Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia

 TESE DE DOUTORAMENTO Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia Jaime Calvo Rodríguez ESCOLA DE DOUTORAMENTO INTERNACIONAL DA UNIVERSIDADE DE SANTIAGO DE COMPOSTELA PROGRAMA DE DOUTORAMENTO EN MEDICINA E SANIDADE VETERINARIA LUGO 2021  DECLARACIÓN DEL AUTOR DE LA TESIS Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia D. JAIME CALVO RODRÍGUEZ Presentomitesis,siguiendoelprocedimientoadecuadoalReglamento,y declaroque: 1) Latesisabarcalosresultadosdelaelaboracióndemitrabajo. 2) Ensucaso,enlatesissehacereferenciaalascolaboracionesquetuvoestetrabajo. 3) Latesiseslaversióndefinitivapresentadaparasudefensaycoincideconlaversiónenviadaen formatoelectrónico. 4) Confirmoquelatesisnoincurreenningúntipodeplagiodeotrosautoresnidetrabajos presentadospormíparalaobtencióndeotrostítulos.  En Lugo, 2 de marzo de 2021 Fdo JAIME CALVO RODRÍGUEZ  AUTORIZACIÓNDELDIRECTOR/TUTORDELATESIS         D./Dña.ROSARIOPANADEROFONTÁN  Encondiciónde:Tutor/aydirector/a  Títulodela tesis: Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia   INFORMA: Quelapresentetesis,secorrespondeconeltrabajorealizadoporD/DñaJAIMECALVORODRÍGUEZ, bajomidirección/tutorización,ya utorizosu  presentación,considerando quereúnel osr equisitos exigidosenelR eglamento deEstudiosde DoctoradodelaUSC, y que comodirector/tutorde esta  noincurreenlascausasde abstención establecidase nlaLey 40/2015.  EnLUGO,02demarzode2021  Firmaelectrónica   AUTORIZACIÓNDELDIRECTOR/TUTORDELATESIS         D./Dña.CEFERINOMANUELLÓPEZSÁNDEZ  Encondiciónde:Director/a  Títulodela tesis: Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia   INFORMA: Quelapresentetesis,secorrespondeconeltrabajorealizadoporD/DñaJAIMECALVORODRÍGUEZ, bajomidirección/tutorización,ya utorizosu  presentación,considerando quereúnel osr equisitos exigidosenelR eglamento deEstudiosde DoctoradodelaUSC, y que comodirector/tutorde esta  noincurreenlascausasde abstención establecidase nlaLey 40/2015.  EnLUGO,02demarzode2021  Firmaelectrónica   AUTORIZACIÓNDELDIRECTOR/TUTORDELATESIS         D./Dña.PABLODÍEZBAÑOS  Encondiciónde:Director/a  Títulodela tesis: Influencia del manejo en la prevalencia e intensidad de eliminación de los parásitos digestivos y pulmonares en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia   INFORMA: Quelapresentetesis,secorrespondeconeltrabajorealizadoporD/DñaJAIMECALVORODRÍGUEZ, bajomidirección/tutorización,ya utorizosu  presentación,considerando quereúnel osr equisitos exigidosenelR eglamento deEstudiosde DoctoradodelaUSC, y que comodirector/tutorde esta  noincurreenlascausasde abstención establecidase nlaLey 40/2015.  EnLUGO,02demarzode2021  Firmaelectrónica  A mi familia … a todas aquellas personas que ya no están con nosotros a día de hoy (mis abuelos Aurelio y Joaquín, mi abuela Inés y mis bisabuelos, Luz y Ramón), sé que estaréis orgullosos de mí … os llevo en mi corazón. A mi abuela, que siempre presume de nieto; espero que esta vez no sea una excepción; yo también te quiero Madrina. La mención más especial es para mis Padres, aquellas personas maravillosas que siempre me han apoyado y ayudado en todas las etapas de mi vida, gracias a ellos soy la persona que soy a día de hoy; muchísimas gracias por TODO y por TANTO … Os quiero mucho. INDICE 1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS GENERALES ........................................ 1 2. ANTECEDENTES DEL TEMA ..................................................................... 7 2.1. CARACTERÍSTICAS DEL SECTOR OVINO Y CAPRINO EN GALICIA ............................................................................................... 9 2.1.1. Censo e importancia económica ................................................ 9 2.1.2. Tipos de explotaciones ............................................................. 15 2.2. EPIDEMIOLOGÍA DE LAS PRINCIPALES PARASITOSIS DIGESTIVAS Y PULMONARES QUE AFECTAN A LOS PEQUEÑOS RUMIANTES ................................................................ 18 2.2.1. Protozoosis digestivas .............................................................. 18 2.2.2. Cestodosis ................................................................................ 23 2.2.3. Trematodosis ........................................................................... 25 2.2.3.1. Fasciola hepática ........................................................ 25 2.2.3.2. Dicrocoelium dendriticum............................................ 30 2.2.3.3. Paranfistómidos ........................................................... 32 2.2.4. Nematodosis............................................................................. 34 2.2.4.1. Gastrointestinales ........................................................ 34 2.2.4.2. Pulmonares .................................................................. 44 2.2.4.2.1. Protostrongílidos......................................... 45 2.2.4.2.2. Dictyocaulus filaria ..................................... 49 2.3. PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y CONTROL DE LAS PRINCIPALES ENDOPARASITOSIS QUE AFECTAN A LOS PEQUEÑOS RUMIANTES .............................................................. 51 3. ESTUDIOS REALIZADOS .......................................................................... 55 CAPITULO 1. PREVALENCIA, INTENSIDAD DE ELIMINACIÓN Y FACTORES DE RIESGO DERIVADOS DEL MANEJO DE LAS PARASITOSIS DIGESTIVAS Y PULMONARS EN REBAÑOS DE PEQUEÑOS RUMIANTES EN SEMIEXTENSIVO DE GALICIA ............... 57 3.1.1. Introducción y objetivos específicos .......................................... 59 3.1.2. Material y métodos .................................................................... 60 3.1.2.1. Área de estudio y animales........................................... 60 3.1.2.2. Factores de riesgo ........................................................ 61 3.1.2.3. Análisis coprológicos ................................................... 63 3.1.2.4. Análisis estadísticos ..................................................... 65 3.1.3. Resultados y discusión ............................................................... 66 3.1.3.1. Prevalencia e intensidad de eliminación de ooquistes de Eimeria .................................................................................... 68 3.1.3.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de cestodos ................................................................................... 71 3.1.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de trematodos ............................................................................... 74 3.1.3.3.1. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Fasciola ..................................................... 75 3.1.3.3.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Dicrocoelium .............................................. 77 3.1.3.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de paranfistómidos .......................................... 80 3.1.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales .................................................... 82 3.1.3.5. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de nematodos broncopulmonares .................................................. 85 3.1.3.5.1. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de protostrongílidos ......................................... 86 3.1.3.5.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de D. filaria ..................................................... 91 CAPITULO 2. ANÁLISIS DE LOS PRINCIPALES FACTORES DE RIESGO QUE AFECTAN A LA PREVALENCIA E INTENSIDAD DE ELIMINACIÓN DE LOS ENDOPARÁSITOS QUE AFECTAN A LOS REBAÑOS EN INTENSIVO ..................................................................................................... 95 3.2.1. Introducción y objetivos específicos .......................................... 97 3.2.2. Material y métodos .................................................................... 98 3.2.2.1. Área de estudio y animales........................................... 98 3.2.2.2. Factores de riesgo ........................................................ 99 3.2.2.3. Análisis coprológicos ..................................................101 3.2.2.3.1. Esporulación ooquistes de Eimeria spp .......101 3.2.2.3.2. Coprocultivos .............................................104 3.2.2.4. Análisis estadísticos ....................................................105 3.2.3. Resultados y discusión ..............................................................106 3.2.3.1. Prevalencia e intensidad de eliminación de ooquistes de Eimeria .....................................................................107 3.2.3.1.1. Prevalencia total y por especies ..................107 3.2.3.1.2. Intensidad de eliminación ...........................111 3.2.3.1.3. Factores de riesgo ......................................112 3.2.3.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de trematodos .................................................................115 3.2.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales ......................................117 3.2.3.3.1. Prevalencia total y genérica por trichostrongílidos ......................................................117 3.2.3.3.2. Intensidad de eliminación de huevos de trichostrongílidos ......................................................121 3.2.3.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Trichuris ...................................................123 3.2.3.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Nematodirus y otros nematodos .................125 3.2.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de nematodos broncopulmonares ....................................126 3.2.3.4.1. Prevalencia total y genérica ..........................126 3.2.3.4.2. Intensidad de eliminación ..............................132 CAPITULO 3. ANÁLISIS DE LA EFICACIA DE LOS PROGRAMAS DE DESPARASITACIÓN EN EXPLOTACIONES DE PEQUEÑOS RUMIANTES EN GALICIA Y PROPUESTAS DE MEJORA ..............................................135 3.3.1. Introducción y objetivos específicos .........................................137 3.3.2. Material y métodos ...................................................................138 3.3.2.1. Área de estudio y animales..........................................138 3.3.2.2. Análisis estadísticos ....................................................140 3.3.3. Resultados y discusión ..............................................................141 3.3.3.1. Influencia del tratamiento sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de Eimeria .........................................141 3.3.3.2. Influencia del tratamiento sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de cestodos.........................................144 3.3.3.3. Influencia del tratamiento sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de trematodos .....................................147 3.3.3.4. Influencia del tratamiento sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de nematodos gastrointestinales ..........154 3.3.3.5. Influencia del tratamiento sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de nematodos broncopulmonares ........156 3.3.3.6. Pautas para el diseño de un programa de control integral de las principales infecciones parasitarias parasitosis en las granjas de pequeños rumiantes del noroeste de España.......................................................................164 3.3.3.6.1. Eimeria .........................................................164 3.3.3.6.2. Cestodos .......................................................165 3.3.3.6.3. Trematodos ...................................................166 3.3.3.6.4. Nematodos gastrointestinales ........................167 3.3.3.6.5. Nematodos broncopulmonares ......................169 4. CONCLUSIONES ........................................................................................171 5. RESUMEN/RESUMO/SUMMARY ............................................................175 6. BIBLIOGRAFÍA..........................................................................................191 1. INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS GENERALES INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS 3 Galicia es una región eminentemente ganadera, en la que predomina la explotación del ganado vacuno de leche y carne que ocupa los terrenos más productivos. No obstante, los pequeños rumiantes también están muy presentes en esta región, siendo Galicia la comunidad española con un mayor número de explotaciones, aunque la mayoría están orientadas al autoconsumo o a complementar los ingresos obtenidos por otras actividades agroganaderas. El progresivo abandono del aprovechamiento del monte y la repoblación forestal, claramente opuesta a los intereses ganaderos, han sido los principales motivos que han frenado la expansión de este sector, relegándolo, a menudo, a entornos marginales con escasos recursos alimenticios y en condiciones climáticas más desfavorables. En las últimas décadas y, gracias a la Política Agraria Común (PAC) se ha despertado cierto interés en la administración por la contribución de los pequeños rumiantes a la gestión eficaz de la superficie agraria de Galicia; en este sentido, entre los años 20072009 se desarrolló un Convenio Silvopastoril orientado a poner en valor la producción agroganadera y forestal, contribuyendo a fijar y mantener la población del medio rural, al tiempo que se compatibilizaba la explotación de la ganadería extensiva y de la fauna silvestre. También se pretendió mejorar la ordenación del territorio a través de la gestión de la superficie infrautilizada, incrementando la extensión de los pastos de las granjas y empleando al ganado ovino y caprino para controlar la biomasa y, de esta forma, prevenir los incendios forestales. Gracias a este tipo de iniciativas y, a pesar del escaso impacto y estrecho margen de beneficio de esta actividad, el sector ovinocaprino ha experimentado en las últimas décadas un crecimiento moderado. En buena medida gracias al aumento de la profesionalización y la diferenciación del producto, impulsada por la Asociación de Criadores de Ovino y Caprino de Galicia (OVICA) que engloba a un 20% del censo de gallego y a más de la mitad de las explotaciones gallegas con más de 100 animales y, por la ADSG ACIVO, que cuenta con un equipo de veterinario/as que vela por la sanidad de la cabaña gallega JAIME CALVO RODRIGUEZ 4 mediante el desarrollo de un programa sanitario en las explotaciones asociadas. En Galicia, la mayoría del ganado ovino/caprino se explota en régimen extensivo o semi extensivo, lo que dificulta la adopción de medidas de control sanitario y favorece la aparición de diversos procesos patológicos. Además, el clima templado y húmedo que predomina en esta región favorece el desarrollo del ciclo biológico de muchos parásitos, entre las que destacan los nematodos broncopulmonares y gastrointestinales (Cienfuegos et al., 2009a; López et al., 2011; Díaz et al., 2011). Para fortalecer la producción de carne de ovino y caprino en Galicia, al tiempo que se aumenta su competitividad en el mercado español, se debe disponer de una cabaña con un correcto estado sanitario que permita optimizar su rendimiento. En este sentido resulta imprescindible conocer cuáles son las principales infecciones que afectan a los pequeños rumiantes en esta Comunidad Autónoma, así como los factores que más condicionan su presencia; solo de esta forma se podrán instaurar las correspondientes pautas de control y, reducir las importantes pérdidas económicas, tanto directas como indirectas, debidas a estas enfermedades. De acuerdo con diversos autores (González-Lanza et al., 1993; Dimander et al., 2003) el adecuado desarrollo y la posterior aplicación de programas estratégicos de control debe basarse en la elaboración previa de estudios epidemiológicos sobre los procesos parasitarios que afectan a los animales de una determinada zona. Finalmente, aunque las especies de pequeños rumiantes presentan similares infecciones, la sensibilidad frente a determinados parásitos, como es el caso de las neumonías verminosas (Mangeon y Cabaret, 1987), difiere considerablemente entre cabras y ovejas. De hecho, se ha constatado que la aplicación de tratamientos antihelmínticos incorrectos y sin base epidemiológica, además de resultar poco eficaces y muy costosos, provoca problemas de resistencias antihelmínticas (Álvarez-Sánchez et al., 2006; Díez-Baños et al., INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS 5 2008; Torres-Acosta et al., 2003, 2005; Papapoulus et al., 2004; Geurden et al., 2014; Martínez-Valladares et al., 2015). La política agraria común incluye numerosas medidas para prevenir y controlar adecuadamente las enfermedades que afectan a los pequeños rumiantes. En Galicia, los programas sanitarios que realizan las asociaciones de ganaderos se basan casi exclusivamente en el control de unas pocas enfermedades parasitarias. Teniendo en cuenta estos antecedentes se ha diseñado un estudio cuyo objetivo general ha sido: Determinar la prevalencia, intensidad de eliminación y factores de riesgo, derivados del manejo, de los principales parásitos digestivos y pulmonares que afectan a los pequeños rumiantes del noroeste de España. Dentro de este objetivo general se plantean los siguientes objetivos específicos: 1. Establecer la influencia de distintos factores de riesgo para los principales endoparásitos digestivos y pulmonares que afectan a los pequeños rumiantes en Galicia. 2. Identificar diferencias en la distribución de las parasitosis digestivas y pulmonares en función del régimen de manejo (intensivo/semiextensivo). 3. Determinar las principales especies de géneros de coccidios y nematodos gastrointestinales que afectan al ganado en intensivo en Galicia. 4. Comprobar la eficacia de los programas antiparasitarios empleados habitualmente en rebaños de pequeños rumiantes en Galicia. 5. Establecer nuevas pautas de control para disminuir la presentación de infecciones parasitarias en las granjas de pequeños rumiantes de Galicia. JAIME CALVO RODRIGUEZ 12 momento a partir del cual ha invertido esta tendencia manteniéndose relativamente estable en los dos últimos años alrededor de los 15-16 millones de efectivos. En el ámbito de la Europa comunitaria, esta cifra sitúa a España como el segundo país en importancia por censo alcanzando 15,9 millones de cabezas, cifra superada únicamente por Reino Unido con 23,3 millones (Eurostat, 2018). Respecto al ganado caprino el censo total no ha sufrido descensos tan significativos como en el caso del ganado ovino. Según Eurostat (2018) lidera el censo comunitario Grecia con 3,7 millones de cabezas seguida por España (3 millones), Rumanía (1,5 millones) y Francia. En la distribución del censo total de ganado caprino por comunidades autónomas destacan: Andalucía con el 37% de efectivos, Castilla-La Mancha con el 16%, Extremadura con el 10%, Canarias con el 7%, y Castilla y León con el 5% que concentran el 75% del censo nacional. Respecto al caprino, en Galicia están censadas (MAPA, 2018) unas 50.523 cabezas. Galicia aporta únicamente el 2% al censo total de caprino de España (Figura 2). En este caso la provincia con mayor censo es Lugo (17.776), seguida por Ourense (13.737), Pontevedra (11.396) y A Coruña (73614). Figura 2. Distribución del censo caprino por comunidades autónomas (MAPAMA, 2018) ANTECEDENTES 13 En la actualidad este sector se está bastante profesionalizando, lo que se traduce en un mayor tamaño de los rebaños y, aun así, el número medio de cabezas es muy variable, siendo más frecuentes los rebaños con menos de 100 animales, aunque excepcionalmente hay explotaciones con más de 400 cabezas. Además, es frecuente observar la presencia de cabras y ovejas conviviendo en un contacto más o menos estrecho, aunque cada vez son más las explotaciones especializadas en una sola especie (Tabla 2). El sector ovino-caprino, incluyendo ambas orientaciones productivas (carne y leche) representa el 4,2% de la Producción Final Agraria en España con una cifra de 1.956,4 millones de euros en 2016 (MAPAMA, 2017). En el conjunto de la rama ganadera, ocupa el quinto lugar en importancia económica en nuestro país en términos de renta agraria, un 11,5% de la Producción Final Ganadera (PFG), por detrás del porcino, el vacuno de carne, la avicultura de carne y del sector vacuno de leche. Tabla 2. Tipos de rebaños en Galicia (Consellería do Medio Rural, 2019) EXPLOTACIONES OVEJAS CABRAS Solo ovejas 14.026 120.203 - Solo cabras 3.068 - 20.298 Mixtas 2.546 32.733 19.022 TOTALES 19.640 152.936 39.320 El valor de la PFG para la producción de carne de ovino y caprino ascendió a 1.205 millones de euros en 2016, un 2,2 % inferior a la registrada en el año anterior. Así, España figura en segundo lugar a nivel europeo en importancia productiva, por detrás de Reino Unido en el caso del ovino de carne y de Grecia en el caprino de carne Por otro lado, la producción de leche de ovino y caprino en nuestro país alcanzó un valor económico estimado de 751,9 JAIME CALVO RODRIGUEZ 14 millones de euros, es decir el 4,4% de PFG y el 26,6 % del valor económico de la producción láctea nacional que en el año 2016 fue de 2.825,8 millones de euros incluyendo la leche de vaca, oveja y cabra. Figura 3. Producción final de ovino y caprino (MAPAMA, 2018) En España la producción de este sector está especialmente orientada a la producción de carne, especialmente en comunidades como Castilla-León, Cataluña y Castilla-La Mancha y Aragón (Tabla 3). No obstante, la producción de leche, destinada fundamentalmente a la elaboración de quesos también es importante, si se tiene en cuenta que la mayor parte de la leche de oveja y cabra se destina a la transformación en quesos y productos lácteos. El aumento de los niveles de producción de los últimos años es fruto de la reestructuración y modernización que se está produciendo en los sectores ovino y caprino de leche. Así, la sustitución a gran escala de efectivos de razas autóctonas en el sector ovino por razas foráneas mejoradas, como es el caso de la Assaf o la raza Lacaune que han aumentado ostensiblemente en nuestro país, han modificado el perfil productivo principalmente en las comunidades autónomas de Castilla-La Mancha, Madrid y Castilla y León, con explotaciones intensivas en estabulación permanente. A todo ello hay que añadir una mayor especialización y profesionalización de la mano de obra en ambos sectores. ANTECEDENTES 15 Tabla 3. Distribución de la producción total de carne de ovino (MAPAMA, 2018) 2.1.2. Características de los rebaños en Galicia En Galicia el sector ganadero ha ido variando con los años y, aunque la principal actividad ganadera sigue siendo la explotación del ganado vacuno de leche, en las últimas décadas, se está tendiendo a la explotación de los rumiantes en extensivo, ya que la producción de carne en este tipo de ganadería es de gran calidad y necesita poco gasto de energía fósil, por lo que es capaz de mantenerse con eficacia y de forma sostenible y duradera. Este hecho ha propiciado que el censo de explotaciones caprinas y ovinas, aunque sigue siendo inferior al del bovino, se haya ido incrementando progresivamente (Consellería do Medio Rural, 2021). JAIME CALVO RODRIGUEZ 16 La explotación de los pequeños rumiantes ha estado siempre ligada a áreas con condiciones climáticas desfavorables. Su rusticidad hace que estas especies sean las más indicadas para el aprovechamiento de los recursos existentes en áreas fundamentalmente de secano, contribuyendo de forma importante a la economía de esas zonas (Sánchez Belda y Sánchez Tujillano, 1986). En este sentido, la cría de ganado caprino ha estado vinculada tradicionalmente a áreas más desfavorecidas, como zonas de montaña y espacios agrícolas donde abundan terrenos de baldío. Más de la mitad de la población ovina del mundo se encuentra en los países en desarrollo; las ovejas son más frecuentes que las cabras en climas más fríos. La producción ovina tiene muchos productos potenciales (leche, carne, piel, fibra y estiércol), pero la mayoría de los pequeños productores de los países en desarrollo crían ovejas por su carne o para la venta como ganado en los mercados locales. La mayor parte de la leche de oveja se produce en la región mediterránea, y la mayoría de las razas de ovejas de aptitud lechera se encuentra en esta región y en Oriente Próximo. La selección genética de las ovejas lecheras no ha dado lugar a mejoras significativas del rendimiento lechero y de la duración de la lactancia comparables a las obtenidas en cabras y bovinos. Entre las razas de ovejas más productoras de leche cabe mencionar la Awassi, la Frisona del Este y la Lacaune. Las cabras poseen un mayor rendimiento lechero que las ovejas. Consideradas las “vacas de los pobres” son la principal fuente de leche y carne para muchos agricultores de subsistencia de las regiones tropicales. Aunque la mayoría de las cabras lecheras se encuentran en los países en desarrollo, los programas de mejora se concentran en Europa y América del Norte. La selección genética de las cabras lecheras ha dado lugar a aumentos considerables de los rendimientos y a períodos de lactancia más prolongados. En las últimas décadas, las razas especializadas se han exportado a muchos países en desarrollo y se han cruzado con las razas locales en un intento por mejorar la producción de leche. Las razas de cabras lecheras más ANTECEDENTES 17 ampliamente distribuidas a nivel mundial son la Saanen, Anglo Nubian, Toggenburg, Alpina y West African Dwarf. En Galicia el ganado ovino se explota tradicionalmente en un sistema semiextensivo muy ligado al ganado vacuno, compartiendo pastos e incluso, en muchas ocasiones, establos. En cuanto a las razas, el censo de ejemplares da raza ovina galega, caracterizada por su rusticidad, fertilidad y prolificidad ha descendido considerablemente en las últimas décadas, debido a la modernización y especialización de las explotaciones ganaderas, así como de la explotación de otras razas ovinas más precoces y especializadas en la producción cárnica. En el sector ovino gallego predominan los rebaños con pocos ejemplares, aunque también existe un buen número de explotaciones con más de 100 animales en las que se concentra la mayor actividad productiva y que está orientada casi exclusivamente a la producción de carne. La explotación del ganado caprino sigue siendo un sector bastante heterogéneo respecto a los sistemas de explotación, razas utilizadas y nivel de formación de los ganaderos. La mayoría de las granjas de caprino se orientan hacia la producción de leche que se utiliza, básicamente, en la elaboración de quesos. La producción de carne se considera, en general, un producto secundario; de hecho, el número de explotaciones de caprino de carne se ha reducido de forma drástica desde el año 2000. En cuanto al régimen de manejo, las razas de caprino de alta producción lechera y, por tanto, con altas exigencias nutritivas, se crían en intensivo o en semiextensivo en áreas topográficas poco accidentadas y con elevada disponibilidad forrajera; sin embargo, las razas de menor producción lechera o de orientación cárnica se mantienen en pastoreo extensivo o semiextensivo en zonas menos favorecidas, como las de montaña o de cultivos marginales, lo que favorece una ganadería sostenible. En Galicia, los rebaños de cabras siempre han estado ligados a zonas de montaña, donde hace años se explotaban en “veceiras” (rebaños comunitarios), normalmente de forma conjunta con ganado ovino. La cabra resulta óptima para el aprovechamiento de los recursos naturales JAIME CALVO RODRIGUEZ 18 de nuestra Comunidad, debido a su rusticidad y adaptación a la orografía y climatología de los montes gallegos. En Galicia, más del 95% de las cabras pertenecen a cruces de diversas razas; si bien existe un pequeño núcleo de cabras de raza autóctona murciano-granadina dedicado a la producción de leche y un reducido número de animales de raza autóctona “Cabra Galega” sobre la que desde el año 2010 se concentran esfuerzos para su recuperación y conservación. 2.2. EPIDEMIOLOGÍA DE LAS PRINCIPALES ENDOPARASITOSIS QUE AFECTAN A LOS PEQUEÑOS RUMIANTES EN EL NOROESTE DE ESPAÑA Las principales infecciones de etiología parasitaria de los pequeños rumiantes afectan a los aparatos digestivo y respiratorio y están producidas por protozoos, cestodos, trematodos, y nematodos. 2.2.1. Protozoosis digestivas Los protozoos digestivos más frecuentemente diagnosticados en los exámenes coprológicos realizados a los pequeños rumiantes son los coccidios que incluyen diferentes especies del género Eimeria. El ciclo biológico de Eimeria spp es monoxeno, y la fase exógena del ciclo se inicia cuando los animales infectados eliminan ooquistes en las heces y, posteriormente esporulan en el medio, formándose en su interior 4 esporocistos con 2 esporozoítos cada uno (fase de esporogonia). La fase endógena comienza cuando un hospedador ingiere los ooquistes esporulados; liberando por digestión los esporozoítos que invaden el epitelio del intestino delgado, donde se dividen asexualmente (fase de merogonia). Posteriormente, los merozoítos originan las formas sexuales (fase de gametogonia). La conjugación de los gametos dará lugar a cigotos rodeados de una fuerte membrana, formando los ooquistes que salen con las heces. ANTECEDENTES 19 En los rumiantes, el signo clínico más característico de la forma aguda de esta enfermedad es la diarrea profusa, a veces de tipo acuoso-sanguinolento, acompañada de deshidratación, debilidad, falta de apetito y pérdida de peso (Hooshmand-Rad et al., 1994, Hidalgo y Cordero, 1999; Von Samson-Himmelstjerna et al., 2006), aunque la intensidad de estos signos depende principalmente de la carga parasitaria y de la patogenicidad intrínseca de las distintas especies de Eimeria. No obstante, diversos autores (Munyua y Ngotho, 1990; Fayer et al., 2000) han indicado que la presencia de especies patógenas de Eimeria no implica necesariamente la aparición de sintomatología clínica, por lo que se debería considerar la influencia de otros factores como las prácticas de manejo y las condiciones higiénicas y ambientales, etc., en la aparición de enfermedad. Sin embargo, no hay que olvidar las consecuencias económicas negativas que conllevan las infecciones subclínicas, ya que los animales muestran una reducción del consumo de alimento, así como en la ganancia diaria de peso y el crecimiento (Maingi y Munyua, 1994; Cicek et al., 2007). En Europa se han identificado once especies de Eimeria en los pequeños rumiantes en base a la morfología del ooquiste esporulado y al tramo intestinal donde se localizan las diferentes fases del ciclo (intestino delgado, intestino grueso o ambos). En la Tabla 4 se resumen las especies más frecuentes de Eimeria spp en el ganado caprino y/o ovino (Norton 1986; Soe y Pomroy 1992). También se incluye información sobre su potencial patógeno y su localización en el tracto gastrointestinal (Taylor, 2007). E. ovinoidalis/E. ninakohlyakimovae son las especies implicadas con mayor frecuencia en brotes de diarrea, causando hemorragias y descamación de la mucosa tanto en intestino delgado como en grueso; las lesiones cursan con infiltración de leucocitos y macrófagos en mucosa, hiperplasia de las criptas y pérdida del epitelio, lo que se traduce en un síndrome hemorrágico y de malabsorción. La intensidad de eliminación de estas especies es especialmente elevada en los animales más jóvenes (Taylor, 2007). JAIME CALVO RODRIGUEZ 20 Tabla 4. Principales especies de Eimeria identificadas en cabras y en ovejas en Europa y su relación en cuanto a la patogenicidad y localización Especies Patogenicidad Localización Ovejas Cabras Ov/ Cap E. parva E. alijevi +/- ID, IG E. bakuensis (E. ovina) E. arloingi +/- ID E. faurei E. aspheronica -/- Desconocido - E. caprina /- ID, IG E. caprovina E. caprovina /- Desconocido E. ashata E. christenseni +/+ ID E. crandallis E. hirci +/+ Desconocido E. granulosa E. jolchijevi -/- Desconocido E. ovinoidalis E. ninakohlyakimovae +/+ ID, IG E. pallida - -/ Desconocido E. weybridgensis - -/ Desconocido ID: intestino delgado; IG: intestino grueso En general, los porcentajes de infección por Eimeria descritos en pequeños rumiantes son bastante elevados. En ovejas explotadas en semiextensivo en diferentes localidades de Galicia, Pedreira et al. (2003), Cienfuegos et al. (2009a) y Díaz et al. (2010a) comprobaron que el 73%, el 94% y el 73%, respectivamente, eliminaban ooquistes de Eimeria. En animales en pastoreo semiextensivo de otras provincias españolas como Segovia, Burgos y Madrid, Ferre et al. (1991), Hidalgo et al. (1995) y Domínguez-Toraño et al. (2000) señalaron porcentajes de infección del 64-100%, del 98% y del 39,6%, respectivamente. En la provincia de León, Hidalgo y Cordero (1981, 1999) y DíezBaños et al. (2006; 2009), comprobaron que prácticamente todos los ovinos (100% y 95%, respectivamente) eliminaban ooquistes de Eimeria. En ganado caprino los trabajos son escasos y entre ellos mencionamos los de Cienfuegos et al. (2009b) y Béjar (2011) quienes han comprobado que las infecciones por Eimeria spp son muy frecuentes (97-100%) y están muy difundidas entre el ganado caprino en diferentes localidades gallegas. En cuanto a la intensidad de eliminación de ooquistes, hay muchas variaciones, así en ganado ovino de Galicia, Pedreira et ANTECEDENTES 21 al. (2003), Cienfuegos et al. (2009a) y Díaz et al. (2010) señalaron eliminaciones de 350, 3.077 y 1.396 opg de Eimeria spp, respectivamente. En cabras de raza gallega explotadas en Galicia, Béjar (2011) halló medias de 2.487 opg. En otras regiones españolas, De la Fuente y Alunda (1992) citan cifras de eliminación que pueden considerarse altas (7.606 opg), mientras que, en caprinos de Gran Canaria, Ruíz et al. (2006) observaron recuentos entre 100 opg y 1,4x106 opg. En ovinos explotados en semiextensivo en las provincias de Burgos y Madrid, Hidalgo et al. (1995) y Domínguez-Toraño et al. (2000) hallaron cifras medias de eliminación de 788,4 y 272 opg respectivamente. En ovejas explotadas en régimen semiextensivo en la provincia de León, Hidalgo et al. (1997), señalaron valores medios elevados (2.062 opg). Por el contrario, Díez-Baños et al. (2006, 2009), también en ovinos en pastoreo en diferentes zonas de la provincia de León, hallaron eliminaciones mucho más bajas (100 y 89 opg). Factores de Riesgo De acuerdo con Charlier y Paraud (2012), existen dos condiciones que favorecen la aparición de coccidiosis clínica: la ingestión de un número considerable de ooquistes esporulados procedentes de un ambiente muy contaminado y/o una mayor multiplicación del parásito en el hospedador debido al deterioro de la respuesta inmunitaria. Algunas medidas de manejo de animales y pastos (hacinamiento, camas húmedas, rotación, etc.) incrementan la contaminación del medio (Jalila et al., 1998). Además, todos aquellos factores relacionados con las condiciones ambientales (frío, calor), la nutrición (destete, destete precoz, malnutrición), el transporte, etc., que causen estrés, deprimen el sistema inmunitario. Estabulación y número de cabezas. La mayoría de las investigaciones realizadas acerca de las coccidiosis de los rumiantes señalan que éstas constituyen un problema más serio en explotaciones grandes donde los animales se encuentran estabulados o confinados. Además, problemas asociados a censos elevados como el hacinamiento, falta de aireación, aumento de JAIME CALVO RODRIGUEZ 28 animales jóvenes no habrían tenido la oportunidad de infectarse al no haber salido todavía al pasto (González-Lanza et al., 1989). En ganado ovino también se ha observado esta correlación; de hecho, Ferre et al. (1991), observaron ovejas de la provincia de Segovia que habían pastado sólo una temporada y que no eliminaban huevos de F. hepatica mientras que un pequeño porcentaje (0,9%) de los que lo habían hecho durante 2 o más temporadas sí lo hacían. Asimismo, Vázquez et al. (2008) y Painceira (2012) señalaron que la prevalencia de infección por F. hepatica era superior en los animales de mayor edad, aunque estas diferencias no fueron significativas. Pérez-Creo et al. (2016) comprobaron en la raza autóctona “Cabra Galega” mediante ELISA de captura que la edad de los animales era un factor determinante, constatando que la seroprevalencia se incrementaba en los animales de mayor edad, lo que evidencia la falta de respuesta inmune protectora frente a F. hepatica en el ganado caprino. Raza: En cabras de raza “Cabra Galega”, Pérez-Creo et al. (2016) constataron mediante ELISA de captura que esta raza es menos sensible a las infecciones por F. hepatica que las cabras procedentes de cruces, probablemente debido a su mayor rusticidad y adaptación al medio. En un estudio realizado en pequeños rumiantes de Pakistán, Afshan et al. (2013) observaron que en las razas de cabras (Local Hairy o Beetal) y ovejas (Salt Range) autóctonas la prevalencia de infección de F. hepatica era menor que en los cruces. Preston y Allonby (1979) señalan que las diferencias en la prevalencia por diversos helmintos en distintas razas de ovejas podrían tener una base genética, relacionada con genes de dominancia incompleta, al encontrar diferencias entre razas de ovejas sometidas a iguales condiciones de manejo. Sexo: la mayoría de los autores (Pal y Qayyum, 1992; Valcárcel y García Romero, 1999; Khan et al., 2009; Phiri et al., 2005) coinciden en señalar que el sexo de los animales influye sobre la prevalencia de infección por diversos endoparásitos, ya que el estrés al que se ven sometidas las hembras durante la ANTECEDENTES 29 gestación y el periparto produce un descenso del estado inmunitario. En este sentido, en vacuno de Zambia y Pakistán, diferentes autores (Khan et al., 2009, 2010, Phiri et al., 2005) comprobaron que, aunque el manejo de los machos y de las hembras fuera similar, estas últimas presentaban mayor prevalencia e intensidad de infección. Sin embargo, Pérez-Creo et al. (2016), en cabras de raza “Cabra Galega”, mediante ELISA de captura, comprobaron que el sexo de los animales no era un factor de riesgo en las infecciones por F. hepatica. Condiciones edafoclimáticas: Existen diferentes factores epidemiológicos que pueden afectar mucho al ciclo de F. hepatica. Entre los factores extrínsecos se incluyen las condiciones climáticas y edáficas, que modulan la supervivencia de las fases libres (huevos, miracidios y metacercarias), y que favorecen la presencia del hospedador intermediario (G. truncatula). La temperatura y, sobre todo, la humedad y/o las precipitaciones, que permiten la supervivencia de los huevos en el exterior y propician la presencia de hospedadores intermediarios, son los factores más determinantes. En este sentido, diversos autores (Díez-Baños et al., 1989; Rojo y Ferre, 1999; Abrous et al., 1999; Szmidt-Adjidé et al., 2000; Silvestre et al., 2000; Paz-Silva et al., 2003; Otranto y Traversa, 2003; Arias et al., 2011) señalaron que las infecciones por Fasciola predominan en áreas donde haya elevadas precipitaciones anuales y terrenos mal drenados, ya que constituyen el hábitat idóneo para G. truncatula. No obstante, también se ha comprobado que en la prevalencia de infección por F. hepatica, más que de las condiciones climáticas registradas ese año, influyen las del año anterior (Rojo-Vázquez et al., 1989; Gónzalez-Lanza et al., 1989; Manga et al., 1991; Sánchez-Andrade et al., 1995; Szmidt-Adjidé et al., 2000; Arias et al., 2011). De acuerdo con los diferentes autores antes citados, la epidemiología de las infecciones por F. hepatica depende básicamente de las condiciones meteorológicas de la zona de estudio y que, tras primaveras y veranos muy lluviosos, los brotes de fasciolosis se manifiestan en otoño. JAIME CALVO RODRIGUEZ 30 Tipo de manejo: Otro factor determinante es el régimen de explotación, ya que los animales en pastoreo extensivo o semiextensivo presentan prevalencias de infección más elevadas que los mantenidos en un régimen intensivo (Sánchez-Andrade et al., 2001). Esto se debe a que los sistemas extensivo y semi-extensivo favorecen el contacto del hospedador definitivo con el parásito, y por tanto la ingestión de metacercarias en el pasto. Además, las prevalencias de infección son más elevadas en zonas donde las temperaturas son suaves y las precipitaciones elevadas, pues favorecen la presencia de hospedadores intermediarios, como es el caso de las provincias gallegas de Lugo y Ourense (SánchezAndrade et al., 2001). Tamaño de las explotaciones: Pérez-Creo et al. (2016) comprobaron en cabras de raza Galega que la seroprevalencia de F. hepatica era significativamente superior en las explotaciones pequeñas, debido a que se utilizan métodos de manejo tradicionales y no se aplican medidas adecuadas de control y prevención de las enfermedades infecciosas y parasitarias. Rebaños mixtos: Así mismo, Pérez-Creo et al. (2016) concluyeron que con la presencia de cabras en los rebaños de ovejas se incrementaba significativamente la seroprevalencia de infección por este trematodo, probablemente debido a que en los rebaños mixtos se realiza un control sanitario menos estricto. 2.2.3.2. Dicrocoelium dendriticum Los adultos de este trematodo se alojan en los conductos y vesícula biliares de su hospedador definitivo (rumiantes domésticos y silvestres y otras especies de mamíferos); los huevos embrionados alcanzan el intestino a través del conducto colédoco, y son eliminados con las heces. Los huevos son operculados, de pared gruesa y color marrón oscuro con dos manchas grandes más intensas, que corresponden a las masas germinales. La eclosión del huevo y la liberación del miracidio únicamente tiene lugar en el tubo digestivo del primer hospedador intermediario, que son moluscos gasterópodos pulmonados ANTECEDENTES 31 terrestres (Stylommatophora); el miracidio se transforma en esporocisto y finalmente en cercaria que, una vez madura, alcanza la cámara respiratoria del molusco, donde se recubre por mucus formando pequeñas esférulas que contienen un número elevado de cercarias. Estas bolas de mucus, que recién emitidas tienen color blanco brillante, son expulsadas al exterior por el pneumostoma (orificio respiratorio) ayudadas por los movimientos respiratorios del caracol y se depositan sobre las plantas al desplazarse el caracol. Cuando las bolas de mucus son ingeridas por distintas especies de hormigas de la Familia Formicidae, las cuales actúan como segundos hospedadores intermediarios, las cercarias atraviesan el buche de las hormigas y se transforman en metacercarias; una de éstas, o a veces 2 ó 3, se aloja en el ganglio subesofágico de la hormiga, constituyendo la llamada «larva cerebral»; el resto de las metacercarias, con pared quística más consistente, se alojan en el abdomen. Al descender la temperatura, la metacercaria (o metacercarias) alojada en el ganglio subesofágico altera el comportamiento de la hormiga, al provocar en ella una parálisis de los músculos mandibulares (tetania), lo que hace que se fije a la hierba y así se facilita la ingestión por los hospedadores definitivos, especialmente en las horas vespertinas. Según Rojo (1986) y Otranto y Traversa (2003), la dicroceliosis es asintomática, generalmente enmascarada por los efectos patógenos de otras enfermedades; además, las pérdidas económicas son menos evidentes que las causadas por otros trematodos, como F. hepatica, por lo que a las infecciones por D. dendriticum no se les ha concedido la importancia real que tienen. Factores de riesgo Edad: Painceira (2012) encontró que la eliminación de huevos era ligeramente superior en los ovinos de más edad. Especie: Painceira (2012) encontró que las vacas tienen 7,9 veces más riesgo de infección por este trematodo que las ovejas. JAIME CALVO RODRIGUEZ 32 2.2.3.3. Paranfistómidos La enfermedad ocasionada por los trematodos, parásitos de los preestómagos, intestino y en alguna ocasión del hígado, está causada por especies de la Familia Paramphistomidae (géneros Paramphistomum, Explanatum, Cotylophoron y Calicophoron) se localizan, en su forma adulta, en el rumen de los hospedadores definitivos, y con menor frecuencia, en el retículo, donde eliminan huevos que salen con las heces. La similitud entre la fase externa del ciclo de los paranfistómidos y de la de F. hepatica llega a que en Europa incluso comparten el mismo hospedador intermediario (Muro y Ramajo, 1999; Szmidt-Adjidé et al., 2000; Silvestre et al., 2000); además, según Muro y Ramajo (1999) también pueden actuar como hospedadores intermediarios moluscos de las familias Planorbidae y Bulinidae, aunque los caracoles de estas 2 familias son más frecuentes en África, Asia y Australia. Tras la ingestión de las metacercarias infectantes que se encuentran en la hierba, éstas se desenquistan en el duodeno, liberando las adolescarias que se fijan a la mucosa, produciendo los daños más graves. A partir de 6-8 semanas regresan al abomaso y posteriormente al rumen, donde se asientan definitivamente entre las microvellosidades, para madurar 3-4 semanas después. Aunque tradicionalmente los paranfistómidos se han considerado parásitos poco patógenos, la paranfistomosis es una enfermedad que puede causar serias pérdidas económicas a la industria láctea y cárnica, que se han estudiado con mayor profundidad en el ganado vacuno (Castro-Trejo et al., 1990); no obstante, varios autores señalan que es una parasitosis a la que no se le ha prestado la debida atención (Castro-Trejo et al., 1990; Mage et al., 2002), ya que no suele cursar con sintomatología evidente, aunque cargas parasitarias elevadas pueden comprometer el estado nutricional, la producción y el crecimiento de los animales (Padungtod et al., 2001). La primera cita de la presencia de duelas ruminales en ovejas en nuestro país fue realizada por Martínez-Gómez y Hernández ANTECEDENTES 33 (1971) en Córdoba. Más recientemente, Morrondo et al. (2003) citó por primera vez la presencia de huevos de Paramphistomum spp en ganado vacuno de Galicia que años más tarde fueron identificados como Calicophoron daubneyi (Díaz et al. 2006). En Galicia, Vázquez et al. (2008) observaron por primera vez huevos de Calicophoron en ovinos en pastoreo, siendo la primera cita registrada en España, señalando una de infección individual del 0,7% y, del 8,5% al considerar la prevalencia por explotación; asimismo, Cienfuegos et al. (2009a) hallaron una prevalencia individual del 1,1%. Por el contrario, en ganado caprino mantenido en pastoreo en Galicia, no se han hallado eliminaciones de huevos de estos trematodos (Béjar, 2011) En relación con las cifras medias de eliminación, Vázquez et al. (2008) y Cienfuegos et al. (2009a), en ganado ovino en pastoreo en Galicia, obtuvieron cifras medias de eliminación de 68 y 185 hpg, respectivamente. Factores de riesgo Debido a la gran similitud de su ciclo externo con Fasciola, los factores de riesgo relacionados con las condiciones edafoclimáticas y de manejo son idénticas a las de la duela hepática. Edad: Aunque existen muy pocos trabajos que hagan referencia al efecto de la edad sobre la prevalencia e intensidad de infección por Calicophoron daubneyi y Dicrocoelium dendriticum, la mayoría coinciden al apuntar mayores prevalencias en adultos que en jóvenes (Padungtod et al., 2001; Pfukenyi et al., 2005 y Otranto y Traversa, 2002). JAIME CALVO RODRIGUEZ 34 2.2.4. Nematodosis Los nematodos son parásitos muy prevalentes en los pequeños rumiantes y pertenecen a diversas familias y géneros (Tabla 5). Tabla 5. Clasificación taxonómica de los principales nematodos de los pequeños rumiantes SUBCLASE FAMILIA GÉNEROS Adenophorea Trichuridae Trichuris Capillariidae Capillaria Secernentea Strongyloididae Strongyloides Chabertiidae Chabertia Oesophagostomun Ancylostomatidae Bunostomun Trichostrongylidae Cooperia Haemonchus Nematodirus Ostertagia Spiculopteragia Teladorsagia Trichostrongylus Dictyocaulidae Dictyocaulus Protostrongylidae Muellerius Neostrongylus Protostrongylus Cystocaulus 2.2.4.1. Gastrointestinales Las gastroenteritis parasitarias de los rumiantes están causadas, principalmente, por nematodos de los géneros Ostertagia, Teladorsagia, Spiculopteragia, Trichostrongylus, Cooperia, Haemonchus y Nematodirus, y son menos frecuentes las infecciones originadas por Oesophagostomum, Bunostomum, Chabertia, Strongyloides, Trichuris y Capillaria (Armour, 1989). Estas infecciones resultan en una reducción de la productividad debido a una menor capacidad de ingesta, al retraso en el crecimiento y menor ganancia de peso. El ciclo biológico es directo generalmente en todos los nematodos gastrointestinales (NGI), presentando estadios de vida ANTECEDENTES 35 libre y otros de vida parásita. Los huevos se eliminan al medio con las heces de los animales infectados y, cuando las condiciones ambientales lo permitan, continúan su desarrollo embrionario dando lugar a la primera fase larvaria, que eclosiona. La larva se nutre de la materia orgánica de las heces, y tras dos mudas se convierte en larva 3 infectante (L-3) para los hospedadores definitivos. La L-3 tiene, a diferencia de las dos anteriores, una doble vaina protectora que le impide tomar alimentos del medio exterior, pero que le confiere una marcada resistencia a las condiciones medioambientales. Dentro de este modelo general existen excepciones, como ocurre con el género Nematodirus, en el que las L-1 y L-2 evolucionan dentro del huevo, eclosionando la L-3. En el caso de los tricúridos (Trichuris spp y Capillaria spp), los huevos se desarrollan en el suelo hasta el estadio infectante (L-1), y causan la infección al ser ingeridos por el ganado. La fase interna o endógena del ciclo se desarrolla en los rumiantes y a partir de L-3 infectantes, o de huevos con L-1 en el caso de los tricúridos. Estas larvas alcanzan el cuajar o el intestino (dependiendo del género) y entran en contacto con la mucosa, donde mudan hasta L-5 o preadulto. Finalmente, maduran sexualmente y, tras la cópula, comienzan a eliminar huevos con las heces. Respecto a los nematodos gastrointestinales o estrongílidos en ganado ovino de la provincia de Lugo diversos autores señalaron que en todas las explotaciones las ovejas eliminaban huevos de nematodos gastrointestinales y que el porcentaje de animales infectados oscilaba entre el 91 y el 94% (Pedreira et al., 2001b, 2003; Álvarez-Feijóo, 2003; Freiría, 2003; Pedreira et al., 2006; Cienfuegos et al., 2009a; Painceira, 2012). La prevalencia fue similar en cabras de raza autóctona gallega en régimen de pastoreo, donde Béjar (2011) observó que el 86,7% eliminaban cifras medias de 432 hpg (DE 552). Los estudios epidemiológicos acerca de las infecciones por estrongílidos en los pequeños rumiantes de España son especialmente numerosos en el ganado ovino, señalando que JAIME CALVO RODRIGUEZ 36 prácticamente el 100% de los animales eliminan a lo largo de su vida huevos de estos nematodos (Cordero et al., 1985; Miró et al., 1993; Meana y Rojo, 1999). No obstante, la prevalencia de infección varía de unas regiones a otras; los porcentajes más elevados (100%) se hallaron en el Valle del Guadalquivir (Martínez-Gómez, 1985) y en el País Vasco (García y Juste, 1987). En la Meseta Meridional, Tarazona et al. (1985), hallaron porcentajes de infección del 87,5%; en Aragón, según Uriarte et al. (1985; 1990) los porcentajes de infección oscilaron entre el 91,2% y el 89,1%, respectivamente; en la Comunidad de Madrid, el 86,9% de los ovinos eliminaban huevos de estrongilados (Domínguez-Toraño et al., 2000); asimismo, en las provincias de Burgos (Hidalgo et al., 1995), de Segovia (Ferre et al., 1991), de Salamanca (Ramajo et al., 1995) y de Cáceres (Reina et al., 1987), señalaron porcentajes de infección del 78,7%; 76,6%; 72,03% y 68,2%, respectivamente. En ovinos de la provincia de León, Cordero et al. (1985), Díez-Baños et al. (1991 a, b) y Álvarez-Sánchez et al. (2001a), señalaron porcentajes de infección del 81,7, 97,9 y 89,8%, respectivamente. Posteriormente, Díez-Baños et al. (2006), en ovinos en pastoreo semiextensivo en la provincia de León y más concretamente en los explotados en la montaña leonesa (Díez-Baños et al., 2009), observaron que en el 87,7% y 87,4% de las explotaciones los animales eliminaban huevos de tricostrongílidos. Finalmente, Valcárcel y García (1999), en ganado caprino del centro de España, halló también un elevado porcentaje de animales positivos (93%). Las cifras medias de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales halladas en ganado ovino de Galicia pueden considerarse entre bajas y moderadas (McKenna, 1985). Pedreira et al. (2003) señalaron eliminaciones de 357 hpg en las 4 provincias gallegas, mientras que Freiría (2003), en ovejas de Lugo, citó cifras medias más bajas (116,8 hpg). Posteriormente, Cienfuegos et al. (2009a) en ovinos en pastoreo semiextensivo en Galicia, señalaron eliminaciones medias de 632,4 hpg. ANTECEDENTES 37 Los recuentos hallados en Galicia se corresponden, en general, con los obtenidos en diferentes regiones españolas. En las provincias de Burgos y Madrid, Hidalgo et al. (1995) y Domínguez-Toraño et al. (2000), hallaron valores medios de 323 y 1.955,2 hpg, respectivamente. En la provincia de León, DíezBaños et al. (1979) señalaron cifras medias de excreción de 490 hpg; aunque en estudios posteriores (Díez-Baños et al., 2006, 2009b) obtuvieron valores más bajos (98,7 y 143 hpg), siendo similares a los hallados por Martínez-González (1996) quien, en ovinos en pastoreo continúo en la provincia de León, comprobó que las cifras medias de eliminación eran bajas (110 hpg) y que en ningún caso los animales eliminaron más de 1.000 hpg. En las gastroenteritis parasitarias que afectan a los rumiantes tiene una gran importancia los géneros y especies implicadas. Los diferentes géneros de estrongílidos y su prevalencia varían notablemente con la zona de procedencia de los rebaños, aunque también habría que considerar otras variables como la edad de los animales, diseño del estudio, época de muestreo, etc. El número de investigaciones realizado en ganado caprino de nuestro país es muy limitado, por lo que nos referiremos a los llevados a cabo en ovino. En España, diversos autores señalan que Teladorsagia, es uno de los géneros más prevalentes. En Galicia, Pedreira (2006), Álvarez-Feijóo (2003), Freiría (2003) y Painceira (2007) lo hallaron en el 50-83,3% de los rebaños. En la provincia de Toledo, García-Romero et al. (1993) identificaron este género en el 79,8% de los rebaños examinados. Asimismo, Llorente (1999) halló larvas de este género en el 95,8% de los rebaños de ovejas que pastaban en el Valle del Ebro. En la provincia de León, Díez-Baños et al. (1979) identificaron L-3 de Teladorsagia en el 91,1 y 97% de los rebaños; mientras que, Martínez-González (1996) y Álvarez-Feijóo (2003) las hallaron en el 59,5 y 50% de los rebaños estudiados, respectivamente. Asimismo, Haemonchus presenta una elevada prevalencia en los rebaños de algunas zonas de España, especialmente en aquellas más cálidas. Así, García Romero et al. (1993) identificaron larvas de este género en el 79,8% de los rebaños de la provincia de JAIME CALVO RODRIGUEZ 44 aporte hídrico para que las larvas eclosionen. En relación con H. contortus, Dinaburg (1944) obtuvo pocas larvas infectantes por debajo de 18º C, temperatura a la que se conoce “Dinaburg line”. Además, debido a que las L-3 de Nematodirus se desarrollan en el interior del huevo, eclosionan de modo casi simultáneo, cuando tras una exposición prolongada al frío (invierno), se eleva rápidamente la temperatura en primavera, determinando estas condiciones atmosféricas las infecciones masivas en especial de los corderos (Miró et al., 1991; Rojo y Meana, 1999). 2.2.4.2. Pulmonares En los rumiantes, las infecciones por nematodos broncopulmonares se conocen también como “neumonías verminosas”, “bronconeumonías parasitarias”, “bronquitis verminosas” o “estrongilosis respiratorias” y están ocasionadas por diversos géneros y especies que pertenecen a las familias Dictyocaulidae (Superfamilia Trichostrongyloidea) y Protostrongylidae (Superfamilia Metastrongyloidea). Con frecuencia se presentan bronconeumonías verminosas por infecciones mixtas. Estos nematodos, además de poseer ciclos biológicos externos e internos distintos, muestran diferencias marcadas respecto a su localización en el aparato respiratorio, su acción patógena y su sensibilidad a los antihelmínticos. Al igual que sucede con otras parasitosis, los ganaderos no suelen prestar demasiada atención a las infecciones por nematodos pulmonares debido a que, por lo general, son procesos crónicos que no causan bajas y cursan con sintomatología poco evidente. Sin embargo, no se debería olvidar que presentan una elevada morbilidad, lo que implica importantes pérdidas económicas indirectas; además, favorecen la entrada y la acción de otros agentes infecciosos al disminuir la resistencia del hospedador. ANTECEDENTES 45 2.2.4.2.1 . Protostrongílidos La familia Protostrongylidae está compuesta por nematodos que se localizan en el parénquima pulmonar y pequeños bronquiolos de pequeños rumiantes y que necesitan completar su ciclo en un molusco terrestre, en los que se desarrollan las larvas infectantes. A diferencia de otros nematodos, estos parásitos no provocan el desarrollo de inmunidad protectora y pueden infectar a los animales durante toda su vida, estando los animales adultos, por regla general, más parasitados que los jóvenes (Díaz et al., 2011). Las infecciones por protostrongílidos están ampliamente extendidas en las explotaciones de ganado caprino de Galicia, lo que necesariamente implica repercusiones negativas de rentabilidad (Cienfuegos et al., 2009b). En Europa, las principales especies de protostrongílidos que parasitan a los pequeños rumiantes son Cystocaulus ocreatus, Muellerius capillaris, Neostrongylus linearis y Protostrongylus spp. (Rojo y Cordero, 1974; Morrondo et al., 1978). Los adultos de los protostrongílidos se localizan dentro de “nódulos verminosos” en el pulmón del hospedador definitivo (HD), en los cuales la hembra pone huevos que posteriormente eclosionarán en extensas zonas del parénquima denominadas “nódulos de cría” bien delimitados y diferenciados del parénquima pulmonar no dañado o en el árbol bronquial, según la especie. Las L-1, una vez eclosionadas de los huevos, salen a la luz bronquial para ascender con el mucus hasta la glotis, donde son deglutidas para ser eliminadas con las heces. Una vez en el exterior, penetran por el pie de los hospedadores intermediarios (HI), donde realizan dos mudas hasta alcanzar el estado infectante o de L-3, permaneciendo infectante durante toda la vida del HI. Cuando los pequeños rumiantes ingieren los caracoles y babosas infectados las L-3 se liberan y pasan a través de la pared del intestino grueso y alcanzan el pulmón vía hemática y/o linfática, donde se localizan definitivamente los adultos. Los ritmos de la eliminación de larvas en heces son discontinuos pues dependen de diversos factores JAIME CALVO RODRIGUEZ 46 epidemiológicos. La mayoría de los autores (Rojo y Cordero, 1974; Morrondo et al., 1978; Cabaret et al., 1980 a, b, 1984, 1986; Richard et al., 1990), señalan que la eliminación de las larvas depende del propio parásito (localización profunda de los adultos en los pulmones, períodos de fertilidad de las hembras), del H.D. (estado fisiológico, inmunológico y nutricional) y de factores extrínsecos (oscilaciones estacionales y presencia de H.I. adecuados entre otros). Cabaret et al. (1980 a, b) señalaron que la eliminación de las larvas de primer estadio estaba ligada a la fertilidad de los adultos, siendo en orden decreciente: M. capillaris, N. linearis, C. nigrescens y P. rufescens los más prolíficos. Además, observaron que cuando las infecciones son elevadas disminuye la fertilidad de las hembras, lo que origina una menor excreción de larvas. Asimismo, para Cabaret et al. (1986) y Richard et al. (1990), la eliminación también varía con la raza de los animales y el estado fisiológico, comprobando que en el periparto aumentaba la eliminación de larvas, especialmente en el último mes de gestación. En relación con la prevalencia e intensidad de las infecciones por nematodos broncopulmonares, la mayoría de los estudios se han efectuado en ganado ovino, siendo muy escasos los realizados en cabras, a pesar de que diversos autores (Mangeon y Cabaret, 1987; Berrag y Cabaret, 1996; Alemu et al., 2006; Suárez et al., 2014) han señalado que las cabras son más sensibles que las ovejas a las infecciones por nematodos broncopulmonares. De hecho, en estudios previos realizados por nuestro grupo de investigación (Cienfuegos et al., 2009b) comprobamos que, en cabras explotadas en Galicia, tanto la prevalencia de infección (78,6%) como la intensidad de eliminación (283,2; DE 782,5) de larvas de protostrongílidos era netamente superior a la hallada en los ovinos, lo que confirma la importancia epidemiológica que según (Berrag y Urquhart, 1996) tienen las cabras en la contaminación de los pastos con larvas de Protostrongylidae y en consecuencia en la posterior infección de los ovinos. ANTECEDENTES 47 En animales de la provincia de A Coruña, (Martínez et al., 1989 a, b; Morrondo et al., 1992c; Díez-Baños et al., 1989, 1994) comprobaron que la especie más prevalente era N. linearis (71,5%) y en menor proporción encontraron M. capillaris (18,8%) y C. ocreatus (9,7%). Por el contrario, en heces de ovinos de la provincia de Lugo, Díez-Baños et al. (1989) y Martínez et al. (1989 a, b) observaron que las especies más frecuentes en orden decreciente eran: M. capillaris, N. linearis y C. ocreatus. Sin embargo, en estudios realizados en ganado ovino en pastoreo semiextensivo en diferentes localidades de Galicia, en la última década se comprobó (López et al., 2010, 2011) que, tanto el porcentaje de animales que eliminaban larvas (11,6%) como las especies de protostrongilidos que parasitaban a las ovejas se habían reducido, ya que únicamente se hallaron M. capillaris (97,9%) y en mucha menor proporción N. linearis (5,5%). Factores de riesgo Edad: en cabras de raza galega, Béjar (2011) comprobó que la prevalencia e intensidad de parasitación era superior en los animales de mayor edad (100%; x  = 244±333) que en los más jóvenes (85,7%; x = 179±251). En ganado ovino explotado en semiextensivo en Galicia, López et al. (2011) comprobaron que los animales de mayor edad presentaban porcentajes de infección superiores (14,7%) a los observados en los de menor edad (5,8%). Además, según diversos autores (Cabaret et al., 1986; Richard et al., 1990) sobre la eliminación de larvas de Protostrongylidae también influye el estado fisiológico del animal, señalando que ésta se incrementa en el último mes de gestación. Condiciones edafoclimáticas: En ganado ovino en pastoreo continuo en la provincia de A Coruña, Díez-Baños et al., (1994) comprobaron que la prevalencia e intensidad de infección era mayor en los meses más fríos (40,9%; 12,3 lpg) que en los más cálidos (21,9%; 0,7 lpg); asimismo, Cienfuegos et al. (2007) señalaron que el porcentaje de animales que eliminaban larvas de protostrongílidos y los valores medios de eliminación de larvas JAIME CALVO RODRIGUEZ 48 eran superiores en primavera (48,5%; 88 lpg) que en otoño (44,9%; 68,8 lpg). Además, en los protostrongílidos hay que tener en cuenta que para que se complete el ciclo, en el área donde pastan los animales deben existir moluscos gasterópodos terrestres que actúen como H.I. (López et al., 1997, 1998; Morrondo et al., 1987, 1988, 1992b, 2005). Además, según estos autores, el desarrollo de las larvas en los moluscos no es simultáneo, de modo que en un mismo caracol se encuentran distintos estadios de desarrollo, al tiempo que puede hallarse infectados por varias especies de nematodos pulmonares. El desarrollo larvario de M. capillaris y N. linearis en H.I. adecuados fue más lento en los meses fríos (60 días p.i.) que en los cálidos (15-20 días p.i.). El máximo de L-3 por molusco de ambos parásitos se obtuvo entre finales de primavera y otoño, de modo que este período entraña mayor riesgo de infección para los hospedadores definitivos (Morrondo et al., 1987, 1988). No obstante, en el Noroeste de España diversos autores (Morrondo et al., 1987, 1988, 1992b, 2005; López et al., 1997, 1998) comprobaron que especies de moluscos como Cernuella (Xeromagna) cespitum arigonis, Cochlicella barbara y Cernuella (Cernuella) virgata, permanecen activos durante todo el año, por lo que si albergan L-3 la infección de los hospedadores definitivos es posible en cualquier época; además, estos autores, en condiciones experimentales y naturales, comprobaron que elevadas infecciones de los hospedadores intermediarios por larvas de protostrongílidos aumentaban de forma significativa su mortalidad. Rebaños mixtos: López et al. (2011) comprobaron que uno de los factores que más influían era la convivencia de los ovinos con las cabras, ya que la prevalencia era superior (12,5%) a la hallada cuando no había presencia de cabras (4%). Así mismo, se comprobó que, en los animales de mayor edad, la prevalencia de infección por protostrongílidos era superior cuando se introducían ovejas de otros rebaños (20,8%) que cuando no se incorporaban animales de otras explotaciones o estos eran solo machos (11,8%). ANTECEDENTES 49 2.2.4.2.2.Dictyocaulus filaria Los adultos de Dictyocaulus filaria, especie que parasita a los pequeños rumiantes domésticos, se encuentran en tráquea, bronquios y bronquiolos. Las hembras son ovovivíparas, por lo que liberan los huevos que contienen larvas 1 (L-1) totalmente desarrolladas. La eclosión de estas tiene lugar en los bronquios, para ser arrastradas por el epitelio vibrátil hacia la tráquea y espacio nasofaríngeo, donde son deglutidas para ser excretadas finalmente con las heces. La fase externa se desarrolla en 6-7 días, en condiciones adecuadas de temperatura y oxigenación, mudando en el seno de la materia fecal hasta la fase larvaria infectante L-3. La dispersión de larvas de Dictyocaulus por el hongo Pilobolus, que crece con frecuencia en las deyecciones de rumiantes, tiene gran importancia epidemiológica, debido a que cuando se abre el esporangio, junto con las esporas, se dispersan las L-3 de Dictyocaulus; comprobándose que la contaminación de los pastos se reduce sensiblemente cuando la presencia de Pilobolus es baja. Además, la diseminación también se favorece con la ayuda del viento, aves, neumáticos de vehículos, estercolado, botas de los operarios, etc. (Díez-Baños et al. 1999). El ciclo biológico es directo, por lo que los rumiantes se infectan al ingerir las L-3 con la hierba. Cuando las larvas llegan al intestino delgado atraviesan la mucosa intestinal, pasan a la circulación linfática y alcanzan los ganglios linfáticos mesentéricos locales, donde mudan a larvas L-4, aproximadamente a los 4 días p.i., desde los capilares perialveolares atraviesan los tejidos y pasan a los alvéolos y bronquiolos pulmonares, donde realizan la última muda para pasar a L-5 (18-20 días p.i.). En los bronquios y bronquiolos estas fases inmaduras se desarrollan sexualmente, y al cabo de un mes p.i., ya se observan las L-1 en las heces. JAIME CALVO RODRIGUEZ 50 Factores de riesgo Edad: en las infecciones por D. filaria, tanto en el ganado caprino como en el ovino se ha comprobado que influye la edad de los animales, ya que en los adultos el ciclo interno se desarrolla más lentamente, siendo el período de prepatencia de 50-80 días, y algunas larvas se destruyen a su paso por los ganglios mesentéricos y el pulmón, de modo que se desarrolla un cierto grado de inmunidad protectora (Díez-Baños et al., 1999, 2003). Además, la edad de los animales, juntamente con la inmunidad, limita el número de L-1 en heces, de forma que los adultos eliminan cifras más bajas de lpg que los más jóvenes (Morrondo et al., 1978; Díez-Baños et al., 1989; Martínez et al., 1989; Garijo et al., 2007; Cienfuegos et al., 2007). Infecciones mixtas: asimismo, y como ya habían comprobado diferentes autores (Morrondo et al., 1990, 1991 b, c; Ferre et al., 1991; Hidalgo et al., 1995; Díez-Baños et al., 2006, 2009; Cienfuegos et al., 2007, 2009a) en la mayoría de las infecciones, D. filaria coexiste con varias especies de protostrongílidos. En este sentido, López et al. (2011) señalaron que cuando las ovejas están infectadas con D. filaria y con protostrongílidos la prevalencia (24,7%) e intensidad de infección por (24,8 lpg) es superior que cuando solo eliminaban larvas de D. filaria (10%; 8,0 lpg). Condiciones edafoclimáticas: no existen prácticamente estudios que relacionen la prevalencia de la infección por D. filaria y las condiciones climáticas. No obstante, se ha observado que sobre el desarrollo de las fases larvarias libres, especialmente de las L-3, influyen la humedad y la temperatura, considerándose estas óptimas entre 10-20°C y 52-100% de humedad relativa (Díez-Baños et al., 1999, 2003; Kusiluka y Kambarage, 2006). ANTECEDENTES 51 2.3. PROGRAMAS DE PREVENCIÓN Y CONTROL DE LAS PRINCIPALES ENDOPARASITOSIS QUE AFECTAN A LOS PEQUEÑOS RUMIANTES Tradicionalmente la lucha frente a los parásitos se ha centrado únicamente en la desparasitación puntual o periódica de los animales sin un diagnóstico previo. El uso desmedido e inadecuado de antihelmínticos de amplio espectro ha favorecido la aparición de cepas resistentes de nematodos parásitos, lo que constituye un grave problema para su control, ya que puede llegar a limitar seriamente las posibilidades de uso de los antiparasitarios. Se sospecha de la existencia de resistencia a un antihelmíntico cuando los animales muestran una escasa respuesta respecto de la mejora clínica tras el tratamiento; no obstante, esta situación también puede obedecer a otras causas. Entre las más importantes se encuentran el diagnóstico incorrecto y la utilización inadecuada de los fármacos, la subdosificación y la propia farmacocinética de los antihelmínticos (Maingi et al., 1996). En este sentido, las encuestas epidemiológicas son muy útiles porque recogen la experiencia de los servicios veterinarios y ganaderos, y permiten tener una visión directa de las pautas de manejo que pueden estar relacionadas directa o indirectamente con la aparición de resistencias en esa región. A partir del conocimiento extraído de estos estudios se podrían tomar las medidas de control necesarias, pero hay que tener en cuenta que cada vez más, el diagnóstico y control son dos acciones inseparables; en este sentido no sólo basta con conocer el agente causal, sino que también es imprescindible determinar lo antes posible el grado de sensibilidad de las poblaciones de nematodos parásitos frente a diversos grupos químicos (Nari, 1996). La coprología, a pesar de ser menos sensible que las técnicas serológicas (Paz-Silva et al., 2003), presentan una especificidad más alta y la toma de muestras es menos agresiva y más fácil de realizar, por lo que constituyen un buen método de elección para conocer el nivel de parasitación de un rebaño. Una alternativa al análisis individualizado de cada muestra fecal, con el fin de JAIME CALVO RODRIGUEZ 52 reducir su laboriosidad, coste en tiempo y mano de otra técnica especializada, puede ser la utilización de mezclas de muestras recogidas individualmente en cada explotación “pools” (Pradenas et al., 2008; Viña et al., 2013). El muestreo por mezclas presenta mayor eficacia sobre los análisis individuales en especial cuando la prevalencia individual es baja (Christensen y Gardner, 2000). Al problema de las resistencias debe añadirse que la disponibilidad de nuevos antiparasitarios se encuentra comprometida por el progresivo aumento de los casos de resistencia y los crecientes costes que suponen la investigación y desarrollo de nuevos fármacos, junto con una cierta falta de perspectivas y competencia para el descubrimiento de nuevas drogas (Vial et al., 1999; Sangster y Gill, 1999). El "elevado umbral" que significó el descubrimiento y desarrollo de los fármacos endectocidas, por sus características de espectro y potencia, ha interferido mucho para que la industria farmacéutica consiga desarrollar moléculas con eficacias similares y que puedan justificar inversiones tan cuantiosas en investigación y desarrollo. El control de las parasitosis se ha basado tradicionalmente en la administración de antihelmínticos en los períodos de mayor riesgo de infección de los animales (Waller et al., 1996; Maingi et al., 1996). Inicialmente, los antihelmínticos se utilizaron con fines terapéuticos frente a los procesos clínicos producidos por nematodos gastrointestinales; no obstante, el desarrollo de fármacos de amplio espectro y escasa toxicidad han propiciado que se utilicen con fines profilácticos (Lloyd y Soulsby, 1998; Sangster, 2001). De hecho, en la actualidad existen numerosos fármacos eficaces frente a vermes nematodos adultos y a formas inmaduras y larvarias, e incluso impiden la viabilidad de los huevos de estos parásitos, por lo que a su acción terapéutica se une la eficacia desde el punto de vista profiláctico (Díez et al., 1997; Uriarte et al., 1994). En la elección de un antiparasitario se debe tener en cuenta no solamente su eficacia, que debe superar el 95%, sino también sus efectos secundarios. Según Díez et al. (1997), el fármaco ANTECEDENTES 53 idóneo debe tener un amplio espectro de acción y de seguridad terapéutica, facilidad de administración y, además, debe ser un lo más inocuo posible (eliminarse rápidamente del organismo y dejar pocos residuos). Para saber cuál es el fármaco más adecuado y la mejor época de aplicación, es imprescindible realizar estudios previos sobre el sistema de explotación y otros factores de manejo de los animales y de las zonas donde pastan. Los fármacos que cumplen la mayoría de las propiedades antes citadas pertenecen a los grupos de los imidazotiazoles, probencimidazoles, bencimidazoles y lactonas macrocíclicas (avermectinas y milbemicinas). Durante años, una práctica recomendada para el control de las parasitosis ha sido la administración de un antihelmíntico durante la primavera y el traslado posterior de los animales a zonas no contaminadas que se conoce como “dose and move system” (Barger, 1999; Githigia et al., 2001). Los tratamientos en épocas en que la mayor parte de la población está en el hospedador, ejercen una presión de selección mayor que si la población está mayoritariamente en el medio externo. Por ejemplo, una práctica frecuente para el control de las infecciones por tricostrongílidos es el tratamiento poco antes del parto (Smith, 1990) lo que hace que los animales jóvenes se infecten con larvas resistentes. La salida de estos animales jóvenes a pastos “limpios” ejerce una fuerte presión de selección ya que están contaminados únicamente con larvas resistentes. El pastoreo conjunto de ovejas y cabras puede favorecer la transmisión cruzada de especies resistentes de unos animales en los que, cuando se subdosifica, la resistencia se desarrolla más fácilmente (cabras) a otros en los que el fenómeno es más lento (ovejas) (Conder y Campbell, 1995). La alternancia estratégica en la utilización de antihelmínticos de diferente familia química, o el cambio anual de antihelmíntico, previene el desarrollo de resistencias. Sin embargo, en la práctica los ganaderos utilizan un antihelmíntico hasta que deja de ser eficaz (Conder y Campbell, 1995). Se ha demostrado que la rotación indebida de antihelmínticos de diferente familia química CAPITULO 1 60 de eliminación por estos parásitos en ganado en semiextensivo de Galicia. 3.1.2. Material y métodos 3.1.2.1. Área de estudio y animales Entre 2010 y 2015 se muestrearon un total de 253 granjas distribuidas por toda la comunidad gallega (6 rebaños fueron eliminados del estudio al no disponer de datos suficientes). Todos los resultados presentados en este capítulo se corresponden al primer muestreo realizado en cada granja tras su adhesión a la Asociación de Defensa Sanitaria de Ovino y Caprino de Galicia “ACIVO”, durante la cual se llevó a cabo una encuesta al ganadero en la que se recogieron distintos aspectos relacionados con el manejo de los animales. Las heces se extrajeron directamente del recto (Foto 1) de los animales mediante guantes de plástico y se analizaron en forma de “pooles” o mezcla de heces, de modo que en cada “mezcla” se incluían heces de entre 4-6 animales escogidos al azar de cada uno de los rebaños muestreados. Una vez identificadas las mezclas, se conservaron a 4ºC hasta su posterior procesado dentro de las 48 horas posteriores a su recogida. Foto 1. Recogida de las heces del recto de los animales JAIME CALVO RODRIGUEZ 61 3.1.2.2. Factores de riesgo Para cada rebaño se tuvieron en cuenta los siguientes factores relacionados con el manejo: • Existencia de una explotación con ovejas y/o cabras a menos de 2 km: 0 (no); 1 (si) • Desparasitación: 0 (no); 1 (si) • Incorporación de animales nuevos la explotación: 0 (no), 1 (si) • Realiza cuarentenas: 0 (no); 1 (si) • Tipo de cama: 1 (paja), 2 (otros: emparrillado, suelo) • Frecuencia de limpieza: 1 (más de 2 veces al año), 2 (menos de dos veces al año) • Rotación de pastos: 0 (no); 1 (si) • Uso de estiércol como abono: 0 (no); 1 (si) • Salida de los corderos /cabritos al pasto: 0 (no); 1 (si) • Tamaño granja: ≤50 animales, 51-135 animales, ≥136 animales • Tipo de rebaño: 0 (ovino); 1 (caprino); mixto (2) Foto 2. Rebaño de ovejas en régimen semiextensivo CAPITULO 1 62 Tabla 6. Distribución de los rebaños en función de las variables consideradas en el estudio VARIABLE CATEGORIA NÚMERO Proximidad rebaños NO 109 SI 144 Desparasita NO 1 SI 252 Incorporaciones NO 61 SI 192 Cuarentena NO 162 SI 91 Cama Paja 242 Otros 11 Limpieza ≥2 veces/año 134 <2 veces/año 119 Rotación pastos NO 119 SI 144 Abono estiércol NO 23 SI 230 Crías en pasto NO 203 SI 48 Tamaño granja ≤50 animales 85 51-135 animales 82 ≥135 animales 86 Rebaño Ovino 72 Caprino 60 Mixto 121 Tal como se aprecia en la tabla 6, de los rebaños muestreados 132 eran puros, de los cuales 72 albergaban ovinos y 60 caprinos, y 121 eran mixtos. La práctica totalidad de los rebaños se desparasitaban en primavera y/o otoño con un tratamiento antihelmíntico rutinario, con albendazol como principal principio activo, dirigido fundamentalmente frente a los nematodos gastrointestinales. La incorporación de animales en las explotaciones, sin cuarentena previa, es una práctica frecuente; generalmente se introduce algún macho para evitar la consanguineidad en el rebaño y, en algunas ocasiones hembras, en un número superior a los machos, para ampliar el rebaño. La rotación de pastos y su abonado con estiércol son prácticas JAIME CALVO RODRIGUEZ 63 bastante habituales y, en general, los corderos/cabritos no salen con sus madres al pasto. 3.1.2.3. Análisis coprológicos La identificación y posterior recuento de las formaciones parasitarias presentes en las heces se realizó mediante las técnicas de flotación en solución salina saturada, sedimentación, y migración larvaria. a) Flotación Se tomaron 3 gramos de cada muestra, que se introdujeron en un frasco de plástico de 150 ml al que posteriormente se añadieron 42 gramos de agua corriente. Se agitó el contenido para homogenizar la mezcla y, posteriormente, la emulsión resultante se filtró a través de una malla de 150 µm de diámetro de poro, con objeto de eliminar los detritus de gran tamaño. Con el filtrado se rellenaron dos tubos de 12 ml que se centrifugaron a 380 x g durante 10 min para que las formaciones parasitarias se depositaran en el fondo. Se eliminó el sobrenadante con ayuda de una bomba de vacío y el sedimento se homogeneizó en una solución de cloruro sódico en saturación (ρ= 1,19), completando un volumen de 15 ml. A continuación, se llenaron las dos celdillas de la cámara McMaster (0,30 ml), se realizó el recuento microscópico; el número de formaciones parasitarias por gramo de heces (opg/hpg) se calculó mediante la fórmula: nº opg/hpg = ( (nº ooquistes/huevos) x 45 ml ) / 3 g 0,30 ml b) Sedimentación En un frasco de plástico con perlas de vidrio y agua se depositaron 4 gramos de heces y, tras su homogeneización, se filtró la emulsión resultante a través de una malla de 150 μm de diámetro de poro, que permite el paso de los huevos de trematodos y retienen los detritus de mayor tamaño. CAPITULO 1 64 Posteriormente, el líquido filtrado y el obtenido tras el lavado a presión de la malla se depositó en copas cónicas de sedimentación de un litro y se añadió agua hasta completar este volumen. Al cabo de 20 minutos se retiró el sobrenadante, de forma que el sedimento quedase en un volumen de agua de 200 ml; tras su homogeneización se añadió agua hasta completar 500 ml. Después de 20 minutos se repitió el proceso y se concentró a 100 ml y finalmente, transcurridos otros 20 minutos, se concentró a 20-50 ml. El sedimento se homogeneizó y con él se rellenaron las 2 celdillas de la cámara de McMaster (0,30 ml). Las muestras se examinaron al microscopio con el objetivo de 10x y se determinó el número de huevos de trematodos en las 2 celdillas de la cámara. Los cálculos realizados para estimar el número de huevos por gramo de heces (hpg) se realizaron con la fórmula: nº hpg =( (nº huevos) x 20-50 ml ) / 4 g 0,30 ml c) Migración Esta técnica se utiliza para obtener larvas de primer estadio de nematodos pulmonares y larvas 3 de nematodos gastrointestinales procedentes de coprocultivos. A continuación, se resume el protocolo seguido: Se pesan 5 g de heces y se envuelven en un filtro de tejidono tejido (Filter-Lab, Filtros Arnoia, S.A., Barcelona) y se colocan en el interior de aparatos de migración larvaria Baermann, cubriéndolos con agua tibia para favorecer la migración de las larvas desde las heces al exterior. Una vez que las larvas han emigrado hacia el agua, por gravedad caen a la parte inferior del embudo. Tras un periodo de 24 horas, se abre la llave de paso y se recoge el primer líquido en un tubo de 12 ml; los tubos se centrifugan a 1000 rpm durante 10 minutos para que las larvas se concentren en el fondo. Posteriormente, se elimina el sobrenadante y las larvas se llevan a un volumen de 2 ml; a continuación, se homogeneiza este líquido y se deposita en una cámara de Favati para su observación microscópica (4x). JAIME CALVO RODRIGUEZ 65 Para determinar el número de larvas por gramo de heces (lpg), se dividió el total de larvas halladas entre los gramos de las heces muestreadas. Para identificar las especies de nematodos broncopulmonares que afectan a los rumiantes domésticos nos basamos en las descripciones de larvas 1 realizadas por Díez-Baños et al. (1999). Si el recuento larvario de una muestra era menor de 100 lpg se identificaban todas las larvas presentes, mientras que si era superior o igual a 100 se identificaban solo 100 de forma aleatoria. 3.1.2.4. Análisis estadísticos Los resultados se procesaron y ordenaron usando con ayuda de la hoja de cálculo Calc del paquete ofimático LibreOffice 5.1. La media se empleó como marcador clásico de tendencia y la desviación estándar como medida de dispersión. Para el análisis de la posible influencia de estas variables se utilizó el programa estadístico R (R v.3.4.3; R Development Core Team, 2017). Se tomó el valor de 0,05 como el nivel de significación para todas las pruebas realizadas. La relación entre la prevalencia de los distintas formas parasitarias estudiadas y los factores de riesgo analizados se estudió mediante un análisis de regresión logística utilizando la función glm() del paquete R. Todos los factores se añadieron en el principio del análisis y se fueron eliminando uno a uno mediante un método condicional por pasos hacia atrás según el valor AIC (“Akaike Information Criterion”) utilizando la función step() del paquete estadístico R, hasta llegar al mejor modelo. Los odds ratio se calcularon por exponenciación del estimador obtenido en la regresión logística de cada categoría de cada factor sobre la primera, considerada referente, no sobre la última. Para el análisis de la intensidad de eliminación de las formas parasitarias en las heces se utilizó una prueba estadística ANOVA y una prueba HSD de Tukey con objeto de realizar comparaciones post-hoc por pares entre los grupos formados. Las variables CAPITULO 1 66 dependientes, eliminación de huevos/larvas de los animales positivos en heces, fueron previamente transformadas a logaritmo natural (LN (x+1)), ya que ninguna de ellas se distribuía de forma normal. Todos los factores se introdujeron al inicio del análisis y se fueron eliminando uno a uno, mediante un método condicional por pasos hacia atrás según el valor AIC, hasta alcanzar el mejor resultado. 3.1.3. Resultados y discusión La figura 4 representa la prevalencia de parasitación inicial de los rebaños, es decir en el primer muestreo realizado tras su adhesión a la ADSG ACIVO. Los grupos parasitarios con mayor prevalencia fueron los coccidios, presentes en prácticamente todos los rebaños del estudio, junto con los nematodos gastrointestinales que se hallaron en el 86,2% de las granjas, seguidos por los protostrongílidos con un 51,8% y más distanciados el resto de los parásitos, incluyendo cestodos, trematodos y Dictyocaulus, con prevalencias inferiores al 20%. Figura 4. Prevalencia por rebaño de los distintos endoparásitos encontrados 0 20 40 60 80 100 JAIME CALVO RODRIGUEZ 67 El estudio muestra un claro predominio de los parásitos de ciclo directo sobre los de ciclo indirecto. En el caso de los coccidios eiméridos, son las condiciones en el interior de los establos las que facilitan la supervivencia de los ooquistes y la transmisión, mientras que, en los nematodos gastrointestinales, su ciclo vital se ve favorecido por las condiciones ambientales existentes (humedad relativa elevada y temperatura moderada) durante gran parte del año en amplias zonas del territorio gallego. También es destacable la elevada presencia de nematodos protostrongílidos, debido a que la actividad y supervivencia de sus hospedadores intermediarios (moluscos terrestres) se ve también favorecida por la climatología del noroeste de España. En general, los trematodos presentaron las prevalencias más bajas del estudio. Estos resultados contrastan con los de Vázquez et al. (2008) quienes detectaron en rebaños ovinos de Galicia, un 52,5% positivos a trematodos, aunque con prevalencias individuales mucho menores (7,5%). Al considerar la intensidad de eliminación, representada en la figura 5, se observa que los parásitos con mayores tasas de eliminación fueron los coccidios (1767,9; DE 3979,48), si bien la variación entre las distintas explotaciones es muy elevada, seguida por los nematodos gastrointestinales (675,7; DE 1087,82). Foto 3. Ooquiste de Eimeria (izda), huevos de nematodos gastrointestinales (centro) y de Moniezia (dcha) CAPITULO 1 68 Figura 5. Intensidad media de parasitación de los distintos endoparásitos encontrados 3.1.3.1. Prevalencia e intensidad de eliminación de ooquistes de Eimeria Los coccidios estaban presentes en el 93,7% de los rebaños. La gran resistencia que presentan los ooquistes de este protozoo en el medio, junto al grado de hacinamiento de los animales y, en especial, a que las medidas de limpieza y desinfección no consiguen eliminar de forma efectiva los ooquistes, propician niveles elevados de contaminación en los establos. Estos resultados coinciden con distintos trabajos previos realizados en rebaños en semiextensivo en Galicia (Pedreira et al. 2003; Cienfuegos et al. 2009a; Díaz et al. 2010; Béjar, 2011). En rebaños de la comunidad de Castilla-León diversos autores (Hidalgo y Cordero, 1981; Ferre et al.,1991; Hidalgo et al. 1995; Díez-Baños et al. 2006, 2009b) comprobaron que prácticamente todos los ovinos (95-100%) eliminaban ooquistes de Eimeria. Por el contrario, en animales en pastoreo semiextensivo en Madrid, 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 Intensidad JAIME CALVO RODRIGUEZ 69 Domínguez-Toraño et al. (2000) señalaron porcentajes de infección del 39,6%. Respecto a la intensidad media de eliminación en los rebaños estudiados, esta fue bastante elevada (1.766,9; DE 3.979,48) si bien la variación entre las distintas explotaciones es muy alta. Estas mismas variaciones pueden apreciarse en estudios previos similares (Pedreira et al., 2003; Cienfuegos et al., 2009a; Díaz et al., 2010a; Béjar, 2011) llevados a cabo en Galicia, cuyas cifras oscilaron entre 350 y 3.077 opg de Eimeria, así como en otras regiones españolas, con valores que fluctuaron entre 89 y 1,4x106 opg (De la Fuente y Alunda, 1992; Hidalgo et al., 1995; Domínguez-Toraño et al., 2000; Ruíz et al., 2006; Díez-Baños et al., 2006, 2009). Análisis de factores de riesgo La ingestión de un elevado número de ooquistes esporulados procedentes de un ambiente muy contaminado y/o una mayor multiplicación del parásito en el hospedador cuando hay menor respuesta inmunitaria, constituyen de acuerdo con Charlier y Paraud (2012), los principales factores que condicionan la aparición de brotes de coccidiosis clínica en un rebaño. En este sentido, ciertas medidas de manejo de animales y pastos que favorecen el hacinamiento y la presencia de camas húmedas incrementan la contaminación del medio (Jalila et al., 1998), mientras que la edad y todos aquellos factores que puedan producir estrés en los animales (frío, calor, destete precoz, malnutrición, transporte, etc.) interfieren con el normal funcionamiento del sistema inmunitario. En la tabla 7 se muestran la prevalencia e intensidad de eliminación de ooquistes de Eimeria al tener en cuenta los distintos factores considerados en el estudio. Debido al elevado porcentaje de rebaños que resultaron positivos a Eimeria no se encontraron diferencias significativas en la prevalencia al considerar los distintos factores de riesgo considerados. CAPITULO 1 76 medidas profilácticas y terapéuticas contra este trematodo (Díaz et al., 2006). Análisis de factores de riesgo En la tabla 11 se observa que los factores en los que existen mayores diferencias entre categorías son la cuarentena, tamaño de granja, rotación de pastos y el abono con estiércol, de modo que la prevalencia resulta más baja en los que rebaños pequeños, en los que no abonan con estiércol, rotan los pastos ó realizan cuarentenas. Tabla 11. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Fasciola teniendo en cuenta distintos factores de manejo FACTOR VARIABLES Prevalencia (%) Intensidad (DE) Proximidad <2 Km NO 10,1 69,3 (172,5) SI 16 77,8 (84,6) Desparasita NO 0 - SI 13,5 75 (117,5) Incorporación NO 14,8 104,2 (112) SI 13 64,5 (119,9) Cuarentena NO 9,9 93 (145,2) SI 19,8 59 (87,3) Cama Paja 13,2 76,2 (121) Otros 18,2 56,2 (26,5) Limpieza ≥2 veces/año 12,7 63,4 (381,5) <2 veces/año 14,3 86,7 (146,8) Rotación pastos NO 7,6 134,7 (195,5) SI 17,4 53,5 (66,5) Abono estiércol NO 0 - SI 14,8 75 (117,5) Corderos pasto NO 13,8 85,7 (126,8) SI 12,5 25 (25) Tamaño granja ≤50 animales 9,4 75 (88,6) 51-135 17,1 107,2 (163,4) ≥135 animales 14 37,5 (44,9) Rebaño mixto Ovino 11,6 68,6 (83,1) Caprino 13,3 45,6 (44,7) Mixto 16,7 102,1 (174,7) El análisis de regresión logística señaló el modelo representado en la tabla 12 en el que únicamente la rotación de JAIME CALVO RODRIGUEZ 77 los pastos aparece como un factor de riesgo para la fasciolosis en granjas en semiextensivo, de modo que aquellos rebaños que rotan los pastos presentan 2,63 veces más riesgo de estar infectados por Fasciola que los que no los rotan. Tabla 12. Análisis de regresión logística para la prevalencia por Fasciola Categoría Estimador Z P OR IC Sin rotación - - - - - Con rotación 0,9666 2,2389 0,025* 2,63 1,169-6,456 Respecto a la intensidad de parasitación el análisis de varianza nos da un modelo que incluye la distancia existente con otros rebaños y la salida de corderos al pasto, si bien, debido al bajo número de rebaños positivos, las diferencias no llegaron a ser significativas (Tabla 13). Tabla 13. ANOVA multifactorial de la intensidad de eliminación por Fasciola en los rebaños estudiados Variables gl Suma cuadrados Valor F P Proximidad 1 4,44 3,68 0,064 Corderos pasto 1 10,8 3,26 0,080 Residuos 31 37,44 Los pequeños rumiantes son más receptivos a la infección por Fasciola que el ganado vacuno y, en el caso de las ovejas, la enfermedad aguda se ha asociado con elevada mortalidad en los rebaños. De acuerdo con Reddington et al. (1986) la receptividad y la respuesta inmunitaria de las cabras frente a Fasciola es similar a las de las ovejas. 3.1.3.3.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Dicrocoelium Dicrocoelium se localiza en los conductos biliares del hígado, en general no es muy patógeno, aunque en infecciones intensas puede provocar amplias zonas de cirrosis hepática y distensión de los conductos biliares. En nuestro estudio Dicrocoelium estuvo presente en un 5,9% de los rebaños (Foto 4). CAPITULO 1 78 Este porcentaje difiere ligeramente del detectado por Vázquez et al. (2008) quienes detectaron huevos de este trematodo en 11,9% de las granjas, con una prevalencia intrarebaño mucho menor (0,8%). Respecto a la intensidad de eliminación detectada en este estudio fue de 142,2 (DE 314,94) hpg. Esta media es superior a la de Vázquez et al. (2008) quienes encontraron cifras de 76,1 (DE 22,09). Análisis de factores de riesgo Al considerar los distintos factores derivados del manejo (Tabla 14) vemos que en los rebaños de cabras la prevalencia es del 0%, así como en los que no incorporan animales y no abonan con estiércol. Tabla 14. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Dicrocoelium teniendo en cuenta distintos factores de manejo FACTOR VARIABLES Prevalencia (%) Intensidad (DE) Proximidad <2 Km NO 5,5 300,8 (475,7) SI 6,3 36,4 (25,4) Desparasita NO 0 - SI 6 142,2 (314,9) Incorporación NO 0 - SI 7,8 142,2 (314,9) Cuarentena NO 6,8 185,9 (361,7) SI 4,4 21,9 (18,7) Cama Paja 6,2 142,2 (314,9) Otros 0 - Limpieza ≥2 veces/año 8,2 34,1 (19,4) <2 veces/año 2,5 169,2 (349,6) Rotación pastos NO 0,8 75 (0) SI 9,7 146,9 (326,3) Abono estiércol NO 0 - SI 6,5 142,2 (314,9) Corderos pasto NO 6,4 148,3 (339,5) SI 4,2 102,5 (38,9) Tamaño granja ≤50 animales 2,3 18,7 (8,8) 51-135 7,3 244,1 (493,2) ≥135 animales 8,1 90 (100,4) Rebaño mixto Ovino 9,9 148,5(348,4) Caprino 0 - Mixto 4,2 116,7(159,3) JAIME CALVO RODRIGUEZ 79 El análisis de regresión logística mostró (Tabla 15) que en aquellas explotaciones que realizan rotación de pastos el riesgo de presentar una infección por este trematodo es 13,88 veces superior que en las que no realizan rotación y, sorprendentemente, en aquellos que limpian más de dos veces al año el riesgo es 0,2 veces mayor que en los que lo hacen con menor frecuencia. Debido a la aparente falta de relación entre el grado de limpieza en las explotaciones y el riesgo de infección por Dicrocoelium es de suponer que esta variable esté relacionada en cierta medida con alguna otra variable que sí influya directamente sobre la prevalencia por este trematodo. Tabla 15. Análisis de regresión logística para la prevalencia de Dicrocoelium Categoría Estimador Z P OR IC Limpieza +6m - - - - - Limpieza -6m -1,605 -2,408 0,016* 0,20 0,044-0,663 Sin rotación - - - - - Con rotación 2,630 2,506 0,012* 13,88 2,678255,073 Respecto a la rotación, es posible que el cambio de pastos aumente la probabilidad de los animales de ingerir las fases infectantes del trematodo Al analizar la intensidad de eliminación (Tabla 16), se observa que los rebaños con otras explotaciones situadas a menos de 2 km eliminan una menor cantidad de huevos que aquellos rebaños que se encuentran más aislados. Este hecho podría estar relacionado con las pautas de tratamiento, pero se necesitarían más estudios para confirmarlo. Tabla 16. ANOVA multifactorial de la intensidad de eliminación por Dicrocoelium en los rebaños estudiados Variables gl Suma cuadrados Valor F P Proximidad 1 7,564 7,564 0,0206 Residuos 13 14,179 CAPITULO 1 80 3.1.3.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de paranfistómidos En nuestro estudio los paranfistómidos estuvieron presentes en el 7,5% de los rebaños estudiados. Este porcentaje es similar al encontrado por Vázquez et al. (2008) en ovinos en pastoreo, señalando una prevalencia por explotación del 8,5%, y una infección individual del 0,7%. Por el contrario, Cienfuegos et al. (2009b) hallaron una prevalencia mucho menor del 1,1%. Béjar (2011) no detectó huevos de estos trematodos en ganado caprino en pastoreo de Galicia. A diferencia de lo encontrado con otros parásitos, llama la atención la escasa diferencia existente respecto al porcentaje encontrado por Vázquez et al. (2008) en un estudio en el que se analizaron todos los animales de los rebaños mayores de 6 meses, al tiempo que resultó mucho más elevada que la encontrada por Cienfuegos et al. (2009b) en un estudio similar al nuestro. Estos resultados ponen de manifiesto un aumento de la prevalencia por paranfistómidos en las últimas décadas en el noroeste de España, que también ha sido registrado por otros autores en ganado vacuno (Díaz et al., 2007; Arias et al., 2011; Gonzalez-Warleta et al., 2013; Sanchís et al., 2013; García-Dios et al., 2020) y que se vincula con cambios de las condiciones climáticas, importación de ganado infectado, disponibilidad de técnicas de diagnóstico más sensibles, desparasitaciones repetidas con fármacos sin eficacia frente a estos trematodos y a una buena adaptación de este parásito al hospedador intermediario Galba truncatula. En relación con las cifras medias de eliminación, en nuestro estudio la intensidad de eliminación fue de 51,3 (DE 82,46) hpg; que es inferior a lo obtenido por Vázquez et al. (2008) y Cienfuegos et al. (2009b), en ganado ovino en pastoreo en Galicia, quienes obtuvieron cifras medias de eliminación de 68 y 185 hpg, respectivamente. JAIME CALVO RODRIGUEZ 81 Análisis de factores de riesgo Si bien a primera vista se aprecia (Tabla 17) que los rebaños de cabras y aquellos que están más aislados de otros rebaños presentan una prevalencia más baja por este tipo de trematodos, los niveles son muy bajos en general y la regresión logística no mostró ninguna relación significativa entre los factores derivados del manejo y la prevalencia por paranfistómidos. Foto 4. Huevo de paranfistómido. Los anfistomas/paramphistómidos son trematodos gástricos cuyos estados inmaduros pueden causar daños intensos e incluso comprometer la vida del hospedador en caso de infestaciones muy intensas. Fasciola hepatica y los Paramphistomidae poseen ciclos biológicos similares y los periodos de máximo riesgo son también parecidos. Teniendo en cuenta que este parásito se identificó como Calicophoron daubneyi (Díaz et al. 2006) en ganado bovino, es muy probable que esta especie también parasite pequeños rumiantes; no obstante, sería necesario llevar a cabo una identificación molecular para confirmar la especie/s implicadas. Mientras que la distribución de Fasciola y Dicrocoelium se encuentra bien definida en pequeños rumiantes de la mayor parte de las regiones de nuestro país, los estudios sobre la distribución de los paranfistómidos son más limitados. CAPITULO 1 82 Tabla 17. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de paranfistómidos teniendo en cuenta distintos factores de manejo FACTOR VARIABLES Prevalencia (%) Intensidad (DE) Proximidad <2 Km NO 3,7 15,6 (6,2) SI 10,4 60,9 (90,95) Desparasita NO 0 - SI 7,5 51,4 (82,5) Incorporación NO 13,1 87,5 (119,1) SI 5,7 25,1 (22,3) Cuarentena NO 8,6 43,8 (89,7) SI 5,5 72,5 (60,8) Cama Paja 7,4 53,5 (84,3) Otros 9,1 12,5 (0) Limpieza ≥2 veces/año 8,2 50,1 (100,1) <2 veces/año 6,7 53,1 (56,2) Rotación pastos NO 9,2 68,2 (105,7) SI 5,6 28,2 (21,8) Abono estiércol NO 4,3 12,5 (0) SI 7,8 53,5 (84,3) Corderos pasto NO 6,4 67,4 (96,4) SI 12,5 16,7 (6,4) Tamaño granja ≤50 animales 8,2 69,6 (125,8) 51-135 9,8 54,7 (52,2) ≥135 animales 4,7 12,7 (0,4) Rebaño mixto Ovino 6,6 46,9 (56,2) Caprino 3,3 181,2 (238,6) Mixto 12,5 26,5 (22) 3.1.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales La eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales fue del 86,2% de las granjas. Este porcentaje, a pesar de ser muy elevado, resulta inferior al detectado por diversos autores en Galicia, quienes señalaron que, todas las explotaciones las ovejas eliminaban huevos de nematodos gastrointestinales y que el porcentaje de animales infectados oscilaba entre el 91 y el 100% (Pedreira et al., 2001a, 2003; Álvarez-Feijóo, 2003; Freiría, 2003; Pedreira, 2006; Cienfuegos et al., 2009a; Painceira, 2012; López et al. (2012). En un estudio realizado por Béjar (2011), en cabras de raza autóctona gallega en régimen de pastoreo, el porcentaje fue muy similar (86,7%). JAIME CALVO RODRIGUEZ 83 La intensidad media de eliminación en los rebaños fue de 675,7(DE 1087,82). Béjar (2011) en un estudio en cabras en pastoreo obtuvo cifras medias de eliminación de 432 (DE 552). Análisis de los factores de riesgo En la tabla 18 no se observan grandes oscilaciones de las prevalencias en función de las distintas variables, siendo más evidentes entre rebaños desparasitados o no, y entre los rebaños puros de ovejas y cabras. Tabla 18. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales teniendo en cuenta distintos factores de manejo FACTOR VARIABLES Prevalencia (%) Intensidad (DE) Proximidad <2 Km NO 86,2 572,9 (1076,1) SI 86,1 753,6 (1094,5) Desparasita NO 100 150 (0) SI 86,1 678,1 (1089,7) Incorporación NO 83,6 620,4 (999,1) SI 87,0 692,5 (1115,8) Cuarentena NO 84,5 712,4 (975,8) SI 89,0 613,5 (1259) Cama Paja 86,8 687,5 (1101,8) Otros 72,7 364,2 (566,8) Limpieza ≥2 veces/año 85,8 187,5 (85,4) <2 veces/año 86,5 701,3 (684,1) Rotación pastos NO 77,3 864,5 (1424,6) SI 87,5 542,9 (746,1) Abono estiércol NO 78,3 358,3 (353,6) SI 86,9 704,2 (1126,8) Corderos pasto NO 85,2 613,4 (1065,8) SI 91,7 843,5 (1057,6) Tamaño granja ≤50 animales 84,7 1075,4 (1622,1) 51-135 86,6 492 (580,4) ≥135 animales 87,2 465,8 (627,9) Rebaño mixto Ovino 90,1 516,2 (749,7) Caprino 75 746,6 (1056,8) Mixto 88,9 897,3 (1494,9) El análisis de regresión logística mostró diferencias estadísticas en este último caso (Tabla 19), de modo que la CAPITULO 1 84 prevalencia en los rebaños integrados solo por ovejas y en los mixtos se mostró superior a los que solo había cabras. Tabla 19. Análisis de regresión logística para la prevalencia por nematodos gastrointestinales Categoría Estimador Z P OR IC Caprino - - - - - Ovino -1,1078 -2,601 0,009** 0,330 0,1410,758 Mixto -0,9808 -2,047 0,041* 0,375 0,1400,938 Al considerar la intensidad de eliminación, las mayores diferencias se demostraron al considerar el tamaño de la granja y la frecuencia de la limpieza; no obstante, el ANOVA mostró diferencias significativas al considerar la salida temprana de los corderos al pasto y con el tamaño de la granja (Tabla 20). La salida temprana de los corderos al pasto incrementa la intensidad de eliminación, puesto que los animales jóvenes son más sensibles a la infección y eliminan un mayor número de huevos por gramo de heces, contribuyendo así a la contaminación de los pastos. Tabla 20. ANOVA multifactorial de la intensidad de eliminación fecal de huevos de nematodos gastrointestinales en los rebaños estudiados Variables gl Suma cuadrados Valor F P Corderos pasto 1 11,6 7,422 0,0206** Tamaño granja 2 16,1 5,143 0,0066** Residuos 214 334,4 Por otra parte, tal como se indica en la tabla 21, los rebaños de menor tamaño eliminaron un número significativamente superior de huevos que los más grandes. En general los rebaños más numerosos están más profesionalizados y las condiciones de manejo y de aprovechamiento de los suelen ser más adecuadas. JAIME CALVO RODRIGUEZ 85 Tabla 21. Prueba post-hoc por pares Tukey HSD para la intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales Tamaño granja Diferencia P ≤50/51-135 animales -0,431 0,100 ≤50/≥135 animales -0,647 0,006* 51-135/≥135 animales -0,215 0,552 3.1.3.5. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de nematodos broncopulmonares Las bronconeumonías verminosas de los pequeños rumiantes están ocasionadas por diversos géneros y especies de las familias Dictyocaulidae y Protostrongylidae que, a menudo coexisten en un mismo animal. Estos nematodos, además de poseer ciclos biológicos externos e internos distintos, muestran diferencias marcadas respecto a su localización en el aparato respiratorio, su acción patógena y la sensibilidad a los antihelmínticos. Al igual que sucede con otras parasitosis, los ganaderos no suelen prestar demasiada atención a las infecciones por nematodos pulmonares debido a que, por lo general, son procesos crónicos que no causan bajas y cuya sintomatología es poco evidente. Sin embargo, no se debería olvidar que presentan una elevada morbilidad, lo que implica importantes pérdidas económicas indirectas; puesto que, además de favorecer la entrada y la acción de otros agentes infecciosos por disminuir la resistencia del hospedador, provocan retrasos del crecimiento, pérdidas de peso y fertilidad junto con menor producción de carne, leche, lana, desvieje prematuro y finalmente, decomiso total de pulmones. CAPITULO 1 92 51-135 animales 11 1 (1,8) ≥135 animales 18,6 3 (9,3) Rebaño mixto Ovino 16,5 27,7 (111,5) Caprino 1,7 0,8 (0) Mixto 12,5 1,1 (1,7) El análisis de regresión logística mostró (Tabla 27) la proximidad a otros rebaños, la incorporación de animales nuevos y la presencia de ovejas en los rebaños como los principales factores de riesgo. Al contrario de lo que ocurría con los protostrongílidos, la presencia de ovejas en los rebaños constituye un factor de riesgo para estos nematodos, así los rebaños puros de ovejas poseen 13,37 y 8,77 más riesgo de estar parasitados por D. filaria que los de cabras y mixtos, respectivamente. Tabla 27. Análisis de regresión logística para la prevalencia por D. filaria Categoría EEstimador Z P OR IC Prox. No - - - - - Prox. Si -0,822 2,010 0,044* 0,44 0,199-0,978 No incorpora - - - - - Si incorpora 1,574 2,065 0,039* 4,83 1,341-31,092 Caprino - - - - - Mixto 2,1713 2,008 0,045* 8,77 1,525-166,312 Ovino 2,592 2,467 0,014* 13,37 2,576-246,261 La incorporación de animales nuevos a los rebaños constituye una vía potencial de entrada de nuevas infecciones en la explotación, y así aquellos rebaños que incorporaron machos poseen un riesgo 4,8 mayor de estar parasitados por D. filaria que los que no lo hacen. La mayor parte de las granjas introducen machos para evitar la consanguinidad en sus rebaños y, aunque, en general, los animales introducidos son pocos, su efecto puede verse reflejado de forma significativa tanto en la prevalencia como en la intensidad de eliminación larvaria. De acuerdo con López et al. (2011) los rebaños que además introducen hembras presentan mayores intensidades de eliminación que los que introducen solo machos. JAIME CALVO RODRIGUEZ 93 Finalmente, ninguno de los factores estudiados influyó de forma significativa en la intensidad de eliminación larvaria por D. filaria. Otros factores como la rotación de pastos, las cuarentenas, limpieza de establos más de 2 veces al año o sacar muy pronto los corderos al pasto disminuyeron las prevalencias de ambos nematodos broncopulmonares, si bien las diferencias no fueron estadísticamente significativas. CAPITULO 2. PREVALENCIA, INTENSIDAD Y FACTORES DE RIESGO DE LAS PARASITOSIS DIGESTIVAS Y PULMONARES EN REBAÑOS DE PEQUEÑOS RUMIANTES EN INTENSIVO DE GALICIA JAIME CALVO RODRIGUEZ 97 3.2.1. Introducción y objetivos específicos En Galicia los pequeños rumiantes generalmente se mantienen en un sistema semiextensivo, es decir, saliendo a pastos cercanos durante el día y estabulándolos por la noche. No obstante, hay también un cierto número de explotaciones que mantienen sus animales en sistemas intensivos; especialmente se trata de granjas de cabras de orientación mixta (leche/carne) y cuya leche se destina a la producción de quesos. Las razas de caprino de alta producción lechera y, por tanto, con altas exigencias nutritivas, se crían en intensivo o en semi intensivo en áreas topográficas poco accidentadas y con elevada disponibilidad forrajera, mientras que las razas de menor producción lechera se mantienen en pastoreo extensivo o semi extensivo en zonas de montaña o de cultivos marginales, en los que aprovechan los subproductos agrícolas. El sistema de manejo condiciona en gran medida las infecciones parasitarias presentes en los rebaños. La estabulación permanente de los animales en ocasiones conlleva condiciones de higiene y hacinamiento que favorecen la presencia de parásitos de ciclo directo como los coccidios; por el contrario, su permanencia en recintos cerrados dificulta la infección por parásitos de ciclo indirecto (cestodos, trematodos), ya que impide el contacto de los animales con sus hospedadores intermediarios (caracoles, ácaros oribátidos, hormigas, etc.). En Galicia se han realizado numerosos estudios sobre la prevalencia e intensidad de distintos parásitos en rebaños en semiextensivo (Pedreira et al., 2003; Vázquez et al., 2008; Dacal et al., 2009; Cienfuegos et al., 2009a,b; López et al., 2011, entre otros), sin embargo, hasta el momento se desconoce su incidencia en rebaños que ven restringido su salida al pasto. Teniendo en cuenta estos antecedentes nos planteamos un estudio con los siguientes objetivos específicos: 1. Conocer la prevalencia e intensidad de eliminación fecal de los parásitos gastrointestinales y pulmonares que afectan a los CAPITULO 2 98 pequeños rumiantes mantenidos en un sistema de manejo intensivo. 2. Determinar los géneros y las especies que parasitan a los pequeños rumiantes en sistemas intensivos. 3. Estudiar la influencia de distintos factores de riesgo dependientes del animal y del entorno sobre las prevalencias e intensidades de eliminación por estos parásitos halladas en ganado en intensivo en Galicia. 3.2.2. Material y métodos 3.2.2.1. Área de estudio y animales El estudio se desarrolló entre febrero y mayo de 2016 en granjas de las provincias de Lugo, A Coruña y Pontevedra. Debido al escaso número de explotaciones intensivas existentes en nuestra comunidad, sólo se han incluido en el estudio 5, situadas en los municipios de Cospeito (n=2), Chantada (n=1), Arzúa (n=1) y Mondariz (n=1) (Figura 6). Tenemos que señalar que en la mayoría de estas granjas (4/5) no se seguía un sistema intensivo estricto ya que los animales, si bien permanecían estabulados la mayor parte del tiempo, en ocasiones salían a pequeñas parcelas situadas alrededor del establo. El clima gallego es de tipo atlántico, con temperaturas suaves y altas precipitaciones, pero se pueden establecer tres subdivisiones (Figura 6) que incluyen zona de costa (1), centro (2) y montaña (3). En este estudio, todas las granjas muestreadas se localizaban en la zona centro (<605 m sobre el nivel del mar) que se caracteriza por menores niveles de precipitación que la costa y temperaturas moderada durante gran parte del año. El tamaño de muestra de cada explotación se calculó tratando de cumplir el 95% de intervalo de confianza y el 90% de potencia, considerando un 50% de prevalencia. Los animales se seleccionaron de manera aleatoria, siendo el total de muestras recogidas 165. JAIME CALVO RODRIGUEZ 99 Figura 6. Localización de las explotaciones incluidas en el estudio en relación con las zonas edafoclimáticas (1= Costa, 2= Centro, 3= Montaña) en las que se divide Galicia. El escaso número de granjas en intensivo existentes en Galicia están constituidas exclusivamente por cabras. Por esta razón, todos los animales examinados en este estudio fueron cabras de diferentes razas, predominando los cruces y, en menor medida, las de raza Alpina, Saanen y Murciano-granadina. 3.2.2.2. Factores de riesgo En cada explotación se realizó una encuesta epidemiológica en la que se recogió información relevante referida al manejo, alimentación y tratamientos antiparasitarios que pudieran influir en los resultados de este estudio (Tabla 28). Debido a la escasez de estudios en rebaños intensivos; también se registraron los datos de cada animal obtenidos de las hojas de calificación sanitaria de la explotación, se verificó el censo y se estimó la edad de los individuos expresada en meses. Como en algunas de estas CAPITULO 2 100 explotaciones los animales tenían acceso, aunque de forma muy restringida, a una zona de pasto, se añadió el factor “zona verde” para analizar su posible influencia sobre la prevalencia e intensidad de eliminación de las diferentes formas parasitarias. Tabla 28. Distribución de las muestras en función de las variables consideradas en el estudio VARIABLE CATEGORÍA NÚMERO Edad1 ≤12 meses 47 >12meses 112 Sexo Macho 12 Hembra 149 Tamaño granja <100 animales 87 ≥100 animales 74 Granjas a <2km No 120 Si 41 Desparasitación Primavera 98 Otoño 0 Primavera/otoño 63 Incorporaciones Pienso No 30 Si 131 Zona verde No 34 Si 127 Pienso No 41 Si 120 Cabritos madre/rebaño 71 Con madre 70 Separados 20 Rebaño mixto No 90 Si 71 1No se dispuso de la edad de 2 animales Las cabras muestreadas pertenecían a cruces de diferentes razas de aptitud lechera, y solo un reducido número eran de raza pura (Murciano-Granadina, Saanen y Alpina), por lo que no se consideró la raza como un factor de estudio. JAIME CALVO RODRIGUEZ 101 3.2.2.3. Análisis coprológicos Las heces se extrajeron directamente del recto de los animales mediante guantes de plástico. Una vez identificadas las muestras de forma individual, se conservaron a 4º C hasta su procesado, que se realizó antes de que transcurriesen 48 horas desde la recogida. Con objeto de identificar las formaciones parasitarias presentes, cada una de las muestras fecales se analizó empleando las técnicas de sedimentación, flotación, migración detalladas en el capítulo anterior (3.1.2.3.). Para la identificación de los géneros y especies de coccidios y nematodos tricostrongílidos se hicieron coprocultivos cuyo protocolo se detalla más adelante. 3.2.2.3 1. Esporulación de ooquistes de Eimeria spp En las explotaciones donde se detectó al menos un animal positivo a coccidios, se procedió a la identificación específica de los ooquistes, para ello se realizaron mezclas de las muestras positivas de cada explotación, que se dividieron en dos grupos separados según la edad de los animales (≤12 meses y >12 meses). Para poder identificar las especies de Eimeria presentes, en primer lugar, los ooquistes se esporularon empleando el protocolo descrito por Hendrix (1998): las heces se homogeneizaron con dicromato potásico al 2,5% y se depositaron en una placa de Petri, incubándola a 20ºC durante 10 días. Con objeto de oxigenar los ooquistes y favorecer su esporulación, la placa se abrió diariamente para remover suavemente su contenido. Transcurrido el período necesario para la esporulación, el contenido de la placa se centrifugó a 380 x g durante 5 minutos. Una vez descartado el sobrenadante, se agitó bien el tubo para homogeneizar el sedimento y se añadió solución de sacarosa (ρ= 1,27 g ml-1) hasta formar un menisco en la parte superior del tubo. Sobre el tubo se colocó un cubreobjetos (18 x 18 mm) y se centrifugó a 380 x g durante 10 minutos para que los ooquistes se adhirieran a él. Los cubreobjetos con los ooquistes se colocaron sobre portaobjetos y se observaron a 400 y 1000 aumentos. Para realizar CAPITULO 2 108 Figura 9. Prevalencia de las distintas especies de Eimeria spp en caprino en intensivo en Galicia A la hora de analizar los resultados de las diferentes especies es interesante tener en cuenta sus respectivas capacidades patógenas que, como se dijo anteriormente, varía considerablemente en función de la especie identificada. Todos los animales estaban parasitados y la intensidad de eliminación era elevada, no obstante, la especie más abundante, E. arloingi parece tener poco potencial patógeno, de modo que los animales parasitados por ella raramente manifiestan signos clínicos. Sin embargo, la segunda más frecuente (E. ninakohlyakimovae) sí es patógena y causa importantes lesiones, tanto en intestino delgado como en grueso. Otra de las encontradas con carácter patógeno es E. christenseni (Taylor, 2007), pero su prevalencia fue reducida. En este sentido debemos tener en cuenta que las cabras son animales muy rústicos que apenas manifiestan signos clínicos o estos son difíciles de interpretar, pero la presencia de coccidios y, en concreto, de las especies más patógenas, son de gran interés si se valoran las mermas productivas que ocasionan. Un animal parasitado, aun cuando no muestre signos clínicos siempre tiene 0 20 40 60 80 100 JAIME CALVO RODRIGUEZ 109 repercusiones económicas para la explotación, por ejemplo, los animales jóvenes tardan más en desarrollarse, reduciéndose la ganancia media diaria de peso; en ganado adulto cabe destacar la reducción de la producción de láctea, de vital importancia al tratarse de ganado mantenido, en muchas ocasiones, para obtención de leche. En relación con las diferentes asociaciones de especies de Eimeria (Figura 10), en todos los cultivos realizados se identificaron parasitaciones mixtas de, 5 especies como mínimo, predominando las infecciones por 6 especies (50%), seguidas por las de 5, 7 y 8 especies, todas ellas con un 16,7%. Figura 10. Distribución de las asociaciones de Eimeria spp en los rebaños del estudio Se realizó un análisis estadístico utilizando la función prop.test() para conocer si las prevalencias de las especies eran diferentes y se observó que E. arloingi, E. ninakohlyakimovae, E. alijevi presentan proporciones estadísticamente diferentes, siendo E. arloingi la que muestra una mayor proporción. E. aspheronica y E. christenseni muestran prevalencias similares, del mismo modo que E. hirci y E. jochijevi. La proporción de E. caprina no es estadísticamente diferente a los dos grupos citados anteriormente, por lo que se incluye en ambos. 5 especies 6 especies 7 especies 8 especies CAPITULO 2 110 Se realizó otro análisis para estudiar las diferentes proporciones de las especies de Eimeria encontradas en función de la edad de los animales (≤12 y >12 meses). Los resultados muestran que tanto la prevalencia de E. arloingi (p<0,001) como la de E. christenseni (p=0,007) fueron significativamente más elevadas en los animales adultos. Sin embargo, la proporción de E. ninakohlyakimovae (p= 0,002), E. alijevi (p=0,027) y E. aspheronica (p=0,047) era significativamente más alta en las cabras más jóvenes. La especie más común es E. arloingi; la prevalencia de esta especie aumenta significativamente en animales adultos y aunque no es una especie patógena y su presencia en el animal no causa sintomatología clínica, sí provoca pérdidas en la producción. Al afectar a animales adultos, las principales pérdidas residen principalmente en la producción láctea, pues la mayoría de las cabras muestreadas son hembras (92%) explotadas para la producción de leche. Otra de las especies que sigue esta tendencia es E. christenseni; que también es patógena y causa lesiones intestinales, pero no se conoce su patogenia en detalle (Taylor, 2007). El resto de las especies encontradas afectan en mayor medida a animales jóvenes; el hecho de que su prevalencia disminuya con la edad indica que el animal desarrolla cierto grado de inmunidad protectora frente a estas especies. La inmunidad puede desarrollarse tras una infección intensa o bien mediante infecciones leves y repetidas. Los animales adultos siguen infectados, pero en menor medida, disminuyendo las repercusiones clínicas de estas parasitaciones, pero, sí son una fuente importante de infección para los animales más jóvenes, por lo que se recomienda mantener los animales separados en lotes de diferente edad. La especie más frecuente en los animales más jóvenes es E. ninakohlyakimovae; que resulta patógena ya que causa lesiones en intestino delgado e intestino grueso. Debido a la rusticidad de estos animales, lo más probable es que no se muestren signos JAIME CALVO RODRIGUEZ 111 clínicos, pero que se manifieste como descenso del desarrollo y reducción de la ganancia media diaria y, lo que implica, pérdidas económicas. 3.2.3.1.2. Intensidad de eliminación La intensidad media de eliminación de ooquistes de Eimeria spp. fue de 2.164,9 opg. Estas cifras son muy superiores a las detectadas en ganado ovino en semiextensivo en Galicia por Pedreira et al. (2003) y Díaz et al. (2010) quienes obtuvieron medias de eliminación de 350 y 1396 opg de Eimeria spp, respectivamente, sin embargo, resultó bastante inferior a lo hallado por Cienfuegos et al. (2009a) (3077; DE 29.963,5 opg). Las cabras estudiadas se encuentran estabuladas la mayor parte del tiempo, lo que hace que aumente de forma rápida la contaminación ambiental con ooquistes de coccidios y en consecuencia se incrementen las cargas parasitarias. Las explotaciones de ganado caprino estudiadas eran más bien tradicionales y con instalaciones poco actualizadas, lo que dificulta la limpieza adecuada del suelo y, además, favorece la esporulación de los ooquistes. En explotaciones modernas, donde el suelo es de tipo emparrillado, los animales tienen muy poco contacto con sus excrementos, de modo que las posibilidades de contaminación por ooquistes son menores (Jäger et al., 2005). La presencia de un elevado número de ooquistes esporulados en el medio, junto con el ciclo directo rápido favorece la infección de los animales y las reinfecciones. CAPITULO 2 112 3.2.3.1.3. Factores de riesgo En la Tabla 30 se reflejan los datos de la intensidad de eliminación; no se incluyeron datos de prevalencia debido a que todos los animales estudiados eliminaban ooquistes de coccidios eiméridos. Tabla 30. Intensidad media de eliminación de ooquistes de Eimeria spp teniendo en cuenta diferentes factores VARIABLE CATEGORÍA Intensidad (DE) Edad ≤12 meses 1719,2 (2266,9) >12meses 2289,7 (2206,5) Sexo Hembra 2268,8 (2363,0) Macho 875,0 (619,6) Tamaño <100 animales 2478,7 (2579,7) ≥100 animales 1795,9 (1893,5) Granjas a <2km No 1852,9 (2088,4) Si 3078,1 (2682,4) Desparasitación Primavera 1644,4 (2065,3) Primavera/otoño 2974,6 (2446,4) Incorporación de animales No 1280,0 (2353,8) Si 2367,6 (2258,6) Pienso No 3078,1 (2682,4) Si 1852,9 (2088,4) Zona verde No 1325,0 (2305,8) Si 2389,8 (2265,7) Cabrito Madre y rebaño 2318,3 (2684,6) Con madre 1803,8 (1893,5) Separado 2885,0 (2046,8) Rebaño mixto No 2043,9 (1969,4) Si 2318,3 (2684,6) Para conocer la posible influencia de los diferentes factores sobre la intensidad de eliminación de ooquistes de coccidios se realizó una prueba ANOVA multifactorial. Además de los factores señalados en la tabla, se añadió al análisis la presencia de nematodos broncopulmonares (protostrongílidos) y la infección por nematodos gastrointestinales, puesto que su capacidad inmunosupresora podría influir en la prevalencia e intensidad de eliminación de Eimeria. Los resultados de la tabla 4 muestra el último paso de la prueba ANOVA, una vez eliminados los factores no significativos. Los factores que resultaron JAIME CALVO RODRIGUEZ 113 significativos son la edad de los animales, el sexo, tamaño del rebaño, la presencia de explotaciones a menos de 2 km, el patrón de desparasitación y la incorporación de animales nuevos a la explotación (Tabla 31). Tabla 31. ANOVA de los factores de riesgo sobre la intensidad de eliminación por Eimeria spp Factores de riesgo F P Edad 4,090 0,0449 Sexo 7,266 0,00782 Tamaño explotación 3,957 0,04846 Explotaciones a menos de 2 km 4,392 0,03776 Patrón de desparasitación 10,513 0,00146 Incorporación de animales 7,600 0,0065 El factor de riesgo que parece tener más importancia es el patrón de desparasitación, que introduce un 7% de variación; la eliminación de ooquistes aumenta cuando los animales se desparasitan dos veces al año, en primavera y otoño, en relación con los desparasitados únicamente en primavera. Hay que tener en cuenta que los tratamientos aplicados en todas las explotaciones están dirigidos específicamente a los helmintos, utilizando benzimidazoles, que no tienen como objetivo los protozoos Apicomplexa. Los nematodos gastrointestinales y los coccidios eiméridos comparten hospedador y ambos se asientan en el intestino de los rumiantes; es posible que el descenso de la infección por nematodos gastrointestinales por efecto del tratamiento antihelmíntico favorezca el desarrollo de los coccidios. Es decir, la disminución de los nematodos gastrointestinales representa una ventaja densidad dependiente para los coccidios que no tienen que competir por el espacio ni la nutrición. Además, la administración los antiparasitarios supone ciertas maniobras de manejo que pueden producir estrés en los animales, que al reducir las defensas del ganado facilitaría el mayor desarrollo de los coccidios. El hecho de tratar dos veces al año aumenta el estrés y probablemente también la facilidad de infección por eiméridos. CAPITULO 2 114 El segundo factor más influyente es la incorporación de nuevos animales a la explotación (4.6% de variación); en este caso lo que aumenta la eliminación es el hecho de incorporar animales de otras explotaciones sin análisis previos ni periodo de cuarentena para poder valorar su estado fisiológico y/o patológico y que pueden suponer la introducción de animales eliminadores activos. Dado que como estos parásitos tienen un ciclo biológico directo, favorecido por condiciones de humedad y temperatura elevadas, como sucede en las instalaciones en que se mantienen los pequeños rumiantes en intensivo, resulta muy fácil introducir agentes infecciosos que antes no existían o, en su caso, incrementar mucho la eliminación de ooquistes en un rebaño. El factor sexo (4.3% de variación) también influye; en este caso las hembras presentan una mayor intensidad que los machos. El estrés provocado por la gestación y el periparto contribuye al descenso de la respuesta inmunitaria de la hembra, lo que favorece el desarrollo del ciclo del protozoo y un aumento en la eliminación de ooquistes en las heces. Del estudio de los demás factores se concluye que la presencia de explotaciones con pequeños rumiantes a menos de 2 km (2,9% de variación) influye positivamente en la eliminación. La presencia de animales que pueden estar infectados por las mismas u otras especies de Eimeria y que, en algunos casos, estos animales salgan a zonas verdes que puedan estar contaminadas por ooquistes excretados por animales de granjas vecinas de las que se desconoce el grado de infección constituye un factor de riesgo a considerar. Con referencia a la edad, los animales mayores de 1 año presentan mayor eliminación que los menores de un año. El hecho aparentemente contradictorio de que los adultos estén más parasitados se asocia, en parte, al hecho de que la especie más abundante (51%) es E. arloingi que como se comprobó estadísticamente afecta mucho más a adultos que a jóvenes. Finalmente, el factor que introduce menor porcentaje de variación es el número de animales en cada explotación. Los rebaños que cuentan con menos de 100 animales presentan JAIME CALVO RODRIGUEZ 115 mayores eliminaciones que los de mayor tamaño. Esto se justifica en parte porque en las explotaciones con menos animales, las condiciones higiénicas suelen ser más deficientes respecto a las de mayor número de efectivos. Es bien sabido que la higiene es un factor determinante en establos donde se mantienen animales en sistemas intensivos especialmente cuando se trata de coccidiosis. Además, en explotaciones más pequeñas, las instalaciones limitan el número de comederos y bebederos, y así se propicia mayor concentración de las formas parasitarias en estas zonas comunes facilitando las infecciones y reinfecciones. 3.2.3.2. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de trematodos Del total de muestras analizadas solo 3 presentaban huevos de Fasciola hepatica (1,9%) y con este número tan reducido, no fue posible analizar estadísticamente la interacción con los factores de riesgo. La intensidad media de eliminación fue de 33,3 huevos por gramo de heces (hpg), con una desviación estándar de 26,02 (DE). Además, no se encontró ningún animal parasitado por Dicrocoelium dendriticum ni por trematodos ruminales paranfistómidos. La escasa prevalencia por trematodos observada en el presente estudio coincide, en general, con los resultados hallados en ganado caprino de Galicia explotado en extensivo o semiextensivo; así, Cienfuegos et al. (2009b) observó que únicamente el 1,4% de los animales eliminaba huevos de paranfistómidos, mientras que Béjar (2011) no halló huevos de trematodos en cabras de raza “Cabra Galega”. Las prevalencias observadas en ganado caprino son inferiores a las señaladas en ganado ovino gallego. Los estudios realizados señalan que entre el 6 y el 9,5% de los animales eliminaban huevos de Fasciola hepatica, mientras que las prevalencias por Dicrocoelium dendriticum y paranfistómidos no CAPITULO 2 116 superaron el 1% (Vázquez et al., 2008; Cienfuegos et al., 2009b; Painceira, 2012). En un estudio serológico reciente, empleando un ELISA directo con la proteína MM3, Pérez-Creo (2015) y Pérez-Creo et al. (2016) observaron seroprevalencias a Fasciola hepatica similares entre ovejas y cabras manejadas en semiextensivo. Estas discrepancias pueden deberse a la menor sensibilidad (30-70%) de la coprología en relación con el ELISA (Charlier et al., 2008), puesto que no permiten detectar animales infectados en fase de prepatencia; además, la coprología no resulta adecuada para detectar animales con reducidos niveles de infección, debido a que, a veces, la cantidad de huevos en las heces no alcanza el límite de detección de la técnica. Por ello es normal que un cierto porcentaje de animales infectados se consideren como falsos negativos mediante métodos coprológicos. No obstante, debido al carácter ramoneador de las cabras, no resulta extraño que éstas estén menos parasitadas que las ovejas. El ciclo de F. hepatica es indirecto, necesita la presencia del hospedador intermediario, un caracol que se localiza en zonas muy húmedas, para completar el ciclo. La fase infectante se encuentra enquistada en la hierba por lo que para que el ganado se infecte debe ingerirla o bien fresca o en ensilado. Esto es lo que justifica que las infecciones por F. hepatica sean superiores en animales que se mantienen en régimen extensivo o semiextensivo (Sánchez-Andrade et al., 2001), en que los animales pastan gran parte del tiempo. Debido a la escasa prevalencia encontrada en el caso de los trematodos, no se ha podido analizar la influencia de los distintos factores considerados en otras infecciones. JAIME CALVO RODRIGUEZ 117 3.2.3.3. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de nematodos gastrointestinales Diversos autores (Cordero et al., 1985; Miró et al., 1993; Meana y Rojo, 1999) señalan que prácticamente el 100% de los animales que pastorean eliminan huevos de nematodos gastrointestinales. Este porcentaje se verá reducido si los animales tienen restringido su acceso al pasto. Así la prevalencia total por NGI en este estudio (46%) fue muy inferior a la detectada en rebaños en semiextensivo (Pedreira et al., 2001b, 2003; Álvarez-Feijóo, 2003; Freiría, 2003; Pedreira, 2006; Cienfuegos et al., 2009a; Painceira, 2012). 3.2.3.3.1. Prevalencia total y genérica por Trichostrongílidos Debido a la falta de estudios en rebaños en intensivo, se realizaron coprocultivos para identificar los géneros más frecuentes en este tipo de explotaciones. De las 161 muestras fecales analizadas, 74 resultaron positivas a nematodos tricostrongílidos, lo que supone una prevalencia del 46%. Los datos de prevalencias de infección por nematodos gastrointestinales difieren notablemente según los autores. Para Hendricks (1983) los porcentajes de infección varían en función del área geográfica de la que procedan las muestras fecales, puesto que las diferentes condiciones climáticas condicionan la resistencia de los huevos y las larvas infectantes en el medio externo. De este modo, no sólo varían las cifras de prevalencia según los países, e incluso las regiones, sino también, lo que es más importante, las especies implicadas en las gastroenteritis parasitarias. En estudios previos realizados en ganado ovino explotado en pastoreo semiextensivo en la provincia de Lugo, diversos autores CAPITULO 2 124 El análisis de regresión logística (Tabla 36) identificó la presencia de granjas cercanas de pequeños rumiantes a menos de 2 km como factor de riesgo en las infecciones por Trichuris, de modo que el riesgo es 8 veces mayor en estas granjas respecto a los que no tenían explotaciones próximas. Tabla 36. Análisis de regresión logística para la prevalencia de Trichuris FACTORES Estimación E.E p OR IC Granjas a <2Km No - - - - - Si 2.133 0.51 <0,001 8.444 3.10822.945 En relación con la intensidad media de excreción (Tabla 37) fue de 19,9 hpg (DE 12,26) y el único factor relevante encontrado mediante ANOVA fue la cercanía de granjas de pequeños rumiantes (F=13,57; p<0,01). En ovinos en pastoreo semiextensivo en diferentes zonas de la provincia de León Díez-Baños et al. (2006, 2009), observaron que las cifras medias de huevos de Trichuris eran de 37,5 hpg y 20,4 hpg, respectivamente. JAIME CALVO RODRIGUEZ 125 Tabla 37. Intensidad media de eliminación de huevos de Trichuris teniendo en cuenta distintos factores VARIABLE CATEGORIA Intensidad (DE) Edad ≤12 meses 21,8 (15,11) >12meses 19,6 (12,1) Sexo Hembra 20,4 (12,8) Macho 15,0 (0) Tamaño <100 animales 15,0 (0) ≥100 animales 32,1 (18,73) Granjas a <2Km No 29,6 (18,28) Si 15,0 (0) Desparasitación Primavera 29,6 (18,28) Primavera/otoño 15,0 (0) Incorporaciónes No 15,0 (-) Si 20,1 (12,53) Pienso No 15,0 (0) Si 29,6 (18,28) Zona verde No 15,0 (NA) Si 20,1 (12,53) Cabrito Madre y rebaño 15,0 (0) Con madre 32,1 (18,73) Separado - Rebaño mixto No 32,1 (18,73) Si 15,0 (0) 3.2.3.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de huevos de Nematodirus y otros nematodos En la flotación, además de huevos de tricostrongílidos y Trichuris spp, también se detectaron huevos de otros nematodos como Nematodirus spp, Strongyloides spp y Skjravinema spp. Los dos últimos se consideran de escasa patogenia sobre el ganado ovino y caprino y en cuanto a Nematodirus spp. sólo se encontró un animal que eliminaba huevos de este nematodo; no obstante, pese a su baja prevalencia, debido a su potencial patogenia, es conveniente analizar su presencia y en los casos positivos tomar medidas adecuadas de control. En Galicia, Pedreira et al. (2001a, b) señalaron elevados porcentajes de eliminación de huevos de Nematodirus (39,2%), siendo estos netamente superiores a los obtenidos por Freiría CAPITULO 2 126 (2003) en ovejas explotadas en la provincia de Lugo (8,5%) y lo hallado en diferentes localidades gallegas (13,6%) por Cienfuegos et al. (2009a). Nematodirus se identificó en el 31,82%, 28,2% y 26,6% de las explotaciones de la provincia de Lugo según Freiría (2003), Pedreira (2006) y Painceira (2007), respectivamente, mientras que Álvarez-Feijóo (2003) solo lo observó en el 9,1%. Respecto a la eliminación de huevos de Nematodirus, en Galicia en ovejas explotadas en la provincia de Lugo, Freiría (2003) citó cifras medias de 23,1 hpg; mientras que para Cienfuegos et al. (2009a) en ovinos en pastoreo semiextensivo en Galicia las eliminaciones eran de 52,4 hpg. 3.2.3.4. Prevalencia e intensidad de eliminación de larvas de nematodos broncopulmonares 3.2.3.4.1. Prevalencia total y genérica por protostrongílidos La infección por protostrongilidos fue la única hallada en las explotaciones, pues no se encontró presencia de Dictyocaulus filaria. De las 161 muestras analizadas, 99 resultaron positivas para protostrongílidos (61,5%). La prevalencia de protostrongílidos encontrada en cabras en la comunidad gallega por Cienfuegos et al. (2009b) es ligeramente superior (78,6%) a la obtenida en nuestro estudio, hecho esperable si tenemos en cuenta que ese estudio incluía animales en extensivo y semiextensivo que tienen más acceso a los HI. No obstante, la prevalencia en nuestro estudio es bastante elevada si tenemos en cuenta que la salida al pasto en estos animales se ve muy restringida, lo que debería reducir considerablemente las oportunidades de infectarse. Este elevado porcentaje de animales positivos podría deberse al carácter crónico de la infección, de modo que un animal que se infecte JAIME CALVO RODRIGUEZ 127 accidentalmente puede eliminar larvas durante varios años sin necesidad de reinfectarse. En relación con Dictyocaulus, Béjar et al. (2014) observaron en ganado caprino gallego una prevalencia individual y por rebaño del 4,4% y 14%, respectivamente. No obstante, debemos señalar que este estudio incluía animales mantenidos en distintos sistemas de manejo (intensivo-extensivo) pero los criados en régimen intensivo no eliminaban larvas de D. filaria, lo que demuestra la baja o nula prevalencia de este parásito en sistemas intensivos. En la tabla 38 puede apreciarse que los animales mayores de 1 año presentan mayores prevalencias que los más jóvenes; y lo mismo sucede en los animales de explotaciones donde se introducen animales nuevos, donde hay otras granjas a menos de 2 km y en las que los animales tienen acceso a pequeñas parcelas. Tabla 38. Prevalencia por protostrongílidos teniendo en cuenta distintos factores en cabras en intensivo en Galicia. VARIABLE CATEGORÍA Prevalencia (%) Edad ≤12 meses 14,9 >12meses 80,4 Sexo Hembra 61,3 Macho 63,6 Tamaño <100 animales 60,5 ≥100 animales 62,7 Granjas a <2km No 53,3 Si 85,4 Desparasitación Primavera 53,1 Primavera/otoño 74,6 Incorporación de animales No 16,7 Si 71,8 Pienso No 85,4 Si 53,3 Zona verde No 14,3 Si 74,6 Cabrito Madre y rebaño 56,3 Con madre 67,1 Separado 60,0 Rebaño mixto No 65,5 Si 56,3 CAPITULO 2 128 Con objeto de determinar los factores que más contribuyen sobre la prevalencia de los protostrongílidos se realizó un análisis estadístico cuyos resultados se representan en la tabla 39 (para completar este análisis se introdujo también la variable infección por nematodos gastrointestinales). Tabla 39. Análisis de regresión logística para la prevalencia por protostrongílidos. FACTOR/CAT Estimación E.E P OR IC Edad <13 m - - - - - ≥13 m 3,241 0,531 <0,001 25.567 9.02872.404 Granjas <2 km No - - - - - Si 2,265 0,776 <0,01 9.634 2.10544.079 Desp. Pv - - - - - Pv/Ot -0,869 0,564 0,123 0.419 0.1391.266 NGI NO - - - - - SI 0,83 0,457 0,069 2.294 0.9375.616 Los resultados de la regresión logística indicaron que los animales mayores a 1 año presentan una prevalencia de protostrongílidos 25 veces superior a la de los más jóvenes. Esto está en sintonía con lo indicado por diversos autores sobre que los animales no desarrollan respuesta inmunitaria protectora frente a estos nematodos, de modo que las cabras de mayor edad, que han estado más expuestas a reinfecciones, muestran mayor prevalencia tanto como recuentos larvarios más altos (Cabaret et al., 1978; Alemu et al., 2006; Regassa et al., 2010; López et al., 2011), por lo que se asume que la infección tiende a ser acumulativa. Asimismo, la prevalencia es casi 10 veces mayor para los animales que están en explotaciones de ovino/caprino con otras a menos de 2 km de distancia, lo que se justificaría con la mayor contaminación ambiental con formas infectantes en granjas cercanas entre sí. En cuanto al factor desparasitaciones, el riesgo de estar infectado con protostrongílidos es 2 veces mayor en los animales JAIME CALVO RODRIGUEZ 129 desparasitados solo en primavera, en comparación con los que se desparasitan también en otoño, lo que indica que los tratamientos antihelmínticos, administrados esencialmente para controlar los nematodos gastrointestinales, son poco eficaces frente a los protostrongílidos. Para el análisis de regresión se introdujo la parasitación por nematodos gastrointestinales como un posible factor de riesgo. Los datos confirman que los animales parasitados por NGI tienen el doble de riesgo de estar parasitados por protostrongílidos. Algunos autores (Kloosterman et al., 1989, 1990) han encontrado que infecciones por nematodos gastrointestinales pueden favorecer el establecimiento de otros parásitos en terneros. La infección por nematodos gastrointestinales podría provocar en las cabras una disminución en las defensas inmunitarias contra la infección por los protostrongilidos, debido a que presentan una amplia gama de mecanismos inmunorreguladores que modificarían la respuesta inmune del hospedador (Else, 2005) y, cuyo efecto secundario podría ser favorecer el desarrollo de otros agentes patógenos. Este mismo proceso fue señalado por López et al. (2011) en ganado ovino de Galicia, ya que la prevalencia de los protostrongílidos era más elevada en los animales que presentaban una coinfección con D. filaria. Otros factores que afectaron a la prevalencia de protostrongílidos en las ovejas (López et al., 2011) fueron el manejo mixto en los rebaños con cabras, la edad y el grupo de fármacos utilizado. El manejo mixto no afecta a las cabras, debido a que éstas presentan generalmente mayor prevalencia y tasas de eliminación que las ovejas. Tras la identificación de los protostrongílidos (Fig. 12), la especie más frecuente en las muestras positivas fue M. capillaris (100%), mientras que N. linearis se identificó en menor proporción (6,98%), no estando presentes ni Cystocaulus ocreatus ni Protostrongylus rufescens. CAPITULO 2 130 Figura 12. Prevalencia de los protostrongílidos identificados. Estos datos difieren de lo publicado décadas atrás por Ramírez (1967) en zonas de Castilla y León, que cita como especie más abundante P. rufescens, seguida de C. ocreatus, N. linearis y M. capillaris. Posteriormente, Morrondo et al. (1978) en Léon, observaron que el mayor porcentaje de parasitación correspondía a M. capillaris y C. ocreatus, y en menor proporción hallaron N. linearis y Protostrongylus spp. Asimismo, Reguera et al. (1979), comprobaron que las especies predominantes eran M. capillaris y N. linearis y, posteriormente, Morrondo et al. (1990, 1991b, c), en ovinos en pastoreo extensivo en la Montaña de León, observaron que M. capillaris aparecía con más frecuencia que C. ocreatus, N. linearis y Protostrongylus sp. En estudios posteriores López et al. (2011) han demostrado que las especies más frecuentes en Galicia son, por orden de prevalencia, Muellerius capillaris (97,9%) y Neostrongylus linearis (0,6%), lo que coincide con lo hallado en este trabajo. La evolución de la prevalencia de los protostrongílidos en nuestra comunidad se relaciona con las desparasitaciones rutinarias que se llevan a cabo en especial para el control de los nematodos gastrointestinales y que han reducido en las últimas décadas, no solo la prevalencia de los protostrongílidos, si no que han ido seleccionado a M. capillaris sobre el resto de especies, 0 20 40 60 80 100 M. capillaris N. linearis JAIME CALVO RODRIGUEZ 131 reduciendo considerablemente la población de N. linearis y eliminando completamente a C. ocreatus y Protostrongylus de este territorio (Mangeon y Cabaret, 1987; Cienfuegos et al., 2009a,b; López et al., 2011). En Galicia, los programas de desparasitación en ovino y caprino en general se basan en la administración de una dosis única en primavera y/u otoño de un antihelmíntico (frecuentemente de la familia de los benzimidazoles) con más eficacia frente a nematodos gastrointestinales (López et al., 2010). Estas aplicaciones son menos eficaces frente a los protostrongílidos, y en especial frente a M. capillaris, dando como resultado la selección progresiva de esta especie (Bliss y Greiner, 1985; McCraw y Menzies, 1986; Helle, 1986; Díez et al., 1995; Rehbein y Visser, 2002; López et al., 2010). En efecto se ha demostrado que las larvas de M. capillaris reaparecen en muestras fecales en menos de 60 días tras el tratamiento con bencimidazoles, incluso en animales en estricto aislamiento. Esta reaparición puede responder a que formas inmaduras del parásito que no se ven afectadas por el fármaco, colonizan el pulmón tras una destrucción de la población original de adultos (McCraw y Menzies, 1986, 1988); también puede basarse en la protección que les confiere el tejido alterado que las rodea, que es superior a la de las otras especies de protostrongílidos (Rehbein y Visser, 2002). Por tanto, los tratamientos específicos frente a los nematodos pulmonares suelen requerir mayores dosis (Richard y Cabaret, 1992) o bien tratamientos repetidos (McCraw y Menzies, 1986), sobre todo para M. capillaris (Bliss y Greiner, 1985; McCraw y Menzies, 1986; Helle, 1986; Rehbein y Visser, 2002; López et al., 2010). Este hecho se confirma en las cabras, que por lo general para que sean eficaces necesitan dosis más elevadas de antiparasitarios que las ovejas (McKenna, 1985). CAPITULO 2 132 3.2.3.4.2. Intensidad de eliminación larvaria de Protostrongílidos Las cifras medias de eliminación encontradas para los protostrongílidos fueron de 65,1 lpg (DE 151,06), que son menores a las encontradas en estudios previos realizados en Galicia en cabras en regímenes semiextensivo y extensivo. Así, Cienfuegos et al. (2009b) obtuvieron medias de 283,2 (DE 782,5) lpg y Díaz et al. (2011) en cabras de raza autóctona gallega observaron una intensidad media de 169 lpg. Las cifras de eliminación en ovejas son inferiores a la detectada en cabras; Cienfuegos et al. (2007) en ovejas en semiextensivo señalaron cifras medias de eliminación de larvas de protostrongílidos de 67,4 lpg, que fue similar a la encontrada en cabras en este trabajo; sin embargo, López et al. (2011) en diferentes localidades de Galicia hallaron una intensidad media de 11,9 lpg en ovinos en pastoreo semiextensivo. Según Mangeon y Cabaret (1987), las cabras son más sensibles a las infecciones por protostrongílidos y presentan porcentajes de infección y de eliminación superiores a los del ganado ovino. Esto explicaría por qué en nuestro estudio incluso la intensidad media en cabras en intensivo es superior a la de ovejas en extensivo. Las cifras de intensidad al considerar los distintos factores estudiados se muestran en la tabla 40. JAIME CALVO RODRIGUEZ 133 Tabla 40. Intensidad media de eliminación de larvas 1 de protostrongílidos teniendo en cuenta distintos factores VARIABLE CATEGORIA Intensidad (DE) Edad ≤12 meses 10,3 (7,47) >12meses 70,5 (157,47) Sexo Hembra 63,5 (154,51) Macho 86,4 (100,38) Tamaño <100 animales 92,9 (202,15) ≥100 animales 34,4 (38,34) Granjas a <2km No 61,4 (176,92) Si 71,9 (87,91) Desparasitación Primavera 74,9 (194,11) Primavera/otoño 54,3 (81,34) Incorporación de animales No 455,6 (521,89) Si 44,4 (64,02) Pienso No 71,9 (87,75) Si 61,4 (176,92) Zona verde No 455,6 (512,89) Si 44,4 (64,36) Cabrito Madre y rebaño 119,9 (224,07) Con madre 34,4 (38,34) Separado 3,1 (3,22) Rebaño mixto No 28,0 (36,45) Si 119,9 (224,07) Los factores que influyen significativamente sobre la intensidad media son la edad (F=4,28; p=0,041), la cercanía de otros rebaños (F=14,93; p<0,001) y el protocolo de desparasitación (F=30,50; p<0,001). Como se aprecia en la tabla 13, los animales mayores de 1 año eliminan un mayor número de larvas que los jóvenes. Al igual que sucedía con la prevalencia, estas diferencias podrían deberse a la falta de inmunidad frente a estos nematodos, que hace que las cabras mayores, más expuestas a reinfecciones, muestren mayores recuentos larvarios (Cabaret et al., 1978; Alemu et al., 2006; Regassa et al., 2010). Así mismo, los animales que tengan otras granjas situadas a menos de 2 km muestran mayores intensidades y podrían dar lugar a mayor contaminación del medio y facilitar el desarrollo del ciclo biológico. Finalmente, los animales desparasitados solo en primavera eliminaron más larvas que los desparasitados también en otoño, demostrando que los tratamientos antihelmínticos