Aceites esenciales de diversas especies de Artemisia

DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA y FARMACODINAMIA FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD DE VALENCIA ACEITES ESENCIALES DE DIVERSAS ESPECIES DE ARTEMISIA VI LLAR, A.; CALDUCH, M. L.; ZAFRA-POLO, M. C. RESUMEN Se analizan por CCF y CGL los aceites esenciales de especies del género Artemisia: A. herba-alba Asso var. glabrescens Boiss. (A. valentina Lamk.) y A. cae rulescens L. sp. gallica (Willd.) K. Person (A. gallica Willd.). El análisis comparativo de los resultados pone de manifiesto las diferencias más notorias entre ellas, siendo más acusadas desde un punto de vista cuantitativo. Son componentes mayoritarios de la primera el alcanfor y a -terpineol y en la segunda predominan el alcanfor y ex -tuyona. ABSTRACT Essential oils from different Artemisia species: A. herba-alba Asso var. gla brescens Boiss. (A. valentina Lamk.) and A. caerulescens L. sp. gallica (Willd,) K. Pers son (A. gallica Willd.) were analysed by TLC'and GLC. A comparative study of the results obtained showed that the most important differences between them were those observed from a quantitative point of view. Camphor and a -terpineol were the main components in the first specie; in the second one were camphor and (t -thujone. INTRODUCCION El desconocimiento en cuanto a la composición de los aceites esenciales de ciertas especies de Artemisia existentes en nuestro país, nos ha llevado a iniciar el estudio de algunas de ellas. En un primer estadío se abordó el análisis de la esencia de A. barrelieri, que sirvió de base para el posterior estudio comparativo por CCF y y CGL de otras especies valencianas del género: A. gallica Willd. Ars Pharmaceutica. Tomo XXIV. Núm. 2, 1983. 150 ARS PHARMACEUTICA y A. valentina Lamk. Así, muy pocos componentes son los descritos para ellas (1,2), siendo los datos referentes a muestras recolectadas en localidades diferentes y siempre fuera de nuestro país. De otro lado, el estudio de A. herba-alba var. glabrescens (A. valentina Lamk.) suscita un mayor interés al no estar perfectamente determinado su encuadre taxonómico. Mientras Flora Europea (3) no reconoce la existencia de la variedad glabrescens Boiss., los autores ibéricos, en base a la glabrescencia y como consecuencia al color verde oscuro de la planta, la consideran como taxón independiente de la genuína herba-alba. MATERIAL y METODOS Determinación del contenido en aceite esencial Recolectadas las sumidades floridas de las especies en estudio, se determinó el rendimiento en aceite esencial para cada una de ellas, así como sus correspondientes índices de refracción por la técnica habitual descrita en Farmacopea Europea (4). Al objeto de expresar los rendimientos en % V/P de droga seca, se determinó la humedad por el método gravimétrico. El lugar de recolección y los resultados obtenidos se recogen en el apartado correspondiente (Cuadro 1). Análisis por CCF La comparación entre las 3 esencias se ha llevado a cabo uti lizando Silicagel G como fase estacionaria y diversas fases móviles de acuerdo con la polaridad de los distintos componentes. Para la fracción hidrocarbonada de la esencia se ensayaron: ciclohexano, tetracloruro de carbono, hexano y mezclas con distintas proporcio nes de ellas. Para componentes oxigenados_por eL contrario, se uti lizó benceno, benceno/ AcOEt en distintas proporciones así como mez clas diversas de hexano/éter y hexano/ AcOEt. En base a los resultados obtenidos se seleccionó el hexano para los primeros y benceno/ AcOEt 97:3 para los terpenos oxigenados, 'siempre con doble reco rrido. El revelador ha sido la vainillina sulfúrica y para los compo nentes carbónicos el Dragendorff. ARS PHARMACEUTlCA 151 Análisis por CGL Todos los análisis han sido realizados en un cromatógrafo Hewlett-Packard 5830 A, acoplado a un procesador 18850 A Hewlett Packard con detector de ionización de llama. Columnas: Carbowax 20M 6 FT 10 P Chrom. W-AW DMSC 80.100 de acero. OV-17 6 FT 3 P Chrom. W-HP 80.100 de vidrio. Condiciones de trabajo: Temperatura 1 Tiempo 1 Gradiente Temperatura 2 Tiempo 2 Temperatura del bloque de inyección Temperatura del detector Temperatura de seguridad Velocidad de la carta Atenuación Gas portador Flujo CARBOWAX 20M .80° C .4 mino 4°/min 190° C 20 mino 240° C 220° C 250° C 1 cm/min 29 35 ml/min 35 ml/min Muestras: 2 pi de aceite esencial al 1% en éter. RESULTADOS y DISCUSION. OV-17 55° C 4 mino 4°/min 180° C 10 mino 250° C 225° C 250° C 1 cm/min 29 Nitrógeno 35 mI/min Los datos referentes a los distintos rendimientos e índices de refracción se pueden ver en el Cuadro 1, siendo ésta la primera vez que se aportan. El estudio por CCF nos da una primera aproximación acerca de la composición de las tres esencias. Así, respecto a la fracción hidrocarbonada (ver Cuadro 2 y Fig. 1), se puede decir que existe cualitativamente una mayor similitud entre A. barrelieri y A. valen tina, solo diferenciables en la mancha que aparece a Rf x 100 = 92 152 ARS PHARMACEUTICA presente en la primera y no en la segunda. Más acusadas son las di ferencias observadas para la A. gallica donde los componentes con Rf x 100 de 67 y 73, no están presentes en ninguna de las otras dos especies estudiadas. ESPECIE A. barrelieri A. valentina A. _gallica A. A. A. barrelieri valentina gallica ® @ @) @ @ Q CUADRO 1 RECOLECCION HUMEDAD RENDIMIENTO IR La Malá (Granada) -Sept. 30% 0,59% 1,466 Jalance (Valencia) -Mayo 33% 0,41% 1,478 Cullera (Valencia) -Junio 38% 0,53% 1,452 CUADRO 2 Valores de Rf x 100: fracción hidrocarbonada 92 92 @ ® @D ® Q 2 90 90 90 � €Y � @ @ � @ � � 88 88 88 Q 3 84 84 85 80 80 80 73 67 60 53 60 53 59 54 e.mJ Azu I déb i I � Azul intenso � Violeta Fig. 1. -Cromatograma fracción hidro carbonada. Fase móvil: Hexano Revelador : Vainillina sul fúrica 1. Ac. esencial A. barrelieri 2. Ac. esencial A. valentina 3. Ac. esencial A. gallica ARS PHARMACEUTICA 153 En cuanto a la fracción oxigenada (ver Cuadro 3 y Fig. 2) por CCF se aprecia la total similitud entre A. valentina y A. gallica donde los componentes a Rf x 100 = 69 y 48 no existen en A. barrelieri. A. barrelieri 86 A. valentina 85 A. gallica 85 o ., @ � O � ® • • • . 1 CUADRO 3 Valores de Rf x 100: fracción oxigenada 83 76 73 83 75 83 75 � @ • � é9 6B> • • O O � � � (JJ!9 O • • • • • • • . · 2 3 69 69 66 59 52 65 59 52 48 65 59 52 48 41 36 24 42 36 25 42 36 26 � Azul débil m Azul intenso � Marrón claro lIIllIIlII Ma r rón oscu ro P Gris verdoso � Violeta _ Azul verdoso Fig. 2.-Cromatograma fracción oxi genada Fase móvil: Benceno/ AcOEt . 97:3 Revelador : Vainillina sulfiírica l. Ac. esencial A. barrelieri 2. Ac. esencial A. valentina 3. Ac. esencial A. gallica Al observar conjuntamente ambas fracciones (hidrocarbonada y oxigenada) cabe deducir que es A. gallica quien «a priori» se pre senta como aceite esencial más complejo. No obstante tendría que ser la CGL, la que nos aportara datos más concluyentes, en este sen tido, ya que por comparación con patrones puros sólo se llegó a la 154 ARS PHARMACEUTICA identificación de : a-pineno (excepto en A. valentina) B-pineno, Sabineno, B-cariofileno, eucaliptol, alcanfor, linalol y a-terpineol. Efectivamente, el análisis por CGL nos indicó la mayor com plejidad del aceite esencial de A. gallica, al existir un número de picos más elevado tanto cuando se analiza por la columna CARBO WAX 20M, como por la OV-17 (ver Fig. 3 Y 4). Pero como norma general, cabe decir que, las diferencias ob servadas entre las distintas esencias, no son de excesiva importancia desde el punto de vista cualitativo, ya que éstas afectan a compo nentes minoritarios. Sí nos ha llamado la atención y creemos es un hecho a señalar, la ausencia de a-pineno en A. valentina, así como su bajo contenido en tuyonas. Desde el punto de vista cuantitativo, en A. ya len tina los re sultados no son totalmente concordantes. Según datos de la columna CARBOWAX 20M habría que admitir que fuese el alcanfor el com ponente mayoritario, ocupando el segundo lugar el eucaliptol, se guido del a -terpineol; en contraposición, la columna OV-17 nos indica un porcentaje bastante inferior de eucaliptol. Por tanto, en la columna CARBOWAX 20M debe existir, junto al eucaliptol, otro componente no identificado. Para la A. gallica el pico observado en la columna CARBOWAX 20M a TR = 19,49 que asignamos a alcanfor + linalol, hay que admi tir que es prácticamente alcanfor si tenemos en cuenta el minúsculo contenido en linalol detectado con la columna OV-17. Sería por tanto éste el componente mayoritario que justifica el fuerte olor canfóreo de dicha esencia así como la formación de pequeños cristales en el fondo del recipiente tras cierto tiempo de su destilación. El segundo componente en importancia es la a-tuyona. Respecto al nerol se nos presenta la duda de si es comp.onente común a las tres especies, ya que en la columna OV-17 dicho com ponente aparece para A. barrelieri a TR = 16,61 que podría corres ponder a los picos con TR = 16,55 detectados en los cromatogramas de las otras dos especies. Cuando se observan los TR del nerol en la columna CARBOW AX 20M, queda perfectamente identificado en A. barrelieri (TR = 24,94) y A. valentina (24,97), no observándose su correspondiente pico en A. gallica. No obstante, interpretamos que siendo componente minoritario, podría quedar enmascarada su existencia y aparecer englobado en el pico de TR = 23,51, por 10 que nos declinamos a favor de que sea componente común a las tres especies. I t ]·1;: i .. � v r ! ! o o ! r ] i" ':, . � '.:...r d 1 � .. : ft:A; ': j ! i ! � ¡ ! j � o j � ! ¡ e ;! Figura 3 o G o G j .i --� ----�._. Ü 146 .. , . ¿ o 1 .! ! e ceL DH ACflT[ [SOCIAL DE A. GAl.LICA VILLD. (COL�MA U,.IOWAX lOfrl) 'Cil DEL AellTE f.S(MCIAL DI: A. VAlZIIrDA l,A"1t. (COl'JfUf,A C.ulow.u 20ft) .... 'Cl DlL ACIIl( U[II(IN. DE: A. 8ARREUrIU IESSor (COl.I.I' ..... H c.uIOWAl' 201'1). Ull . i j j � .. � H ¡,:,. i ! " , � � � :! . < ;¡ ! "� - .. ¡, _e : �i "" Figura 4 C' . . . _ - �; .. j. =: �: � .! �i ]; 5i .:. cel DEL At[lTE [$[NCIAl DE A. GALLlr:A VILlD. (COU..-t1tA OV-IJ) CGl DEL ACEITE ESENCIAL DE A. VALDITlNA L.MK. ICOl,,""" 'OV-17) . -�_ .. en DEl ACEITE ESUClAl DE A. BARRELIrRI IES5[. (COll,,.NA ov-l7) " " "" " � " :: :;, .11 ARS PHARMACEUTICA 157 En los Cuadros 4 y 5 se resumen los componentes de cada una de las especies, analizadas por ambas columnas, por comparación de los TR de sus distintos componentes con los ya identificados para A. barrelieri (5). CUADRO 4 COMPONENTES IDENTIFICADOS EN LAS DISTINTAS ESENCIAS Y SUS TR (Columna CARBOWAX 20M) . COMPONENTE A. BARREllERi' A. V ALEN11NA A. GALileA a-Pineno 3,28 -3,29 Canfeno 4,24 4,26 4,24 J3-Pineno + Sabineno 5,24 5,26 5,23 .13-Careno 6,45 6,43 6,53 Mirceno 7,15 7,17 - d-Limoneno 7,69 7,72 7,68 Eucaliptol 8,21 8,23 8,21 P -Terpineno 8,99 9,02 9,00 p-Cimeno + Terpinoleno 9,86 9,88 9,86 a -Tuyona 15,27 15,29 15,28 J3-Tuyona 15,85 15,75 15,81 Mentofurano 17,21 17,20 - Alcanfor + Linalol 18,47 18,49 18,49 Acetato de Isobornilo 20,25 20,27 - Terpinen-4-01 + J3-Cariofileno 20,85 20,86 20,85 Mentol 21,71 21,69 - a-Terpineol 23,83 23,96 24,01 Borneol -23,96 24,01 Nerol 24,94 24,97 25,31 Geraniol 28,22 28,23 -