Aislamiento e identificación de compuestos fenólicos de Helichrysum picardii Boiis & Reuter

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE COMPUESTOS FENOLICOS DE Helichrysum picardii BOISS. & REUTER. PUERTA*, R.; SAENZ*, M.T.; GARCIA*, M.D.; GIL**, A.M. *Laboratorio de Farmacognosia y Farmacodinamia, Facultad de Farmacia, Universidad de Sevilla. **Laboratorio de Química Orgánica, Universidad de Sevilla. INTRODUCCION Facultad de Química, Helichrysum picardii Boiss. & Reuter perteneciente a la familia Asteraceae es una de las cuatro especies de este género localizadas en Andalucía Occidental [TALAVERA,1987]. Los estudios relativos a la fitoquímica de este género son muy numerosos, estando la mayoría encaminados al análisis de los compuestos polifenólicos. Estos compuestos, entre los que se han descrito flavonoides, derivados cumarínicos y floroglucinoles, son los más interesantes dentro del grupo, tanto por su importan cia en quimiotaxonomía como por su interés en terapéutica. En el presente trabajo hemos llevado a cabo el aislamiento y la identificación de varios compuestos polifenólicos en la especie Helichrysum picardii Boiss. & Reuter muy abundante en nuestra zona. 523 MATERIAL Y METODO Material vegetal Las muestras constituidas por las sumidades de H.picardii Boiss. & Reuter, fueron recolectadas en la segunda quincena del mes de Julio en El Puerto de Santa Maria (Cádiz) . Extracción El material vegetal desecado y troceado se sometió a un proceso de extracción �ontinua siguiendo la técnica recomendada por �ubuk9U y col.[1977, 1986] para el aislamiento de flavonoides en distintas especies de este género. El esquema del proceso extractivo, realizado en un aparato tipo Soxhlet, fue el siguiente: DROGA (200 G) I Eter de petroleo I Ext2 Eter petroleo I I MARCO alcoh.962 I Ext2 alcoholico concentrar r.s. (16.95 g) agua I Ext2 acuoso n-Hexano Ext2 n-Hex. I Ext2acuoso , Ext2 Clorof. (A) , Ext2 Et-E (B) I Clorof. I Ext2acuoso I Eter etilico I Ext2acuoso Seleccionamos para su estudio los extractos clorofórmico (A) y el etéreo (B) . 524 RESULTADOS Y CONCLUSIONES Estudio del Extracto clorofórmico CA) El estudio de este extracto se llevó a cabo por cromatografia en columna de gel de silice utilizando corno eluyentes: cloroformo, acetato de etilo y metanol a diferentes concentraciones. Obtuvimos 105 fracciones (15-20 mI) . Las fracciones 10-15 mostraron un componente de fuerte fluorescencia azul a la luz U.V., correspondiente a un compuesto que purificarnos por cromatografia en columna y denominarnos Al' Identificación del compuesto Al� C.C.F. Fases móviles Tolueno/AcoEt/Ac.fórmico (50: 40: 10) AcOH/ Cl3CH (10: 90) U.V. máx. nm Rf 0.45 0.69 MeoH ....... 230, 254, 298, 345 I.R. máx. Ccm-l)« BrK Coloración U.V. U.V.+OHNH4 Azul Azul-brillante Azul Azul-brillante 3280, 3090, 2944, 1711, 1632, 1609, 863 Teniendo en cuenta todos estos datos pudimos deducir que el compuesto Al era la 7-hidroxi-6-metoxicumarina o Escopoletina [BALLANTYNE Y col., 1971]. 525 Estudio del Extracto etéreo (B) El residuo seco procedente del extracto de éter etilico se cromatografió igualmente en columna de gel de silice. De éste fraccionamiento utilizando como eluyentes: éter etilico, acetato de etilo, y metanol en distintas proporciones, se obtuvieron 135 fracciones. En las fracciones 1-5 se produjo un precipitado no cristalizado, que se comportó como un solo compuesto al que denominamos Bl. De las fracciones 6-8 obtuvimos una mezcla de dos componentes B2 y B) que fueron separados posteriormente por cromatografia preparativa en celulosa. Identificacion del compuesto Bl C.C.F. Fases móviles Tolueno/AcOET/Ac.fórmico (50: 40: 10) AcOH/Cloroformo (10: 90) u.v. máx. nm Rf 0.60 0.10 Coloración Oleum C13Al Pardo-amar. Amarillo Pardo-amar. Amarillo Me OH ........... 370, 301 sh, 269 sh, 253 MeONa .......... 432, 245 AIC1) .......... 455, 269 AIC1)/HCl ...... 425, 265 NaOAc .......... 390, 272 NaOAc/BO)H) .... 384, 247 r.R. máx. (cm-l)« BrK 3350, 1600, 1500, 1350, 1200 Por todos estos datos, este compuesto correspondió al flavonoide Quercetina (3, 5,7,3' ,4'-pentahidroxiflavona) [HARBONE y MABRY, 1975] . 526 Este compuesto ha sido identificado en diversas especies de este género [9UBUK9U, 1976] [9UBUK9U y YUKSEL.,1982] [BEZANGERBEAUQUESNE y col.,1990]. Identificacion de los compuestos B2�3 C.C.F. Compuesto A Rf B C 0.56 0.53 0.22 0.55 0.58 0.51 Fases móviles A: Ac.Acético 2% B: Ac. Fórmico 2% C: Benceno/ Ac.acético/Agua (60/22/12) U.v. máx. nm B2 -MeOH ........ 295 B3 -MeOH ........ 258, 289 E.M. mIz (%) Coloración p-N p-N + Na2co3 Amarillo Rosa Naranja Morado Reveladores p-N: p-nitroanilina B2 -M+ 138 (70) ,121 (100) , 107 ( 58) ,93 (14) B3 -M+ 168 (100) , 153 (62) , 97 (15) , 93 (14) Los datos cromatográficos y espectrales coincidían con los de los patrones de ácidos fenóles [RIBERAU-GAYON, 1968] utilizados y por ello identificamos el compuesto B2 con el ácido m-hidroxibenzoíco y el compuesto B3 con el 3-hidroxi-5-metoxibenzoíco o ácido vaníllico. 527 BIBLIOGRAFIA BALLANTYNE, M.M.; MC CABE, M. & ROBERT, D.H. (1.971) -"Claisen rearrangernentes 11. Synthesis of six natural cournarins", Tetrahedron, 27 (4) ,871-877. BEZANGER-BEAUQUESNE, L.; PINKAS, M.; TORCK, M. & TROTIN, F. (1990) -"Plantes Médicinales des Régions Ternpérées", 12� ed., Maloine, París. C;::UBUKC;::U, B. (1976) "Sur les dérivés flavoniques et cournariniqúes d'Helichrysurn orientale (L.) Gaertner", Planto Méd. et Phytothér., 10 (1) , 44-53. C;::UBUKC;::U, B. & MERIC;::LI, A.H. (1977) -"Flavonoides d'Helichrysurn plicaturn D.C." Planto Méd. et Phytothér., 11 (4) , 294-302. C;::UBUKC;::U, B.& YÜ!<SEL, V. (1982) -"Constituents of Anatolian Medicinal Plants; Flavonoids of Helichrysurn arrneniurn D. C. " , J.Nat. Prod., 45 (2) , 137-139. C;::UBUKC;::U, B. & DAMADYAN, B. (1986) -Flavonoides d'Helichrysurn graveolens", Fitoterapia, 57(2) , 124-127. HARBONE, J.B. & MABRY, T.J. (1975) "The Flavonoids", Chaprnan-Hall, Londres. RIBERAU-GAYON, P. (1968) -"Les acides-phénols et leurs déri vés" , en: "Les cornposés phénoliques des végétaux", Dunod, París. 528