a sin G. . 18 a 282 a 160 a 90 a con G. . 28 a 260 a 130 a 60 a sin G. . 16 a 278 a 129 a 68 a con G. . 29 a 290 a 112 a 61 a sin G. . 24 a 1423 a 200 a 112 a con G. . 36 a 778 a 186 a 54 b sin G. . 21 a 1669 a 268 a 81 ab con G. . 26 a 606 a 137 a 45 b Plan a A B SOM-1 Raíz A B Tallo A B Hojas A B Tallo A B Hojas SOM-1 Raíz A B A B Plan a A B Mn Zn ppm % N P K Ca Mg Na Cl Cu Fe Los as e íscos indican di e encias signi ica i as (* P<0,05 y ** P<0,01) en e plan as de los ipos A y B sin inocula con G. ascicula um según el es -T pa a mues as independien es. Le as di e en es en columna indican di e encias signi ica i as (P<0,01) según el es de Rango múl iple de Duncan. 119 An e io men e se indicó ( abla 42) que ambos g upos de plan as (A y B) as 65 días de cul i o in i o no ue on muy di e en es en sus espec i os es ados nu i i os. Algo pa ecido ocu ió as el asplan e y se cul i adas du an e días en condiciones de in e nade o. En e ec o, como se obse a en la abla 44, en gene al, ue on escasas las di e encias es adís icamen e signi ica i as obse adas en los con enidos de nu ien es espec i os con espec o al o igen o al a amien o úngico de las plan as. Las a iaciones pun uales exis en es no pudie on se elacionadas con ninguno de los dos ac o es an e io es y pudie on debe se a ci cuns ancias no conocidas de la p opia plan a o del expe imen o. En consecuencia, el mayo peso de las plan as del g upo B sob e A y las espec i as mico izadas B+G. sob e A+G. . no pudo elaciona se con di e encias elacionadas con un mejo es ado en la nu ición mine al de las plan as. En la igu a 22 se mues an las aices co espondien es de las plan as SOM-1 de los g upos A, A+G. ., B y B+G. . eñidas con azul ypán. En las aíces de las plan as A no se obse an es uc u as de ipo úngico eñidas como cab ía espe a al habe sido asplan adas a un sus a o p e iamen e desin ec ado. Po el con a io, en las aíces de las plan as A+G. . se ap ecian cla amen e es uc u as úngicas eñidas, que se co esponden con espo as de Glomus ascicula um emi iendo hi as que p og esan po el in e io del co ex de la aíz. Es a si uación es aco de con la p esencia en el sus a o de asplan e de dichos hongos MVA, como ya se había obse ado en el capí ulo VII. En las plan as B, en las que se espe aba una si uación idén ica a la de A, se obse a on es uc u as de ipo úngico eñidas po el azul ypán, que di e ían de las obse adas en las plan as del g upo A+G. . Po úl imo, en las plan as B+G. . se obse an espo as e hi as como en plan as A+G. . y o as es uc u as simila es a las de las plan as B. Las es uc u as úngicas que apa ecen en las plan as B y B+G. . y que no se co esponden con Glomus ascicula um y que no se obse an en plan as A, deben es a elacionadas con las plan as mad es o iginales y habe se ansmi ido ia explan o, ya que no pudie on o igina se ni du an e el p oceso asép ico de cul i o in i o, ni en el asplan e a suelo es e ilizado mico izando o no con Glomus ascicula um, como lo p ueban las plan as del g upo A y A+G. . en las que no apa ecen dichas es uc u as. En consecuencia, los ac o es que di e encian las plan as A y B y que pueden es a elacionados con la mayo p oducción de biomasa de las segundas son: - Mayo desa ollo de las plan as mad es B mico izadas con Glomus dese icola (II Ag 8903) en e a las A no mico izadas. Es deci un ma e ial 120 Fig. 22. Imágenes ob enidas en el mic oscopio de aíces de plan as A (no mico izada y de o igen no mico izado), A+G. . (mico izada y de o igen no mico izado) donde se obse an es uc u as úngicas ca ac e ís icas, B (no mico izada y de o igen mico izado) donde se ap ecian es uc u as úngicas y B+G. . (mico izada y de o igen mico izado) eñidas con azul ypan (100x) en donde, jun o a las espo as p opias de es a mico iza, se obse a una mayo can idad de hi as. 121 de pa ida di e en e, que no obs an e, no iene un cla o e lejo en la p opagación in i o sal o po un mayo desa ollo de la pa e aé ea. P esencia en las aíces de las plan as B y B+ G. . de es uc u as úngicas ansmi ida desde las plan as mad es mico izadas. Pa a comp oba es os esul ados, como se indicó en el apa ado de Ma e ial y Mé odos, se ealizó un segundo expe imen o con plan as del g upo A y B del clon SOM-1 ob enidas in i o, y en es e caso asplan adas a un sus a o es é il de a ena la ada. Como se obse a en las igu as 23 y 24 las plan as del g upo B alcanza on un mayo amaño y núme o de hojas que las del g upo A, lo que concue da con lo indicado en el expe imen o an e io . Además, cuando es as plan as se some ie on a iegos de ici a ios, las del g upo A mos a on más cla a y ápidamen e signos de es és híd ico. Así, apa eció lacidez en el allo po lo que en las o os las plan as del g upo A apa ecen apoyadas en el ondo, mien as que las del g upo B pe manecie on e guidas. Se obse ó clo osis se e as en las hojas e minales de las plan as A y un meno o nulo desa ollo de és as. Las aíces de las plan as A eñidas con azul ypán, al igual que se indicó en la p ueba an e io no mos a on es uc u as úngicas ( ig. 25a) mien as que las B p esen a on de nue o es uc u as colo eadas como hi as, espo as y es uc u as globosas asociadas ( ig. 25 b, c, d, e y ). También se obse a on di e encias en la es uc u a ana ómica de la aíz, allo y hojas de las plan as A y B, an o in i o ( ig. 26) como ex i o ( ig. 27). La aíz de plan as del g upo A in i o ( ig. 26 a) p esen a una epide mis, exode mis, pa enquima co ical laxo y con g andes espacios in e celula es y un cilínd o ascula e áme o donde se al e na xilema y loema. En es a imagen no se ap ecia endode mis ni pe iciclo como ocu e en la sección ans e sal de la aiz de la plan a del g upo B ( ig. 26 d) donde apa ece cla amen e una endode mis con eng osamien o de la pa ed (bandas de Caspa y) y un pe iciclo monoes a i icado indicando un mayo desa ollo de es a aíz. En el allo del g upo A ( ig. 26 b) se ap ecian la epide mis, pa énquima co ical seguido po el anillo ascula cons i uido po haces de loema, cambium ascula y xilema, a con inuación se p esen a el pa énquima medula . En plan as del g upo B ( ig. 26 e), as la epide mis se ap ecia una capa de colénquima que le con ie e mayo igidez, y en el pa énquima co ical se obse an unas es uc u as inme sas en él. 122 ig. 23. Plan as de los ipos “A” (no mico izadas p e iamen e) y “B” (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) del clon SOM-1 de mandioca c eciendo en cáma a de cul i o du an e 56 días. ig. 24. Plan as de los ipos “A” (no mico izadas p e iamen e) y “B” (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) del clon SOM-1 de mandioca c eciendo en cáma a de cul i o du an e 70 días. 123 ig.25. Imágenes ob enidas en el mic oscopio de aíces de plan as A (no mico izadas p é iamen e) (a) donde no se obse a on es uc u as eñidas con azul ypan (40x) y B (mico izadas p é iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) (b) 40x, (c) 100x, (d) 100x, (e) 100x y ( ) 400x, eñidas con azul ypan (100x) donde se pueden ap ecia hi as y es uc u as globosas que p esen an a inidad po es e colo an e. a. b. c. d. e. . Po lo an o ambién el allo de las plan as del g upo B p esen an un g ado de desa ollo mayo que las plan as A. Con espec o a las hojas, la p incipal di e encia en e ambos ipo de plan as adica en la o ganización de la misma ap eciándose en las hojas de plan as B ( ig. 26 ) un pa énquima en empalizada y o o esponjoso jun o con amplios espacios celula es, mien as que en plan as A ( ig. 26 c) se ap ecia en o ganización del mesó ilo la p esencia de amplios espacios in e celula es p opios de plan as cul i adas in i o. 124 ig. 26. Secciones ans e sales de aíz, allo y hoja de plan a de ipo A (no mico izadas p é iamen e (a, b y c espec i amen e) y de ipo B (mico izadas p e iamen e con G. dese icola (II Ag 8903)) (d, e y espec i amen e), p oceden es de cul i o in i o y eñidas con ucsina- e de luz (200x). En la imagen d se ap ecian hoquedades inme sas en el pa énquima que no se ap eian en la imagen a. Con espec o al allo, en la imagen e se obse an ambién unas es uc u as p óximas a la exode mis que no apa ecen en la imagen b. Po úl imo, en la imagen se puede obse a una o ganización la hoja ligé amen e dis in a a la obse ada en la imagen c. a d b e c 131 En cualquie caso, los explan os uninodales de los es clones de mandioca conside ados, ue un ma e ial bien di e enciado que se mul iplicó pe ec amen e en un solo cul i o y en ausencia de egulado es de c ecimien o en el medio nu i i o. Es o p opo cionó ma e ial su icien e pa a las dis in as p uebas a ealiza , con una al a ga an ía de es abilidad gené ica al e i ase la a iación somaclonal. El cul i o in i o de células ege ales en medio nu i i o salinizado con NaCl, ha sido u ilizado con ela i a ecuencia pa a la ob ención de plan as ole an es (Gangopadhyay e al., 1997; Basu e al., 1997). No obs an e, es e mé odo p esen a el p oblema de que muchas eces exis e una al a de co espondencia en e los mecanismos de ole ancia a la sal de la célula y los de la plan a comple a (Tal, 1994). Po ello, en el p esen e abajo se eligió un ma e ial ege al como el explan o nodal, mucho más di e enciado y en consecuencia con mayo es posibilidades de co elación en e la ole ancia in i o y en condiciones ex e nas. El cul i o in i o en medio salino de segmen os nodales de los es clones en conside ación, indicó que es e ipo de ma e ial no sopo ó concen aciones supe io es a 2,5 gl -1 de NaCl en el medio. Es deci , salinidades in e io es s las ole adas po o o explan os in i o como la id (T oncoso e al., 1999 a), u oli o (T oncoso e al., 1999 b), cuando en condiciones de campo, la mandioca puede se conside ada como ole an e. En consecuencia, el ma e ial in i o demos ó una ue e sensibilidad a la p esencia de sal (NaCl) en el medio. No obs an e, exis ió una g adación de compo amien o en e los es clones usados de o ma que se pudo es ablece una clasi icación de ole ancia ela i a en e ellos (SOM-1> 50> 05). El compo amien o de los es clones de mandioca cul i ados en condiciones de in e nade o y some idos a concen aciones c ecien es de NaCl disuel o en la solución nu i i a, de e minó una clasi icación po ole ancia igual a la indicada pa a el cul i o in i o, es deci SOM> 50 y 05. Exis ió en consecuencia una co elación en e la espues a ela i a de cada clon in i o y ex i o, aunque a dis in os ni eles de salinidad. Como se ha indicado, el ma e ial in i o p esen ó p oblemas an e concen aciones de NaCl supe io es a 2 gl -1 , mien as que en las condiciones de in e nade o en gene al las plan as sopo a on bien concen aciones de NaCl de 4 gl -1 , y el clon SOM-1 has a 8 gl -1 . Jun o a p o oca la mue e de algunas plan as y el descenso en el desa ollo y p oducción de biomasa en las plan as supe i ien es, el e ec o de la sal (NaCl) se 132 ca ac e izó po o igina disminuciones impo an es del g ado de hid a ación de los ejidos de la hoja, en especial en los clones menos ole an es, y acumulación de Na + y Cl - . Es deci , se p oduje on los e ec os (osmó ico y óxico) indicados en la bibliog a ía como ca ac e ís icas de la acción salina (Munns, 1993). La co elación en e los ni eles de Na + y Cl - en el medio y en la plan a, pe mi en pensa que los con enidos de es os iones en los ejidos del ege al son buenos indicado es pa a conoce la salinidad que en un momen o dado sopo a la mandioca. Indi a y Ramanujam (1982), abajando con plan as jó enes de 15 cul i a es de mandioca en condiciones de in e nade o ambién obse a on que concen aciones de 1500 ppm (1,5 gl -1 ) de NaCl no a ec a on el c ecimien o de dichas plan as. Po el con a io, Hawke y Smi h, (1982), aplicando soluciones de 50 mM (3 gl –1 ) de NaCl obse a on educciones del 50% en el peso esco de los ubé culos de las plan as de mandioca. De es os esul ados se deduce que en especial, el compo amien o del clon SOM-1 an e la sal de inido en es e abajo, deno a un g ado in e esan e de ole ancia como co esponde a una a iedad cul i ada desde hace muchos años en una zona á ido- salina del desie o de Somalia. La co elación en e el compo amien o in i o y ex i o de los clones de mandioca en conside ación, pues a de mani ies o en es e abajo po p ime a ez, ep esen a en p incipio un hallazgo de g an in e és, ya que as nue as comp obaciones, el cul i o in i o puede ep esen a una en aja impo an e de iempo, espacio y economía en los es udios de salinidad con la mandioca. La p esencia de mico iza Glomus dese icola (II Ag 8903) o Glomus ascicula um inc emen ó muy signi ica i amen e el desa ollo de los es clones de mandioca al se asplan ados desde in i o a condiciones de in e nade o, lo que demos ó el ca ác e de mico iza-dependien e que se a ibuye a la mandioca (Janos, 1980; Hab e y Byappanahalli, 1994). Exis en o os p eceden es en los que la mico iza a ec ó posi i amen e a la plan a de mandioca (Ca e e o e al., 1997 Fagbola, 1998). Jun o a se más desa olladas y posiblemen e in luenciadas po ello, las plan as de mandioca mico izadas ole a on mejo la sal que las no mico izadas, lo que es de g an in e és pa a la posible adap ación de es a especie a nue as zonas de cul i o con ca ác e salino. En es e sen ido, se debe des aca que con el binomio clon SOM-1-mico iza se log ó una ole ancia muy ele ada, y lo hace especialmen e in e esan e. 133 T abajos en los que se elaciona la ole ancia a la sal con la mico iza ue on ealizados po Azcón y El-A ash (1996) en al a a, Ca e e o e al., 1997) en mandioca o Copeman e al., (1996) y Al-Ka aki y Hammad, (2001) en oma e. Las causas de es a mejo ole ancia pa ecen es a elacionadas con un mao c ecimien o y adquisición de nu ien es (Al-Ka aki,2000l) y a unas mejo es elaciones híd icas (Gu, 1998) en plan as mico izadas en e a no mico izadas en ambien es salinos. O o aspec o muy in e esan e de la simbiosis hongo mico ícico-mandioca, conside ado po p ime a ez en es e abajo, ue el compo amien o in i o in i o y ex i o de ma e ial de mandioca p e iamen e mico izado. En e ec o, como se indicó an es, los segmen os nodales p oceden es de allos de plan as mico izadas, p oduje on in i o plan as con una biomasa simila a la de aquellos p oceden es de mandioca no mico izada, aunque con una elación pa e aé ea- aíz muy supe io . No obs an e, cuando se asplan a on a condiciones de in e nade o el desa ollo de las plan as de o igen mico izado ue muy supe io . Jun o con es e mayo desa ollo, las plan as de o igen mico izado mos a on una se ie de dis inciones ana ómicas an o in i o como ex i o, basadas undamen almen e en un mayo g ado de di e enciación de ejidos, en la obse ación es uc u as no iden i icadas po noso os en plan as de o igen mico izado y localizadas en el pa énquima co ical de allo y aíz, y la p esencia de es uc u as úngicas en su aíces. Dado el p oceso o almen e asép ico seguido en el cul i o in i o, la p esencia de es os hongos sólo pudo se debida a una ansmisión po el explan o inicial. Aunque no se ha podido clasi ica dichos hongos, sólo exis en dos posibilidades; o se a a de hongos que acompañan al inóculo de Glomus dese icola (Ag 8903) capaces de alcanza el sis ema ascula de la plan a pa a ins ala se en la pa e aé ea de la misma, o bien se a a del p opio G. dese icola cuyas hi as pod ían p og esa po el có ex hacia la pa e aé ea de la plan a dadas las ca ac e ís icas his ológicas que p esen an las plan as p oceden es de cul i o in i o e el momen o del asplan e. Po o a pa e mico ización de plan as cul i adas in i o en la ase de en aizamien o ya ha sido expe imen ada en a ias especies (Pons e al., 1983; Cha ez y Fe e a-Ce a o, 1990; Ma hu y Vyas, 1995). En cualquie caso, es impo an e de des aca que las plan as ob enidas in i o a pa i de explan os p oceden es de allos de plan as mico izadas se desa olla on más cuando se asplan a on a condiciones ex e nas que las equi alen es p o enien es de plan as no mico izadas y que ello pudo es a elacionado o con las mejo es condiciones 134 de las plan as de o igen, o con la p esencia de hongos en las p ime as, o con ambas a la ez. 135 X. CONCLUSIONES 1. Po el mé odo u ilizado en es e abajo, los es clones de mandioca conside ados, SOM-1, 05 y 50, espondie on muy bien a la p opagación in i o po medio de sagmen os nodales, incluso sin adición de egulado es de c ecimien o, o mando plan as comple as (desa ollo de la pa e aé ea y del sis ema adical) en una sóla ase de cul i o. Es o ep esen a un aho o de iempo, abajo y cos es sob e el sis ema adicional de mic op opagación de la mandioca, que se hace en dos ases; una pa a el desa ollo de la pa e aé ea y o a de en aizamien o. 2. Con enidos supe io es a 2 gl -1 de NaCl en el medio de cul i o, a ec a on nega i amen e la supe i encia y el desa ollo del ma e ial in i o de los es clones de mandioca, aunque se pudie on es ablece di e encias en e ellos. El clon SOM-1 ue el que sopo ó mejo el es és salino y el clon 05 ue el más sensible. Po el con a io, concen aciones más bajas de NaCl en el medio a o ecie on el desa ollo de la plan a de mandioca in i o. 3. Jun o a la incidencia sob e la supe i encia y el desa ollo del ma e ial de mandioca in i o, la p esencia de sal en el medio a ec ó nega i amen e el g ado de hid a ación de los ejidos de la hoja (más en los clones menos ole an es) y o iginó una ue e acumulación de sodio y clo o en la plan a. Es deci , se p oduje on los dos e ec os indicados en la bibliog a ía como esponsables de la acción nega i a de la sal. 4. La p esencia de sal (NaCl) en la solución nu i i a, dada a plan as de los es clones de mandioca cul i ados en con enedo es en cáma a de cul i o, ambién a ec ó su supe i encia, desa ollo, g ado de hid a ación olia y acumulación de sodio y clo o, y con el mismo o den de ole ancia en e clones (SOM-1> 50> 05) que el indicado in i o. 5. Con independencia del ni el de ole ancia en cada caso (in i o y ex i o), el compo amien o equi alen e an e la sal de los es clones de mandioca en ambas condiciones de cul i o a alan la posibilidad de uso de la écnica de cul i o in i o pa a e alua el compo amien o an e la sal (NaCl) del ma e ial de mandioca. Es e 136 hecho, pues o de mani ies o po p ime a ez en la bibliog a ía de es a especie, se conside a de g an in e és en los es udios sob e salinidad y mandioca. 6. La mico iza mandioca-Glomus ssp. a o eció muy signi ica i amen e el desa ollo de las plan as de los es clones de mandioca as el asplan e in i o-ex i o, lo que demos ó además el ca ác e mico izo-dependien e de es e géne o. 7. En conco dancia con el mejo desa ollo de las plan as, la p esencia de mico iza ambién aumen ó cla amen e la ole ancia a la sal (NaCl) de los es clones de mandioca. 8. Segmen os nodales p oceden es del allo de plan as mico izadas y no mico izadas, del clon SOM-1, o ma on in i o plan as semejan es aunque con una mayo elación pa e aé ea- aíz en las p ime as. Una ez es as plan as ue on asplan adas a condiciones ex e nas, las de o igen mico izado u ie on un mayo desa ollo que las de o igen no mico izado. 9. Jun o al mayo desa ollo, las plan as de o igen mico izado mos a on en sus aíces la p esencia de o maciones úngicas y modi icaciones ana ómicas que di ie en de lo obse ado en las plan as de o igen no mico izado. Las o maciones úngicas, aún no iden i icadas se ansmi en desde las plan as o iginales a a és del allo en el cul i o in i o y se elacionan con el mayo desa ollo de las plan as ob enidas. 10. La combinación de ole ancia a la sal del clon SOM-1 de mandioca, como co esponde a una plan a adap ada a las condiciones á ido-salinas del desie o de Somalia, su cul i o in i o en medio salino, y la acción posi i a de la mico iza con Glomus dese icola (II Ag 8903), ha dado luga a un ma e ial bas an e ole an e al es és salino, disponible pa a se ensayado en campo en aquellos paises donde la salinidad a ec a cla amen e al cul i o de la mandioca. 137 XI. BIBLIOGRAFIA Abbo L.K. y Robson A.D. 1984. The e ec o myco hizas on plan g ow h. En VA Myco hiza. Powell, C.Ll.,Bagya aj, D.J. (eds), CRC P es, Boca Ra on, Flo ida, pp113- 130. Adams P., Thomas J.C., Ve non D.M., Bohne H.J. y Jensen R.G. 1992. Dis inc cellula and o ganismic esponses o sal s ess. Plan Cell Physiol, . 33, 8: 1215-1223. 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