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Trabajo Fin de Grado (TFG) GRADO EN QUÍMICA Grupo Cristales Líquidos y Polímeros Dpto. Química Orgánica Universidad de Zaragoza Curso 2013/2014 Laura Labarta Pueyo Director: Dr. Luis T. Oriol Langa  Título del Trabajo Fin de Grado en Química: “SÍNTESIS DE COPOLÍMEROS SUPRAMOLECULARES ANFÍFILOS Y ESTUDIO DE FORMACIÓN DE VESÍCULAS POLIMÉRICAS EN MEDIOS ACUOSOS” Estudiante: LAURA LABARTA PUEYO Departamento que realizó la propuesta: Departamento de Química Orgánica D. Luis T. Oriol Langa, Profesor Titular del Departamento de Química Orgánica y DIRECTOR del TFG realizado por Dña. Laura Labarta Pueyo, HACE CONSTAR Que este trabajo ha sido realizado en laboratorios del Departamento de Química Orgánica de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Zaragoza y del Instituto de Ciencia de Materiales de Aragón (Universidad de Zaragoza-CSIC) y que cumple las condiciones exigidas para su presentación como Trabajo Fin de Grado en Química. En Zaragoza a 23 de junio de 2014 Fdo. Luis T. Oriol Langa  Este trabajo ha sido financiado por el proyecto MAT2011-27978-C02-01 y el Gobierno de Aragón (Grupo Cristales Líquidos y PolímerosE04). Se agradece especialmente la colaboración del Servicio General de Apoyo a la Investigación-SAI, Universidad de Zaragoza, los diferentes servicios utilizados del CEQMA (Universidad de Zaragoza-CSIC).  RESUMEN: “SÍNTESIS DE COPOLÍMEROS SUPRAMOLECULARES ANFÍFILOS Y ESTUDIO DE FORMACIÓN DE VESÍCULAS POLIMÉRICAS EN MEDIOS ACUOSOS”. El azobenceno es uno de los compuestos orgánicos más estudiados en la preparación de materiales que responden a la luz debido a su fotoisomerización reversible trans-cis-trans. Numerosos homo y copolímeros con azobenceno en la cadena lateral han sido aplicados al almacenamiento holográfico de información, la preparación de actuadores fotomecánicos o, más recientemente, preparación de nanopartículas poliméricas fotoestimulables a partir de copolímeros bloque. La mayoría de los polímeros descritos tienen estructura covalente. Partiendo de estos resultados se planteó obtener copolímeros bloque utilizando principios de la Química Supramolecular. Los objetivos de este trabajo han sido:  Síntesis y caracterización de copolímeros bloque supramoleculares anfífilos que contiene unidades de 2,6-diacilaminopiridina capaces de unirse vía enlaces de hidrógeno con azocompuestos y cadenas hidrocarbonadas que poseen grupos timina terminales. Fig. 1 Copolímeros bloque supramoleculares estudiados.  Autoensamblaje en agua de los copolímeros bloque supramoleculares anfífilos. De acuerdo a estos objetivos, se ha preparado un monómero metacrílico que contiene unidades de 2,6diacilaminopiridina. Este monómero fue polimerizado de forma controlada, vía RAFT, utilizando un agente de transferencia de cadena que contiene un bloque de poli(etilenglicol), para obtener un copolímero bloque anfífilo. Por otra parte se prepararon dos derivados de timina (Figura 1) que pueden enlazarse a través de un triple enlace de hidrógeno a las unidades de 2,6-diacilaminopiridina para dar copolímeros supramoleculares con una composición variable de los grupos laterales. Todos los intermedios, precursores y copolímeros fueron caracterizados por técnicas espectroscópicas y estudiadas sus propiedades térmicas. Una vez obtenidos los copolímeros supramoleculares, se procedió al estudio de su agregación en agua. Se optimizó el método de preparación y se han obtenido nanopartículas poliméricas homogéneas de 40 nm que pueden ser empleadas como nanotransportadores, con respuesta a la luz, para el encapsulado y liberación controlada de moléculas hidrófobas. Bloque hidrófilo Bloque hidrófobo Enlaces de hidrógeno  ABSTRACT: "SUPRAMOLECULAR AMPHIPHILIC COPOLYMERS SYNTHESIS AND STUDY OF POLYMER VESICLES FORMATION IN AQUEOUS MEDIA". Azobenzene is one of the most studied organic compounds in the preparation of photoresponsive materials due to its reversible photoisomerization trans-cis-trans. Manyfold homo and copolymers with azobenzene in the side chain have been applied to holographic optical storage, the preparation of photomechanical actuators or, more recently, the preparation of photoresponsive polymeric nanoparticles from block copolymers. Most of the polymers described have a covalent structure. Taking into account these results, it was proposed to obtain block copolymers using the principles of Supramolecular Chemistry. The aims of this work were:  The synthesis and characterization of amphiphilic supramolecular block copolymers containing units of 2.6-diacylaminopiridine capable of binding, via hydrogen bonds, azobenzene and hydrocarbonated compounds having thymine terminal groups. Fig.1 Supramolecular block copolymers studied.  Self-assembly of amphiphilic supramolecular block copolymers in aqueous solutions. According to these objectives, a methacrylic monomer containing 2.6-diacylaminopiridine units was synthesized. This monomer was polymerized by controlled RAFT polymerization, and using a chain transfer agent containing a poly(ethyleneglycol) block, in order to obtain an amphiphilic block copolymer. Moreover, two thymine derivatives were synthesized, (Figure 1) which can be linked through a triple hydrogen bond to the 2.6diacylaminopyridine units to give supramolecular copolymers having a variable composition of the side groups. All intermediates, precursors and copolymers were characterized by spectroscopic techniques and their thermal properties were also studied. Once obtained the supramolecular copolymers, self-assembly in aqueous solution was studied. The preparation method was optimized and uniform polymeric nanoparticles with 40 nm diameter were obtained. These nanoparticles can be employed as nanocarriers, having response to light, for the encapsulation and controlled release of hydrophobic molecules. Hydrophilic block Hydrophobic block Hydrogen bonds Introducción 4 cambio en la forma geométrica de la molécula y en su polaridad. El retorno al isómero trans puede inducirse también por luz o por temperatura (Figura 1.9). Ambos isómeros tienen diferente espectro de absorción de ahí su carácter fotocrómico. La longitud de onda a la cual isomeriza depende de la estructura del azobenceno. Normalmente presentan una absorción poco intensa n-π* en el visible, y otra mucho más intensa π-π* en la región UV. 2 , 3 Fig 1.9.a) Isomerización del azobenceno. b) Espectro UV típico de los dos isómeros de azobencenos. La foto-isomerización permite la reorientación molecular si se irradia con luz linealmente polarizada. La probabilidad de isomerización es proporcional a cos2α, siendo α el ángulo entre el vector de polarización de la luz y el momento de transición que es paralelo al eje largo de la molécula de azobenceno. Por lo tanto, solo los azobencenos con un componente paralelo a la dirección de polarización de la luz serán excitados. Las moléculas orientadas en el plano perpendicular tendrán probabilidad nula de isomerizar. Tras diversos ciclos de isomerización trans-cis-trans (la vuelta a trans no tiene por qué ser en la misma orientación) las unidades de azobenceno se orientarán preferentemente en ese plano perpendicular ya que no pueden seguir isomerizando. Como consecuencia se induce orientación y anisotropía en la zona irradiada (Figura 1.10). 2, 4 Esta es la base de la gran mayoría de aplicaciones descritas para los azobencenos como materiales. Fig 1.10. Distribución inicial aleatoria de un compuesto con unidades de azobenceno y generación de anisotropía fotoinducida tras sucesivas isomerizaciones trans-cis-trans. (E: campo eléctrico luz polariza lineal) 1.3.2. Tipos de polímeros con azobenceno. Existe una amplia variedad de polímeros que contienen azobenceno y su diseño molecular depende de la incorporación del cromóforo en la estructura polimérica. De acuerdo a la Figura 1.11, el azobenceno se puede encontrar: (a) disperso físicamente en una matriz polimérica, (b) formando parte de la estructura de la cadena principal, o bien (c) unidos como grupos de la cadena lateral. 2 E. Blasco, Tesis Doctoral, Facultad de Ciencias, Universidad de Zaragoza, Julio 2013 3 M. Ribagorda, E. Merino, An. Quím. 2009, 105, 290−299 4 S. Hvilsted, C. Sánchez, R. Alcalá, J. Mater. Chem. 2009, 19, 6641-6648 l1360 nm λ2> 420 nm / Δ μ= 0.0 D μ= 3.0 D 300 400 500 trans cis p-p* n-p* A a) b) E Introducción 5 Fig 1.11. Incorporación del azobenceno a materiales poliméricos: a) sistema huésped-anfitrión, (b) formando parte de la cadena principal, (c) como parte de la cadena lateral. (Ref. 5) Además, también es interesante encontrar un equilibrio entre la inclusión de estos azobencenos (para que cumplan su función) con la presencia de la mínima cantidad de compuesto azoico. Esto es así porque en aplicaciones tales como la holografía de volumen se requieren películas de gran espesor y por lo tanto no pueden tener una elevada composición de azobenceno (debido a su elevada absorción). Para disminuir la cantidad de compuesto azoico se puede polimerizar en presencia de otros monómeros o preparar copolímeros bloque que combinen un bloque con azobenceno con otro bloque sin estos grupos. 5 1.3.3. Aplicaciones. Son muy diversas las aplicaciones descritas para los azopolímeros. Entre ellas cabe destacar el almacenamiento óptico de información, que ha permitido desarrollar materiales para aplicación en holografía de volumen4 o su función como actuadores fotomecánicos, es decir, el empleo de películas o dispositivos de azobenceno que debido a la fotoisomerización (y cambio geométrico y orientacional asociado) son capaces de moverse de manera selectiva al ser irradiados. 6 En el departamento de Química Orgánica de la Universidad de Zaragoza se han preparado diferentes polímeros para holografía de volumen, principalmente basados en copolímeros bloque. Sin embargo cuando estos copolímeros bloque son anfífilos (compuestos de una parte hidrófila y otra hidrófoba) surgen nuevas posibilidades que han sido tema de investigación en este departamento en los últimos años. 1.3.3.1. Autoensamblados poliméricos. La isomerización fotoinducida de los azobencenos puede utilizarse para provocar cambios en autoensamblados macromoleculares dispersados en un medio líquido. Cuando se introduce en agua un copolímero bloque anfífilo sus partes hidrófobas tienden a interactuar entre sí para minimizar el contacto con el agua, desfavorecido desde el punto de vista entálpico, mientras que las hidrófilas quedan solvatadas por moléculas de agua. Este autoensamblado se traduce en diversos tipos de micelas o vesículas. Las micelas poliméricas consisten en un núcleo formado por la parte hidrófoba y una corona formada por la parte hidrófila. Si se consigue encapsular en el núcleo moléculas hidrófobas (p. ej. medicamentos), las micelas pueden usarse como transportadoras de sustancias con concentraciones que pueden superar su valor de solubilidad en agua. Por otra parte, las vesículas poliméricas contienen un volumen interno encapsulado por una membrana con estructura bicapa. Las vesículas tienen particular interés por su interior hidrófilo y su robusta membrana hidrófoba lo que le permite encapsular tanto moléculas hidrófobas (dentro de la membrana) como hidrófilas (en el interior), tal y como se muestra esquemáticamente en la Figura 1.12. 5 E. Blasco, M. Piñol, C. Berges, C. Sánchez-Somolinos, L. Oriol “Smart Polymers for Optical Data Storage” en Smart Polymers (Ed. M.R. Aguilar, J. San Román), 2014 Woodhead Pubs., Cap. 16, 510-548 6 T. Ikeda, T. Ube, Materials Today 2011, 14, 480-487 a) b) c) Introducción 6 Fig 1.12. Ensamblados en forma de micelas y vesículas a partir de moléculas anfífilas y disposición de moléculas encapsuladas. El tamaño y la forma de estos autoensamblados pueden ser modulados controlando la relación hidrófobo/hidrófilo del copolímero bloque. Por ejemplo, en el Dpto. de Química Orgánica de UNIZAR se han preparado copolímeros bloque dendrítico-lineal que pueden formar nanofibras, micelas y vesículas, según la composición (Figura 1.13). 7 Inicialmente se sintetizaron copolímeros bloque anfífilos dendrítico-lineales derivados del polietilenglicol (PEG) con dendrones que tienen unidades de 4-cianoazobenceno unidas a la periferia, lo que a priori les confiere respuesta a la luz. Se conoce como dendrón a un polímero con ramificaciones regulares y que ramifica a partir de un origen monofuncional. Si bien las vesículas formadas por ellos respondían a la luz (se deformaba su membrana), las interacciones polares entre grupos ciano suponen un impedimento para la fotoisomerización y es necesario irradiar con luz intensa. Por ello se sustituyó el 4-cianoazobenceno por unidades de 4-isobutiloxiazobenceno que isomerizan con mayor facilidad. 8 , 9 Fig 1.13. Autoensamblados formados por polímeros bloque anfifílicos con diferente relación hidrófilo/hidrófobo (los azobencenos se representan como elipses y se unen a la periferia del dendrón). Posteriormente se observó que si la sustitución del dendrón se hacía con diferentes proporciones de la unidad azobenceno y una cadena hidrocarbonada (Figura 1.14a), se podían controlar mejor las modificaciones que sufrían las vesículas al ser irradiadas con luz. En la figura 1.14b puede observarse las vesículas formadas antes y después de la irradiación con UV según la proporción cromóforos azo/cadenas alifáticas. La velocidad de liberación y modificación de vesículas varía según la composición y el mejor resultado se obtiene con la composición 50:50. 10 Utilizando moléculas fluorescentes se comprobó que estas vesículas encapsulaban y liberaban estas sondas con luz como estímulo, lo que abre la posibilidad de utilizarlas para encapsular otras moléculas de interés, como fármacos, que puedan ser liberadas a demanda con luz como estímulo. 11 Todos los copolímeros mencionados para este tipo de aplicaciones tienen estructura covalente. 7 J. del Barrio, L. Oriol, C. Sanchez, J. L. Serrano, A. Di Cicco, P. Keller, M. H. Li, J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 3762-3769 8 J. del Barrio, Tesis Doctoral, Facultad de Ciencias, Universidad de Zaragoza, Marzo 2010. 9 E. Blasco, B.V.K.J. Schmidt, C. Barner-Kowollik, M. Piñol, L. Oriol, Polym. Chem. 2013, 4, 4506-4514 10 E. Blasco, J. L. Serrano, M. Piñol, L. Oriol, Macromolecules 2013, 46, 5951−5960 11 E. Blasco, J. del Barrio, C. Sánchez-Somolinos, M. Piñol, L. Oriol, Polym. Chem., 2013, 4, 2246–2254 Micelas Molécula hidrófila Molécula hidrófoba Vesículas 0. 2 µm 0. 2 µm 1 µm 0. 2 µm 0. 2 µm 0. 5 µm 0. 5 µm Nanofibras Micelas lamelares Micelas tubulares Vesículas 33%wt hidrófobo 50%wt hidrófobo 67%wt hidrófobo 80%wt hidrófobo Introducción 7 Fig 1.14. a) Copolímero bloque anfífilo dendrítico-lineal con diferente composición de azobenceno y cadena alifática. b) Cryo-TEM de vesículas antes (izquierda) y después (derecha) de irradiar con UV., según composición. 1.4. Polímeros supramoleculares con azobenceno. La Química Supramolecular aplicada a los azopolímeros permite combinar de una manera sencilla el procesado de los polímeros con el fotocromismo y los movimientos fotoinducidos propios de los azobencenos. En la Universidad de Zaragoza también se han estudiado copolímeros supramoleculares preparados a partir de copolímeros bloque comerciales de poliestireno-b-poli(4-vinilpiridina) y azobencenos con grupos carboxílicos. 12 , 13 Fig 1.15. Ejemplo de copolímero bloque supramolecular con azobencenos sintetizado en UNIZAR (ref. 13). Sin embargo, dada la fortaleza del enlace de H las mezclas no eran completamente homogéneas. Para evitar la segregación de los componentes se sustituyeron las polivinilpiridinas por polímeros con unidades de 2,6diacilaminopiridinas y se sintetizó un derivado de azobenceno con timina. Así, se forma un triple enlace de H entre 2,6-diacilaminopiridina y timina, lo que evita la segregación macroscópica. 14 Se prepararon copolímeros bloque de PEG con polímeros con unidades de 2,6-diacilaminopiridina que fueron funcionalizadas con timinaazobenceno. Estos son los antecedentes directos de este TFG, en el que se estudiarán copolímeros bloque supramoleculares con unidades de 2,6-diacilaminopiridina. A diferencia de lo anterior, en este TFG se busca una modificación de las mismas con dos grupos diferentes: uno con azobenceno (tAZO-i) y otro con una cadena hidrocarbonada (tC20) para modular propiedades, como ya se había comprobado en los compuestos covalentes. 12 J. del Barrio, E. Blasco, L. Oriol, R. Alcalá, C. Sánchez, J.Polym. Sci. Polym. Chem. 2013, 51, 1716-1725 13 J. del Barrio, E. Blasco, C. Toprakcioglu, A. Koutsioubas, O. A. Scherman, L. Oriol, C. Sánchez-Somolinos, Macromolecules 2014, 47, 897−906 14 A. Concellón, Trabajo Fin de Máster, Facultad de Ciencias, Universidad de Zaragoza, Junio 2013 LUZ LUZ LUZ 75:25 50:50 25:75 a) b) Objetivos 8 2. OBJETIVOS Y PLANTEAMIENTO De acuerdo a los antecendentes previos, el objetivo de este trabajo es la preparación de copolímeros bloque supramoleculares anfífilos y de sus precursores correspondientes, basados en unidades repetitivas que contienen anillos de 2,6-diacilaminopiridina, así como de compuestos derivados de timina con y sin unidades de azobenceno. Ambos, copolímeros y derivados de timina, son capaces de formar enlaces de H múltiples para dar lugar a los copolímeros bloque supramoleculares. Además se formarán autoensamblados poliméricos (micelas o vesículas) que pueden ser utilizados en el transporte y liberación controlada de moléculas orgánicas debido a su capacidad de responder a la luz. De acuerdo a esto, el planteamiento y las tareas específicas programadas para este TFG han sido las siguientes: 2.1. Síntesis y caracterización del monómero con la unidad de 2,6-diacilaminopiridina (DAP) y derivados de timina (tAZO-i y tC20).  Monómero (DAP) El monómero precursor debe de cumplir dos requisitos: el primero, formar a partir de un bloque de poli(etilenglicol) (PEG) el copolímero bloque anfífilo de forma sencilla; y el segundo, tener la capacidad de unirse por enlaces de H a los derivados de timina que formarán la cadena lateral. Para ello se seleccionó el monómero codificado como DAP con la siguiente estructura: Fig 2.1. Monómero con la unidad de 2,6-diacilaminopiridina (DAP).  Derivados de timina (tAZO-i y tC20) La timina es capaz de formar tres enlaces de H con la unidad de 2,6-diacilaminopiridina del monómero. Uno de los compuestos contiene el grupo cromóforo 4-isobuilioxiazobenceno (tAZO) y el otro una cadena hidrocarbonada de 20 átomos de C (tC20). Fig 2.2. Derivados de timina: a) tAZO-i y b) tC20. Objetivos 9 2.2. Preparación y caracterización del copolímero bloque y de los copolímeros bloque supramoleculares. El copolímero bloque objetivo (PEG-b-PDAP) es un copolímero anfífilo formado por el monómero sintetizado DAP y PEG como parte hidrófila (se seleccionó un PEG comercial de masa aprox. 2000: PEG2000-b-PDAP). Su estructura es consecuencia del método de preparación utilizado: la polimerización controlada RAFT. Fig 2.3. Estructura polimérica del PEG-b-PDAP. Este polímero se unirá a los derivados de timina presentados anteriormente (con diferentes porcentajes de cada uno de ellos) mediante enlaces de H para formar polímeros supramoleculares de cadena lateral. Fig 2.4. Interacciones supramoleculares entre una unidad repetitiva de PDAP del copolímero bloque con a) tAZO-i y b) tC20. 2.3. Preparación y caracterización de micelas o vesículas poliméricas. La última parte del TFG consiste en comprobar si es posible preparar micelas o vesículas poliméricas resultantes del autoensamblado de estos copolímeros en medio acuoso, así como del estudio de su posible morfología mediante microscopía electrónica. NC O O O O OO ONH N NH O S S n OH3C m CH3 (CH2)19 N HN O O NC O O O O OO ONH N NH O S S n OH3C m O N ON (CH2)12 N HN O O a) b) Resultados y Discusión 10 3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 3.1. Síntesis y caracterización del monómero DAP y derivados de timina.  Preparación y estudio del monómero metacrílico (DAP). El monómero necesario para preparar copolímeros supramoleculares se obtuvo de acuerdo a la siguiente ruta sintética: Fig. 3.1 Esquema de la ruta sintética del monómero con unidad de 2,6-diacilaminopiridina (DAP). La reacción de N-acilación para obtener 2-propanoilamino-6-aminopiridina se realizó de acuerdo a un procedimiento previamente descrito14, 15 y que parte de 2,6-diaminopiridina y cloruro de propionilo (ambos comerciales) con estequiometría 2:1, que permite captar HCl resultante y favorecer la amidación de un solo grupo amino. Obtenida la 2-propanoilamino-6-aminopiridina, se introduce el grupo polimerizable por amidación del amino restante del anillo de piridina con succinato de mono-2-metacriloiloxietilo, un compuesto comercial y barato. En esta segunda reacción se utiliza DIC (diisopropilcarbodiimida) para activar el grupo carboxílico. Además como subproducto se genera diisopropilurea que es fácilmente eliminable dada su solubilidad en disolventes orgánicos (a diferencia de la urea generada cuando se utiliza diciclohexilcarbodiimida, DCC). La caracterización del intermedio 2-propanoilamino-6-aminopiridina se llevó a cabo por IR, 13C-RMN y 1H-RMN y una vez confirmada su estructura se procedió a la síntesis del monómero DAP. A este monómero se le realizó, además de las caracterizaciones nombradas anteriormente, espectrometría de masas (MALDI) y análisis térmicos (TGA y DSC). Los resultados básicos de caracterización espectroscópica de ambas síntesis pueden observarse en el apartado espectros A.1 y A.2 de los anexos.  Derivados de timina (tAZO-i y tC20). El derivado de timina que contiene la unidad fotocrómica de 4-isobutiloxiazobenceno codificado como tAZO-i se sintetizó según la ruta siguiente: 15 J. Bernstein, B. Stearns, E. Shaw, W.A. Lott, J. Am. Chem. Soc. 1947, 69, 1151-1158 Resultados y Discusión 11 Fig. 3.2 Esquema de la ruta sintética del azoderivado (tAZO-i). La unidad de azobenceno, se prepara por acoplamiento azoico. Con tal fin, en la primera reacción se parte de pnitrofenol y se hace reaccionar con bromuro de isobutilo (esterificación de Williamson), utilizando DMF como disolvente, K2CO3 como base para formar el fenolato correspondiente y KI para favorecer la sustitución. La siguiente reacción consistió en reducir el grupo nitro a amino utilizando hidracina como dador de hidrógeno y NiRaney como catalizador. La reacción se siguió por cromatografía de capa fina ya que puede ser que la reacción se detenga tanto por falta de catalizador como de hidracina. Cuando se comprobó que sólo aparecía un único producto de reacción (no se observó reactivo de partida ni compuestos intermedios) se dio por finalizada la reacción. Posteriormente, el compuesto formado se disolvió en medio ácido y se hizo reaccionar con una disolución acuosa de NaNO2 para dar lugar a la sal de diazonio (la reacción se mantiene a temperatura por debajo de 5°C). Una vez formada la sal se añadió el fenol disuelto en medio básico para llevar a cabo el acoplamiento azoico. De esta manera se obtuvo el 4-isobutiloxi-4´-hidroxiazobenceno (producto 3). Sobre este se realizó otra reacción de Williamson con 1,12-dibromododecano, K2CO3 como base, éter 18-corona-6, y acetona como disolvente para obtener 4-isobutiloxi-4´-(12-bromododeciloxi)azobenceno. El último paso para llegar al producto deseado consistió en una sustitución nucleófila de la timina sobre el bromuro de alquilo utilizando K2CO3 como base y DMSO como disolvente. El otro derivado de timina, tC20, se preparó de forma análoga al compuesto 5, en este caso a partir de bromuro de 1-bromoeicosano: Fig. 3.3 Esquema de la ruta sintética del derivado hidrocarbonado (tC20). Las técnicas por las que se analizaron ambos compuestos fueron: IR, 1H-RMN, 13C-RMN (también para los intermedios) (Ver apartados Anexos espectros B y C), espectrometría de masas (técnica MALDI) y análisis térmicos (TGA y DSC) (Anexos). Ambos derivados son compuestos cristalinos con temperaturas de fusión (DSC, 10ºC/min, 2º barrido) de 162°C y 116°C para tAZO-i y tC20 respectivamente. Resultados y Discusión 12 3.2. Preparación del copolímero bloque (PEG-b-PDAP). La preparación de copolímeros bloque supone el uso de métodos de polimerización diferentes a los convencionales. Un monómero metacrílico, como es el caso del monómero DAP, suele ser polimerizado por una reacción en cadena vía radicales libres con sus correspondientes etapas de iniciación, propagación y terminación, como por ejemplo para obtener el poli(metacrilato de metilo) comercial. Sin embargo, con esta metodología no es posible obtener copolímeros bloque con un control preciso de la estructura. Para sintetizar copolímeros bloque se solía recurrir a la polimerización aniónica. No obstante, esta polimerización requiere de condiciones estrictas de reacción (baja temperatura, disolventes de muy alta pureza, atmósfera inerte, etc.) y además solo puede ser aplicada a unos pocos monómeros. El desarrollo a finales del siglo pasado de nuevos métodos de polimerización radicalaria controlada ha incrementado notablemente las macromoléculas que pueden prepararse de forma sencilla con un alto grado de control estructural. La clave de estas metodologías suele residir en impedir (o minimizar lo más posible) la reacción de terminación en el proceso en cadena radicalario, manteniendo una muy baja concentración de radicales, normalmente “enmascarados” en forma de un compuesto con un enlace lábil. Entre estas reacciones destacaremos la polimerización RAFT (por sus siglas en inglés: Reversible Addition Fragmentation Transfer). La clave del mecanismo de polimerización RAFT (ver Figura 3.4) es una secuencia de equilibrios de adición-fragmentación como los mostrados en este esquema: Fig. 3.4 Esquema del mecanismo de una polimerización RAFT (ref. 16) La iniciación y la terminación por unión de radicales transcurren como en una polimerización radicalaria convencional. En las primeras etapas de la polimerización, la adición del radical de propagación (Pn•) al agente de transferencia de cadena o CTA (Z-CXX-R, generalmente X=S, ditioester) seguida de la fragmentación del enlace R-X da lugar a un polímero unido en uno de sus extremos al CTA y un nuevo radical que sigue reaccionado. Finalmente, el rápido equilibrio entre los dos radicales de propagación y el polímero “latente” unido a CTA proporcionan la misma probabilidad de crecimiento a todas las cadenas y permiten la obtención de polímeros con poca dispersidad. Cuando la polimerización se completa muchas de las cadenas retienen el CTA como grupo terminal y pueden ser aislados como materiales estables. 16 , 17 La reacción de polimerización RAFT para la obtención del copolímero PEG2000-b-PDAP (2000 indica masa molar del PEG usado) es la siguiente: 16 G. Moad, E. Rizzardo, S. H. Thang, Polymer, 2008, 49, 1079-1131. Resultados y Discusión 13 Fig. 3.5 Reacción de polimerización RAFT para la obtención del copolímero PEG2000-b-PDAP. La síntesis de este polímero se realizó por duplicado y se utilizó el monómero diacrílico DAP, un macro-CTA comercial que contiene PEG de masa molar aprox. 2000 (por tanto en el CTA ya se introduce uno de los bloques del copolímero bloque final), AIBN que es un iniciador radicalario térmico y DMF anhidra como disolvente. En este caso el CTA es un ditiobenzoato, que están aconsejados para polimerizar metacrilatos. 18 Las concentraciones de monómero, macro-CTA e iniciador se ajustaron para obtener una masa molar de 5200 (g/mol) si la conversión era igual a 1. Esta masa molar responde a la ecuación 3.1 (siendo [M] la concentración de monómero inicial, [CTA] la concentración inicial de CTA, PMM la masa molar de la unidad repetitiva y PMCTA la masa molar del CTA). ( ) ( [ ] [ ] ) Ecuación 3.1 La reacción se llevó a cabo en atmósfera inerte; antes de iniciarla se realizaron tres ciclos sucesivos de vacío (previa inmersión en nitrógeno líquido del matraz de reacción) e introducción de argón (a temperatura ambiente) para eliminar el O2 ya que es un inhibidor radicalario. Una vez acondicionado el sistema, fue necesario precalentar el baño (80°C) e introducir el matraz posteriormente ya que el AIBN es un iniciador térmico y si la reacción no empieza a una temperatura fija la concentración de radicales no sería constante y el equilibrio del mecanismo se alteraría. Una vez iniciada la reacción se dejó transcurrir durante 3 horas y para finalizarla se introdujo el matraz Schlenk en nitrógeno líquido (quenching). El copolímero precipitó por adición del crudo de reacción sobre dietiléter frío. Dado que no tiene una masa molar elevada y es difícil de filtrar, se procedió a la centrifugación y posterior decantación para obtener el copolímero, que finalmente se lavó con dietiléter frío para eliminar posibles restos de disolventes u otras impurezas. Tras analizar el polímero por GPC se observó que todavía quedaban trazas de PEG residual. Se disolvió el polímero y se volvió a precipitar con el fin de eliminar el PEG. En uno de los experimentos se obtuvo el copolímero libre de PEG con éxito, sin embargo en el segundo no. En este caso se disolvió de nuevo en DCM y se hicieron extracciones con agua. Posteriormente se reprecipitó el polímero y tras analizar el GPC se observó que se había conseguido eliminar el PEG. La masa molar promedio y la distribución del polímero fue obtenida mediante cromatografía de exclusión por tamaños o permeación en gel (GPC) con un detector de difusión de luz (Light Scattering) y utilizando estándares 17 G. Moad, E. Rizzardo, S. H. Thang, Aust. J. Chem. 2005, 58, 379-410. 18 ALDRICH comercializa estos CTA y tiene información al cliente en una página web para este tipo de consultas: http://www.sigmaaldrich.com/materials-science/polymer-science/raft-polymerization.html#classes Parte experimental 20 4. PARTE EXPERIMENTAL 4.1. Síntesis y caracterización del monómero con la unidad de 2,6-diacilaminopiridina (DAP).  Síntesis de 2-propanoilamino-6-aminopiridina (ver 1, Figura 3.1). Para llevar a cabo esta reacción previamente hay que recristalizar la 2-6-diaminopiridina en etanol (amina sensible a la oxidación). Se disuelve en un matraz de 250 mL la 2-6-diaminopiridina (7,454 g; 68,30 mmol) en 50 mL de THF seco bajo flujo de argón. Se disuelve también cloruro de propanoílo (3,16 g; 34,15 mmol) en 10 mL de THF seco y se adiciona gota a gota sobre la disolución anterior, en baño de hielo, durante aprox. 1 h. Después, se deja a temperatura ambiente durante 4 h. Transcurrido este tiempo se evapora el disolvente, se extrae con agua y se purifica por recristalización en etanol/tolueno 1:6. Rto: 50%.  Caracterización. Rf: 0,24; hexano/acetato de etilo 1:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3478, 3370, 3226, (NH), 1674 (C=O), 1629, 1541, 1466, 793 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 7.86 (s, 1H), 7.57-7.48 (m, 1H), 7.42 (dd, 1H, J=7.9 Hz, J=7.9 Hz), 6.23 (dd, 1H, J=7,9 Hz, J=0.7 Hz), 4.34 (s, 2H), 2.35 (c, 2H, J=7.5 Hz), 1.19 (t, 3H, J=7.5 Hz). 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm): 172.3, 157.2, 150.0, 140.3, 104.3, 103.4, 30.8, 9.5.  Síntesis de 2-(propanoilamino)-6-[3-(metacriloxietiloxicarbonil)-propanoilamino] piridina (DAP). En un matraz de 50 mL se disuelve 2-propanoilamino-6-aminopiridina (2,2 g; 13,32 mmol) en 10 mL de diclorometano seco. Se conecta un flujo de Ar y se añade succinato de mono-2-metacriloiloxietilo comercial (3,68 g; 15,98 mmol) y p-toluensulfonato de dimetilamino piridinio (DPTS) (4,99 g; 15,98 mmol). La mezcla se enfría en baño de hielo y se añade DIC (2,016 g; 15,9 8mmol). La reacción se mantiene a temperatura ambiente durante 70 h. El producto obtenido se purifica por cromatografía de columna a presión sobre gel de sílice utilizando hexano/acetato de etilo 1:1 como eluyente y por último se recristaliza en etanol y se lava con éter frío. Rto: 54%  Caracterización. Rf: 0,21; hexano/acetato de etilo 1:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3336 (NH), 1726, 1689 (C=O), 1636 (C=C), 1586, 1512, 1453 (Ar), 1315, 1151, (C-O), 806 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 8.01 (s, 2H), 7.89-7.79 (m, 2H), 7.68-7.63 (t, 1H, J=8 Hz, J=8 Hz), 6.116.10 (m, 1H), 5.57-5.55 (m, 1H), 4.37-4.35 (m, 4H), 2.80-2.77 (m, 2H), -2.70-2.67 (m, 2H), 2.41 (c, 2H, J=7.6 Hz), 1.92-1.91 (m, 3H), 1.23 (t, 3H, J=7.6 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 172.5, 172.4, 167.3, 149.7, 149.2, 140.7, 135.9, 126.2, 109.5, 109.4, 62.6, 62.4, 32.1, 30.7, 29.3, 18.2, 9.4. 4.2. Síntesis y caracterización de los derivados de timina tAZO-i y tC20. 4.2.1. Síntesis del 1-[12-(4-(4´-isobutiloxifenildiazo)feniloxi)dodecil]-5-metil-3H-pirimidin-2,4diona (tAZO-i).  Síntesis de 4-isobutiloxinitrobenceno (ver 1, Figura 3.2). En un matraz de 500 mL se introduce p-nitrofenol (13 g; 93,45 mmol), bromuro de isobutilo (25,61 g; 186,9 mmol) y se disuelve con 200 mL de DMF. Se añade K2CO3 seco (38,74 g; 280,35 mmol) y una punta de espátula de KI. Se mantiene la reacción a 120°C con agitación a reflujo durante 10 h. La reacción se sigue Parte experimental 21 mediante CCF. Se añaden 200 mL de H2O destilada al crudo de reacción y se extrae con hexano/acetato de etilo 1:1. Seguidamente se lava con NaOH 2% y con una disolución de NaCl saturada. La fase orgánica se seca con MgSO4 anhidro y tras filtrar se elimina el disolvente. Se obtiene un aceite que se purifica mediante cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice utilizando como eluyente una mezcla de hexano/acetato de etilo 20:1. Rto: 95%.  Caracterización. Rf: 0,59; hexano (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 1593, 1343 (NO2), 1513, 1470 (Ar), 1266, 1020 (C-O), 845 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 8.20-8.18 (m, 2H), 6.95-6.93 (m, 2H), 3.82 (d, 2H, J=6.8 Hz), 2.18-2.08 (m, 1H), 1,05 (d, 6H, J=6.8 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 164.4, 141.2, 125.8, 114.4, 75.1, 28.0, 19.1.  Síntesis de 4-isobutiloxianilina (2). Antes de comenzar la reacción es necesario activar con precaución el Ni-Raney lavándolo con etanol y extrayendo el disolvente con una jeringuilla sin dejar secar por completo el catalizador. Se introducen en un matraz 4-isobutiloxinitrobenceno (1) (7 g; 35,85 mmol) e hidracina (3,61 g; 71,71 mmol) y se disuelven en 70 mL de etanol. La disolución se calienta a 40°C y se añade el Ni-Raney previamente activado hasta completar la reacción (cuando termina la reducción, la reacción deja de burbujear). La evolución de la reacción se sigue mediante CCF y hay que observar si ha desaparecido el nitrocompuesto (puede ser que la reacción deje de burbujear por falta de hidracina y en ese caso sería necesario adicionar más reductor). La mezcla resultante se filtra sobre lecho de celite para eliminar el catalizador (hay que evitar que se seque el Ni-Raney de la placa; para desactivarlo se lava con etanol y se añade arena). El disolvente se evapora en el rotavapor. Se obtiene un aceite que se disuelve en éter dietílico y posteriormente se lava con H2O y una disolución de NaCl saturada. La fase orgánica se seca con MgSO4 anhidro, se filtra y se evapora el disolvente. Rto: 71%. Este compuesto se utiliza poco después de ser obtenido para evitar la oxidación de la amina. Si hay que guardarlo, conviene hacerlo bajo atmósfera de argón.  Caracterización. Rf: 0,35; hexano/DCM 4:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3431, 3352, 3218 (NH2), 1625, 1511, 1469 (Ar), 1235, 1036 (C-O), 824 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 6.79-6.71 (m, 2H), 6.68-6.60 (m, 2H), 3.65 (d, 2H, J=6.8 Hz), 3,48 (s, 2H), 2,05 (m, 1H), 1.01 (d, 6H, J=6.8 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 105.5, 143.1, 118.1, 114.4, 75.1, 28.2, 19.1.  Síntesis de 4-isobutiloxi-4´-hidroxiazobenceno (3). En un matraz de 250 mL se añade la 4-isobutiloxianillina (2) (4,18 g; 25, 3mmol) sobre 12,5 mL de HCl 6M y se coloca en un baño de hielo. Se agita la mezcla y se añade gota a gota NaNO2 (1,74 g; 25,3 mmol) disueltos en 20 mL de H2O. Se mantiene en agitación durante 30 min a 0°C y transcurrido este tiempo se añade fenol (2,38 g; 25,3 mmol) disuelto en una disolución acuosa de NaOH (2M, 10 mL). La reacción se mantiene en las mismas condiciones otros 30 min. Posteriormente se quita el baño de hielo y se deja agitando 3 h a temperatura ambiente. Después se añade una disolución de NaHCO3 hasta pH neutro. Se lava el precipitado formado con abundante agua y se seca. El producto se purifica por cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice utilizando DCM como eluyente (se probó alternativamente una recristalización en etanol, pero no se obtuvieron los resultados deseados). Rto: 72%. Parte experimental 22  Caracterización. Rf: 0,13; DCM (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3140 (OH), 1586, 1504, 1462 (Ar), 1260, 1149 (C-O), 838 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 7.87-7.81 (m, 4H), 7.00-6.91 (m, 4H), 5.40 (s, 1H), 3.81 (d, 2H, J=6.8 Hz), 2,17-2.07 (m, 1H), 1,06 (d, 6H, J=6.8 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 161.4, 157.8, 147.2, 146.8, 124.5, 124.4, 115.8, 114.8, 74.2, 28.3, 19.2.  Síntesis de 4-isobutiloxi-4´-(12-bromododeciloxi)azobenceno (4). Se adiciona en un matraz de 250 mL 1,12-dibromododecano (4,86 g; 14,81 mmol), K2CO3 seco (4,05 g; 29,72 mmol) y éter 18-corona-6 (0,39 g; 0,148 mmol) y se disuelven en 15 mL de acetona. La mezcla de reacción se lleva a 60°C y se añade gota a gota una disolución de 4-isobutiloxi-4´-hidroxiazobenceno (3) (4 g; 14,81 mmol) con 60 mL de acetona. La reacción se mantiene a reflujo con agitación durante 20 h. El seguimiento de la reacción se realiza mediante CCF. Se elimina el disolvente en el rotavapor, el sólido obtenido se disuelve con DCM y se lava con HCl 2M, posteriormente con agua y por último con NaCl saturado. La fase orgánica se seca con MgSO4 anhidro, se filtra y se elimina el disolvente. La purificación del producto se realiza mediante cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice utilizando una mezcla de hexano/DCM 3:1 como eluyente. Rto: 42%.  Caracterización. Rf: 0,60; hexano/DCM 1:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 1600, 1579, 1498, 1469 (Ar), 1236, 1023 (C-O), 552 (C-Br). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 7.87-7.85 (m, 4H), 7.26-6.97 (m, 4H), 4.03 (t, 2H, J=6.8 Hz), 3.81 (d, 2H, J= 6.4 Hz), 3.41 (t, 2H, J=7.2 Hz), 2.12 (m, 1H), 1.87-1.80 (m, 4H), 1.49-1.26 (m, 16H), 1.06 (d, 6H, J= 6.8 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 161.3, 161.1, 146.9, 146,9, 124.4, 114.7, 114.7, 74.7, 68.4, 34.0, 32.9, 29.5, 29.4, 29.4, 29.2, 28.8, 28.3, 28.2, 26.0, 19.2.  Síntesis de 1-[12-(4-(4´-isobutiloxifenildiazo)feniloxi)dodecil]-5-metil-3H-pirimidin-2,4-diona (tAZO-i) (5). En un matraz se introducen 4-isobutiloxi-4´-(12-bromododeciloxi)azobenceno (4) (2,5 g; 4,83 mmol), timina (1,83 g; 14,49 mmol), K2CO3 seco (2 g; 14,49 mmol) y 150 mL de DMSO. La reacción se mantiene en agitación y a 70°C durante 72 h. Una vez finalizada se añaden 100 mL de acetato de etilo y se lava con agua destilada y seguidamente con una disolución de NaCl saturada. La fase orgánica se seca con MgSO4 anhidro. Se filtra y se evapora el disolvente. El sólido obtenido se purifica mediante cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice utilizando como eluyente hexano/acetato de etilo 4:1 y aumentando gradualmente la polaridad. El sólido final se recristaliza en etanol. Rto: 34%.  Caracterización. Rf: 0,48; hexano/acetato de etilo 1:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3154 (NH), 3032 (=C-H), 1681 (C=O), 1601 (C=C), 1580, 1499, 1471 (Ar), 1241, 1145 (CO), 838 (Ar). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 8.28 (s, 1H), 7.88-7.86 (m, 4H), 7.26-6.97 (m, 5H), 4.04 (t, 2H, J=6.4 Hz), 3.82 (d, 2H, J=6.4 Hz), 3.71-3.67 (m, 2H), 2.14 (m, 1H), 1.94 (d, 3H, J=0.8), 1.88-1.77 (m, 2H), 1.701.64 (m, 2H) 1.37-1.25 (m, 16H), 1.07 (d, 6H, J=6.8 Hz). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 163.9, 161.2, 150.5, 140.4, 124.3, 114.7, 74.7, 68.3, 48.6, 26.5, 28.3, 26.4, 26.0, 19.3, 12.3. Parte experimental 23 4.2.2. Síntesis de 1-eicosil-5-metil-3H-pirimidin-2,4-diona (tC20). Se introduce en un matraz de 250 mL, 1-bromoeicosano (5 g; 13,83 mmol), timina (5,23 g; 41,50 mmol) y K2CO3 (5,74 g; 41,50 mmol) y se disuelve en 200 mL de DMSO. Se lleva la reacción con agitación a 60°C y se mantiene durante 48 h. La reacción se sigue por CCF. Una vez concluida se deja enfriar a temperatura ambiente. Se realiza una extracción con H2O y después con hexano/acetato de etilo 1:1 (x2). La fase orgánica se lava con H2O y con NaCl saturado (x2), después se seca con MgSO4 anhidro. Se filtra y se evapora el disolvente en el rotavapor. El sólido obtenido se purifica por cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice utilizando como eluyente hexano/acetato de etilo 2:1 (inicialmente se hizo una recristalización en hexano/DCM 9:1, sin conseguir una purificación adecuada). Rto: 32%.  Caracterización. Rf: 0,38; hexano/acetato de etilo 1:1 (eluyente), gel de sílice (fase estacionaria). IR (KBr), ʋ (cm-1): 3157 (NH), 3069 (=C-H), 1683 (C=O), 1640 (C=C). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 8.51 (s, 1H), 6.97 (c, 1H, J=1.2 Hz), 3.69-3.66 (m, 2H), 1.92 (d, 3H, J=1.2 Hz), 1.68-1.64 (m, 2H), 1.31-1.25 (m, 34H), 0.88-0.86 (m, 3H). 13C-RMN (CdCl3, 100MHz) δ (ppm): 163.8, 150.6, 140.4, 110.5, 48.6, 31.9, 29.7, 26.4, 22.7, 14.1, 12.3. 4.3. Síntesis y caracterización del copolímero de PEG-b-PDAP (PEG2000-b-PDAP). La polimerización se lleva a cabo en un reactor Schlenk. Se introduce en este el monómero DAP (300 mg; 0,795 mmol), el agente de transferencia macromolecular CTA-PEG (187,16 mg; 0,094 mmol), AIBN (2,30 mg; 0,014 mmol) y 4 mL de DMF anhidra. Se realizan tres ciclos vacío-argón y se coloca el Schlenk en un baño precalentado a 80°C. La reacción se mantiene con agitación a esta temperatura durante 3 h. Después se introduce el Schlenk en nitrógeno líquido (quenching) y se precipita el crudo en dietiléter frío. El precipitado se centrifuga y se lava posteriormente con dietiléter frío. Para purificar el compuesto se disuelve el polímero en DCM y se vuelve a precipitar con el fin de eliminar el PEG residual. En el caso de que esta técnica no funcione, se disuelve el polímero en DCM, se hacen extracciones con agua y posteriormente se vuelve a precipitar el polímero. Rto: 75%  Caracterización. IR (KBr), ʋ (cm-1): 3330 (NH), 1736 (C=O), 1586, 1524, 1449 (Ar), 1244, 1151 (C-O). 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm): 8.93-8.08 (m, 2H), 7.93-7.34 (m, 3H), 4.43-4.02 (m, 4H), 3.70-3.55 (m, 18H), 2.87-2.53 (m, 4H), 2.44-1.85 (m, 4H), 1.36-0.71 (m, 6H). 4.4. Preparación de los copolímeros supramoleculares. Para preparar las mezclas se pesa en la balanza de precisión la cantidad correspondiente de polímero, tAZO-i y tC20 y se introducen en un tubo “clip”. Se disuelven con THF de calidad HPLC y se filtran (filtros de 0,2 micras de teflón) para eliminar posibles residuos sólidos. Se mantienen en agitación mecánica para que se vaya evaporando poco a poco el disolvente (2-3 semanas). Una vez se ha evaporado, se secan a vacío a temperatura ambiente. Los polímeros que se utilizan en las mezclas son PEG2000-b-PDAP y PEG10000-b-PDAP. Parte experimental 24 Complejo supramolecular Polímero tAZO-i tC20 PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 75:25 30mg de PEG10000-b-PDAP 20,6 mg de tAZO-i 5,0 mg de tC20 PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 50:50 30mg de PEG10000-b-PDAP 13,7 mg de tAZO-i 9,9 mg de tC20 PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 25:75 30mg de PEG10000-b-PDAP 6,9 mg de tAZO-i 14,9 mg de tC20 PEG2000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 75:25 30mg de PEG2000-b-PDAP 20,8 mg de tAZO-i 5,0 mg de tC20 PEG2000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 50:50 30mg de PEG2000-b-PDAP 13,8 mg de tAZO-i 10,0 mg de tC20 PEG2000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 25:75 30mg de PEG2000-b-PDAP 6,9 mg de tAZO-i 15,1 mg de tC20 4.5. Autoensamblados en agua. Los autoensamblados en agua se han preparado por tres métodos diferentes con los copolímeros supramoleculares de PEG10000:  PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 75:25  PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 50:50  PEG10000-b-PDAP + tAZO-i/tC20 25:75 1er método (A): Se disuelven 5 mg de muestra en tres tubos diferentes, tipo “clip”, en 5 mL de THF (grado HPLC) previamente filtrado con filtro de teflón de 0,2 μm. Después se añade H2O miliQ progresivamente (de 10 en 10 μL). El seguimiento de la formación de nanopartículas se hace mediante espectroscopía UV-vis a l=650nm. Se va tomando nota de la absorbancia que da el aparato cada vez que se le adicionan los 10 μL de H2O (una vez estabilizada la medida). Cuando se alcanza un valor aproximadamente constante, se introduce en una membrana y se dializa en agua miliQ con el fin de eliminar el THF. Se cambia el agua de la diálisis cada 24h y durante 4 días consecutivos. Tras la diálisis se pasaron las disoluciones con los autoensamblados a una probeta para medir el volumen y poder así calcular una concentración aproximada que resultó ser 1,3 mg de copolímero supramolecular por mL de agua. Estas mezclas se diluyeron con agua hasta tener una concentración aproximada de 0,5mg/mL. 2o método (B): Se disuelve 1mg de cada compuesto en un tubo “clip” con 1ml de H2O miliQ, y se sonica con una sonda en un equipo Hielscher UP400s trabajando a 70% de potencia y con ciclos de 1s encendido+1s apagado, durante 20 min. 3er método (C): Se disuelve 1mg de cada compuesto en un tubo “clip”, se añade 100μL de DCM para disolverlo y posteriormente 1ml de H2O miliQ. Las condiciones de sonicación son iguales al método B (DCM se evapora en la sonicación). Las mezclas preparadas con los métodos B y C también se diluyeron a una concentración de 0,5mg/mL. Para el estudio por TEM, una vez que se tuvieron las concentraciones adecuadas se deposita una gota sobre una rejilla de cobre con película de carbono. Se esperaron 30 segundos y se eliminó la muestra no depositada por capilaridad con un papel de filtro. Seguidamente se añadió una gota de acetato de uranilo (tinte), se esperó otros 30 segundos y se retiró por capilaridad. Las muestras preparadas se dejaron a secar 12 h a vacío. Conclusiones 25 5. CONCLUSIONES Las principales conclusiones de este trabajo son: - Mediante polimerización RAFT es factible obtener copolímeros bloque de estructura controlada y naturaleza anfífila. El copolímero bloque está formado por PEG (hidrófilo) y un polimetacrilato que contiene unidades de 2,6diacilaminopiridina PDAP (hidrófobo). - Los derivados de timina pueden modificar las propiedades del copolímero. Se han sintetizado dos compuestos tAZO-i y tC20 que se unen lateralmente al bloque de PDAP mediante enlaces de H múltiples entre unidades de timina y 2,6-diacilaminopiridina. Gracias a este reconocimiento se sintetizaron copolímeros bloque supramoleculares anfífilos variando las proporciones de las unidades de cadena lateral. En todos ellos se calculó que la parte hidrófoba final resultase ser aproximadamente de un 80%w y se utilizaron para preparar nanopartículas fotoestimulables. - Los precursores del copolímero supramolecular y el copolímero se estudiaron por 1H-RMN, 13C-RMN e IR y también se les realizaron análisis de sus propiedades térmicas (TGA y DSC). En los copolímeros bloque supramoleculares también se estudiaron las propiedades térmicas y se vio que eran homogéneos y que no presentaban segregación de fases. El estudio por IR demostró la presencia de enlaces de H. - Se probaron tres métodos de formación de nanopartículas micelares en agua y se comprobó que el método de disolución en THF y adición de agua es el más óptimo. Con este método se han obtenido micelas esféricas homogéneas de aprox. 40 nm de diámetro, de acuerdo al estudio por TEM. El porcentaje de derivados de timina influye en la tendencia a agregar de estas nanopartículas. Como conclusión final se puede afirmar que la vía supramolecular es adecuada para la formación de copolímeros bloque funcionales (en este caso con unidades fotosensibles), no segregados y que dan lugar a nanopartículas poliméricas homogéneas, con potencial utilidad para encapsular y liberar moléculas hidrófobas.  CONCLUSIONS The main conclusions of this work are: - Using RAFT polymerization is possible to obtain block copolymers with a controlled structure and having amphiphilic nature. The block copolymer is composed of PEG (hydrophilic) and a polymethacrylate containing units of 2.6-diacylaminopiridine, PDAP (hydrophobic). - Thymine derivatives can modify the properties of the block copolymer. We have synthesized tAZO-i and TC20, two compounds that can be laterally linked to the PDAP block through multiple hydrogen bonds between thymine and 2,6-diacylaminopiridine units. By means of this molecular recognition, supramolecular amphiphilic block copolymers were synthesized with different proportions of side chain units. The final hydrophobic part was tuned to be about 80%w in all compounds and they were used to prepare photoresponsive nanoparticles. - The precursors of supramolecular copolymer and the copolymer were studied by 1H-NMR, 13C-NMR and IR. Thermal properties (TGA and DSC) were also studied. In supramolecular block copolymers, thermal properties were also studied and they behave as homogeneous materials and show no phase segregation. The IR study demonstrated the presence of hydrogen bonds. - Three methods of preparing polymeric nanoparticles or aggregates in water were tested and it was found that the method of solving in THF and progressive addition of water is the optimum one. By this method, uniform spherical micelles with approx. 40 nm diameter were obtained for the tested block copolymers, according to the study by TEM. The thymine derivative percentage influences on the tendency to aggregate of these nanoparticles. As a final conclusion we can say that supramolecular approach is suitable for the preparation of functional block copolymers (in this case with photosensitive units), not segregated and leading to homogeneous polymeric nanoparticles, with potential application to encapsulate and release hydrophobic molecules.  Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-1 ANEXOS: 1. Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN). A.1. Intermedio monómero (1, ver Figura 3.1): Fig. A.1.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. A.1.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 0 20 40 60 80 100 120 400140024003400 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-8 Fig. B.1.3 Espectro de 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-9 B.3. Compuesto 3, ver Figura 3.2: Fig. B.3.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. B.3.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 40090014001900240029003400 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-10 Fig. B.3.3 Espectro de 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-11 B.4. Compuesto 4, ver Figura 3.2: Fig. B.4.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. B.4.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 0 20 40 60 80 100 40090014001900240029003400 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-12 Fig. B.4.3 Espectro de 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-13 B.5. Compuesto 5 (tAZO-i): Fig. B.5.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. B.5.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 0 20 40 60 80 100 40090014001900240029003400 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-14 Fig. B.5.3 Espectro de 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-15 C. tC20: Fig. C.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. C.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 0 20 40 60 80 100 40090014001900240029003400 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-16 Fig. C.3 Espectro de 13C-RMN (CDCl3, 100MHz) δ (ppm) Anexos: Espectros (FTIR, 1H-RMN, 13C-RMN) A-17 D. PEG-b-PDAP: Fig. D.1 Espectro de FTIR (KBr) Fig. D.2 Espectro de 1H-RMN (CDCl3, 400MHz) δ (ppm) 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1 1,1 400900140019002400290034003900 Transmitancia (%) Número de onda (cm-1) Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-24 D. tAZO-i Fig. D.1 Curva TGA. Fig. D.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-25 E. PEG10000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (75/25) Fig. E.1 Curva TGA. Fig. E.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-26 F. PEG10000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (50/50) Fig. F.1 Curva TGA. Fig. F.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-27 G. PEG10000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (25/75) Fig. G.1 Curva TGA. Fig. G.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-28 H. PEG2000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (75/25) Fig. H.1 Curva TGA. Fig. H.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-29 I. PEG2000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (50/50) Fig. I.1 Curva TGA. Fig I.2 Curva DTGA. Anexos: Termogravimetría (TGA, DTGA) A-30 J. PEG2000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (25/75) Fig. J.1 Curva TGA. Fig. J.2 Curva DTGA. Anexos: Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) A-31 4. Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC). A. Monómero DAP: Fig.A Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC. B. Polímero PEG2000-b-PDAP: Fig.B Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC. Anexos: Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) A-32 C. Tc20 Fig.C Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC. D. tAZO-i Fig.D Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC. Anexos: Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC) A-33 E. PEG10000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (75/25) Fig.E Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC. F. PEG10000-b-PDAP•tAZO-i/tC20 (50/50) Fig.F Primera curva enfriamiento y segunda curva de calentamiento del DSC.