Análisis cuantitativo del buffy coat en medicina veterinaria canina

CUNICA VETERINARIA DE PEQUEÑOS ANIMALES Volumen 10 Número4 Octubre/Diciembre 1990 Artículos originales S. Lavín F.]. Mora 1. Viñas U.D. Patología General yMédica. Laboratorio de Hematología. Facilitad de Veterinaria. Universidad Autónoma de Barcelona. 08193 Bellaterra (Barcelona). 165 Análisis cuantitativo del bu.ffy eoat en medicina veterinaria canina RESUMEN ABSTRACT En el presente trabajo se evalúa la utilidad clínica del análisis cuantitativo del bufly coat mediante el Sistema QBC-V para su uso en Medicina Veterinaria canina. Se compara el Sistema QBC-V frente al método manual de referencia en 100 muestras de sangre de perro. Los resultados obtenidos indican que existe una correlación muy elevada para el valor hematocrito y el recuento de leucocitos y granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos), elevada para el recuento de agranulocitos (linfocitos y monocitos) y baja para las plaquetas. PALABRAS ClAVE Perro; Hematología; Buffy coat. 13 Ibis study evaluates the clinical utility value of the "bu.ffycoat" quantitative analysis by means of the QBC-Vsystem for canine Veterinary Medicine purposes. Tbe QBC-Vsystem is compared with the reference manual method in the blood samples of lOOdogs. Tbe results obtained shaw that the height of the "bu.ffycoat" correlates very highly with the haematocrit value, totalleucocyte and granulocyte (neutropbils, eosinophils and basophils) count, highly with the agranulocyte (limpbocytes and monocytes) count and lowly with the platelets count. KEYWORDS Dog; Haernatology; "Buffy coat". S. Lavín F.]. Mora L. Viñas 166 INTROnUCCION El análisis cuantitativo del bu.ffy coat se basa en la medida del. espesor de la capa de leucocitos y de plaquetas después de centrifugar la sangre obtenida con un anticoagulante, ya que las células se reparten según su peso específicow. Existe en el mercado un sistema para cuantificar el bu.ffy coat, mediante el cual podemos determinar el valor hematocrito, el número de leucocitos y el de plaquetas, así como el número y porcentaje de granulocitos (neutrófilos, eosinófilos y basófilos) y agranulocitos (linfocitos y monocitos). Este sistema se diseñó en un principio para trabajar con sangre humana, pero en la actualidad se puede utilizar con sagre de perro, gato o caballo; aunque ha sido valorado en estas especies por diferentes autoresv ", los resultados publicados son bastante dispares. , Con este trabajo, pretendemos evaluar la exactitud y precisión del sistema QBC V para su utilización con sangre de perro comparando los resultados obtenidos mediante este sistema con los obtenidos por el método manual de referencia. Todos los análisis se realizaron en nuestro laboratorio de hematología. MATERIAL Y METonos Animales El trabajo se realizó en 100 perros sanos y enfermos, de diferentes razas, edades y estado fisiológico. Muestras Las muestras de sangre fueron obtenidas por punción en la vena cefálica, en tubos comerciales (2,5 ml) con EDTA K 3. Análisis Los análisis se efectuaron antes de transcurrir dos horas de la extracción de las muestras. Método de referencia: •V. hematocrito. Método del rnicrohematocrito. Análisis cuantitativo del buffy coat en medicina veterinaria canina Plasma Plaquetas H==;==='=--Agran uloci tos Flotador Gran uloci tos Eri troci tos Figura 1. Coloración de las distintas capas celulares después de la centrifugación del tubo capilar del QBC V • Leucocitos. Dilución de la muestra con líquido de Turck y posterior recuento en cámara de Neubauer. • Granulocitos y agranulocitos. Fórmula leucocitaria sobre 100 células. • Plaquetas. Dilución de la muestra (Plaquet-CROM) y recuento en cámara de Neubauer. Sistema QBC VEl sistema está formado por tubos capilares, pipeta automática, centrífuga y aparato de lectura. El tubo capilar de alta precisión (1.683 mm de diámetro interior) se llena de sangre (111 )1.) con ayuda de la pipeta y el extremo libre se cierra con un capuchón de plástico. En el otro extremo se introduce un flotador de plástico (1.596 mm de diámetro exterior) de densidad crítica con el fin de expandir la capa celular 14 CLINICA VETERINARIA DEPEQUEÑOSANThVUES Volumen 10 Número4 Octubre/Diciembre 1990 r: coeficiente de correlación de Pearson comprendida entre los eritrocitos y el plasma (bu.ffy coat) y poder diferenciar las distintas capas de células una vez centrifugado el tubo durante 5minutos a 12.000 rpm. La parte interior del tubo está recubierta con oxalato potásico y un anticuerpo monoclonal para facilitar la separación de los hematíes y leucocitos, y naranja de acridina para diferenciar las distintas capas que se separan según su densidad como se indica en la figura 1. El lector consta de un micrómetro electrónico que permite medir las longitudes de las bandas moviendo los tubos longitudinalmente. Las longitudes de las bandas se transforman en unidades de medida habituales en hematología clínica. Los resultados que aparecerán en la pantalla son los siguientes: Valor hematocrito (%) Recuento de leucocitos (xl 03 JÍll) Recuento de granulocitos y ag,ranulocitos (% y xI 03/'¡ll) Recuento de plaquetas (x 10> JÍl!? Estudio estadístico Mediante ordenador se determinó: • Exactitud. Coeficiente de correlación de Pearson. • Precisión. Coeficiente de variación. RESULTADOS Y DISCUSION Los resultados obtenidos en este trabajo están indicados en las tablas 1 y 2. La mayor parte de los valores obtenidos se encontraban dentro del intervalo que indica el fabricante 15 Análisis cuantitativo del bu.tfy coaten medicina veterinaria canina 167 cv coeficiente de variación del QBC V, en el cual los resultados son totalmente fiables: Valor hematocrito Recuento de leucocitos Recuento de granulocitos Recuento de agranulocitos Recuento de plaquetas 15-60 2-30 0,02-29,7 0,02-29,7 50-700 0/0 x10 3 /¡li x103/ll i x10 3 /¡li x10 3 /¡li Hemos encontrado una correlación muy alta entre el QBC V y el método manual de referencia para el valor hematocrito; r= 0,99 (Fig. 2), el número de leucocitos; r= 0,95 (Fig. 3) y el porcentaje y número de granulocitos; r= 0,93 (Fig. 4). Sin embargo, para el porcentaje y número de agranulocitos, la correlación no es alta; r= 0,76 (Fig. 5), hecho que coincide con los valores obtenidos por otros autores'> 4) En todos los casos, se ha diferenciado bien la banda de granulocitos, y cuando el porcentaje de eosinófilos en la muestra era superior al 10% se observaba una banda dentro de ésta que se correspondía con los eosinófilos y que podía ser cuantificada. En cinco muestras, la banda de agranulocitos no se podía diferenciar. El coeficiente de correlación observado para las plaquetas; r= 0,58 (Fig. 6) es bajo y coincide con lo indicado por Levine y col.w, mientras que otros autores'vv obtienen valores muy superiores (r>0,90). En diez muestras, no se pudo valorar el número de plaquetas mediante el QBC V por agregarse en la parte superior del flotador o por no poder diferenciar la banda debido posiblemente a que los agregados se acumulaban en la parte inferior del flotador. Esta circunstancia ya ha sido indicadaw 4) y en el primer caso se detecta fácilmente al S. Lavín F.]. Mora L.Viñas Análisis cuantitativo del buffy coat en medicina veterinaria canina 168 3 v. HEMATOCRITO (Ofo) LEUCOCITOS (x10 /pl) 100 30 80 20 > 60 > o o m m O . : ~:"-' ... , O 40 10 .~ .... :.:1" 20 y•-1.80 • 1.03 x Y• -0.158 • 1.12 x r. o.~¡ r·0.95 OO O 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 O 10 20 30 Método de referencia Método de referencia Figura 2. Correlación entre el método de referencia y el Sistema QBC V Valorhematocrito (n= 100). Figura 3. Correlación entre el método de referencia y el Sistema QBC V Recuento de leucocitos (n= 100). 3 (X10 3 /pl) GRANULOCITOS (x10 /pl) AGRANULOCITOS 30 10 8 20 >> 6 o o m ., m O O .. ... 10 . Ol!:.:.: y • -1.60 • 1.24 x ".: y • 0.66 • 0.79 x r ·0.93 r·0.76 O O O 10 20 30 O 8810 Método de referencia Método de referencia Figura 4. Correlación entre el método de referencia y el Sistema QBC V Recuento de granulocitos (ri« 100). Figura 5. Correlación entre el método de referencia y el Sistema QBC V Recuento de agranulocitos (n» 95). examinar el tubo capilar antes de su lectura, pudiendo evitarse en parte si se obtienen las muestras con el máximo cuídado'v. Por otra parte, hay que indicar que las plaquetas en el perro presentan en condiciones 16 CUNICA VETERINARIA DEPEQUEÑOSANThVUES Volumen 10 Número4 Octubre/Diciembre 1990 PLAQUETAS 3 (x10 /}JI) 1000 800 > 600 o ID O 400 . o' o' , . .' 200 '.:-~ o· ·0 O 200 400 y• 78.84 • 1.09 x r·0.e8 800 1000 800 Método de referencia Figura 6. Correlación entre el método de referencia y el Sistema QBC V. Recuento de plaquetas (n= 90). Análisis cuantitativo del buffy coat en medicina veterinaria canina normales grandes diferencias en tamaño, circunstancia 169 que hemos podido observar al estudiar el frotis de sangre teñido, lo que influye en que la correlación no sea muy alta. La precisión (Tabla 2) es aceptable en todos los casos, excepto en el porcentaje y número de agranulocitos que es alta (cv= 13,2%). Estos valores coinciden' con los indicados por otros autoresv4). Podemos concluir indicando que la cuantificación del bu.ffy coatmediante el sistema QBC V es un método rápido, sencillo de manejo y suficientemente fiable para determinar el valor hematocrito, número de leucocitos, porcentaje y número de granulocitos y agranulocitos, mientras que el recuento de plaquetas hay que interpretarlo con sumo cuidado. BmLIOGRAFIA 1 Browri SA and Barsanti JA. Quantitative buffy coat analysis for hematologic measurements of canine, feline and equine blood samples and for detection of microfilaremia in dogs. Dog] Vet Res 1988;49:321-324. 2 Creppi G, Cavallone E, Mantelli F y Sornmariva M. Ematologia a colori in ambulatorio. Scienza Veterinaria 1989;8:3-6. 3 Guelfi]F y julie P. Profil hématologique par analyse quantitative 19 du "buffy coat" (QBC) chez le chien, le chatet le cheval. PraMéd Cbir An Comp 1989;24:485-491. 4 Levine RA, Hart AH and Wardlaw Sc. Quantitative buffy coat analysis of blood collected rrorn dogs, cats an horses.] Arn Vet Med Ass 1986;189:670-673. 5 Wintrobe MM. Macroscopic examination ofthe blood. Arn ] Med Sci 1933;185:58-71.