Estudio experimental del efecto relajante del etanol sobre la fibra lisa

TRABAJOS DE COLABORACION DEP ART AMENTOS DE BROMATOLOGIA, TOXICOLOGIA, ANALISIS QUIMICO APLICADO, (Facultad de Farmacia) y D�PARTAMENTO DE FARMACOLOGIA, (Facultad de Medicina) ESTUDIO EXPERIMENTAL DEL EFECTO RELAJANTE DEL ETANOL SOBRE LA FIBRA LISA H. López García de la Serrana; R. García-Villanova y E. Puche RESUMEN Estudiamos el efecto relajante del Etanol sobre la contracción del ileo aislado de rata inducida con dósis crecientes de acetil-colina y Cloruro cálcico en un me dio libre de calcio y previa despolarización del ileo con potasio. Los resultados obtenidos indican que el Etanol posee actividad relajante del ileo "in vitro" a través de un mecanismo de acción no mediado por receptores muscarínicos (Acetil-colina) y muy probablemente relacionado con un antago nismo frente al calcio. Palabras clave: Fibra lisa, Acetil-colina, Calcio, Etanol. Key words: Smooth musc1e, Acetylcholine, Calcium, Ethanol. SUMMARY We study the relaxing effect of ethanol on smooth musc1e, refered to the con traction of rat isolated ileum induced by increasing doses of acetylcholine and calcium chloride in a calcium free medium after depolarising ileum with pota ssium. The results obtaines show that ethanol has relaxing activity on the ileum "in vitro". The mechanism of this effect seems not to be mediated through mus carinic receptors (acetylcholine) but very probably related to an antagonism to wards calcium. Ars Pharmaceutica. Tomo XXVI. Núm. 4, 1985. 278 ARS PHARMACEUTlCA INTRODUCCION El etanol es un componente farmacológicamente activo tanto a nivel central como periférico (1). Entre sus efectos periféricos, está su capacidad relajante de la fibra lisa, demostrada in vivo (2, 3 Y 4) e in vitro (5). Actualmente no se conoce con exactitud el mecanismo de acción mediante el cual el etanol relaja la fibra lisa, aunque se sabe que inhibe la secreción de acetil colina de las terminaciones nerviosas (6) y que bloquea la entrada del calcio al in terior de la célula (7). El presente trabajo trata de aportar dat·os acerca del mecanismo de acción del etanol mediante el cual relaja la fibra lisa, partiendo de observaciones experimen tales in vitro, como es la contracción del ileo aislado de rata inducida con Acetil colina y Cloruro cálcico. MATERIAL Y METODOS Se usaron ratas machos y hembras indistintamente, de la cepa wistar con un pe so comprendido entre 200-250 g, a las que se les extrajo, previo sacrificio del ani mal el ileo terminal y a las hembras el útero. Ambos órganos fueron introducidos en una copa de perfussión, empleando líquido Tyrode a 360C para el ileo yel lí quido de Jalon a 320C para el útero. La tensión de trabajo osciló entre 1-2 gramos tanto para el ileo como para el útero. La curva dósis-respuesta con acetil-colina se realizó empleando concentraciones de acetil-colina comprendidas entre 1O-7M y 1O-5M en ausencia y en presencia de etanol de 400,600 Y 800 GL. La serie con CaC12 se hizo con dósis acumulativas de Ca2+ entre 0,31 y 0,79 mM en un tyrode exento de calcio y despolarizando previamente el íleo con po tasio (110 mM). El parámetro a estudiar fue la contracción del órgano registrada en un polígra fo Beckman, RS por medio de un transductor de presiónfuerza Staham, UL5, inducida con actil-colina y calcio. Como método estadístico se usó el test de student para muestras apareadas, considerándose valores significativos a partir de p<0,05. RESULTADOS a) Contracción de la fibra lisa inducida con acetilcolina. Conforme fuimos incrementando la cantidad de etanol presente en la copa de órganos fue disminuyendo la respuesta contráctil del ileo inducida por dósis cre cientes y acumulativas de acetil-colina, según se desprende de los resultados obte nidos (figura 1) (p<0,001). ARS PHARMACEUTICA 279 100 .. o � 'S !lO :!. ¡¡ <3 10 10 J..2 11O-f, 1, Acet,[ + Coli1lQ (M.) FIGURA 1.- Representación de los valores correspondientes a los efectos inducidos por la Acetil-colina sola ( .... ) y eri. presencia de Etanol de 40°, 60°, 80° GL (O-O) (p < 0,02), ( • -. ) (p < 0,01), (0- O) (p< 0,01) respectivamente sobre la contracción del ileo aislado de rata. Para (n=6). Siendo el etanol de 80° el que más antagonismo ejerció, al desplazar aún más hacia la derecha, la curva dósis-respuesta. Con objeto de disponer de otro tipo de fibra lisa de distinta procedencia y co mo comprobación del efecto relajante del etanol, empleamos útero aislado de rata en el cual el etanol se comportó de igual manera que en el ileo . , como puede verse en la figura 2 con valores estadísticamente significativos (p<0,001). b) Contracción de la fibra lisa inducida con Ca02 . El etanol bloqueó la contracción inducida con CaCI2, del ileo aislado de rata previamente despolarizado con potasio e inmerso en un medio sin calcio, siendo 280 ARS PHARMACEUTlCA el etanol de 800 GL, el más activo en este sentido como se observa en la figura 3, presentando valores estadísticamente significativos (p<O,OO 1). 19. AG.'i! • Col ina {M I FIGURA 2. Representación gráfica de los valores correspondientes a los efectos inducidos por Acetil-colina sola (e-e) yen presencia de Etanol de 40°, 60° Y 80° GL; (.-.) ( p < 0,05); (0-0) (p < 0,01) Y (O-O) (p < 0,001), respectivamente, sobre la contracción del útero aislado de rata. Para n=5. DlSCUSION Los resultados obtenidos indican claramente que el etanol produce un bloqueo de la contracción tanto del ileon como del útero de rata aislados y perfundidos, dósis-dependientes; de manera que a mayor concentración de etanol en la copa de órganos menor respuesta contráctil de ambos órganos. Este antagonismo observa do entre el etanol y la acetil-colina, según se desprende de la cinética de las curvas dósis-respuesta, parece ser de naturaleza no competitiva, por lo que en principio se descarta la participación de los receptores colinérgicos. ARS PHARMACEUTICA 281 100 .. o . "" u . .., <3 10 11.10" ".115 I lOl le. CJ.r ... ,.. ÚJhuo (MJ FIGURA 3. Representación gráfica de los valores correspondientes a los efectos inducidos por . cloruro cálcico solo ( .... ) y en presencia de Etanol de 40°, 60° y 80° GL. (0-0) (p < 0,05); (.-.) (p < 0,02) Y (0-0) (p < 0,01) respectivamente, sobre la contracción del ileo aislado de rata. Para (n=5). Por otro lado el que el etanol disminuya la respuesta contráctil del ileo ,pre viamente despolarizado con potasio e inducida con el calcio; sugiere la existencia de un antagonismo con el calcio; este antagonismo también es dósis-dependiente, es decir a mayor cantidad de etanol menor respuesta contráctil del ileo . En resumen pensamos que el etanol relaja la fibra lisa del ileo aislado de rata y probablemente del útero aislado de rata también, mediante su antagonismo fren te al calcio; de hecho otros autores han demostrado, aunque en sinaptosomas cere brales, que el etanol bloquea la entrada de calio (7) indicando los mismos autores que el primer paso para la liberación de acetil-colina de las terminaciones nervio sas es precisamente la entrada del calcio al interior de la sinapsis neuronal. Por tanto apuntamos el antagonismo frente al calcio posiblemente bloqueando su entrada, por parte del etanol como mecanismo de acción mediante el cual re laja la fibra lisa al menos a nivel intestinal. 282 ARS PHARMACEUTICA BIBLlOGRAFIA 1. RITCHIE, 1. (1982). Los alcoholes alifáticos. Goodman y Gilman. Sexta edición. Ed. Pa namericana. Buenos Aires, pág. 379-393. 2. IBER, F.L. (1971). Gastroenterology, 61, 120. 3. GIMENO, M.A.F.; BEDNERS, A.S.; VASTIK, F.l. y GIMENO, A.L. (1971). Arch. lnt. Pharmacodyn, 191, 213. 4. 10NES, B.M. y JONES, M.K. (1976). Ann. Acad. Sci. 273, 263. 5. MAYER, 1.M.; KHANNA, 1.M. Y KALANT, H. (1980). Journal ofPharmacology, 68, 223 6. BLANSTEIN, M. (1975). J. Physiol (London) 247: 617-655. 7. HARRIS, A. and HOOD, W. (1980). 1. Pharmacol. Exp. Ther, 213,562-568.