Diseño y síntesis de nuevos análogos del Aprepitant

13 DISEÑO Y SÍNTESIS DE NUEVOS ANÁLOGOS DEL APREPITANT ÁNGELA MORENO ORTIZ Universidad de Sevilla Facultad de Farmacia Departamento de Química Orgánica y Farmacéutica Grado en Farmacia Diseño y síntesis de nuevos análogos del Aprepitant Trabajo Fin de Grado Tipología del proyecto realizado: Experimental Ángela Moreno Ortiz Tutores: Dra. Rocío Recio Jiménez/ Dr. Lorenzo Gabriel Borrego Sánchez de la Cuesta Sevilla, junio 2018 Abreviaturas y acrónimos c: concentración d: doblete DAG: diaceton-D-glucosa dd: doble doblete dm: decímetro DMF: dimetilformamida EMAR: Espectro de Masas de Alta Resolución EPOC: Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica Equiv.: equivalentes g: gramos GESA: Grupo de Estereoquímica y Síntesis Asimétrica h: horas Hz: hertzios IL: interleuquina M: molar m: multiplete mg: miligramos MHz: megahertzios min: minutos mL: mililitros mm: milímetros mmol: milimoles nm: nanometros NKA: neuroquinina A NKB: neuroquinina B NK-1: neuroquinina-1 NK-2: neuroquinina-2 NK-3: neuroquinina-3 ppm: partes por millón RMN: Resonancia Magnética Nuclear s: singulete SNA: Sistema Nervioso Autónomo SNC: Sistema Nervioso Central SNP: Sistema Nervioso Periférico SP: sustancia P t: triplete t.a.: temperatura ambiente td: triple doblete TFG: Trabajo Fin de Grado THF: tetrahidrofurano TNF: Factor de Necrosis Tumoral M: micromolar UV: ultravioleta Resumen El receptor NK-1 es actualmente una diana terapéutica de gran relevancia debido a la amplia implicación de su ligando específico, la sustancia P, en diferentes procesos fisiopatológicos, entre los que cabe destacar el cáncer, la enfermedad de Parkinson, la migraña y la depresión, entre otros. A principios de los años 90 del siglo pasado se descubrió el primer antagonista no peptídico de los receptores NK-1 (CP-96345), lo que ha llevado a impulsar la investigación en este área, con el objetivo de identificar nuevos antagonistas de este receptor que sean selectivos y potentes. Actualmente, uno de los antagonistas de los receptores NK-1 más potentes comercializados es el Aprepitant (Emend®), un derivado morfolínico con tres centros quirales desarrollado por Merck, indicado en la emesis en terapia oncológica. Recientemente se ha demostrado que, bajo ciertas condiciones de concentración, el Aprepitant actúa como anticanceroso de amplio espectro. En este sentido, el Grupo de Investigación donde se ha desarrollado este Trabajo de Fin de Grado (TFG), cuenta con la metodología apropiada para la síntesis diastereoselectiva de nuevos análogos del Aprepitant a partir de materia prima de muy bajo coste, como son los hidratos de carbono. Al mismo tiempo, posee una amplia experiencia en la funcionalización de nanosistemas con moléculas de interés terapéutico. Por tanto, en este trabajo se presenta la síntesis de un sintón clave para la síntesis de nuevos análogos del Aprepitant con actividad antagonista de los receptores NK-1, que posee un grupo azida en su estructura, permitiendo así su unión posterior a nanosistemas y favoreciendo así, el efecto de multivalencia. Palabras clave: Antagonistas del receptor NK-1, sustancia P, Aprepitant, multivalencia, nanopartículas. ÍNDICE 1. Introducción 1 1.1 La Sustancia P 1 1.2 Multivalencia 8 2. Objetivos 11 3. Metodología 13 4. Resultados y discusión 15 4.1 Síntesis de nuevos análogos del Aprepitant 15 5. Conclusiones 19 6. Parte experimental 21 7. Bibliografía 25 Introducción 6 peso en ratones obesos, lo cual conlleva una mejora de la sensibilidad a la insulina (Karagiannides y Pothoulakis, 2009). Enfermedad inflamatoria intestinal (EII) y enfermedad de Crohn. Estudios recientes han demostrado que preadipocitos humanos mesentéricos y omentales contienen receptores NK-1 funcionales que están vinculados a las vías proinflamatorias, y que la SP aumenta directamente la expresión del receptor NK-1 y de la IL-1 en estas células de una manera NFB dependiente (Karagiannides et al., 2006). Estos resultados pueden ser clínicamente relevantes para la patogénesis de la EII y en particular de la enfermedad de Crohn, donde la obesidad mesentérica está directamente relacionada con el desarrollo del estado de la enfermedad. Cáncer. Se sabe que a través de la activación de su receptor NK-1, la SP regula funciones biológicas relacionadas con el cáncer, como la proliferación celular, la angiogénesis y la migración de las células tumorales para la invasión de otros órganos y metástasis (Palma, 2006). Los antagonistas del receptor NK-1 pueden inhibir específicamente la proliferación de células tumorales (provocando la muerte celular por apoptosis), la angiogénesis y la migración de las células tumorales. Resultan de especial interés los datos obtenidos recientemente que indican que la actividad anticancerosa de los antagonistas de los receptores NK-1 resulta ser de muy amplio espectro, permitiendo el tratamiento del melanoma humano, el neuroblastoma, el linfoma de Hodgkin humano, la leucemia linfoblástica, el rabdomiosarcoma humano, el linfoma de Burkit humano, el carcinoma de pulmón humano, el sarcoma humano de Edwing, el glioma humano, el osteosarcoma humano, gangliomas humanos malignos, el melanoma humano maligno invasivo, células metastásicas de melanoma humano y el cáncer de mama humano entre otros. Es importante destacar que, recientemente se ha demostrado que el receptor NK-1 es altamente sobre-expresado en un gran número de tumores agresivos, en particular de glioma, astrocitomas y glioblastomas, donde el nivel de expresión se correlaciona con el grado de malignidad (Hennig et al., 1995) (Singh et al., 2000) (Muñoz et al., 2010) (Palma y Maggi, 2000) (Muñoz et al., 2004) (Lai et al., 2005). De acuerdo con lo indicado hasta el momento, es indudable que el receptor NK-1 nos ofrece una excelente oportunidad como diana terapéutica para combatir una amplia gama de enfermedades de muy diversa etiología, sin embargo, a pesar de los esfuerzos de las compañías farmacéuticas en la identificación de nuevos antagonistas de los receptores NK-1, actualmente tan sólo existen dos antagonistas en el mercado, el Aprepitant (Emend®, Merck), Introducción 7 junto con su forma inyectable Fosaprepitant dimeglumina (Ivemend®, Merck) y el Rolapitant (Varubi®, Tesaro), indicados únicamente para la prevención de náuseas y vómitos inducidos por la quimioterapia (figura 3). Figura 3. Medicamentos comercializados como antagonista NK-1. Existen numerosos estudios que ponen de manifiesto que el Aprepitant, a concentraciones superiores a las indicadas para la emesis (del orden M), ejerce una importante actividad anticancerosa de amplio espectro (Muñoz, 2005). Desde el punto de vista estructural, el Aprepitant está formado por un núcleo de morfolina con dos sustituyentes en los carbonos de las posiciones 2 y 3, éstos son: un grupo alcóxido quiral, derivado del [bis(trifluorometil)fenil]etanol, y un grupo p-fluorofenilo. Además, posee un fragmento de metiltriazolona en el nitrógeno morfolino. Por ello, la síntesis del Aprepitant representa un gran reto ya que posee tres centros quirales, y de los 8 isómeros posibles tan sólo uno de ellos es el que presenta la actividad biológica deseada. Las aproximaciones desarrolladas hasta la fecha para la síntesis del Aprepitant constan de un gran número de etapas y transcurren con bajo rendimiento global del producto, hecho que se traduce en un elevado precio del medicamento (Zhao et al., 2002) (Brands et al., 2003). En este sentido, llevamos a cabo este TFG aprovechando la experiencia que el Grupo de Estereoquímica y Síntesis Asimétrica (GESA) posee en síntesis asimétrica, y actualmente viene desarrollando una línea de investigación encaminada a la síntesis de nuevos análogos del Aprepitant con actividad anticancerosa, a partir de materias primas de muy bajo coste, simplificando así la metodología de síntesis y abaratando costes. Introducción 8 1.2 Multivalencia El concepto de multivalencia nace del estudio de la interacción carbohidrato-proteína que tiene lugar en el organismo como consecuencia del gran número de funciones biológicas en las que se encuentran involucrados los carbohidratos, como son el reconocimiento celular, la regulación del crecimiento, la adhesión, la unión de hormonas, bacterias o virus y la metástasis de células cancerígenas, entre otras (Kobata, 1992). A pesar de la vital importancia de esta unión, la interacción entre ambas biomoléculas es muy débil, algo que la naturaleza resuelve con el uso de la multivalencia. Esto es, múltiples copias del carbohidrato unidas a múltiples copias de proteínas con múltiples sitios de reconocimiento en la superficie celular (Mammen et al., 1998). Este fenómeno produce una interacción muy superior a la que corresponde a la suma de las interacciones individuales y es conocido como “efecto cluster” o “efecto multivalente” (Cagnoni, 2013). Este incremento de la afinidad puede explicarse a través de dos mecanismos diferentes (figura 4) (Pohl y Kiessling, 1999): - Efecto estadístico: un compuesto multivalente provoca que existan altas concentraciones de ligando en el sitio de unión. - Efecto quelato: un compuesto multivalente conduce a redes entrecruzadas que desencadenan procesos biológicos específicos como consecuencia de las uniones entrecruzadas o con dos receptores adyacentes, o con un receptor multivalente. Figura 4. Efecto cluster (a) efecto estadístico, (b-d) efecto quelato (Bruce y Fraser, 2002). El concepto del efecto cluster, ha abierto nuevas posibilidades en las estrategias para el diseño de fármacos con una alta afinidad por el receptor, donde se incluye la funcionalización de Introducción 9 nanosistemas que permitan la presentación multivalente de los motivos de reconocimiento de un determinado compuesto con actividad biológica. En este sentido, una de las estrategias sintéticas más utilizadas para llevar a cabo esta funcionalización es la conocida como click chemistry. El concepto de click chemistry fue introducido por los profesores Kolb, Finn y Sharpless en 2001 en el campo del descubrimiento de fármacos (Kolb et al., 2001), como una serie de procesos que permiten la obtención de nuevos compuestos de interés biológico a partir de reactivos altamente energéticos. Para que una reacción química sea considerada dentro de la click chemistry, debe cumplir una serie de requisitos: i) la reacción debe ser modular y de amplio alcance, ii) tener un rendimiento químico muy alto, iii) generar subproductos y productos inocuos que puedan ser aislados por métodos no cromatográficos, iv) ser estereoespecífica (aunque no necesariamente enantioselectiva), v) deben ser reacciones fáciles de llevar a cabo desde el punto de vista experimental, con condiciones de reacción sencillas y reactivos accesibles y, iv) deben emplearse disolventes respetuosos con el medio ambiente, lo que casa con el concepto de green chemistry. De entre toda la colección de reacciones que cumplen los criterios de la click chemistry, la reacción de cicloadición [3+2] de compuestos 1,3-dipolares (cicloadición de Huisgen) con sustratos que contienen enlaces C-C triples (Huisgen, 1963) (figura 5) es una de las más utilizadas hoy día. Figura 5. Cicloadición 1,3-dipolar entre azidas y alquinos terminales. El grupo de investigación donde se ha desarrollado este TFG, dispone de una amplia experiencia en la síntesis estereoselectiva de nuevas moléculas con actividad terapéutica, en general, entre las que se incluyen antagonistas de los receptores NK-1 en particular (Recio et al., 2017) (Khiar et al, 2016) y en la funcionalización de nanosistemas y su utilización en terapéutica (Khiar y Wellinger, 2017) (Cid et al., 2016) (Pernia et al., 2015) (Assali et al., 2013), siendo actualmente una de las líneas de investigación del GESA, precisamente, la funcionalización de nanopartículas de interés para el diagnóstico e interés terapéutico con los antagonistas NK-1 y el estudio de su actividad biológica tanto in vitro como in vivo. Teniendo Introducción 10 en cuenta además que el receptor NK-1 es sobreexpesado por las células tumorales, estos nanosistemas funcionalizados también pueden ser utilizados como vehículos para que otros fármacos anticancerosos puedan ser dirigidos a su diana terapéutica. Objetivos 11 2. Objetivos Teniendo en cuenta los antecedentes comentados, en este Trabajo nos planteamos un objetivo básico y fundamental: 2.1. Desarrollo de una metodología de síntesis de análogos del Aprepitant derivados de hidratos de carbono adecuadamente funcionalizados para su posterior bioconjugación con nanopartículas. Basándonos en la química desarrollada en el GESA y teniendo en cuenta que una de las reacciones más utilizadas en la click chemistry para la bioconjugación de nanopartículas es la cicloadición de Huisgen, nos propusimos el desarrollo de una metodología para la síntesis de ambos anómeros de un análogo del Aprepitant, utilizando D-glucosa como sustrato quiral de partida, funcionalizados con un grupo azida (1 y 2) (figura 6). Estos derivados, mediante una simple reducción, son precursores directos de los correspondientes aminoderivados análogos del Aprepitant (3 y 4) (figura 6). Figura 6. Aminoderivados de la D-glucosa. Teniendo en cuenta el esquema retrosintético de los análogos 1 y 2, representado en el esquema 1, en este Trabajo nos hemos marcado como objetivo específico, la síntesis del sintón 7, con la estereoquímica y funcionalización adecuadas, utilizando Diaceton-D-glucosa 8 como sustancia quiral de partida. Objetivos 12 Esquema 1. Análisis retrosintético de los análogos del Aprepitant, 1 y 2. Metodología 13 3. Metodología Para alcanzar el objetivo indicado en el apartado anterior, nos centraremos en una aproximación sintética que permita acceder a la molécula objetivo con un coste sintético moderado, teniendo en cuenta, además, que los resultados previos obtenidos por el GESA avalan la viabilidad de las metodologías sintéticas propuestas y que, ofrecen perspectivas muy prometedoras en lo que a datos de actividad se refiere. Para solventar el problema que supone el elevado coste y la complejidad de la síntesis del Aprepitant, comentadas en el apartado 1.1, en este TFG se ha aplicado una síntesis novedosa que permite acceder a nuevos análogos del Aprepitant utilizando carbohidratos como productos de partida. Es decir, de las diferentes aproximaciones que existen para acceder a compuestos diastereoméricamente puros, hemos utilizado el denominado chiral pool. Este método consiste en realizar transformaciones químicas de compuestos quirales disponibles en la naturaleza y de bajo coste tales como carbohidratos, aminoácidos, terpenos, o ácido láctico y tartárico para obtener el compuesto objetivo con la quiralidad deseada (Thall, 1996). Concretamente, en este TFG se ha utilizado la diacetón-D-glucosa (DAG) (1,63€/g) como plataforma quiral de partida de los nuevos análogos del Aprepitant. La ruta sintética planteada para llevar a cabo la síntesis de nuestra molécula objetivo se encuentra representada en el esquema 2. Conclusiones 19 5. Conclusiones Se ha llevado a cabo, de forma fácil y efectiva, la síntesis de un sintón clave para la preparación de 4 nuevos análogos del Aprepitant en tan sólo 4 etapas. Para llevar a cabo la síntesis de la molécula objetivo se ha utilizado como sustrato quiral de partida la diacetón-D-glucosa, una materia prima barata, renovable y fácilmente asequible. La reacción de activación del grupo hidroxilo de la DAG en posición 3 y su posterior sustitución nucleofílica transcurre de forma estereoselectiva con inversión de la configuración y resulta ser una etapa clave para la introducción del grupo azida en dicha posición, imprescindible para la posterior bioconjugación de los análogos a diferentes nanopartículas. La molécula objetivo presenta la funcionalidad adecuada para obtener en tres etapas, mediante transformaciones químicas sencillas, los análogos deseados del Aprepitant, con potencial actividad anticancerosa como antagonista de los receptores NK-1. Parte experimental 21 6. Parte experimental Todas las reacciones se han llevado a cabo bajo atmósfera de argón, usando material de vidrio seco, y disolventes recientemente destilados y secos. El seguimiento de las reacciones se efectúa por cromatografía en capa fina empleando cromatofolios de gel de sílice tipo 60F25H, con espesor de capa de 0,2 mm (Merck). El análisis de las placas se lleva a cabo en una lámpara de UV de 254/365 nm y mediante revelado con ácido fosfomolíbdico. La purificación y separación de los productos de las reacciones se realiza mediante cromatografía en columna bajo presión (cromatografía flash), utilizando como fase estacionaria gel de sílice de tipo 60, con un tamaño de partícula de 35-70 micras. En cada proceso se indica el eluyente utilizado y las proporciones en volumen-volumen. Las rotaciones ópticas [α]20D se han determinado a 20°C en un polarímetro Perkin-Elmer 241MC, empleando luz amarilla de sodio (λ=589 nm) y celdas de 1 dm de longitud. En cada caso se indica el disolvente utilizado, así como la concentración (c en g/100 mL). Los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) se han realizado, en general, a temperatura ambiente y en CDCl3, los desplazamientos químicos (ppm) se han referido al disolvente utilizado. Los espectros de 1H-RMN y 13C-RMN se registran en los aparatos Bruker AMX500 y Bruker Advance DRX500, en cada caso se indican los desplazamientos químicos en la escala J (Hz). Los espectros de masas de alta resolución (EMAR) se han realizado por el servicio de Espectrometría de Masas de la Universidad de Sevilla en un espectrómetro Kratos MS-80-RFA y en un espectrómetro de masas Micromass modelo AutoSpec. Parte experimental 22 3-Azido-3-desoxi-1,2,4,6-di-O-isopropiliden-α-D-alofuranosa, 9. Sobre una disolución de DAG 8 (1 g, 3,8 mmol) en una mezcla de diclorometano/piridina (40 mL) en proporción 19:1 como disolvente, a 0°C se añade gota a gota anhídrido tríflico (0,69 mL, 4,2 mmol). Tras un tiempo de reacción de 1 hora, se añade una disolución acuosa de HCl al 10%. La fase acuosa se extrae con diclorometano (3x30 mL) y las fases orgánicas reunidas se secan con sulfato de sodio anhidro y se evaporan a presión reducida. El sólido obtenido se disuelve en DMF anhidra (100 mL) y se adiciona azida de sodio (1,25 g, 19,2 mmol) a 0°C. La reacción se mantiene con agitación durante 24 horas a t.a. A continuación, se adiciona agua y se extrae con diclorometano (3x30 mL). La fase orgánica se lava con una disolución saturada de NaCl (20 mL), se seca con sulfato de sodio anhidro, y se evapora a presión reducida. El crudo de reacción se purifica mediante cromatografía en columna usando AcOEt/Hexano en proporción 1:10 como eluyente. Se obtiene 9 (506,8 mg, 1,78 mmol) como un sirupo incoloro con un rendimiento del 46%. [α]20 D: +68,9 (c 1.0, CHCl3) 1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ 5,79 (d, J = 3,5Hz, 1H), 4,74-4,72 (m, 1H), 4,21-4,17 (m, 1H), 4,15- 4,12 (m, 1H), 4,04-3,98 (m, 2H), 3,52 (dd, J1 = 4,8 Hz, J2 = 9,0 Hz, 1H), 1,58 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,38 (s, 3H), 1,36 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (125 MHz, CDCl3): δ 113,4, 110,3, 104,1, 80,8, 78,3, 76,0, 66,9, 62,8, 26,7, 26,6, 26,4, 25,2 ppm. EMAR: calculado para C12H19O5N3Na: [M+Na]+ 308,1217; encontrado 308,1217 (0,0341 ppm). 3-Desoxi-1,2:5,6-bis-O-(1-metiletiliden) -D-eritro-hex-3-enofuranosa, 12. Se obtiene como subproducto de la reacción anterior como un sólido blanco de bajo punto de fusión (332,5 mg, 1.37 mmol) con un rendimiento del 36%. 1H-RMN (300 MHz, CDCl3): δ 6,07 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,30-5,27 (m, 1H), 4,60-4,55 (m, 1H), 4,04 (fragmento AB de un sistema ABX, ∆ν = 0,18 ppm, JAX = 5,8 Hz, JBX = 6,8 Hz, JAB = 8,4 Hz, 2H), 1,46 (s, 6H), 1,43 (s, 3H), 1,38 (s, 3H) ppm. EMAR: calculado para C12H18O5Na: [M+Na]+ 265,1046; encontrado 265,1049 (1,1509 ppm). Parte experimental 23 3-Azido-3-desoxi-1,2,4,6-tetra-O-acetil-D-alopiranosa, 10. A un matraz que contiene 9 (0,2 g, 0,7 mmol) bajo atmósfera de argón se añade una disolución de ácido trifluoroacético al 90% en agua (1,83 mL, 23,8 mmol) y se deja en agitación 24 horas. Transcurrido este tiempo se evapora el disolvente. El crudo obtenido se disuelve en piridina seca (5,5 mL, 68,0 mmol) y se adiciona, a 0°C, anhídrido acético gota a gota (3,7 mL, 39,3 mmol). La reacción se mantiene con agitación a t.a. durante 24 horas. Posteriormente, se evapora el disolvente a presión reducida. El crudo de reacción se purifica mediante cromatografía en columna usando AcOEt/Hexano en proporción 1:4 como eluyente. Se obtiene 10 (105 mg, 0,3 mmol) como un sirupo incoloro con un rendimiento del 40%. 1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ 6,22 (d, J = 3,9 Hz, 0,1H), 5,12-5,11 (m, 0,2H), 5,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,92 (td, J1 = 3,2 Hz, J2 = 10,2 Hz, 2H), 4,44-4,43 (m, 1,2H), 4,25 (dd, J1 = 4,3 Hz, J2 = 12.3 Hz, 1H), 4,15-4,09 (m, 2,3H), 2,14 (s, 0,3H), 2,10 (s, 0,3H), 2,09 (s, 6H), 2,08 (s, 4H), 2,06 (s, 0,3H), 2,05 (s, 0,3H), 2,03 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (125 MHz, CDCl3): δ 170,6, 169,4, 169,4, 169,2, 169,3, 169,0, 89,8, 83,4, 80,0, 75,9, 71,9, 70,9, 69,3, 67,7, 66,9, 66,5, 65,9, 61,9, 61,7, 60,8, 58,4, 21,0, 20,9, 20,7, 20,7, 20,6, 20,6, 20,5, 20,4 ppm. EMAR: calculado para C14H19O9N3Na: [M+Na]+ 396,1014; encontrado 396,1009 (-1,2193 ppm). Fenil 3-azido-3-desoxi-2,4,6-tri-O-acetil-1-tio-D-alopiranósido, 11. Sobre una disolución de 10 (1,6 g, 4,2 mmol) en CH2Cl2 anhidro (10 mL) a 0°C se adiciona gota a gota trifluoruro de boro eterato (2,9 mL, 16,9 mmol). Tras 15 min. De agitación a t.a. se añade tiofenol (0,5 mL, 4,4 mmol). La reacción se mantiene bajo agitación a t.a. durante una noche. A continuación, se adiciona una disolución acuosa saturada de NaHCO3 (10 mL), se separan las dos fases y se extrae la acuosa con CH2Cl2 (3 x 20 mL). Los extractos orgánicos reunidos, se lavan con una disolución saturada de NaCl (10 mL). La fase orgánica se seca con Na2SO4 anhidro y se evapora el disolvente a presión reducida. El residuo obtenido se purifica mediante cromatografía en columna utilizando AcOEt/Hexano en proporción 1:5 como eluyente. Se obtiene el producto 11 (1,3 g, 3 mmol) como un sirupo amarillo con un rendimiento del 71%. Parte experimental 24 1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ 7,50-7,45 (m, 4H), 7,32-7,27 (m, 7H), 5,70 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,18 (dd, J1 = 3,4 Hz, J2 = 6,0 Hz, 1H), 4,98 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,92 (dd, J1 = 3,5 Hz, J2 = 10,3 Hz, 1H), 4,86 (dd, J1 = 3,3 Hz, J2 = 10,1 Hz, 1H), 4,83 (dd, J1 = 3,4 Hz, J2 = 10,0 Hz, 1H), 4,67-4,63 (m, 1H), 4,41-4,36 (m, 3H), 4,22-4,15 (m, 3H), 4,06-4,02 (m, 1H), 2,20 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,06 (s, 3H) ppm. 13C-RMN (125 MHz, CDCl3): δ 170,8, 169,7, 169,6, 169,5, 169,2, 135,8, 133,3, 131,6, 129,2, 129,1, 128,5, 127,7, 85,8, 82,6, 72,6, 69,3, 68,8, 67,4, 67,1, 64,8, 62,5, 62,3, 61,6, 59,9, 53,6, 20,9, 20,9, 20,8, 20,8, 20,7 ppm. EMAR: calculado para C18H21O7N3NaS: [M+Na]+ 446,0992; encontrado 446,0986 (-1,3395 ppm). Fenil 3-azido-3-desoxi-1-tio-D-alopiranósido, 7. Sobre una disolución de 11 (0,2 g, 0,5 mmol) en metanol (5 mL) se adiciona, a 0°C, otra disolución de metóxido de sodio 1M (0,19 mL, 0,19 mmol). Tras agitar durante 30 min, la reacción se neutraliza con resina ácida y se filtra obteniéndose el producto 7 (0,1 g, 0,31 mmol) como un sólido blanco con un rendimiento cuantitativo con un alto grado de pureza. 1H-RMN (500 MHz, CDCl3): δ 7,52-7,49 (m, 4H), 7,34-7,29 (m, 6H), 5,43 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,29 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 4,19 (t, J = 3,5 Hz, 1H), 4,11-4,07 (m, 2H), 3,92-3,88 (m, 3H), 3,86 (dd, J = 3,7 y 9,8 Hz, 1H), 3,74 (fragmento AB de un sistema ABX, ∆ν = 0,08 ppm, JAX = 4,7 Hz, JBX = 3,5 Hz, JAB = 9,7 Hz, 2H), 3,62-3,58 (m, 1H), 3,56 (dd, J1 = 3,4 Hz, J2 = 9,7 Hz, 1H) ppm. 13C-RMN (125 MHz, CDCl3): δ 136,1, 133,0, 131,9, 131,3, 129,4, 129,3, 128,6, 128,0, 91,3, 85,7, 69,9, 69,1, 68,7, 67,1, 66,9, 65,7, 65,4, 62,6, 62,3 ppm. EMAR: calculado para C12H15N3O4S: [M+Na]+ 320,0675; encontrado 320,0674 (-0,4939 ppm). Bibliografía 25 7. Bibliografía - Aliakbari J, Sreedharan SP, Turck CW, Goetzl E. 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