Método de cultivo de Hyalomma /Hyalomma) marginatum marginatum Koch, 1844 (Acarina: Ixodidae)

DEPARTAMENTO INTERFACULTATIVO DE PARASITOLOGIA Director: Prof. DI. J. González Castro METODO DE CULTIVO DE HYALOMMA (HY A LOMMA) MARGINATUM MARGINATUM KOCH, 1844 (ACARINA: IXODIDAE). L. E. Hueli; D.C. Guevara Benítez y P. García Fernández RESUMEN Se realiza un estudio sobre el desarrollo de la garrapata del ganado bovino Hya lomma (H) marginatum marginatum en el laboratorio, y se describe un método de cultivo de esta garrapata. Las larvas y ninfas se alimentaron sobre pollos; los adul tos se alimentaron sobre conejos. Las fases no parásitas se mantuvieron en condi ciones constantes (28 ± 1°C; 75 ± 5 por ciento H.R. y 12/12 horas de ciclo luz/ oscuridad). Con nuestro sistema de cultivo se obtuvo un incremento medio en la población de 860 X/generación. SUMMARY A study about the growing of the cattle tick Hyalomma (H) marginatum mar ginatum in the laboratory is carried out and a breeding method is described. Lar vae and nymphs were fed on chickens; adults were fed on rabbits. The non-parasi tic stages were kept under constant conditions (28 ± 1°C; 75 ± 5 per cent R. H. and 12/12 hours light/darkness cycle). With our rearing system we obtained and avg rate of population increase of 860 X/generation. INTRODUCCION Hyalomma (H) marginatum marginatum K. es una garrapata frecuente en los países de la cuenca mediterránea (1). En España, concretamente en Andalucía, tiene una alta incidencia sobre el ganado bovino (2). Sobre sus hospedadores na turales, bovinos y equinos, H m marginatum desarrolla un ciclo biológico de 2 hospedadores. Pero el uso de estos grandes animales en pequeños laboratorios es tá limitado frecuentemente por razones técnicas y económicas. Por todo ello, es necesario en estos casos contar con un dispositivo de cultivo bien contrastado y es tandarizado. Ars Pharmaceutica. Tomo xxv. Núm. 4, 1984. 408 ARS PHARMACEUTICA Aquí describimos un método de cultivo de Hyalomma m. marginatum en la boratorio, con excelentes resultados en cuanto al rendimiento y relativamente fá cil de llevar a cabo. MATERIAL Y METODOS A) Alimentación de fases parásitas Las larvas y ninfas de Hyalomma m. marginatum se alimentaron sobre pollos de unos 6 meses de edad, mientras que las garrapatas adultas se alimentaron sobre co-' nejos, también de la misma edad. En este JÍltimo caso seguimos la técnica "ear bags" (3) adaptándola para nuestros fmes. Los ejemplares a alimentar se introduje ron en bolsas de tela blanca que se colocaron alrededor de las orejas de los conejos previamente peladas, con la ayuda de una tira de esparadrapo rodeando uniforme mente la base de la oreja y la parte inferior de la bolsa. Finalmente, las bolsas se cerraban con otra tira de esparadrapo. Los conejos eran provistos de un collar de cuero grueso (I/4 de pulgada), para evitar que al rascarse desprendieran las bolsas de las orejas. Estos collares se hicieron de acuerdo con el diseño que se muestra en la Figura 1, Y se colocaron alrededor del cuello del conejo según se describe en la Figura 2. FIGURA nº 1_ Esquema del collar de protección utilizado en la alimentación de las garrapatas sobre conejo. ARS PHARMACEUTlCA FIGURA nº 2. Conejo dispuesto para la. alimentación de los adultos de garrapatas, según la metodología descrita. 409 En el caso de los pollos, animales utilizados como hospedadores para larvas y ninfas, se empleó una metodología similar a la seguida con los conejos. Se utiliza ron también bolsas de tela blanca, que se colocaron alrededor de las alas de los po llos, cuidando de que no se formaran pliegues. Previamente, se cortaron las plumas más largas para que hubiera un estrecho contacto entre las bolsas y la piel. Las bol sas se confeccionaron según la forma y tamaño de las alas de los animales. Al igual que se hizo con los conejos, se aseguraron a la base de las alas con esparadrapo. Fi nalmente, las bolsas se ataron juntas por sus extremos por encima del cuerpo del pollo, para evitar que fueran arrastradas por el suelo. Posteriormente, tanto los conejos como los pollos, se colocaron en jaulas indi viduales por debajo de las cuales se dispuso una batea esmaltada de color blanco con unos centímetros de agua en su fondo. De esta forma, en las raras ocasiones en que los animales consiguen desprenderse de las bolsas, las garrapatas caen al agua y se evita su fuga. Con el sistema aquí descrito se pudieron alimentar de 3.000 a 5.000 larvas-nin fas sobre cada pollo y unos 50 adultos (lO hembras y 15 machos en cada oreja) sobre cada conejo. 410 ARS PHARMACEUTICA B) Mantenimiento de las fases no-parásitas Respecto al desarrollo y mantenimiento de Hyalomma m. marginatum en sus fases de vida libre, el estudio se realizó mediante el mantenimiento de las mismas a con diciones constantes de temperatura, humedad relativa y ciclo día/noche (28 ± 10 e; 75 ± 5 por ciento H.R. y 12/12 horas, respectivamente). La·incubación se realizó mediante la introducción del material de que se tratara (hembras saciadas para ovoposición, masas de huevos para eclosión y ninfas sacia das para su muda) en frascos de cultivo de diferentes tamaños según los casos, pe ro siguiendo una misma pauta en su preparación. Como ejemplo, se observan en la Figura 3 los tubos utilizados para las hembras saciadas. En cada frasco de cultivo se introdujo una sola hembra saciada; en el caso de las ninfas se colocaron hasta 100 ninfas por frasco. Para los huevos, se introdujo en cada frasco la masa total diaria depositada por cada hembra. E o Ol , , , , , , , .-2,5cm ..... Algodón graso con gasa estéril Tira de papel de filtro Disco de papel de filtro FIGURA nº 3. Tubo de cultivo para las hembras saciadas. RESULTADOS Los resultados obtenidos, en valores medios, los resuminos en la Tabla 1. TABLA 1 RESULTADOS SOBRE EL CICLO BIOLOGICO DE HYALOMMA (H.) MARGINATUM MARGINATUM EN LABORATORIO (*) Periodos expresados en dlas: pfomedio (mlnimo-máximo). Fase de desarrollo Hospedador Duración del período (*) Incubación huevos 27,6 (24 -39) Alimentación larva-ninfa Pollo 17,8 (12 -26) Muda ninfa-adulto 20,5 (15 -27) Alimentación machos Conejo 18,3 (9 -25) Alimentación hembras Conejo 9,1 (7 -13) Pre-ovoposición 4,2 (1 � 6) Ovoposicicín 22,4 (13 -31) DURACION TOTAL CICLO 101,6 (72 -142) Rendimiento (%) 65 (eclosión) 53 97 87,5 73,3 7.234 huevos/hembra � '" ." :r > � (') tT1 c:: ....¡ ;:; > � ..... ..... 412 ARS PHARMACEUTICA DISCUSION Con nuestro sistema de cultivo, el rendimiento en la alimentación de las larvas ninfas (ya que H. m. margina tu m se comportó como garrapata de 2-hospedadores también en el laboratorio) fue bastante alto, el 53 por ciento. En la alimentación de los adultos sobre conejos se obtuvo un rendimiento del 87,5 y 73,3 por ciento para machos y hembras, respectivamente. Además, los animales pueden volver a ser utilizados después de un descanso de unas 3 semanas, aunque el rendimiento baja algo. Aplicando los rendimientos parciales obtenidos en cada fase de ciclo biológico de Hyalomma m. marginatum en el laboratorio, podemos calcular el rendimiento fmal o "razón del crecimiento" de una generación a la siguiente. Partiendo de una hembra saciada y aplicando los porcentajes correspondientes, se obtienen 860 hembras saciadas en la siguiente generación, tal como se explica en el siguiente es quema:. Por tanto, este método de cultivo proporcionó un incremento en la pobla ción de garrapatas de 860 X. Este incremento es superior por ejemplo, al encontra do para Amblyomma americanum (4), una de las garrapatas más prolíficas en cuanto a su producción de huevos, lo que indica el buen rendimiento proporciona do por el método seguido con Hyalomma (H.) marginatum marginatum. 1 HEMBRA REPLETA I ovoposición .7.234 HUEVOS I eclosión (Rend.: 65%) 4.702 LARVAS I alimentación (Rend.: 53%) 2.492 NINFAS SACIADAS I muda ninfa-adulto (Rend.: 97%) 2.417 ADULTOS (Razón sexo M/H: 1,06/1) 1. 244 MACHOS alimentación (Rend.: 87,5%) 1.088 MACHOS REPLETOS 1 .173 HEMBRAS alimentación (Rend.: 73,3%) 860 HEMBRAS REPLETAS ARS PHARMÁCEUTICA 413 BIBLlOGRAFIA 1. TENDEIRO, J. (1962). Revisao sistemática dos Ixodídeos Portugueses. Bol. Pecuário, 30: 5-131. 2. GARCIA FERNANDEZ, P. y HUELI, L.E. (1984). Garrapatas (Acarina, Ixodidae) parási tas del ganado bovino en el Sur de España. Identificación, distribución geográfica y esta cional. Rev.lbér. Parasitol, 44 (2): 129-138. 3. BAILEY, K.P. (1960). Notes on the rearing of Rhipicephalus appendiculatus and their in fection with Theileria parva for experimental transmission. Bull. Epiz. Dis. Afric., 8: 33-43. 4. KOCH, H.G. y MOUNT, G.A. (1980). Mass rearing of lone star ticks. J. Econ. Entomol., 73: 560-581.